מחקר של השפעת Cistanche על רדיקלים חופשיים

למידע נוסף:Ali.ma@wecistanche.com

יער ענן שני An Old Zhang Hongjing

כיום, מאמינים כי הירידה בתפקוד החיסוני של המכונה קשורה להזדקנות. על סמך המחקר שCistancheיכול לשפר את הפונקציות החיסוניות ההומורליות והתאיות של עכברים ולהילחם במודל ההזדקנות הנגרם על ידי d-galactose, למדנו עוד יותר את השפעת התרופה על עכברים. שאיפת אוזון<. 3)="" induces="" strong="" antagonistic="" effects="" of="" aging="" and="" aging="" caused="" by="" strong="">רדיקלים חופשייםבתוך הגוף. קצב ביטוי הכימילומינסנציה של עכברים בקבוצת התרופות עלה, SOD הגברת החיוניות "תכולת הליפידים ברקמות הפלזמה, הכריעה והירך וחיוניות ה-MAOB של רקמות המסדרון ירדה; היה קשר מינון-אפקט בין קבוצות מינון שונות. השפעת ההזדקנות של עכברים נגד הזדקנות תת-חריפה תואמת את המחקר שלCistancheשיפור התפקוד החיסוני בעכברים.Cistancheיכול לשפר את התפקוד החיסוני, לשפר את יכולת הגוף נגד סטרס, וראוי לקבל או להעלים בעקיפין את הנזק שלרדיקלים חופשייםלגוף. , מעכב את החיוניות של 1WMAO-B. כדי להשיג את האפקט של עיכוב ההזדקנות. ניסוי זה מספק את הבסיס הניסיוני ליישום שלCistancheבאנטי אייג'ינג וטיפול במחלות סניליות מסוימות.

לחץ כדי לראות יתרונות ותופעות לוואי עבור רדיקלים חופשיים

1 חומר ושיטות

1.1 חומר

1.1.1 תרופות וריאגנטים:Cistanchedeserticola YC Ma רקחו במים 3 פעמים, המרתחים אוחדו, רוכזו לנפח מתאים, והוספה כמות מסוימת של אתנול. לאחר עמידה של 24 שעות, הוא עבר סינון. התסנין התאדה ללא אלכוהול. הכן עם מים מהבילים לפני השימוש ב-0.25 אחוז ~0.5 אחוז ריכוז. ml מכיל תרופות גולמיות בערך lg). Luminol (luminol), מוצרי חברת ®National E Merck Huang Howling Oxidation 88 (HO), Hypochromatic Howling (HX), פרופאן טטרה אתוקסי סטנדרטי, כולם הם המוצר של החברה, מלח, בנזלקוניום, Changzhou Guangming Biochemical Research Institute; cyclohexane, מוצר מ- Shanghai Reagent No. 1; Thiobarbituric acid, מוצר מ- Shanghai Reagent No. 2, LuzhanסופראוקסידDismutase, שנגחאי האקדמיה הסינית למדעים מוצרים של המכון למוצרים ביוכימיים.

Cistanche

1.1. 2 מכשירים בקמן LS-98ספירת ניצוץ נוזלי OO33 בלבד, ספקטרופוטומטר פלואורסצנטי Shimadzu RF-540, ספקטרופוטומטר אולטרה סגול 752 ספקטרופוטומטר-G1-20צנטריפוגה מקורר במהירות גבוהה, CPS-1A מרסק קולי.

1.1.3 עכברי ICR בעלי חיים, בני חודשיים, במשקל 20±2 גרם, מסופקים על ידי Jiangsu Experimental Animal Center.

שיטת 1.2

העכברים חולקו לבקרה (לא להיכנס לסביבת Q), דגם וקבוצת תרופות, כל אחד עם 10 עכברים, אכילת מים מהירה ללא הגבלה. קבוצת התרופות חולקה לשתי קבוצות מינון, כרך 2, גיליון 7, 1994, Chinese Journal of Chinese Materia MedicaCistancheתמצית100 ו-200 מ"ג/ק"ג (שווה ערך לתרופות גולמיות 20 ו-4Qg/kg) הוזנו בהתאמה. קבוצת הביקורת וקבוצת המודל קיבלו נפח שווה של מי מלח רגיל מדי יום. קבוצת הניהול וקבוצת המודל קיבלו O, סביבה (0.9 X 10-^Oaft degree), רציף 2. יום. הבדיקה של כל זן אצבע בוצעה ביום ה-21 לניסוי.

1. 2.1 מבחן סיבולת הכנס את העכברים בכל אחת מהקבוצות לעיל לעומק מים של 40 ס"מ ו-12±ליטר. במיכל של Water®L, התחילו לתזמן עד שהוא שוקע לתחתית ולא זז, וזה זמן השחייה של העכברים.

   
   

1.2.2 בדיקת עמידה בחום העכבר מוגדר תחילה ל-15. שחו במים במשך 2 דקות, ואז היכנסו למקפיא 15P כדי לראות את זמן ההקפאה המלא.

1.2.3 בדיקת סבילות להיפוקסיה אטמוספרית הכניסו את הגלוטן הקטן לבקבוק בעל פה רחב של 250 מ"ל מלא בסיד-נתרן, ורשמו את זמן ההישרדות של העכברים בכל קבוצה לאחר האטימה.

1.2.4 קביעת מונואמין אוקסידאז מסוג B (MACXB) על פי שיטת הפה של הספרות, קח את כל המוח של עכברים, הוסף כמות מתאימה של חיץ פוספט מקורר מראש 0.2mol/L (PH7.4 ), homogenate ואולטרסאונד (24kC) ריסוק 3 פעמים, סך הכל פעמיים, במרווח של 30sr1000r/min, 0C למשך 30 דקות, קח את סופרנטנט בקצב של 17000r/min, 4C למשך 30 דקות, השליכו את הסופרנטנט וקחו את המשקע, והשתמשו בכמות מתאימה. .2mo(/L PH7.4) החומצה מוחמצת ומושהה מחדש כדי ליצור תמיסת תסיסה גולמית. קח כמות מתאימה של תמיסת תסיסה גולמית, הוסף 16 מ"ל/ליטר בנזמידין 0.3 מ"ל, השתמש במאגר הפוספטים לעיל כדי להרכיב 3 מ"ל, והשתמש בתוף חומצה זרחתית 3 מ"ל של תמיסת חיץ משמשת כצינור ריק. כל המבחנות ממוקמות ב-37. לנער באמבט מים למשך 3 שעות, להוציא אותה, להוסיף 6 אחוז חומצת פרוקסי כדי לסיים את התגובה, ואז להוסיף 3m [ציקלוהקסאן, לנער לערבב, לצנטריפוגה ב-1000r/min למשך 1 Omin, ולקחת אותו הספיגה של התמיסה השקופה נמדדת ב-242nm, ויש לשמור על הצינור הריק חם לפני הוספת אמין סיני. עכירות החלבון נקבעת בשיטת Folin-phenol, כאשר אלבומין בסרום העגל הוא החלבון הסטנדרטי. יחידת פעילות אנזים אחת ויחידת פעילות אנזים אחת מוגדרות כ-37P מייצרת את כמות האנזים עם שינוי בספיגה של 0.01/3h.'

1. 2. 5 סרוםסופראוקסידdismutaseקביעת פעילות (SOD) (5 mu I, סרום עכברים 10M, הוספה לתערובת הזוהרת (מעורבב על ידי 0, 1mmol/L luminol ו-0.1mmol/L hypoxanthine) בשנת 980", שמור זה באינקובטור של 37C למשך 20 דקות. לאחר הוצאתו, הוסף את Huang Guanyin oxidase כדי להתחיל את התגובה. במדיום הבזק נוזלי של Beckman LS~98OO, מספר הזוהר בתום דקה מחושב על סמך דרגת זיהוי פוטון בודד. Com משמש כיחידה. קצב עיכוב הארה מחושב עם קבוצת הסרום הנחותה כחסר. בנוסף, התקןסופראוקסידשינוי צורהריכוז (abscissa) ושיעור עיכוב זוהר (קואורדינטה) משמש כקביעת תכולת החלבון הסטנדרטית כמו קודם. 1. 2.6 קביעת מי חמצן ליפידים (LPO) בפלזמה, במוח ובכבד ④ קח 50 פחיות פלזמה של עכבר, הגדיר את הכבד והמוח (השתמש ב-0.2mol/L חיץ פוספט pH7.4 , בהומוגנית המיוצר בריכוז של 10 אחוז) כל 50 אבות, הוסף ליטר/24מול/ליטר חומצה גופרתית 4 מ"ל, 1 אחוז חומצה זרחתית 0.5 מ"ל, ערבב והנח למשך 5 דקות, צנטריפוגה ב-1000r/mm למשך 10 דקות, ושאב את הסופרנטנט. הוסף למשקע 2 מ"ל של ליטר/24 מול/ליטר חומצה גופרתית ו-0.3 מ"ל של 10 אחוז סידן פוספט, ערבב היטב, צנטריפוגה במהירות של 1000 r/min, והוסף למשקע 1 מ"ל מים פחדנים עמידים, ערבב היטב ליצירת תרחיף, הוסף מגיב חומצה ברביטל שבור 1ml, ב-95. לאחר קירור של 14 באמבט שמן, הוסף 5ml n-butanol, ערבב היטב *100Or/min צנטריפוגה 10mtn, קח את שלב n-butanol, ומדוד את עוצמת הקרינה על ה-RF{{ 33}}ספקטרופוטומטר מערכת הפעלה (אורך גל עירור 515 דקות, אורך פליטה 553 ננומטר), בנוסף, השתמשו בפרופאן טטרה אתוקסי סטנדרטי ובעוצמת הקרינה היחסית כעקומה סטנדרטית.

   
   

2. 

2 תוצאות

2.1 ההשפעה על מבחן הסיבולת של עכברים שנפגעו מרדיקלים חופשיים

זמן השחייה של עכברים בקבוצת המודל היה קצר משמעותית מזה של קבוצת הביקורת, בעוד שזמן השחייה של קבוצת הניהול נמשך זמן רב יותר, וקבוצת המינון הגבוה היה דומה לקבוצת הביקורת (טבלה 1).

טבלה 1: ההשפעה שלCistancheעל מבחן סיבולת שחייה של דגם עכבר פציעת קבר חופשי

2.2 השפעה על היכולת להתחמם

עכברים בקבוצת המודל קופאים במהירות בטמפרטורות נמוכות, והזמן קצר מזה של קבוצת הביקורת, בעוד זמן ההקפאה של קבוצות שתי מנות שלCistancheהוא לא רק ארוך מקבוצת המודל אלא גם ארוך מקבוצת הביקורת, מה שמעיד על כךCistancheיש לא רק את ההשפעה של נזק נגד רדיקלים חופשיים אלא יש גם השפעות ברורות. הגדל את היכולת להתחמם מהקור (טבלה 2).

טבלה 2: ההשפעה שלCistancheעל היכולת של Senhan במודל עכברים של פגיעה טובה חופשית

2.3 השפעה על היכולת לעמוד בהיפוקסיה בלחץ אטמוספרי

לאחר ניהול שלCistanche, עכברים שרדו תחת לחץ נורמלי והיפוקסיה.Cistancheההשפעה של מודל העכבר Senhan על יכולתו של דגם עכבר פציעה חופשית הייתה ארוכה משמעותית מזו של קבוצת המודל וגם גבוהה מזו של קבוצת הביקורת, מה שמצביע על כךCistancheיכול להגביר את הסבילות של העכברים להיפוקסיה. כוח (טבלה 3)

שולחן 3:Cistanche's מודל עכבר של נזק של רדיקלים חופשיים

2.4 השפעה על החיוניות של MAO-B

לאחר שאיפת O, פעילות MAO-B של רקמת המוח של קבוצת המודל הייתה גבוהה משמעותית מזו של הקבוצה המקבילה, והעלייה בפעילות MAO-B של קבוצת המתן עוכבה באופן משמעותי

טבלה 4: ההשפעה שלCistancheעל הפעילות של גפן מונואמין אוקסיד מסוג 1SB (MAO~B) במודל עכבר פציעה חופשית בקבר

2. 5 השפעה על חיוניות SOD

שיעור עיכוב הכימילומיננסנציה של הסרום בקבוצת המודל היה נמוך משמעותית מזה של הקבוצות האחרות, ופעילות ה-SOD ירדה באופן משמעותי. פעילות ה-SOD של קבוצת התרופות גדלה באופן משמעותי, וקבוצת המינון הגבוה הייתה גבוהה מזו של קבוצת הביקורת (ראה להלן טבלה 5）

טבלה 5: דגם סרוםסופראוקסידפעילות דיסמוטאז (SOD) היא החזקה ביותר 2.6 ההשפעה על התוכן של שומנים חמצן (ZLPO)

2.6 תכולת הליפיד פרוקסיד (LFO) בפלזמה, בכבד וברקמת המוח של קבוצת המודל גדלה באופן משמעותי, ותכולת ה-LPO ירדה באופן משמעותי לאחר מתן. קבוצת המינון והמינון הגדולים הפחיתו את ה-LPO ברקמת המוח לרמה של קבוצת הביקורת (טבלה 6).

טבלה 6: ההשפעה של בשר אקסון על רמות פלזמה, כבד וליפיד פרוקסיד (LPO) במודל עכבר של נזק של רדיקלים חופשיים

3 דיון

הזדקנות היא תופעה חיובית בתהליך החיים. הרפואה המסורתית של המולדת צברה ניסיון עשיר ומקורות רפואה בשנים אנטי אייג'ינג. בשנים האחרונות, מדענים מקומיים התמקדו במציאת תרופות אנטי-אייג'ינג יעילות מהרפואה הסינית המסורתית. כיום מסתכלים יותר ויותר על תיאוריית הרדיקלים החופשיים של הזדקנות הגוף. למרות שרדיקלים חופשייםנוצרים בגוף בתנאים רגילים, תאי הרקמה מוגנים עקב הסרה מתמשכת של SOD ומערכות אנזימים נגד רעילות חמצן אחרות. אואה הוא חומר חמצון חזק. , יכול להתחיל את תגובת הרדיקלים החופשיים בגוף. שאיפה מוגזמת של חמצן גורמת ליצירתרדיקלים חופשייםבגוף, החורגת מיכולת הניקוי של מערכת הסטלה האנטי-סובלנית של הגוף, הגורמת לנזק לחומצות גרעין, חלבונים, חומצות אמינו, פחמימות ותרכובות שומנים, ובכך פוגעת ביצירת ותפקוד התאים, ומובילה להזדקנות ⑶. ניסוי זה מראה כי לאחר שאיפת חמצן7, הכוח הפיזי של העכברים, יכולתם להתחמם והסבילות להיפוקסיה מופחתים כולם, בדומה לביצועי הירידה בתפקוד הפיזיולוגי של בעלי חיים ישנים. זה מראה שהעכברים הצעירים יכולים לגרום למודל מזדקן לאחר קבלת גירוי d.Cistancheשיפרה משמעותית את השינויים באינדיקטורים לעיל.

סופראוקסידרדיקלים חופשייםקיימים בגוף לזמן קצר ובעיקר מסולקים על ידי SOD. בדרך כלל, רמת או משתקפת על ידי מדידת הפעילות של SOD. נוגדי חמצון שונים בגוף של עכברים מזדקנים באופן טבעי ועכברים שניזוקו ברדיקלים חופשיים מופחתים, פעילות הסב פוחתת, ובכך מפחיתה את היכולת לנקותרדיקלים חופשיים, מה שמוביל לעלייה בתכולת החמצנים השומנים. הפעילות של מונואמין אוקסידאז מסוג B (MA0-B) במוח עולה עם הגיל. MAOB היא השליטה העיקרית של השעון הביולוגי המזדקן בהיפותלמוס המרכזי. Clockwork קשור קשר הדוק להזדקנות. ⑴. הפעילות של MA0-B במוחם של עכברים בקבוצת מודל ניסוי זו מוגברת, ומראה שינויים ביוכימיים התואמים את אלה של בעלי חיים מזדקנים.