ilבחר
הבית / יֶדַע / תוכן

יֶדַע

Plumbagin מדכא מלנוגנזה המושרה על ידי MSH בתאי מלנומה של עכברים B16F10 על ידי עיכוב פעילות טירוזינאז

Apr 25, 2023

תַקצִיר:

מחקרים אחרונים הראו שלפלומבאגין פעילות אנטי דלקתית, אנטי אלרגית, אנטיבקטריאלית ואנטי סרטנית; עם זאת, עדיין לא הוכח האם פלומבאגין מדכא סינתזת מלנין המושרה בהורמון אלפא-מלנוציטים (-MSH) כדי למנוע היפרפיגמנטציה. במחקר זה, הדגמנו כי פלומבאגין מדכא באופן משמעותי סינתזת מלנין מגורה -MSH בתאי מלנומה של עכברים B16F10. כדי להבין את המנגנון המעכב של פלומבאגין על סינתזת מלנין, ביצענו מבחני פעילות של טירוזינאז תאית או נטולת תאים וניתחנו ביטוי גנים הקשור למלנוגנזה. הדגמנו כי פלומבאגין מדכא ישירות את פעילות טירוזינאז ללא תלות במנגנון התעתיק הקשור למלנוגנזה, הכולל גורם שעתוק הקשור למיקרופתלמיה (MITF), טירוזינאז (TYR) וחלבון הקשור לטירוזינאז 1 (TYRP1). כמו כן, בדקנו האם פלומבאגין היה רעיל לקרטינוציטים אנושיים נורמליים (HaCaT) ולתאי אפיתל עדשה (B3) שעלולים להיפגע על ידי שימוש בתכשירי קוסמטיקה לטיפוח העור. באופן מפתיע, ריכוזים נמוכים של פלומבאגין (0.5-1 מיקרומטר) עיכבו ביעילות את סינתזת המלנין ופעילות טירוזינאז, אך אינם גורמים לרעילות בקרטינוציטים, בתאי אפיתל העדשה ובתאי מלנומה של עכבר B16F10, מה שמצביע על כך שפלומבגין בטוח ליישום עורי. יחד, תוצאות אלו מצביעות על כך שההשפעה המעכבת של פלומבאגין על פיגמנטציה עשויה להפוך אותו לרכיב מקובל ובטוח לשימוש בתכשירים קוסמטיים לטיפוח העור המשמשים להלבנת עור.

על פי מחקרים רלוונטיים,cistancheהוא צמח נפוץ המכונה "עשב הנס מאריך חיים". המרכיב העיקרי שלו הואcistanoside, בעל השפעות שונות כגוןנוגד חמצון, אנטי דלקתי, וקידום תפקוד מערכת החיסון. המנגנון בין cistanche והלבנת עורטמון בהשפעה נוגדת החמצון של cistancheגליקוזידים. המלנין בעור האדם מיוצר על ידי חמצון של טירוזין המזוזז על ידיטירוזינאז, ותגובת החמצון דורשת השתתפות של חמצן, ולכן הרדיקלים החופשיים בחמצן בגוף הופכים לגורם חשוב המשפיע על ייצור המלנין. Cistanche מכיל ציסטאנוסיד, שהוא נוגד חמצון ויכול להפחית את יצירת הרדיקלים החופשיים בגוף, ובכךעיכוב ייצור המלנין.

where can i buy cistanche

לחץ על מוסף Cistanche Tubulosa

למידע נוסף:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

מילות מפתח:פלומבגין; מלנוגנזה; צִבעָנוּת; טירוזינאז

1. הקדמה

המלנין מורכב מקבוצה של פיגמנטים המסונתזים במלנוציטים אפידרמיס הממלאים תפקיד חשוב בהגנה על העור מפני נזקי קרינה אולטרה סגולה (UV) [1]. מלנוגנזה חריגה, ייצור מוגבר או מופחת של מלנין, קשורה קשר הדוק למספר מחלות עור כולל מלנומה והפרעות פיגמנטציה, כגון כלואזמה ונמשים [2,3]. הביוסינתזה של מלנין מתחילה על ידי גירויים מרובים כולל הקרנת UV, ציטוקינים דלקתיים ואיתות הורמונלי. באופן ספציפי, הורמון מגרה של מלנוציטים (-MSH) המשתחרר מקרטינוציטים החשופים ל-UV יכול לעורר ביוסינתזה של מלנין במלנוציטים אפידרמיס על ידי הפעלת ציר cAMP-PKA-CREB (ציקלי אדנוזין מונופוספט-חלבון קינאז A-cAMP תגובה אלמנט מחייב חלבון) [3] . ציר cAMP-PKA-CREB המופעל מוביל לעלייה ב-mRNA המקודד ל-microphthalmia-associated transcription factor (MITF). MITF מגביר את ביטוי הגנים של טירוזינאז (TYR), חלבון קשור לטירוסינאז 2 (TYRP1) וחלבון קשור לטירוזינאז 2 (TYRP2) לאחר גירוי -MSH במלנוציטים [3,4]. בנוסף, מסלולי איתות רבים השולטים בצמיחת תאים, כולל חלבון קינאז המופעל על ידי מיטוגן (MAPK), קינאז תגובה חוץ תאית (ERK) ו-AKT, חיוניים למלנוגנזה על ידי ויסות יציבות ופעילות MITF [5].

האנזים טירוזינאז, אוקסידאז רב תכליתי המכיל נחושת, ממלא תפקיד חיוני בביו-סינתזה של מלנין על ידי זרז התגובות שבהן L-tyrosine עובר הידרוקסילציה ל-L-dihydroxyphenylalanine (L-DOPA) ו-L-DOPA מתחמצן לאו-קינון (דופקינון). ) [5,6]. לכן, מעכבי טירוזינאז מסוימים מעכבים גם את הביוסינתזה של מלנין, ואלה כוללים רזברטרול, ארבוטין והונוקיול, שכולם שימשו ביישומים קוסמטיים להלבנת עור [7].

does cistanche work

פלומבאגין הוא הידרוקסיל-נפטוקינון פשוט, שהופק לראשונה משורשי הצמחים מהסוג Plumbago והוכח כבעל סגולות רפואיות יוצאות דופן [8]. דווח על פעילות אנטי דלקתית, אנטי סרטנית, אנטי אלרגית ואנטי בקטריאלית של פלומבאגין [8,9]. ואכן, דווח כי פלומבאגין מעכב הפעלת נויטרופילים, אנגיוגנזה וביטוי קולגנאז על ידי דיכוי טופואיזומראז-II, דבר המצביע על שימוש בפלומבאגין כתרופה פוטנציאלית לטיפול בדלקת מפרקים שגרונית [10]. בנוסף, מספר דיווחים הראו כי פלומבאגין מפגין פעילות אנטי-סרטנית במספר סוגים של סרטן, כולל שד [11], ערמונית [12], שחלה [13], ריאות [14], קרצינומה של העור [15] וסרטן הכבד [16]. למרות שמתברר כי פלומבאגין עשוי להיות שימושי כהתערבות טיפולית בטיפול במחלות אנושיות שונות, מעולם לא דווח על ההשפעה המעכבת של הפלומבאגין על מלנוגנזה הקשורה להיפרפיגמנטציה.

במחקר הנוכחי, הערכנו את ההשפעות המעכבות של פלומבאגין על מלנוגנזה המגורה על ידי -MSH. כאן אנו מראים כי פלומבאגין מדכא באופן משמעותי את הביוסינתזה של מלנין המושרה על ידי MSH בתאי מלנומה של עכבר B16F10 על ידי עיכוב פעילות טירוזינאז אך אינו מעכב ביטוי גנים בתיווך MITF הקשור למלנוגנזה.

2. תוצאות

2.1. מבנה כימי והשפעות ציטוטוקסיות של פלומבאגין בתאי מלנומה של עכבר B16F10

לפני שחקרנו את ההשפעות האנטי-מלנוגניות של פלומבאגין, הערכנו תחילה את הרעילות שלו בתאי מלנומה של עכבר B16F10 המייצרים מלנין. המבנה הכימי של פלומבאגין מוצג באיור 1A. התוצאות של בדיקת הציטוטוקסיות שלנו שבה ריכוזי פלומבאגין פחות מ-5 מיקרומטר לא השפיעו על כדאיות התא בתאי B16F10 מוצגות באיור 1B.

cistanche tubulosa supplement

2.2. Plumbagin מדכא סינתזת מלנין המושרה על ידי MSH בתאי מלנומה של עכבר B16F10

לאחר מכן חקרנו את ההשפעות המעכבות של פלומבאגין על סינתזת מלנין המושרה בהורמון מלנוציטים (-MSH) בתאי B16F10. הדגמנו כי פלומבאגין מדכא מאוד הצטברות מלנין המושרה על ידי MSH במדיום תרבותי של תאי B16F10 (איור 2A). כדי לאשר את ההשפעה המעכבת של פלומבאגין על סינתזת מלנין המושרה על ידי-MSH, קבענו את תכולת המלנין החוץ-תאית או התוך-תאית בהיעדר או נוכחות של פלומבאגין בתאי B16F10 מגורים-MSH. איורים 2B ו-C מראים כי פלומבאגין מפחית באופן משמעותי את תכולת המלנין החוץ-תאית והתוך-תאית.

how to take cistanche

2.3. Plumbagin לא מווסת - MSH-Induced Melanogenesis ביטוי גנים ומפלי העברת אותות

מכיוון שגורם שעתוק הקשור למיקרופתלמיה (MITF) הוא גורם שעתוק חיוני המווסת ביטוי גנים הקשור למלנוגנזה דרך ציר -MSH-PKA-CREB, בדקנו האם פלומבאגין יכול לווסת ביטוי גנים בתיווך MITF הקשור למלנוגנזה. ראשית, קבענו נקודת זמן של ביטוי גן מלנוגנזה מקסימלי עבור MITF, tyrosinase (TYR) וחלבון 1 (TYRP1) הקשור ל-tyrosinase תחת גירוי -MSH. MITF מווסת בצורה חזקה לאחר טיפול -MSH למשך 2 שעות (איור 3A). TYR ו-TYRP1 הווסרו באופן דרמטי לאחר 48 שעות של טיפול ב-MSH (איור 3A). רמות חלבון MITF ו-tyrosinase עלו בתגובה לטיפול ב-MSH ולא דוכאו על ידי הטיפול בפלומבגין (איור 3B). באופן עקבי, פלומבאגין לא עיכב את רמות ה-MRNA של MITF, TYR ו-TYRP1 לאחר גירוי -MSH, מה שמצביע על כך שפלומבאגין אינו מווסת את מנגנון התעתיק הקשור לביטוי גן מלנוגנזה בתאי B16F10 (איור 3C). מכיוון שנדרשים זרחון והפעלה של AKT, ERK1/2 ו-CREB (מפלי העברת אותות מרכזיים המווסתים מלנוגנזה) למלנוגנזה [3], חקרנו עוד האם פלומבאגין מווסת את מסלולי העברת האותות הקשורים למלנוגנזה. התוצאות שלנו, המתוארות באיור 3D, מראות כי פלומבאגין אינו משנה את איתות AKT, ERK1/2 או CREB לאחר טיפול -MSH.

cistanche side effects reddit

2.4. Plumbagin מעכב את פעילות טירוזינאז

מכיוון שמוצרים טבעיים המעכבים טירוזינאז ישירים או עקיפים יכולים להיות שימושיים לפיתוח מוצרי קוסמטיקה להלבנת עור, חקרנו בשלב הבא את ההשפעה המעכבת של פלומבאגין על פעילות האנזים טירוזינאז. במחקר זה, הדגמנו כי פלומבאגין מדכא באופן משמעותי את הפעילות האנזימטית של טירוזינאז תאית המושרה על ידי MSH בתאי B16F10 (איור 4A). כדי להבין האם פלומבאגין מעכב את פעילות טירוזינאז באופן ישיר או עקיף, נמדדה פעילות טירוזינאז נטולת תאים. Plumbagin מעכב מאוד את פעילות החמצון L-DOPA של טירוזינאז שמקורו בפטריות גם כן, מה שמרמז שפלומבאגין מדכא מלנוגנזה על ידי עיכוב ישיר של פעילות טירוזינאז (איור 4B). בנוסף, נצפתה עלייה משמעותית בפעילויות ניקוי רדיקליות באמצעות בדיקת 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) בדגימות שטופלו בוויטמין C ובפלומבאגין בריכוזים הנעים בין 0.1 עד 5 מ"ג/מ"ל. כתוצאה מכך, 5 מ"ג/מ"ל של פלומבאגין הראו השפעה דומה על פעילות ניקוי רדיקליים לאלה של 0.1 מ"ג/מ"ל של ויטמין C (איור 4C).

cistanche for sale

2.5. Plumbagin אינו רעיל בקרטינוציטים רגילים ובתאי אפיתל העדשה

מכיוון שמוצרי קוסמטיקה כגון קרם עור מיועדים לשימוש חיצוני וציטוטוקסיות עלולה לגרום לבעיות עור, בדקנו עוד האם פלומבאגין רעיל לקרטינוציטים נורמליים (HaCaT) ולתאי אפיתל העדשה (B3) והאם הוא עשוי להיות שימושי לפיתוח הלבנת עור קוסמטיקה. כתוצאה מכך, מצאנו שריכוזים נמוכים יותר של פלומבאגין (1-5 מיקרומטר) אינם גורמים לרעילות בתאי HaCaT ו-B3, אלא יעילים בעיכוב סינתזת המלנין (איור 5A). בנוסף, פלומבאגין לא גרם ל-H2AX הקשור לנזק ל-DNA והפחית את חלבוני הפולי (ADP-ribose) הקשורים לאפופטוזיס תאית (PARP) וקספאז-3 בתאי HaCaT ו-B3 (איור 5B), מה שמצביע על כך שפלומבאגין עשוי להיות מקובל לשימוש במוצרים להלבנת עור מבלי להפגין רעילות עורית כלשהי.

rou cong rong benefits

3. דיון

Plumbagin הוא מטבוליט משני שמקורו בצמחים ומציג מספר פונקציות ביולוגיות, כולל פעילות אנטי דלקתית, אנטי סרטנית, אנטי אלרגית ואנטי בקטריאלית [8,9]. עם זאת, לא היה ידוע אם לפומבאגין הייתה השפעה מעכבת על מלנוגנזה הקשורה להיפרפיגמנטציה ולמלנומה. במחקר זה, הדגמנו כי פלומבאגין מדכא מאוד מלנוגנזה בתאי מלנומה B16F10, ועבודה זו יכולה לספק הזדמנות לפיתוח קוסמטיקה לטיפוח העור המבוססת על הפעילויות האנטי דלקתיות, האנטי אלרגיות, האנטי בקטריאליות ואנטי מלנוגנזה של הפלומבאגין.

מכיוון ש-upregulation של מלנוגנזה נצפה לעתים קרובות במלנומה ממאירה עם רמות טירוזינאז המובעות מדי בדם כמו גם ברקמות הגידול, ברור שמלנוגנזה היא יעד פוטנציאלי לכימותרפיה של מלנומות ממאירות [1]. במחקר הנוכחי, מצאנו כי פלומבאגין מדכא ישירות את פעילות טירוזינאז ללא תלות במנגנון התעתיק הקשור למלנוגנזה (איור 6). לכן, התוצאות שלנו מצביעות על כך שפלומבאגין עשוי להיות מרכיב פוטנציאלי באסטרטגיה מניעתית וטיפולית לניהול מלנומה ממאירה. אכן, דווחו ההשפעות האנטי-מלנומה, רגישות כימות ורדיוסנסיטיזציה של פלומבאגין על טיפול במלנומה [17-21].

cistanche chemist warehouse

במחקרים קודמים שעסקו בהשפעות האנטי-סרטניות והאנטי דלקתיות של פלומבאגין, נעשה שימוש בכ-5-10 מיקרומטר של פלומבאגין (גבוה מהריכוז בו נעשה שימוש במחקר זה) במודלים במבחנה [17,22 ,23]. לכן, חקרנו את ההשפעה הרעילה של פלומבאגין בתאים שגשוג, כולל קרטינוציטים רגילים (HaCaT) ותאי אפיתל עדשה (B3), שעלולים להינזק על ידי מוצרי קוסמטיקה לטיפול בעור. התוצאות שלנו הוכיחו שריכוזים נמוכים יותר, בערך 0.5-1 מיקרומטר של פלומבאגין, אינם רעילים לקרטינוציטים נורמליים ולתאי אפיתל העדשה, אך יעילים מספיק כדי להפחית את פעילות טירוזינאז וסינתזת המלנין. בנוסף, מצאנו גם שפומבאגין מדכא את המלנוגנזה בצורה יעילה יותר מאשר 1 mM ארbutin או 0.2 mM kojic acid, שהיא חומרי הלבנת עור ידועים. תוצאות אלו מצביעות על כך שפלומבאגין בטוח לשימוש כמרכיב לפיתוח קוסמטיקה להלבנת עור.

במחקר הנוכחי, חקרנו את ההשפעות המעכבות של פלומבאגין על תגובת האנזים טירוזינאז באמצעות מבחני פעילות טירוזינאז תאיים וללא תאים המבוססים על חמצון L-DOPA. עם זאת, לא הצענו מנגנון מולקולרי מדויק לגבי האופן שבו פלומבאגין מעכב את פעילות טירוזינאז. מנגנון זה צריך להיחקר עוד יותר כדי לקבוע האם פלומבאגין יוצר אינטראקציה ישירה עם טירוזינאז ומעכב את פעילות האוקסידאז שלו או שיש לו השפעות עקיפות המובילות לירידה בפעילות טירוזינאז.

4. חומרים ושיטות

4.1. ריאגנטים ונוגדנים

Plumbagin, -MSH (M4135), ארבוטין (A4256), חומצה קוג'ית (K3125), L-DOPA (333786) וטירוזינאז (T3824) מטוהרים מפטריות נרכשו מסיגמא-אלדריץ' (סנט לואיס, מונטנג'רס, ארה"ב). נוגדנים נגד MITF (#12590), p-AKTS473 (#4060), p-AKTT308 (#13038), p-CREB (#9198), p-ERK1/2 (#4370), ERK1/2 (#9102), H2AX (#9718), PARP (#5625) ו-caspase-3 (#9665) נרכשו מ- Cell Signaling Technology (Danvers, MA, ארה"ב). Tyrosinase (sc-7833), ו-tubulin (sc-9104) נרכשו מסנטה קרוז ביוטכנולוגיה (דאלאס, טקסס, ארה"ב).

4.2. בדיקת תרבות תאים וחיות תאים

תאי B16F10 (תאי מלנומה של עכברים), B3 (תאי אפיתל של עדשה אנושית) ו-HaCaT (קרטינוציטים אנושיים) תורבו במדיום של Dulbecco שונה של Eagle's (DMEM) בתוספת של 10 אחוז סרום בקר עוברי ו-25 mM גלוקוז. התאים הודגרו באווירה לחה של 95 אחוז אוויר ו-5 אחוז CO2 ב-37 מעלות צלזיוס. כדי למדוד כדאיות, תאים הודגרו עם ריכוזים שונים של פלומבאגין מומס בדימתיל סולפוקסיד (DMSO) למשך 48 או 72 שעות. לאחר הדגירה, תאים מתורבתים נשטפו עם PBS ולאחר מכן הודגרו עם תמיסת צביעה בסגול קריסטל של 0.5 אחוז למשך 20 דקות בטמפרטורת החדר. כדי למדוד צפיפות אופטית, תאים צבועים הודגרו בתמיסת נתרן דודציל סולפט (SDS) 1% למשך 15 דקות בטמפרטורת החדר, והצפיפות האופטית של כל באר נמדדה לאחר מכן ב-570 ננומטר (OD570) באמצעות קורא ספיגה (BioTek, Winooski , VT, ארה"ב).

4.3. אימונובלוטינג

תאים מתורבתים עברו ליטוש באמצעות 1% IGEPAL (octylphenoxypolyethoxyethanol), 150 mM NaCl, 50 mM Tris-HCl (pH 7.9), 10 mM NaF וקוקטייל מעכב פרוטאז במאגר תמוגה. דגימות חלבון הופרדו באמצעות אלקטרופורזה של ג'ל סודיום דודציל סולפט-פוליאקרילאמיד (SDS-PAGE), והחלבונים המופרדים הועברו לאחר מכן לממברנת פוליווינילידן דיפלואוריד (PVDF) (Millipore, Billerica, MA, ארה"ב). הממברנות הודגרו במשך הלילה עם נוגדנים ראשוניים (1:1000) ב-4 ◦C, ולאחר מכן הודגרו עם נוגדנים משניים מצומדים HRP (1:10,000) למשך שעה אחת בטמפרטורת החדר. חלבונים הוצגו באמצעות ערכת ECL Prime (GE Healthcare, פיטסבורג, פנסילבניה, ארה"ב).

cistanche nedir

4.4. מדידת תכולת מלנין תוך תאי וחוץ תאי

תכולת המלנין נקבעה וכמתה באמצעות שיטה שתוארה קודם לכן עם שינוי קל [2,24]. לצורך ניתוח תכולת המלנין, תאי B16F10 תורבו ב-DMEM נטול פנול אדום המכיל 10 אחוז סרום בקר עוברי. תאי B16F10 תורבו בטיפול -MSH בהיעדר או נוכחות של פלומבאגין למשך 3 או 4 ימים. התאים או המדיה התרבותיים נקצרו והכדורים הומסו ב-1N NaOH המכיל 10 אחוז DMSO ב-80 מעלות צלזיוס למשך שעה אחת. תכולת המלנין נמדדה באמצעות קורא ספיגה ב-475 ננומטר (OD475), ותכולת המלנין נורמלה לאחר מכן לריכוז החלבון הסלולרי.

4.5. בידוד RNA ו-RT-PCR כמותי

RNA כולל הופק מתאי B16F10 באמצעות TRIzol (Invitrogen, Waltham, MA, ארה"ב) ו-2 מיקרוגרם של RNA כולל שימשו לסינתזה של cDNA באמצעות ערכת שעתוק לאחור של cDNA בעלת קיבולת גבוהה (Applied Biosystems, Waltham, MA, ארה"ב). PCR כמותי בוצע באמצעות SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems). הרצפים של הפריימרים של PCR (50 -30) היו כדלקמן: TCAAGTTTCCAGAGACGGGT ו- CATCATCAGCCTGGAATCAA עבור MITF; ATAGGTGCATTGGCTTCTGG ו- TCTTCACCATGCTTTTGTGG עבור TYR; CATTTCCAG CTGGGTTTCTC ו-TGGTCTGTGAATCCTTGGAA עבור TYRP1.

4.6. Assay Activity Tyrosinase Cellular

פעילות טירוזינאז תאית נקבעה באמצעות שיטה שתוארה בעבר עם שינוי [25,26]. תאי B16F10 מתורבתים הודגרו עם -MSH בהיעדר או נוכחות של פלומבאגין, ולאחר מכן התאים נשטפו והוסרו עם PBS המכיל 1 אחוז נתרן דאוקסיכולאט ו-0.5 אחוז Triton X{{8} }. לאחר קביעת ריכוז החלבון, 50 מיקרוגרם של חלבון הודגרה עם 2.0 mM L-DOPA ו-0.1 M PBS (pH 6.8) למשך שעה אחת ב-37 ◦C. החמצון של L-DOPA נמדד ב-475 ננומטר (OD475) באמצעות קורא ספיגה. הפעילות נמדדה באמצעות הנוסחה הבאה: פעילות טירוזינאז ( אחוז )=(OD475 של המדגם/OD475 של הביקורת) × 100.

4.7. בדיקת פעילות טירוזינאז ללא תאים

כדי לקבוע את ההשפעה המעכבת של פלומבאגין על פעילות טירוזינאז, טירוזינאז פטריות מטוהר הודגר במשך שעתיים עם תערובת תגובה המכילה 0.1 M PBS (pH 6.8) ו-2 mM L-DOPA בהיעדר או נוכחות של פלומבגין . החמצון של L-DOPA ל-dopachrome נמדד ב-475 ננומטר (OD475) עם קורא ספיגה. הפעילות נמדדה באמצעות הנוסחה הבאה: פעילות טירוזינאז ( אחוז)=(OD475 של המדגם/OD475 של הביקורת) × 100.

4.8. DPPH Radical Scavenging Activity Assay

כדי לקבוע את פעילות הניקוי הרדיקלי של פלומבאגין, הוכנה והשתמשה בתמיסת {{0}}.2 mM DPPH במתנול. כל דגימה דוללה במים מזוקקים לריכוזים סופיים של 0.1, 0.2, 0.5, 1, 2 ו-5 מ"ג/מ"ל (פלומבאגין), או { {13}}.005, 0.01, 0.05, 0.1, 0.2 ו-0.5 מ"ג/מ"ל (ויטמין C). לאחר התגובה, צפיפות אופטית (OD) נמדדה ב-517 ננומטר (OD517) באמצעות קורא ספיגה. פעילות סילוק רדיקלים חופשיים חושבה באמצעות הנוסחה הבאה: פעילות סילוק רדיקלים DPPH ( אחוז )=10 − ((ODs/ODc) × 100), כאשר ODs מייצגים את הספיגה של הדגימות, ו-ODc מייצגת את הספיגה של הדגימות. שליטה ברכב.

4.9. ניתוח סטטיסטי

כל הנתונים נותחו באמצעות מבחן t של Student ללא התאמה עבור שתי השוואות ניסיוניות וניתוח שונות של שונות (ANOVA) עם מבחן הפוסט-הוק של Tukey עבור השוואות מרובות באמצעות Prism (GraphPad Software Inc., La Jolla, CA, ארה"ב). הנתונים מוצגים כממוצע ± סטיית תקן (SD). הבדלים בין ערכים ממוצעים נחשבו מובהקים סטטיסטית כאשר ערך ה-p המשויך היה קטן מ-0.05.

5. מסקנות

הממצאים העיקריים של מחקר זה הם שפלומבאגין (i) מדכא סינתזת מלנין המושרה על ידי MSH על ידי עיכוב פעילות טירוזינאז; (ii) אינו משפיע על מנגנון התעתיק המקושר ל-MITF ומפלי העברת אותות כולל AKT והפעלה של ERK1/2 הקשורים למלנוגנזה; ו-(iii) אינו גורם לרעילות בקרטינוציטים נורמליים (HaCaT) ובתאים אפיתל עדשה (B3) כאשר ריכוזם היה נמוך מ-5 מיקרומטר. ביחד, הפלומבאגין מבטל את סינתזת המלנין המושרה על ידי MSH על ידי עיכוב פעילות טירוזינאז ללא תלות בציר התעתיק CREB-MITF. תוצאות אלו, לפיכך, מצביעות על מוצר טבעי מבטיח ובטוח פלומבגין להפחתת היפרפיגמנטציה על ידי שימוש בו בפיתוח מוצרי קוסמטיקה להלבנת עור.

cistanche norge

תודות:עבודה זו נתמכה על ידי אוניברסיטת Konkuk בשנת 2016.
תרומות מחבר:ג'י-הונג לים הגה ועיצב את הניסויים; Taek-In Oh, Jeong-Mi Yun, Eun-Ji Park, ויאנג-Seon Kim ביצעו את הניסויים; Ji-Hong Lim, Taek-In Oh ו- Yoon-Mi Lee ניתחו את הנתונים; ג'י-הונג לים ויון-מי לי כתבו את כתב היד.
ניגודי עניינים: המחברים אינם מצהירים על ניגוד עניינים.
קיצורי מילים
הורמון מגרה אלפא מלנוציטים MSH
TYR טירוזינאז
L-DOPA L-3,4-דיהידרוקסיפנילאלנין
MITF גורם שעתוק הקשור למיקרופתלמיה
חלבון הקשור ל-TYRP1 טירוזינאז 1
CREB cAMP תגובה אלמנט קושר חלבון
PKA חלבון קינאז A
ERK1/2 קינאז מווסת אות חוץ תאי 1/2

הפניות

1. Riley, PA מלנוגנזה ומלנומה. פיגמנט Cell Res. 2003, 16, 548–552. [CrossRef] [PubMed]

2. Bae, JS; האן, מ.; יאו, ג; Chung, JH Chaetocin מעכב מלנוגנזה המושרה על ידי IBMX בתאי מלנומה של עכבר B16F10 באמצעות הפעלה של ERK. Chem. ביול. אינטראקציה. 2016, 245, 66–71. [CrossRef] [PubMed]

3. D'Mello, SA; Finlay, GJ; באגולי, לפני הספירה; Askarian-Amiri, ME מסלולי איתות במלנוגנזה. Int. י.מול. Sci. 2016. [CrossRef] [PubMed]

4. קים, HJ; Yonezawa, T.; תרויה, ט; וואו, JT; Cha, BY Nobiletin, פלבנואיד פולי אתוקסי, מופחת אנדותלין-1 בתוספת פיגמנטציה הנגרמת על ידי SCF במלנוציטים אנושיים. Photochem. Photobiol. 2015, 91, 379–386. [CrossRef] [PubMed]

5. קאנג, SJ; Choi, BR; לי, EK; קים, SH; יי, הי; פארק, משאבי אנוש; שיר, ח; לי, YJ; Ku, SK השפעה מעכבת של אבקת ריכוז רימונים מיובשים על מלנוגנזה בתאי מלנומה B16F10; מעורבות של מסלולי איתות p38 ו-PKA. Int. י.מול. Sci. 2015, 16, 24219–24242. [CrossRef] [PubMed]

6. קים, JW; קים, היי; קים, JH; קוון, OC; בן, ES; לי, CS; Park, YJ השפעות של ganodermanondiol, מעכב מלנוגנזה חדש מפטריית המרפא Ganoderma lucidum. Int. י.מול. Sci. 2016, 17, 1798. [CrossRef] [PubMed]

7. טסאו, YT; Huang, YF; Kuo, CY; לין, YC; צ'יאנג, שירותים; וואנג, WK; Hsu, CW; Lee, CH Hinokitiol מעכב מלנוגנזה באמצעות איתות AKT/mTOR בתאי מלנומה של עכבר B16F10. Int. י.מול. Sci. 2016, 17, 248. [CrossRef] [PubMed]

8. Padhye, S.; Dandawate, P.; יוסופיפי, מ.; אחמד, א.; Sarkar, FH פרספקטיבות על תכונות רפואיות של פלומבאגין והאנלוגים שלו. Med. מילון Rev. 2012, 32, 1131–1158. [CrossRef] [PubMed]

9. גופטה, SC; קים, JH; פראסד, ש.; Aggarwal, BB ויסות של הישרדות, שגשוג, פלישה, אנגיוגנזה וגרורות של תאי גידול באמצעות אפנון של מסלולים דלקתיים על ידי חומרים תזונתיים. סרטן גרורות Rev. 2010, 29, 405-434. [CrossRef] [PubMed]

10. ג'קסון, ג'יי קיי; היגו, ט.; האנטר, WL; Burt, HM מעכבי טופואיזומראז כסוכנים אנטי ארטריטיים. Inflflamm. מילון 2008, 57, 126–134. [CrossRef] [PubMed]

11. אחמד, א.; Banerjee, S.; וואנג, ז.; קונג, ד.; Sarkar, FH אפופטוזיס המושרה על ידי Plumbagin של תאי סרטן שד אנושיים מתווכת על ידי אי-אקטיבציה של NF-κB ו-Bcl-2. J. Cell. Biochem. 2008, 105, 1461–1471. [CrossRef] [PubMed]

12. עזיז, מ"ה; דרקשמידט, ניו יורק; Verma, AK Plumbagin, נפתוקינון שמקורו בצמחי מרפא, הוא מעכב חדש של גדילה ופלישה של סרטן ערמונית חסין הורמונים. Cancer Res. 2008, 68, 9024–9032. [CrossRef] [PubMed]

13. תסני, ק"א; רקש, ש; Rojini, G.; רתאשקומאר, ט; סריניבס, ג'; Priya, S. איתות תאים תלויי אסטרוגן ואפופטוזיס ב-BRCA 1-חסמו תאי סרטן השחלות BG1 בתגובה לפלומבאגין ולסוכנים כימותרפיים אחרים. אן. אונקול. 2008, 19, 696–705. [CrossRef] [PubMed]

14. Gomathinayagam, R.; סומיאלקשמי, ש.; Mardhatillah, F.; קומאר, ר.; אכברשה, מ"א; Damodaran, C. מנגנון אנטי-סרטני של פלומבאגין, תרכובת טבעית, על תאי סרטן ריאות לא קטנים. Anticancer Res. 2008, 28, 785–792. [PubMed]

15. וואנג, CC; צ'יאנג, י.מ; סונג, SC; הסו, י"ל; צ'אנג, JK; Kuo, PL Plumbagin משרה עצירת מחזור התא ואפופטוזיס באמצעות מיני חמצן תגובתיים/מסלולי קינאז N-טרמינלי c-Jun בתאי מלנומה אנושית A375.S2. סרטן Lett. 2008, 259, 82–98. [CrossRef] [PubMed]

16. שי, י"ו; לי, YC; וו, PF; לי, י.ב; Chiang, TA Plumbagin מעכב פלישה והגירה של תאי HepG2 סרטן הכבד על ידי הפחתת הייצור של מטריקס מטלופרוטאינז-2 ומפעיל אורוקינאז-פלסמינוגן. הפטול. מילון 2009, 39, 998–1009. [CrossRef] [PubMed]

17. ענוף, א"ר; רמצ'נדרן, ר.; קרישנאסמי, ר.; גנדי, נ.ב; Periyasamy, S. השפעות אנטי-פרוליפרטיביות של Plumbago rosea והמרכיב המטוהר שלו Plumbagin על SK-MEL 28 קווי תאי מלנומה. Pharmacogn. מילון 2014, 6, 312–319.

18. Gowda, R.; שארמה, א.; רוברטסון, GP השפעות מעכבות סינרגיות של celecoxib ופלומבאגין על צמיחת גידול מלנומה. סרטן Lett. 2017, 385, 243–250. [CrossRef] [PubMed]

19. לי, ג'; Shen, Q.; פנג, ר.; חן, ר.; ג'יאנג, פ.; לי, י.; ג'אנג, ל.; Lu, J. Plumbagin משפר אפופטוזיס בתיווך TRAIL באמצעות ויסות-על של קולטן המוות בתאי מלנומה A375 אנושית. J. Huazhong Univ. Sci. טכנול. Med. Sci. 2010, 30, 458–463. [CrossRef] [PubMed]

20. נאיר, ש.; Nair, RR; סריניבס, פ.; סריניבס, ג'; Pillai, MR השפעות רגישות לרדיו של פלומבאגין בתאי סרטן צוואר הרחם היא באמצעות אפנון של המסלול האפופטוטי. מול. קרצינוג. 2008, 47, 22–33. [CrossRef] [PubMed]

21. פראסד, VS; Devi, PU; ראו, ב"ש; Kamath, R. Radiosensitizing אפקט של plumbagin על תאי מלנומה עכברים שגדלו במבחנה. ההודי J. Exp. ביול. 1996, 34, 857–858. [PubMed]

22. לי, י.כ; הוא, SM; הוא, ZX; לי, מ.; יאנג, י.; Pang, JX; ג'אנג, X.; צ'או, ק.; ג'ואו, ש; דואן, ו.; et al. Plumbagin גורם למוות של תאים אפופטוטי ואוטופגי באמצעות עיכוב של מסלול PI3K/Akt/mTOR בתאי סרטן ריאות אנושיים לא קטנים. סרטן Lett. 2014, 344, 239–259. [CrossRef] [PubMed]

23. צ'קר, ר.; שארמה, ד.; Sandur, SK; חנם, ש.; Poduval, TB השפעות אנטי דלקתיות של פלומבאגין מתווכות על ידי עיכוב של הפעלת NF-κB בלימפוציטים. Int. Immunopharmacol. 2009, 9, 949–958. [CrossRef] [PubMed]

24. קים, ב.; לי, ש; Choi, KY; Kim, HS N-Nicotinoyl tyramine, נגזרת חדשנית של ניאצינמיד, מעכבת מלנוגנזה על ידי דיכוי ביטוי גנים MITF. יורו J. Pharmacol. 2015, 764, 1–8. [CrossRef] [PubMed]

25. לי, HY; ג'אנג, EJ; ביי, SY; ג'ון, JE; פארק, HJ; שין, ג'; Lee, SK פעילות אנטי-מלנוגנית של Gauguin D, דיטרפנואיד מחומצן מאוד מהספוג הימי Phorbas sp., באמצעות מווסת ביטוי ופירוק טירוזינאז. Mar. Drugs 2016, 14, 212. [CrossRef] [PubMed]

26. וינדר, AJ; Harris, H. מבחנים חדשים לפעילות טירוזין הידרוקסילאז ו-DOPA אוקסידאז של טירוזינאז. יורו J. Biochem. 1991, 198, 317–326. [CrossRef] [PubMed]

למידע נוסף: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

אולי גם תרצה