סמני איכות של Cistanches Herba על בסיס יחסי ספקטרום-אפקט נוגד חמצון Ⅱ

3. תוצאות

3.1 הקמת מפת טביעות אצבע

הכינו 10 קבוצות של תמיסות בדיקה לפי השיטה בסעיף 2.1, השתמשו בתנאים הכרומטוגרפיים בסעיף 2.2 לאיתור, השג את טביעות האצבע של כל אצווה של דגימות (איור 1), ובחרו בשיא מס' 11 (C11) כשיא הייחוס של טביעת אצבע. ייבא את נתוני השלב הנוזלי. קובץ AIA של טביעת האצבע של מוצר הבדיקה Cistanche deserticola לתוכנת "מערכת הערכת טביעות אצבע כרומטוגרפית של רפואה סינית מסורתית" (גרסת 2012). 17 פסגות כרומטוגרפיות נפוצות כיוולו במצב הנפוץ, ובהשוואה לספקטרום הייחוס הסטנדרטי המעורב (איור 2), זוהו בסך הכל 10 פסגות נפוצות.

3.2 מחקר על ההשפעה נוגדת החמצון של Cistanche deserticola

3.2.1 השפעת Cistanche deserticola על הכדאיות של תאי HEK 293.

בהשוואה לתאים בקבוצה הרגילה, Cistanche deserticola לא יצר ציטוטוקסיות בריכוז מסה של 50~100 ug·mL-1, ושיעורי ההישרדות של התאים היו גדולים מ-90%. ככל שריכוז ה- Cistanche deserticola עלה, כדאיות התא ירדה. לכן, Cistanche deserticola עם ריכוז מסה של 100 µg·mL-1 נבחרה למתן לאחר מכן.

3.2.2 השפעת Cistanche deserticola על ROS המושרה על ידי H2O2 בתאי HEK 293

ROS IC50 של Cistanche deserticola בריכוזים שונים חושב באמצעות תוכנת GraphPad Prism 8. התוצאות מוצגות באיור 3 ובטבלה 2.

לידע נוסף על cistanche, בואו נסתכל כיצד להבחין באיכות cistanche. איכות Cistanche תלויה בתכולת החומרים הפעילים Echinacoside ו-Acteoside, התכולה הגבוהה יותר פירושה תפקוד חזק יותר, היום אנו לוקחים 30% Echinacoside ו-12% Acteoside Cistanche Supplements כדוגמה כדי לתת לנו הסבר, בדרך כלל קוראים cistanche במאמר זה.

כמה זמן לוקח ל-CISTANCHE לעבוד?

3.2.3 השפעת Cistanche deserticola על H2O2-ה-SOD המושרה של תאי HEK 293

כפי שמוצג באיור 4, בהשוואה לקבוצה הרגילה, פעילות ה-SOD בתאים של קבוצת המודל פחתה באופן משמעותי, ופעילות ה-SOD של קבוצת הניהול של Cistanche deserticola עלתה בדרגות שונות (P<0.001), indicating that Cistanche deserticola can increase the intracellular SOD enzyme activity.

3.2.4 ההשפעה של Cistanche deserticola על H2O2-ה-CAT המושרה בתאי HEK 293

כפי שמוצג באיור 5, H2O2 יכול לגרום לירידה משמעותית בפעילות האנזים CAT תוך תאית (P<0.001), with the activity only reaching 30% of the normal group, indicating that H2O2 has seriously damaged the antioxidant system of cells. After Cistanche deserticola administration, intracellular CAT enzyme activity decreased significantly (P<0.001). The enzyme activity was significantly increased (P<0.001).

3.3 הקרנת סמן Q של Cistanche deserticola המבוססת על ניתוח מתאם יעילות ספקטרלית

3.3.1 PCA משתמש בערך העצמי > 1 ובשיעור תרומת השונות המצטבר > 85% כסטנדרט לחילוץ 4 רכיבים עיקריים. לעלילה (איור 6) של שלושת המרכיבים העיקריים הראשונים יש עקומה תלולה יותר, מה שאומר ששיעור התרומה שלו גבוה יותר. גָדוֹל. שיעור תרומת השונות המצטבר של ארבעת המרכיבים העיקריים הוא 87.640%, מה שמצביע על כך שארבעת המרכיבים העיקריים הללו יכולים לייצג 87.640% מהמידע של המשתנים המקוריים. הערכים העצמיים הראשוניים ושיעורי תרומת השונות מוצגים בטבלה 3. מטריצת הרכיבים המסובבים מתקבלת בשיטת השונות המקסימלית של קייזר נורמליזציה, ראה טבלה 4. בהתאם לערך הטעינה של כל שיא כרומטוגרפי על ארבעת הרכיבים העיקריים, המידע משתקף על ידי כל אחד מהם. ניתן לחלץ את הרכיב העיקרי. כלומר, ככל שערך העומס גדול יותר, כך גדלה השפעת השיא הכרומטוגרפי על הרכיב העיקרי. ברכיב ראשי 1, לפסגות 1 עד 3, 5, 7, 11 ו-13 עד 15 יש את העומסים האבסולוטיים הגדולים ביותר; ברכיב ראשי 2, לפסגות 6 ו-16 יש את העומסים האבסולוטיים הגדולים ביותר; פסגה 17 מסבירה את המידע של רכיב עיקרי 3, לשיא 8 יש את ההשפעה הגדולה ביותר על רכיב ראשי 4, כך ש-13 הרכיבים הכימיים של פסגות 1~3, 5~8, 11, 13~17 נבחרו כבסיס החומר העיקרי של Cistanche deserticola לניתוח יעילות ספקטרלית לאחר מכן.

3.3.2 PCC

ROS IC50 הוא אינדיקטור שלילי ליעילות התרופה, ולכן מקדם מתאם שלילי אומר שהמשתנה התלוי נמצא בקורלציה חיובית עם יעילות התרופה. מקדמי המתאם של 13 הפסגות הכרומטוגרפיות של Cistanche deserticola הם כולם שליליים, מה שמצביע על כך שכולם קשורים באופן חיובי להסרת ROS IC50, ביניהם פסגות 14 ו-3, 7, 11, 1 ו-13 היו בקורלציה חזקה ביותר עם ROSIC50 (עמ'<0.01), and peaks 2, 5, and 15 were strongly correlated (P<0.05); the 13 chromatographic peaks were all positively correlated with SOD, among which peaks 13 and 3 , 15, 11, 2 were extremely strongly correlated with SOD (P<0.01), and peaks 1, 14, 7, 5, and 6 were strongly correlated (P<0.05); 11 peaks were positively correlated with CAT, and peak 5 was positively correlated with CAT. There was a strong correlation (P<0.05). The results are shown in Table 5.

בשילוב תוצאות ה-PCC של ROS IC50, SOD ו-CAT, פסגות 1~3, 5, 7, 11 ו-13~15 נבחרו כקבוצת החומרים הפעילים של Cistanche deserticola כדי להפעיל השפעות נוגדות חמצון.

3.3.3 PLS

In PLS, the ROS IC50 regression coefficients of 13 chromatographic peaks are all negative and positively correlated with the pharmacodynamic activity. Among them, the chromatographic peaks with VIP>1 are: 14, 3, 11, 1, 7, 13, 2, 5, 15 (Figure 7A); in the study of SOD enzyme activity, the coefficients of all peaks are positive, that is, all peaks are positively correlated with drug efficacy. Among them, the chromatographic peaks with VIP>1 are: 13, 3, 15, 11, 2, 1 , 14, 7 (Figure 7B); in the study of CAT enzyme activity, except for peaks 6 and 16, the other chromatographic peaks are positively correlated with drug efficacy, among which the chromatographic peaks with VIP>1 הם: 5, 13, 14, 11, 7 (איור 7C). התרכובות המיוצגות על ידי פסגות 1~3, 5, 7, 11 ו-13~15 נבדקו כרכיבים פעילים נוגדי חמצון פוטנציאליים במודל PLS.

3.4 אימות פעילות Cistanche deserticola Q-marker

3.4.1 השפעת החומרים הפעילים על ציטוטוקסיות HEK 293

בהתבסס על התוצאות של ניתוח מתאם ספקטרום-אפקט, נבחרו 6 מרכיבים כולל חומצה גניפינית, 8-חומצה אפיסטריכנואית, אכינצאוזיד, verbascoside, anthocynoside A ו- isorbascoside לאימות פעילות. ששת המרכיבים הפעילים של Cistanche deserticola לא הראו ציטוטוקסיות בריכוזים שנעו בין 0.781 ל-3.125 µmol·mL–1, ושיעורי ההישרדות של התאים היו כולם גבוהים מ-90%. ככל שהריכוז עולה, כדאיות התא מעוכבת. לכן, ריכוזי המינון שלאחר מכן נבחרו כ-0.781, 1.563 ו-3.125 µmol·mL-1.

3.4.2 זוגות חומרים פעילים

ההשפעה נוגדת החמצון של תאי HEK 293 המושרים על ידי H2O2- אומתה על ידי זיהוי ההשפעה השואבת של כל מרכיב פעיל על ROS תוך תאי והיכולת לווסת את הפעילות של אנזימי SOD ו-CAT כדי לוודא אם יש לו השפעה נוגדת חמצון. בניסוי הסרת ROS, ההבדלים בין קבוצות חומצה גניפינית במינון גבוה ובין קבוצת המודל היו מובהקים סטטיסטית (P<0.01, P<0.001, Figure 8A). Compared with the model group, there were statistically significant differences between the low, medium and high dose groups of inulin, anthoside A, verbascoside and isorbascoside (P<0.001, Figure 8B, Figure 8C), indicating that the six monomers All have a certain degree of ROS scavenging effect; in the SOD and CAT enzyme activity measurement test, the enzyme activities of the low, medium and high dose groups of active ingredients were all higher than the model group, indicating that all 6 monomers can increase SOD and CAT Enzyme activity.