דפוסי ביטוי MRNA של קשת במוח החולדות בעקבות היזכרות כפולה של מידע חברתי מבוסס פחד ותגמול(2)

קשת בהיזכרות של אסוציאציות פחד ישירות ונרכשות חברתית.

היכולת שלנו לפרש את הממצאים שלנו לגבי החולדות שלנו שעוברות היזכרות של פחד שנרכש באמצעות למידה ישירה נעזרת באופן משמעותי על ידי מידת המאפיינת היטב את המערכת שבבסיס הלמידה וההיזכרות של הפחד. מספר מהתחומים שבדקנו מעורבים בלמידת פחד או הכחדה (שהאחרונים שבהם היינו מניחים שיוזמו במדגמים, מכיוון שהם עברו מצגת CS לא מחוזקת במהלך FCbP) במיוחד ה-ACC, PLC ו-ILC30–32 ,37. למרות שקיים מאגר מחקר קטן מעט יותר לגבי המנגנונים העצביים של פחד חברתי, המודלים המוצעים של למידת פחד חברתי טוענים שמערכות דומות עומדות בבסיס למידת פחד חברתי וישיר28. הממצאים שלנו לא מצביעים על תפקיד כולל של ה-ACC, PLC או ILC בהיזכרות של אסוציאציה לפחד נרכשת חברתית או אסוציאציה של פחד נרכש ישירות (אם כי ראה גם "דיון" על הבדלי מין בפעילות PLC להלן). עם זאת, כפי שכוסה בסעיף הקודם, זה כנראה רק מצביע על כך ש-Arc לא משמשת כאינדיקטור אמין לפעילות במקרה זה. בדיקה של תחומים אלה לאחר רכישת פחד תספר סיפור אחר. מחקר מפורש קשוח בפעילות Arc בעקבות היזכרות בפחד מוגבל, יש כמה מחקרים מהעבר שאפשר להפיק ממנו. Chia ו-Otto35 מצאו כי בעקבות התניה של חולדות היה ביטוי חלבון Arc גבוה יותר באופן משמעותי הן בהיפוקמפוס הגבי והן בהיפוקמפוס הגחון בהשוואה לבקרות לא מותנות. יש לציין כי Arc כמתה על ידי ניתוח Western Blot של ההיפוקמפוס הגחון והגב הומוגני בניסוי זה, ולכן לוקליזציה מדויקת של פעילות ההיפוקמפוס לא הייתה זמינה. ממצאים אלו מצביעים ככל הנראה על כך שכמו ב-STFP, שעתוק קשת עשוי להיגרם באזורים מסוימים של ההיפוקמפוס בנקודת זמן ההיזכרות 48-h עבור זיכרון פחד רמז. ייתכן שהתוצאות האפסיות שלנו עשויות להיות גם בגלל ריקול כושל מצד הצופים, שכן בניגוד למחקרים קודמים במעבדה שלנו12-14,26 לא ראינו הקפאה גבוהה יותר ל-CS אצל צופים בהשוואה לביקורות. לא ברור אם זה בעצם בגלל ריקול כושל אצל משקיפים או בגלל נוהל ריקול CS יחיד שלנו והחשיפה המוקדמת של בקרות ל-CS לא ברור.

מה עושה cistanche-שיפור הזיכרון

תפקיד פוטנציאלי של קליפת המוח האורביטו-פרונטלית בהיזכרות של מידע נרכש חברתית.

במחקר ציון דרך, Lesburguères et al.24. הצליחו להדגים כי בעוד שפעילות ההיפוקמפוס הגבית (dHPC) הייתה הכרחית לרכישה וזיכרה לטווח קצר של STFP נרכש, זיכרון STFP הוצא בסופו של דבר ל-OFC לאחסון לטווח ארוך. בנוסף, Lesburguères et al. הצליחו להדגים כי תיוג של נוירונים בקליפת המוח האורביטו-פרונטלית במהלך רכישת STFP נחוץ לאחסון לטווח ארוך של העדפות מזון המועברות חברתית ושההפרעה לפעילות ה-OFC בעקבות הרכישה פוגעת בזיכרון הזיכרון 30 יום לאחר הרכישה (אם כי ראה גם38). ממצאים אלה יצביעו על תקשורת בין ה-dHPC ל-OFC בימים או בשבועות הראשונים שלאחר רכישת STFP וארגון מחדש מתמשך של ה-OFC בנקודת זמן זו כדי להתאים לאחסון לטווח ארוך של זיכרון STFP. בעוד שהיעדר הבדלים כלליים בביטוי קשת OFC גחון או רוחבי בין מפגינים, בקרות ומשקיפים במחקר זה יערער את הפרשנות הזו, זיהינו מתאם שלילי משמעותי בין המדד המשולב שלנו לביצועי למידה חברתית הכוללת לבין תאים המבטאים קשת כפולה. ב-VOC. יתר על כן, מתאם זה לא נצפה בין מדד דומה שנוצר עבור מפגינים בהתבסס על ביצועי מבחן בחירה והקפאה ל-CS. מכיוון שניתן להתייחס להסתמכות על מידע שנרכש מבחינה חברתית כבחירה בין מידע חברתי שעלול להיות בלתי אמין לבין הסכנות של למידה באמצעות התנסות ישירה, התפקיד המעכב לכאורה של הקול בביטוי המידע הנרכש מבחינה חברתית עשוי להיות קשור לתפקיד הרחב יותר של ה- OFC בערך. קבלת החלטות מבוססת 39–42.

ניסוי Cistanche deserticola

הבדלי מין בתעתיק קשת.

מספר סיבות סטטיסטיות ומתודולוגיות. ראשית, גודל המדגם הנמוך מדי פעם עבור נקבות, עם גודל קבוצה עבור שילובי מין/מצב שנעים בין n=2 ל-n=9 לאחר הסרת חולדות ללא מספיק חלקים קיימא (אם כי יש לציין, n<5 was only present for female Controls in the vOFC and lOFC and female Demonstrators and Observers in the lOFC, see Table S5 for specific group sizes). Additionally, our lack of entirely undisturbed controls means that we have no way to determine whether these sex differences are the result of baseline or task-specific differences in Arc mRNA production. Finally, because the pre-in situ PFA wash was not introduced until all female sections had been processed, this difference in tissue processing might have affected the overall stain. That said, if this were the case, we might expect to see a broader and more consistent effect of sex across regions and types of Arc expression (nuclear, cytoplasmic, and dual). As it is, 18 regions/cellular areas of Arc expression combinations are examined, and only 10 display a significant overall effect of sex. Furthermore, this effect is not uniform in its direction, with males displaying greater overall Arc expression in 5 cases and females displaying greater expression in the other 5. Regardless, we feel that our findings here should serve only to inform possible future research into sex differences in Arc expression. As it is, the limitation of the current study would make drawing definitive conclusions regarding sex effects on Arc expression inappropriate. This should be kept in mind in reading the following discussion.

למרות שנערכה מעט חקירה של הבדלי מין בביטוי קשת, ישנם כמה ממצאים המצביעים על כך שחולדות נקבות מביעות יותר קשת באזורים מסוימים בהיפוקמפוס הגבי בעקבות חשיפה חוזרת ונשנית לסביבה מועשרת יחסית43, אם כי מגמה בכיוון ההפוך הייתה גם נצפה בחולדות שנבדקו ללא התערבות התנהגותית מוקדמת43. הממצאים שלנו עשויים להצביע על כך שהבדלים בין המינים בתעתיק קשת קיימים בעקבות משימות או התנסויות התנהגותיות כלליות מסוימות. באזור CG1 של ה-ACC, מצאנו שלזכרים, בסך הכל, היו יותר תאים פעילים בשתי נקודות הזמן, אולי בגלל תעתוק בסיס גבוה יותר ב-ACC של זכרים או שעתוק מוגבר בעקבות שינויים בהקשר/חשיפה מחדש (כלוב ביתי → STFP חדר בדיקה → תא מיזוג) שכן ישנן ראיות מסוימות - אם כי מוגבלות - לתפקיד של ה-ACC בזכירה ארוכת טווח של זיכרונות הקשריים44. חולדות זכרים הציגו גם ספירות גרעיניות ו-Dual Arc גבוהות יותר ב-ILC. זה עשוי להיות מוסבר על ידי תפקידו של ILC בהכחדה ועיכוב פחד31,45,46 וכן ליקויים שנצפו בעיכוב והכחדה של פחד נלמד אצל נשים47-49. אם זה המקרה, זה אכן מעלה את השאלה מדוע לא נצפו הבדלים כלליים בין חולדות ה-Control, Observer וה-Demonstrator שלנו אם ביטוי Arc הופעל על ידי פעילות אינפראלימבית שמקורה ב-CS.

נקבות הראו רמות גבוהות יותר של ביטוי Arc עבור כל הספירות ב-vCA3. ההבדל בספירה הגרעינית יכול היה להיות תוצאה של הפעלה גדולה יותר בעקבות חשיפה ל-CS או חשיפה חוזרת לתא ההתניה אצל נקבות, בעוד שהרמות הגבוהות יותר של ביטוי קשת ציטופלזמי ב-vCA3 בעקבות משימת המזון עשויות להצביע על הבדלים בין המינים. התפקיד של Arc ב-vCA3 או הכרה במזון "מוכר" (אפילו עבור Observers הריח יהיה מוכר בשל האינטראקציה הקודמת שלהם עם המפגין) או תגמול/תהליכים כלליים. נקבה זו גם הראתה תיוג כפול גבוה יותר באופן משמעותי ב-vCA3 - אם כי השפעה זו הייתה קטנה - עשויה גם להצביע על עליות כלליות בתעתוק vCA3 Arc אצל נקבות. חולדות נקבות גם הציגו שעתוק ארק גרעיני גבוה יותר ב-vOFC ורמות כפולות גבוהות יותר של Arc mRNA ב-lOFC, אם כי תוצאות אלו קשות יותר לפירוש עקב המספר הנמוך של חולדות בקרה נקבות שרקמת המוח שלהן הייתה שלמה מספיק כדי לקחת ספירת OFC (n=2 ו-3 עבור OFC לרוחב וגחון, בהתאמה). נתונים מחולדות הבקרה הזמינות מצביעים על עלייה אפשרית בתיווך מין בייצור mRNA של OFC Arc, אך ייתכן באותה מידה שהשפעה זו לא תימשך עם n גבוה יותר. יש לציין, כמה מחקרים בעבר הצביעו על הבדלים מבניים ב-OFC והבדלים תפקודיים בהתנהגויות בתיווך OFC בין מכרסמים נקבות וזכרים 50-52.

אבקת תמצית Cistanche

אולי הבדלי המינים המעניינים ביותר שלנו ב-Arc mRNA זוהו ב-PLC. שם, זכרים הראו בסך הכל מספר גבוה יותר של תאים המבטאים Arc בציטופלזמה וגם בציטופלזמה וגם בגרעין (ביטוי כפול) מאשר נקבות. מצאנו גם שבעוד שמפגינים ותצפיתנים גברים לא הראו עלייה בתעתיק קשת על פני בקרה בנקודת הזמן של היזכרות בפחד, נשים מדגימות הראו תמלול קשת גרעיני גבוה משמעותית מאשר בקרה בעוד נשים משקיפות נפלו באמצע בין השניים. אפקט מין זה עשוי להיות מונע על ידי החסרים הנ"ל שנצפו בעיכוב והכחדה של פחד שנצפו בנשים בגילאי 47-49, שכן מחקרים קודמים הראו שה-PLC מעורב באופן קריטי בגירוי התנהגות פחד45,53,54. יתר על כן, מספר מחקרים הצביעו על הבדלים באיתות ובמבנה PLC כגורמים מניעים פוטנציאליים לליקויים ספציפיים למין אלה בעיכוב והכחדה של פחד55-58. אמנם לא מצאנו הבדל משמעותי בהתנהגות ההקפאה הנשית והזכרית לרמז, הוויסות המוגבר של Arc mRNA בתגובה ל-CS לא מחוזק הקשור ל-CS בנשים ספציפיות במפגינים עשוי להעיד על מבנה מחדש עצבי דיפרנציאלי ב-PLC שעלול להוביל בסופו של דבר הבדלים בין המינים בהבעת פחד.

מסקנות

אמנם הממצאים של מחקר זה לא הרחיבו את ההבנה שלנו לגבי מנגנוני המוח המעורבים באחזור של זיכרונות שנרכשו חברתית כפי שקיווינו, אבל התוצאות שלנו מספקות כמה תובנות פוטנציאליות לגבי הבדלי מין בביטוי Arc, כמו גם את התפקיד (או היעדר) של Arc בזיכרון לטווח ארוך. הממצאים שלנו מצביעים על כך שלפחות בקליפת המוח הקדם-מצחית וב-vCA3- אינדוקציה של פעילות מוחית באמצעות זכירת מידע נרכש חברתית אינה מספיקה כדי לגרום לעלייה בביטוי קשת לעומת אלו שנגרמו על ידי הליך הבדיקה בלבד. עם זאת, תקפותה של נטילת גישה זו מוטלת בספק על ידי התוצאות הלא חד משמעיות של מבחני ההתנהגות שלנו, שכן שמירה לקויה של המידע הנרכש מבחינה חברתית עשויה להיות אשמה בחוסר ההשפעה הזו. אנו משערים שייתכן שהסיבה לכך היא שארגון מחדש עצבי מינימלי מופעל כאשר החזרה מתרחשת לפני איחוד מערכות. מחקר נוסף על תפקידו של חלבון Arc בתהליכי היזכרות של למידה חברתית עדיין מוצדק בהתחשב בכך שהתוצאות ההתנהגותיות שלנו אינן מדגימות למידה חברתית בחולדות Observer. מחקר עתידי הבוחן חפיפה במנגנונים עצביים השולטים בצורות שונות של למידה חברתית עשוי גם להפיק תועלת מהכללה של בעלי חיים העוברים הליכי רכישה וחיות העוברות הליכי היזכרות מרחוק, מכיוון שנקודות זמן אלו עשויות להיות בסבירות גבוהה יותר לגרום לשינויי פלסטיות ולפיכך שינויים בביטוי הקשת. .

תוסף Cistanche בקרבתי-משפר זיכרון

לחץ כאן לצפייה במוצרי Cistanche Improve Memory

【בקש עוד】 דוא"ל:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

שיטות

נושאים. הנבדקים היו חולדות Sprague-Dawley זכרים ונקבות שגודלו בבית במרכז משאבי בעלי חיים של אוניברסיטת טקסס באוסטין. שבעה זוגות רבייה יצרו את הנבדקים עבור עוקבה 1 (n=27 נקבות, n=36 זכרים), ושמונה זוגות רבייה יצרו את הנבדקים עבור עוקבה 2 (n=27 זכרים, ללא נקבות). מגדלות נקבות היו חולדות ספראג-דאולי (בין 215 ל-260 גרם בהגעה) שהתקבלו מצ'רלס-ריברס (ווילמינגטון, MA, ארה"ב) בעוד שמגדלי זכר היו חולדות ספראג-דאולי (בין 230 ל-300 גרם בהגעה) שהושגו מהרלן (כעת Envigo) (יוסטון, טקסס, ארה"ב). כל החולדות שוכנו עם בן זוג מכלוב ממין הפוך עד שהנקבה הראתה סימנים ברורים של הריון, ובשלב זה הנקבות שוכנו לבד. גורים נגמלו לשלשות של אחים חד מיניים ביום 21 שלאחר הלידה (P21) כדי לעזור להבטיח למידה של פחד חברתי26. גורי חילוף נגמלו לשלשות או לדיאדות עם חולדות לא קשורות והשתמשו בהן בניסויים אחרים באוניברסיטת טקסס באוסטין. גורים נקבות מהמלטה השנייה שלנו שימשו בניסויים אחרים. גורים הורשו להתבגר עם הפרעות מינימליות מלבד נהלי גידול בעלי חיים שגרתיים (למשל, החלפת כלוב) עד שהחלו הליכי התרגלות (שלשות נקבות) או הליכי הערכת דומיננטיות (שלשות זכרים) (נהלי דומיננטיות ותוצאות המפורטות בחומרים משלימים). חולדות קבוצה 1 החלו בהליכים בין גיל P106-P112 ימים וחולדות קבוצה 2 החלו בין גיל P99-P118 ימים. כל הנבדקים הוחזקו במחזור של 12-שעות הפוך כהה-אור עם האורות כבויים בשעה 15:00. כל ההליכים הניסויים הושלמו במהלך מחזור החושך של הנבדקים באור אדום. כל חלקי הניסוי הזה נערכו בהתאם למדריך הלאומי לבריאות של המכונים הלאומיים לטיפול ושימוש בחיות ניסוי ואושרו לשימוש על ידי הוועדה לטיפול ושימוש בבעלי חיים של אוניברסיטת טקסס באוסטין.

מנגנון וגירויים. התניית פחד. כל הליכי מיזוג הפחד ומיזוג הפחד הושלמו בתאי מיזוג סטנדרטיים (30.48 ס"מ×25.4 ס"מ×30.48 ס"מ) שנבנו מקירות פרספקס שקופים מלפנים ומאחור, שני קירות פלדה בצד ותקרת פרספקס עם חור במרכז. ריצוף החדר היה שורה של מוטות נירוסטה המחוברים למחולל זעזועים (קולבורן אינסטרומנטס, אלנטאון, הרשות הפלסטינית). כל החדרים היו סגורים בקופסאות בידוד אקוסטיות (קולבורן מכשירים) ומוארים באור אדום פנימי. ההתנהגות תועדה על ידי מצלמות במעגל סגור (Panasonic™ WV-BP334) שהותקנו מעל תאי המיזוג כשהעדשה מוכנסת דרך החור בתקרת הפרספקס. תאים נמחקו במלואם עם תמיסת אלכוהול של 70 אחוזים בין כל נבדק. כל מסירת הגירוי נשלטה באמצעות תוכנת Freeze Frame (קולבורן מכשירים). ה-CS היה אבן של 20 (5 קילו-הרץ, 80 dB) ובפרוצדורות עם מספר מצגות CS, מרווח בין-ניסוי משתנה (ITI) בממוצע של 180 שניות. הגירוי הבלתי מותנה (US) היה הלם של 1 mA שנמשך 500 אלפיות השנייה והסתיים יחד עם הגירוי המותנה.

העברה חברתית של העדפת מזון. כל הליכי STFP התרחשו בחדר סמוך לחדר המכיל את תאי המיזוג. דיאטות חדשות הורכבו על ידי ערבוב של 100 גרם אבקת מאכל מכרסמים 5LL2 Purina עם 1 גרם של קינמון טחון מק'קורמיק (דיאט Cin) או 2 גרם של אבקת קקאו Hershey (diet Co). הדיאטה הרגילה, שניתנה לכל החולדות במהלך תקופת הגבלת המזון ולחולדות בקרה ביום הסופי של פרוצדורות הניסוי, הייתה מאכל מכרסם 5LL2 Purina באבקת אבקת פורינה. כל המאכלים באבקת - הן במהלך הגבלת מזון והן במהלך ניסויים - הוצגו בכוסות מזון תלויות שנבנו מ-4 אונקיות. צנצנות זכוכית וחוטי פלדה 12-. כוסות מזון נשטפו ולאחר מכן ניגבו בתמיסת אתנול של 70 אחוז לפני שנשטפו ביסודיות במים וסבון בין כל שימוש. כל שלבי ההשלמה של הליכי הניסוי של STFP התרחשו בכלובי חולדות סטנדרטיים (26.7 ס"מ × 48.3 ס"מ × 20.3 ס"מ), כאשר כל חולדה קיבלה כלוב טרי. שלב האינטראקציה (שלב רכישת STFP) התקיים בפח פלסטיק גדול (50.5 ס"מ×39.4 ס"מ×37.5 ס"מ) עם מצעים לרצפת שבבי עץ שהוחלפו בין כל קבוצה. פחי פלסטיק ניגבו ביסודיות עם Windex בין כל פגישה.

סקירה כללית של עיצוב ניסוי והליכי למידה חברתית.

(ראה איור 2 לסקירה גרפית).

כל החולדות היו מוגבלות למזון למשך חמישה ימים והורגלו לטיפול ולחדר שבו יתקיימו נהלי STFP במשך ארבעה ימים מיד לפני היום הראשון של ההליכים הניסויים. בעוד הליכי התרגלות הסתיימו לפני היום הראשון של ההליכים הניסויים, הגבלת מזון נמשכה עד סוף הניסוי. חולדה אחת מכל שלישיה הוקצתה לאחד משלושה תנאים: מפגין, צופה או בקרה. שלשות גברים של עוקבה 2 הוערכו לגבי דומיננטיות וכולם הראו היררכיה ברורה והוקצו כך שהחולדה הדומיננטית הייתה המפגין וכפוף לכך היה ה-Observer כדי לשפר את ההעברה החברתית של פחד13. שלישיות בודדות חולקו עוד באופן אקראי לקבוצות שבהן המדגים והמשקיף יקבלו מבחן בחירה ב-STFP recall (Choice) וקבוצות שבהן יקבלו רק את האוכל המודגם (Cin).

ביום הראשון של הליך הניסוי, חולדות שהוקצו למצב המפגין הועברו לתאי מיזוג פחד והורשו להתרגל במשך 10 דקות לפני שנחשפו ל-3 CSs שהסתיימו יחד עם הלם כואב (ראה "מכשירים וגירויים" עבור פרטים). בעקבות נהלי התניית פחד, המפגינים הועברו חזרה לכלוב הביתי המקורי שלהם. ביום השני של ההליכים הניסויים, 24 שעות לאחר התניית פחד, המפגינים הוחזרו לתאי ההתניה עם חברם לכלוב שהוקצה למצב Observer ועברו את הליך FCbP (איור 2). מיד לאחר הליך FCbP, חולדות Observer הוחזרו לכלוב הביתי שלהם בעוד המפגינים הועברו לחדר סמוך וקיבלו שעה אחת לצרוך אבקת צ'או בטעם קינמון. לאחר שחלפה שעה, המשקיפים הועברו לפח אינטראקציה עם המפגינים שלהם והורשו לקיים איתם אינטראקציה במשך 30 דקות כדי לאפשר רכישת העדפת מזון המועברת חברתית. מחקר קודם מהמעבדה שלנו אימת את נקודות הזמן הללו כמספיקות לשידור STFP33. לאחר מכן, חולדות ה-Observer הוחזרו לכלוב הביתי שלהן ואילו חולדות המדגימה הועברו לדיור יחיד כדי למנוע העברת STFP נוספת ל-Observer או לבקרה. ביום 3 של הליכי ניסוי, חולדות בקרה הועברו לתאי מיזוג בלבד ולאחר 10 דקות של התרגלות לתא הוצגו עם שלושה CSs של 20 שניות ללא הלם נלווה. זה נעשה ביום נפרד כדי למזער את האפשרות של פרומוני אזעקה מתמשכים - אשר ידועים כמשתחררים על ידי חולדות בתגובה לגירויים מאיימים ומשפיעים על למידה ספציפית59 - שעדיין נמצאים בחדר.

ביום הסופי של הניסוי, יום 4, החלה ריקול הן להעדפת המזון המועברת חברתית והן לזיכרונות התניית הפחד/התניית הפחד. לכל המשקיפים והמפגינים משלישיות שהוקצו למצב Choice הורשו גישה של 10 דקות אד-ליביטום לדיאטות המועדפות בקינמון וגם לקקאו, בעוד שמשקיפים ומפגינים משלישיות שהוקצו למצב Cin קיבלו גישה של 10 דקות אד ליביטום לדיאטת הקינמון- רק. בכל השלשות, חולדות הבקרה קיבלו גישה של 10 דקות באופן חופשי למאכל אבקתי רגיל. מיד לאחר מכן, חולדות הוחזרו לכלוב הביתי שלהן והושארו ללא הפרעה למשך 10-דקות לפני שהוחזרו לחלל המעבדה והונחו בתאי המיזוג. לאחר מכן ניתנה לכל החולדות 3-דקות תקופת התרגלות לתא לפני שהוצגו בפניהן CS בודד של 20 שניות. 5 דקות לאחר סיום ה-CS, כל החולדות הורדו באמצעות הזרקת תמיסת פנטוברביטל ופניטואין (Euthasol; Virbac Animal Health) וחוללו. המוח שלהם עובד מאוחר יותר לביטוי mRNA של Arc. בהינתן מהלך הזמן של ההליך הטרמינל שלנו ומסגרת זמן ההגירה הידועה של Arc mRNA28, הגברת הביטוי הציטופלזמי של Arc mRNA תהיה עקב הליכי ריקול STFP, בעוד שביטוי גרעיני יהיה בשל הליכי החזרה של FC/FCbP, כאשר תאים מראים הפעלה כפולה הופעל בשני מסגרות הזמן (ראה איור 1; כמו כן, ראה "ניתוח רקמות" לפרטים על טיפול ועיבוד רקמות).

ציסטאנצ'ה חיה במדבר

נהלים.

הרגלה והגבלת מזון. כל ההתרגלות התרחשה ממש לפני היום הראשון של ההליכים הניסויים. ההרגלה כללה כל כלוב של חולדות שהועבר לחדר בו יתקיימו כל הליכי הניסוי של STFP ואפשרו לו להתרגל לחדר למשך 15 דקות. במהלך תקופה זו, כל חולדה נאספה וטיפלה על ידי הנסיין שתנהל התנהגות במשך 2 דקות כדי להרגיל אותה לטיפול ולאותו אדם. כל הליכי ההתרגלות התרחשו בחדר חשוך באור אדום, וכל החולדות קיבלו 4 ימי התרגלות. הגבלת מזון החלה יום לפני תחילת ההתרגלות ונמשכה עד לסיום הניסוי. בתחילת הגבלת המזון, כדורי המזון שכל הנבדקים אכלו הוסרו מהכלוב. לאחר מכן, כל הכלובים קיבלו גישה יומית באופן חופשי לצנצנת תלויה מלאה באבקת פורינה 5LL2 דיאטה רגילה בכלוב הביתי למשך שעה. חולדות נשקלו מדי יום החל מתחילת הגבלת המזון עד לסיום הניסוי כדי להבטיח לא ירידה חריגה במשקל.

ניקוד התנהגותי.

כל הניקוד ההתנהגותי עבור ניסוי זה הושלם באמצעות התוכנה האינטראקטיבית למחקר התנהגותי (BORIS)60.

התניית פחד על ידי ניקוד של קשר חברתי באמצעות פרוקסי. מחקרים קודמים מהמעבדה שלנו הצביעו על קשר חזק בין כמות הפחד שהציגו צופים במבחן הזיכרון לטווח ארוך לבין הזמן המושקע באינטראקציה עם המדגים שלהם במהלך CS אצל גברים13 ואחרי CS אצל נשים14,26. ככזה, סרטונים של שלב הרכישה החברתית של התניית פחד על ידי פרוקסי קיבלו ניקוד עבור אינטראקציה חברתית בין הצופה והמפגין עבור כל תקופה של 20- במהלך מצגת CS והתקופה של 20- מיד לאחר כל אחת מהן. מצגת CS כדי לספק אינדקס משני של רכישת פחד. מגע חברתי נמדד כאשר חולדות Observer ו-Demonstrator יצרו מגע שלא במעבר במהלך תקופת הרמז (במהלך מגע עם CS) או ב-20 השניות שלאחר ה-CS (מגע לאחר CS). חושב האחוז של כל תקופת ניקוד שהושקעה במגע עם המפגין. נתונים לאחוז מגע במהלך תקופת הרמז לזכרים ונתונים לאחוז מגע מיד לאחר תקופת הרמז לנקבות נמשכו ושולבו למדד "מגע רלוונטי" אחד שישמש בכל הניתוחים הסטטיסטיים הסופיים.

ציון מבחן בחירה. סרטונים של מבחן הבחירה ליזום הזכירה של העדפת מזון המועברת חברתית קיבלו ניקוד עבור משך הזמן שחולדה נתונה בילה באינטראקציה עם כוס מזון בהתבסס על האם היא מכילה את הדיאטה שהוכחה/נצרכה כבר (דיאט Cin) או את הרומן דיאטה (דיאט Co). זה נעשה כמדד משני פוטנציאלי להעדפת מזון, מכיוון שציפינו שבשל בדיקת הבחירה קצרה באופן חריג (10 דקות) מכורח ייתכן שלא נוכל לזהות העדפות על סמך הכמות שנאכלה בלבד. אינטראקציה עם כוס המזון נמדדה בכל פעם שחולדה הייתה במגע פיזי עם הכוס ולא התרחקה ממנה באופן פעיל (כלומר, כפות קדמיות במגע עם הצנצנת, ראש בתוך הצנצנת, טיפוס על גבי הצנצנת, או אוכל פעיל מהצנצנת). לניתוח סטטיסטי, חישבנו את אחוז הזמן המושקע באינטראקציה עם כוס המכילה דיאטה נתונה בהתבסס על כמות הזמן הכוללת של אינטראקציה עם כל אחת מהכוסות (למשל, עבור דיאט Cin, אחוז זמן= TimeDiet Cin/ (TimeDiet Co בתוספת TimeDiet Cin)). מבחן הבחירה המלא של 10-דקות זכה לציון עבור כל החולדות שעברו אותה.

ניתוח רקמות.

כדי למזער את הפירוק של mRNA על ידי ribonuclease (RNase), כל הציוד והמשטחים ששימשו במהלך הכנת המוח ועיבודם עברו חיטוי באופן קבוע עם RNase AWAY™ (Termo Scientity; Waltham, MA, ארה"ב) או RNAseZap™ (Ambion; Grand Island, NY , ארה"ב).

הכנה למוח. מיד לאחר המתת חסד, נבדקים חולפו תוך-לב באמצעות תמיסת פרפורמלדהיד (PFA) של 4 אחוזים. לאחר מכן הוסרו מוחות והוטבלו ב-4% PFA כדי לאפשר לאחר קיבוע למשך 24-48 שעות. לאחר השלמת פוסט-קיבוע, מוחות הועברו לתמיסה של 30 אחוז סוכרוז בתמיסת מלח מחוסרת פוספט להגנת קריו. לאחר שהמוח שקע לתחתית הבקבוקון, דבר המעיד על ספיגת סוכרוז מספקת להגנת קריו, הם הוקפאו באבקת קרח יבש והועברו למקפיא - 80 מעלות לאחסון עד לחיתוך. לאחר מכן, מוחות נחתכו בעטרה על מיקרוטום הזזה בעובי 30 מיקרומטר לשש סדרות (כך שהקטעים הבאים בסדרה בודדת היו במרחק של 180 מיקרומטר זה מזה) והותקנו מיד והורשו להתייבש באוויר לפני שהונחו בתא ואקום עם ספוגי לחות היכן שהם היו. נשאר לייבוש מלא למשך 24 שעות. רק קטעי היפוקמפוס (כ-3.2 עד -5.2 מברגמה) או אזורים פרה-פרונטליים (בערך פלוס 3.7 עד פלוס 1.4 מברגמה) המכילים את אזורי העניין נחתכו ועובדו. חלקים רכובים הונחו לאחר מכן בקופסת שקופיות אטומה ללא RNase ואוחסנו ב- 80 מעלות עד לעיבוד.

עיבוד רקמות. כל ההליכים שונו מהפרוטוקולים שבהם נעשה שימוש ב- Lee et al.61 ו- Petrovich et al.62. לפני עיבוד רקמות, נבנה בדיקה של cRNA עבור Arc mRNA החל מפלסמיד המכיל cDNA באורך מלא (~3.0 kbp) של תמליל Arc. כדי ליצור את הבדיקה, ה-DNA נחתך תחילה על ידי ערבוב הפלסמיד עם חיץ עיכול 10× (NEBufer; Biolabs; Ipswich, MA, ארה"ב), אנזים הגבלה 10×EcoRI (Biolabs), ומים מטוהרים ללא נוקלאז לפני היותו דגירה ב-37 מעלות למשך שעתיים. חיתוך תקין של ה-DNA אומת באמצעות אלקטרופורזה, ולאחר מכן ה-DNA טוהר בן לילה באתנול. לאחר הטיהור, גלולת ה-DNA נסחררה בצנטריפוגה, נשטפה ב-EtOH, מיובשה במלואה, והושעה מחדש במאגר TE. כדי לוודא שה-DNA היה ליניארי בצורה נכונה, לחשב את ריכוז הקשת ולבדוק שלא היו מזהמים, נבדקה דגימה של ה-DNA באמצעות ספקטרופוטומטריה (Nanodrop Lite; Thermo Scientific, Waltham, MA, ארה"ב). הבדיקה המסומנת Digoxigenin (DIG) הועתקה על ידי שילוב של ה-DNA הליניארי עם מים נטולי RNase, חיץ 10× שעתוק (Ambion), בלוק RNAse (Ambion), תערובת תיוג DIG RNA (Roche Applied Science; אינדיאנפוליס, אינדיאנפוליס, ארה"ב) , ופולימראז T7 RNA (Ambion) לפני דגירה של התמיסה ב-37 מעלות למשך 2 שעות. לבסוף, הבדיקה דוללה במים נטולי נוקלאז וטיהרה בעמודת מיני Quick-Spin (Roche).

לאחר בניית בדיקת ה-cRNA, שקופיות המכילות רקמה מהעכברושים הזכרים הושקעו למשך 40 דקות בתמיסת PFA של 4 אחוזים כדי להגביר את שלמות הרקמה לאורך כל העיבוד באתרו. רקמות של חולדות נקבות עובדו ללא שטיפת PFA זו. לאחר מכן, השקופיות נשטפו והודגרו במאגר פרוטאינז K (PK) ב-37 מעלות לפני שטופלו בתמיסת 0.5 אחוז אצטית/1.5 אחוז טריאתנולמין המכילה חומצה אצטית קפואה לחילול. לאחר מכן, השקופיות נשטפו במאגר מלוח-נתרן ציטראט (SSC) לפני שהתייבשו על ידי טבילה בריכוזים עולים של אתנול ויובשו באוויר. לבסוף, כל שקופית כוסתה ב-300 μL של חיץ הכלאה המכיל tRNA שמרים (Invitrogen; קרלסבד, קליפורניה, ארה"ב), DNA של זרע סלמון (Ambion), דיתיוטריטול (Sigma; St. Louis, MO, ארה"ב) ובדיקת cRNA. (1:100). לאחר מכן, כל שקופית כוסתה ונאטמה סביב הקצוות עם חומר DPX (Electron Microscopy Sciences; Hatfield, PA, ארה"ב) לפני שהודגרה בתמיסת ההכלאה למשך 20 שעות ב-60 מעלות. יש לציין כי הכיסוי הגן על הרקמה מכל מגע ישיר עם חומר ה-DPX, כך שהסרה מאוחרת יותר של ה-DPX המוקשה לא גרמה לנזק לרקמה.

לאחר השלמת ההכלאה, כיסויי כיסוי הוסרו בזהירות, ושקופיות הודגרו במאגר 4xSSC מעורבב עם נתרן תיוסולפט (ST) ב-60 מעלות למשך שעה לפני שטופלו בתמיסה על בסיס חומצה אתילן-דיאמין-טטרה-אצטית לעיכוב פעילות RNAse ב-37ºC. לאחר מכן, השקופיות נשטפו בריכוזים יורדים של תמיסת SSC מעורבבת עם ST שוב ב-60 מעלות. לאחר מכן הרקמה נשטפה בתמיסת ניקוי (Tween20) לפני שנצבעה במערכת PerkinElmer TSA Fluorescein (NEL701001KT; PerkinElmer, Waltham, MA, ארה"ב). השקופיות הונחו בתא לח וטופלו במאגר חוסם ואחריו מצמיד אנטי-DIG-HRP למשך 2 שעות. לאחר מכן, השקופיות נשטפו לזמן קצר בתמיסת הניקוי לפני שהוחזרו לתא לח חשוך וצופו בתמיסה המכילה ריאגנט פלואורססאין טירמיד (FITC) והורשו לשבת במשך 30 דקות. לבסוף, השקופיות נשטפו, הורשו להתייבש באוויר והוספו עם חומר כיסוי המכיל את הכתם הגרעיני 4′,6-diamidino-2-phenylinodole (DAPI) (Vectashield; Vector Lab, Burlingame, CA, ארה"ב) . השקופיות אוחסנו בחושך ב-20 מעלות עד להדמיה.

הַדמָיָה. כל ההדמיה הושלמה באמצעות מיקרוסקופ Axio Scope A1 (Zeiss; Tornwood, NY, ארה"ב). אזורי עניין זוהו באמצעות צביעת DAPI באמצעות מטרה של 10× בסיוע אטלס המוח Paxinos ו-Watson63 ולאחר מכן צולמו תחת מטרה של 40× (הגדלה ממשית~900×). תמונות צולמו הן עבור כתמי DAPI והן עבור כתמי FITC ולאחר מכן נצבעו והתמזגו באופן אוטומטי באמצעות מאקרו מותאם אישית בתוכנת ImageJ עם FIJI (NIH, Bethesda, MD). בשל פירוק רקמות המתרחש לאורך באתרו, לא כל הקטעים או האזורים בעלי עניין פוטנציאלי היו קיימא. ככאלה, לא ניתן היה לערום תמונות z בצורה מהימנה, ובמקום זאת, צולמו במישור יחיד. האזורים הבאים צולמו ונספרו: קליפת המוח הקדם-לימבית (פלוס 3.72 עד פלוס 2.52 מברגמה), הקורטקס האינפראלימבי (פלוס 3.52 עד פלוס 2.2 מברגמה), הצדדית (פלוס 3.72 עד פלוס 3.2 מברגמה) והגחון (פלוס 3.72 עד פלוס 3.0 מקליפת המוח האורביטו-פרונטלית, אזור CG1 של קליפת המוח הקדמית (בתוספת 3.72 עד פלוס 2.52 מ- Bregma), ואזור CA3 של ההיפוקמפוס הגחוני (- 4.3 עד - 4.8 מ- Bregma) (איור S6). למרות שגרעיני האמיגדלר היו בעלי עניין מיוחד בשל תפקידם המבוסס בלמידת פחד, הנזק לרקמות הנ"ל נטו להיות חמור במיוחד באזור זה. ככזה, לא הצלחנו להשיג גודל מדגם גדול מספיק כדי לכלול את האזור הזה (נדרשו מינימום של 6 תמונות/אזור בר-קיימא כדי שחולדה תיכלל בניתוח הסטטיסטי של אזור נתון).

הספירות הושלמו אזור אחר אזור ולכל קבצי התמונה הוקצה קוד מספרי אקראי כדי לעוור את הנסיין שמסיים את הספירות מכל פרט הנוגע לתמונה בזמן הספירה. כל ספירות התאים צולמו ב-ImageJ עם חבילת FIJI ונעשו באמצעות כלי ספירת התאים. תאים נספרו עבור ביטוי mRNA של Arc גרעיני וציטופלזמי בנפרד ותאים המראים ביטוי חופף נספרו כביטוי כפול. הספירות הסופיות של תאים המבטאים Arc גרעיני ותאים המבטאים Arc ציטופלזמה כללו רק את התאים המבטאים רק באזור זה (כלומר, לא כללו תאים בעלי ביטוי כפול). נלקחו ספירות מלאות עבור תאים צבועים DAPI ואחוז התאים המציגים ביטוי בכל אזור נתון חושב ולאחר מכן האחוז הממוצע של תאים המציגים כל סוג של הפעלה בחולדות בודדות. כדי למנוע מהציונים של חולדות עם מספר גדול יותר של תמונות תהיה השפעה לא פרופורציונלית על הסטטיסטיקה שלנו וכדי למנוע אינפלציה של גודל מדגם רק ממוצעים אלה שימשו בניתוח הסופי שלנו.

סקירת ניתוח סטטיסטי. כל הניתוחים הסטטיסטיים הושלמו באמצעות תוכנת קידוד R. הקוד המלא זמין באופן חופשי לצפייה במאגר הנתונים שלנו בכתובת https://dataverse.tdl.org/dataverse/MonflsFearMemoryLab. אלא אם כן צוין אחרת, החתך למבחן שייחשב מובהק סטטיסטית נקבע ל-p<0.05. All of our Arc results, unless otherwise mentioned, were tested for significance using a series of two-way ANOVAs (type 2) containing sex and condition as between-subject variables (Sex and Condition) with an individual ANOVAs run for each area of expression (nucleus, cytoplasm, and dual). Similarly, a series of one-way ANOVAs were run with a combined variable containing the food task (diet Cin only or Choice test for Demonstrators and Observers; plain chow only for all Controls) for each area of expression. Sex was not included as a secondary variable as the relatively low number of female rats made sample sizes too small for certain condition/food task combinations. When ANOVA assumptions were violated, data were transformed using either a log(y+1) function or by taking the inverse square root. As these transforms did not always succeed in bringing ANOVAs in line with assumptions, Kruskal-Wallace tests were performed on datasets where transforms were not effective. Pairwise t-tests were performed for posthoc analyses against a Bonferroni-corrected alpha value when ANOVAs indicated a significant effect of condition (α=0.017) or a significant sex and condition interaction (α=0.008; conditions tested against each other within each sex-only) with between-group effect sizes calculated using Cohen's d. To provide a better gauge of variability for our smaller group sizes, the MSError obtained from our ANOVA was used in the denominator of post hoc t-tests. Effect sizes for ANOVAs were calculated using the standard partial η2 formula and for Kruskal-Wallace tests using the formula η2 H =(H − k+1)/(n – k). For simplicity of data presentation, unless the addition of the food task grouping variable resulted in a significant effect or unless a significant contribution of sex was detected all data were presented graphically split up by area of expression and overall experimental condition only. Any rats that had fewer than 6 viable images counted in a given brain region were excluded from the analysis for that area.

מתאמים דו-משתנים חושבו עבור חולדות Observer ו-Demonstrator כדי להעריך קשרים פוטנציאליים בין מדדים התנהגותיים וספירת תאי Arc לביטוי המתרחש בנקודות זמן מתאימות (למשל, ספירת קשת ציטופלזמית עבור אחוז הקינמון שנאכל). נעשה שימוש במקדמי המתאם של פירסון אם לא זוהו חריגים באף מערך נתונים עם מבחן Grubbs. אם זוהו חריגים, נעשה שימוש במקום זאת במקדם המתאם של ספירמן. כדי לאמוד אם הקשר בין למידה חברתית לארק בתאים בעלי ביטוי כפול ב- Observers, מדד כולל של למידה חברתית - המכונה מכאן ואילך מדד הלמידה החברתית (SLM) - חושב על ידי לקיחת הממוצע של הציונים הסטנדרטיים ( z-score) עבור אחוז האכילה הכוללת שהיה המזון שהודגם ואחוז הזמן שבילה במגע עם המפגין במהלך שלב הלמידה החברתית של FCbP במהלך מצגת CS (גברים) או לאחר מצגת CS (נשים). יש לציין שאחוז הקפאה לסימן ביום האחרון לא שימש עבור חולדות Observer מכיוון שהתוצאות שלנו ותוצאות ניסוי ההמשך שלנו (ראה חומרים משלימים) הצביעו על כך שתנאי הליך הבדיקה ההתנהגותית שלנו הביאו להתנהגות הקפאה מסוימת אפילו חולדות לשלוט - לפחות בזכרים - וככאלה, אולי לא המדד הטוב ביותר לעוצמת תגובת הפחד הנרכשת מבחינה חברתית. ככזה, בהתחשב בממצאי העבר שלנו לפיהם אינטראקציות עם המפגין במהלך או אחרי ה-CS (בהתאם למין) חזו היטב הקפאה מאוחרת יותר לרמז 12-14, אינטראקציה עם המפגין בנקודת הזמן המתאימה למין נבדקה עבור מתאמים מול פעילות קשת גרעינית במקום לקפוא לפי הכוונה ביום האחרון עבור חולדות אובזרבר. עבור מפגינים, מדד דומה חושב בהתבסס על הקפאה סטנדרטית לסימן ביום האחרון ואחוז סך האכילה שהיה הדיאטה המוכרת (Diet Cin) ונבדק מול פעילות Dual Arc. כדי לתקן את המבחנים המרובים שבוצעו על כל מערך נתונים התנהגותי (6, עבור כל אזור מוח), ערך ה-p הקריטי עבור מתאמים היה Bonferroni מותאם ל-0.0083.

הפניות

1. Dawson, G., Meltzof, AN, Osterling, J., Rinaldi, J. & Brown, E. ילדים עם אוטיזם אינם מצליחים להתמצא בגירויים חברתיים המתרחשים באופן טבעי. J. Autism Dev. אי-סורד. 28, 479–485 (1998).

2. Zeeland, AAS-V., Dpretto, M., Ghahremani, DG, Poldrack, RA & Bookheimer, SY עיבוד תגמול באוטיזם. אוטיזם מיל.

3, 53–67 (2010). 3. Chevallier, C., Kohls, G., Troiani, V., Brodkin, ES & Schultz, RT תיאוריית המוטיבציה החברתית של אוטיזם. טרנדים קוגן. Sci. 16, 231–239 (2012).

4. Öst, L.-G. דרכים לרכישת פוביות ותוצאת טיפולים התנהגותיים. התנהג. מילון טר. 23, 683–689 (1985).

5. Ollendick, TH & King, NJ מקורות פחדי הילדות: הערכה של התיאוריה של רחמן לגבי רכישת פחד. התנהג. מילון טר. 29, 117–123 (1991).

6. Merckelbach, H., Arntz, A. & de Jong, P. התניה של חוויות בפוביות עכבישים. התנהג. מילון טר. 29, 333–335 (1991).

7. Jeon, D. et al. למידת פחד תצפיתית כוללת מערכת כאב לקויה וערוצים Cav1.2 Ca2 פלוס ב-ACC. נאט. Neurosci. 13, 482–488 (2010).

8. Yusufshaq, S. & Rosenkranz, JA בידוד חברתי לאחר גמילה פוגע בהתניית פחד תצפיתית. התנהג. מח. 242, 142–149 (2013).

9. Kavaliers, M., Choleris, E. & Colwell, DD למידה מאחרים להתמודד עם זבובים נושכים: למידה חברתית של שיכוך כאבים מותנה הנובע מפחד והימנעות אקטיבית. התנהג. Neurosci. 115, 661–674 (2001).

10. Kavaliers, M., Colwell, DD & Choleris, E. למידה לפחד ולהתמודד עם גורם לחץ טבעי: קורטיקוסטרון נרכש באופן אינדיבידואלי וחברתי ותגובות הימנעות לזבובים נושכים. הורם. התנהג. 43, 99–107 (2003).

11. Kavaliers, M., Colwell, DD & Choleris, E. קרבה, היכרות ומעמד חברתי מווסתים למידה חברתית על "מיקרו טורפים" (זבובים נושכים) בעכברי צבי. התנהג. אקול. סוציוביול. 58, 60–71 (2005).

12. Bruchey, AK, Jones, CE & Monfls, M.-H. התניית פחד על ידי פרוקסי: העברה חברתית של פחד במהלך שליפת זיכרון. התנהג. מח. 214, 80–84 (2010).

13. Jones, CE & Monfls, M.-H. סטטוס הדומיננטיות מנבא העברת פחד חברתי בחולדות מעבדה. אנים. קוגן. 19, 1051–1069 (2016).

14. Agee, LA, Jones, CE & Monfls, M.-H. השפעות שונות של היכרות/קרבה בהעברה חברתית של אסוציאציות פחד והעדפות מזון בחולדות. אנים. קוגן. 22, 1013–1026 (2019).

15. Mitchell, CJ, Heyes, CM, Gardner, MR & Dawson, GR מגבלות של הליך בקרה דו-כיווני לחקירת חיקוי בחולדות: סימני ריח על המניפולנדום. QJ Exp. פסיכול. B 52, 193–202 (1999).

16. Galef, BG & Wigmore, SW העברת מידע בנוגע למזונות רחוקים: חקירה מעבדתית של השערת 'מרכז המידע'. אנים. התנהג. 31, 748–758 (1983).

17. Galef, BG, Mason, JR, Preti, G. & Bean, NJ פחמן דיסולפיד: בחירה סמיוכימית המתווכת בחולדות. פיזיול. התנהג. 42, 119–124 (1988).

18. Galef, BG מחקר מקרה בניתוח התנהגותי, סינתזה ותשומת לב לפרטים: למידה חברתית של העדפות מזון. התנהג. מח. 231, 266–271 (2012).

19. Posadas-Andrews, A. & Roper, TJ העברה חברתית של העדפות מזון בחולדות בוגרות. אנים. התנהג. 31, 265–271 (1983).

20. Countryman, RA, Orlowski, JD, Brightwell, JJ, Oskowitz, AZ & Colombo, PJ CREB זרחון וביטוי c-Fos בהיפוקמפוס של חולדות במהלך רכישה והיזכרות של העדפת מזון המועברת חברתית. היפוקמפוס 15, 56–67 (2005).

21. Boix-Trelis, N., Vale-Martínez, A., Guillazo-Blanch, G., Costa-Miserachs, D. & Martí-Nicolovius, M. Effects of nucleus basalis magnocellularis על העדפת מזון המועברת חברתית ו-c -הבעה של פוס. לִלמוֹד. מ. 13, 783–793 (2006).

22. Ross, RS & Eichenbaum, H. דינמיקה של הפעלה של ההיפוקמפוס והקורטיקל במהלך איחוד זיכרון לא מרחבי. J. Neurosci. 26, 4852–4859 (2006).

23. Smith, CA, Countryman, RA, Sahuque, LL & Colombo, PJ קורסי זמן של ביטוי Fos בהיפוקמפוס של חולדות ובניאוקורטקס בעקבות רכישה והיזכרות של העדפת מזון המועברת חברתית. נוירוביול. לִלמוֹד. מ. 88, 65–74 (2007).

24. Lesburguères, E. et al. תיוג מוקדם של רשתות קליפת המוח נדרש ליצירת זיכרון אסוציאטיבי מתמשך. מדע 331, 924–928 (2011).

25. Knapska, E. et al. העברת מידע רגשי בין נושאים מעוררת דפוסים ספציפיים של הפעלת האמיגדלה. פרוק. נאטל. Acad. Sci. 103, 3858–3862 (2006).

26. Jones, CE, Riha, PD, Gore, AC & Monfls, M.-H. העברה חברתית של פחד פבלובי: התניה-לוואי של פחד בחולדות נקבות קשורות. אנים. קוגן. 17, 827–834 (2014). 27. Twining, RC, Vantrease, JE, Love, S., Padival, M. & Rosenkranz, JA מעגל תוך-אמיגדלה מווסת באופן ספציפי למידת פחד חברתי. נאט. Neurosci. 20, 459–469 (2017).

28. Olsson, A., Knapska, E. & Lindström, B. Te מערכות עצביות וחישוביות של למידה חברתית. נאט. הכומר נוירוסקי. 21, 197–212 (2020).

29. Guzowski, JF, McNaughton, BL, Barnes, CA & Worley, PF ביטוי ספציפי לסביבה של הגן המיידי-מוקדם Arc בהרכבי נוירונים בהיפוקמפוס. נאט. Neurosci. 2, 1120–1124 (1999).

30. Kim, JJ & Jung, MW מעגלים ומנגנונים עצביים המעורבים בהתניה של פחד פבלובי: סקירה ביקורתית. Neurosci. ביו-התנהגות. Rev' ​​30, 188–202 (2006).

31. Laurent, V. & Westbrook, RF Inactivation of the infralimbic but not the prelimbic cortex פוגע בגיבוש ובשליפה של הכחדת פחד. לִלמוֹד. מ. 16, 520–529 (2009).

32. Tovote, P., Fadok, JP & Lüthi, A. מעגלים עצביים לפחד וחרדה. נאט. הכומר נוירוסקי. 16, 317–331 (2015).

33. Agee, LA & Monfls, M.-H. השפעת אמינות המדגים והעדכניות של ההדגמה האחרונה על רכישת העדפת מזון המועברת חברתית. R. Soc. פתח Sci. 5, 172391 (2018).

34. Nikolaienko, O., Patil, S., Eriksen, MS & Bramham, CR Arc protein: רכזת גמישה לפלסטיות סינפטית וקוגניציה. סמינר. Cell Dev. ביול. 77, 33–42 (2018).

35. ביטוי Chia, C. & Otto, T. Hippocampal Arc (Arg3.1) מושרה על ידי זכירת זיכרון ונדרש לגיבוש מחדש של הזיכרון בהתניית פחד עקבות. נוירוביול. לִלמוֹד. מ. 106, 48–55 (2013).

36. Pilarzyk, K. et al. אובדן תפקוד של phosphodiesterase 11A4 מראה שניתן לנתק זיכרונות ארוכי טווח עדכניים ומרוחקים. Curr. ביול. 29, 2307-2321.e5 (2019).

37. Jones, CE Te העברה חברתית של פחד אסוציאטיבי אצל מכרסמים - הבדלים אינדיבידואליים בהתניה של פחד על ידי פרוקסי כרך. 17 (ספרינגר, 2021).

38. Smith, CA, East, BS & Colombo, PJ Te orbitofrontal cortex אינו הכרחי עבור רכישה או היזכרות מרחוק של העדפות מזון המועברות חברתית. התנהג. מח. 208, 243–249 (2010).

39. Rudebeck, PH, Walton, ME, Smyth, AN, Bannerman, DM & Rushworth, MFS מסלולים עצביים נפרדים מעבדים עלויות החלטה שונות. נאט. Neurosci. 9, 1161–1168 (2006).

40. Rolls, ET & Grabenhorst, F. Te cortex orbitofrontal ומעבר: מהשפעה לקבלת החלטות. פרוג. נוירוביול. 86, 216–244 (2008).

41. Wallis, JD מחקרים בין מינים של קליפת המוח האורביטופרונטלית וקבלת החלטות מבוססת ערכים. נאט. Neurosci. 15, 13–19 (2012).

42. Izquierdo, A. הטרוגניות פונקציונלית בתוך קליפת העין האורביטו-פרונטלית של חולדה בלימוד תגמול וקבלת החלטות. J. Neurosci. 37, 10529–10540 (2017).

43. Randesi, M. et al. הבדלי מין לאחר מתח כרוני בביטוי של גנים הקשורים לאופיואידים, מתח ונוירופלסטיות בהיפוקמפוס החולדות. נוירוביול. מתח 8, 33–41 (2018).

44. Maren, S., Phan, KL & Liberzon, I. Te המוח ההקשרי: השלכות על התניה של פחד, הכחדה ופסיכופתולוגיה. נאט. הכומר נוירוסקי. 14, 417–428 (2013).

45. Vidal-Gonzalez, I., Vidal-Gonzalez, B., Rauch, SL & Quirk, GJ. לִלמוֹד. מ. 13, 728–733 (2006).

46. ​​Sierra-Mercado, D., Padilla-Coreano, N. & Quirk, GJ תפקידים ניתנים לניתוק של קליפת המוח הקדם-לימבית והאינפראלימבית, ההיפוקמפוס הגחוני והאמיגדלה הבסיסית בביטוי והכחדה של פחד מותנה. Neuropsychopharmacology 36, 529–538 (2011).

47. בארן, SE, ארמסטרונג, CE, נירן, DC, Hanna, JJ & Conrad, CD מתח כרוני והבדלים בין המינים על היזכרות של התניה והכחדה של פחד. נוירוביול. לִלמוֹד. מ. 91, 323–332 (2009).

48. Greiner, EM, Müller, I., Norris, MR, Ng, KH & Sangha, S. הבדלי מין בוויסות פחד והתנהגויות מחפשות תגמול במשימת אפליה של פחד-בטיחות-תגמול. התנהג. מח. 368, 111903 (2019).

49. Day, HLL & Stevenson, CW הבסיס הנוירו-ביולוגי להבדלים בין המינים בפחד הנלמד ועיכוב שלו. יורו J. Neurosci. 52, 2466–2486 (2020).

50. van Hasselt, FN et al. וריאציות אינדיבידואליות בטיפול אימהי מוקדם בחיים מתואמות עם קבלת החלטות בשלב מאוחר יותר וביטוי c-fos בתת-האזורים הפרה-פרונטליים של חולדות. PLoS ONE 7, e37820 (2012).

51. Bayless, DW & Daniel, JM הבדלי מין ברמות חלבון הקשורות למיאלין בתוך וצפיפות ההקרנות בין קליפת המוח הקדמית האורביטלית והסטריאטום הגבי של חולדות בוגרות: השלכות על שליטה מעכבת. מדעי המוח 300, 286–296 (2015).

52. Orsini, CA & Setlow, B. הבדלי מין במודלים של בעלי חיים של קבלת החלטות. J. Neurosci. מילון 95, 260–269 (2017).

53. Corcoran, KA & Quirk, GJ פעילות בקליפת המוח הפרה-לימבית הכרחית לביטוי של נלמד, אך לא מולדת. פחדים. J. Neurosci. 27, 840–844 (2007).

54. Burgos-Robles, A., Vidal-Gonzalez, I. & Quirk, GJ תגובות מותנות מתמשכות בנוירונים פרה-פרונטליים פרלימביים מתואמים עם ביטוי פחד וכישלון הכחדה. J. Neurosci. 29, 8474–8482 (2009).

55. Fenton, GE et al. פעילות קליפת המוח הפרה-לימבית מתמשכת תורמת לשיפור ביטוי הפחד הנלמד אצל נשים. לִלמוֹד. מ. 21, 55–60 (2014).

56. Fenton, GE, Halliday, DM, Mason, R., Bredy, TW & Stevenson, CW ההבדלים בין המינים בהבעה והכחדה של פחד נלמדים כרוכים בשינויים בתנודות גמא בקליפת המוח הקדם-מצחית המדיאלית. נוירוביול. לִלמוֹד. מ. 135, 66–72 (2016).

57. Kirry, AJ et al. איתות פוליפפטיד המפעיל את אדנילט ציקלאז יותרת המוח (PACAP) בקליפת המוח הקדם-מצחית מווסת למידת פחד רמז, אך לא זיכרון עבודה מרחבי, בחולדות נקבות. Neuropharmacology 133, 145–154 (2018).

58. Day, HLL, Suwansawang, S., Halliday, DM & Stevenson, CW הבדלים בין המינים בהבחנה בפחד שמיעתי קשורים לשינוי בתפקוד הפרה-פרונטלי של קליפת המוח המדיאלית. Sci. Rep. 10, 6300 (2020).

59. Kikusui, T., Takigami, S., Takeuchi, Y. & Mori, Y. פרומון אזעקה משפר היפרתרמיה הנגרמת על ידי מתח בחולדות. פיזיול. התנהג. 72, 45–50 (2001).

60. Friard, O. & Gamba, M. BORIS: תוכנה חינמית ורב-תכליתית לרישום אירועים בקוד פתוח עבור קידוד וידאו/אודיו ותצפיות חיות. שיטות אקול. Evol. 7, 1325–1330 (2016). 61. Lee, HJ, Haberman, RP, Roquet, RF & Monfls, M.-H. הכחדה ושליפה בתוספת הכחדה של פחד מותנה מפעילים באופן דיפרנציאלי את הקורטקס הפרה-פרונטלי המדיאלי ואת האמיגדלה בחולדות. חֲזִית. התנהג. Neurosci. 9, 1–10 (2016).

62. Petrovich, GD, Holland, PC & Gallagher, M. Amygdalar והמסלולים הפרה-פרונטליים להיפותלמוס הצדי מופעלים על ידי רמז נלמד שממריץ אכילה. J. Neurosci. 25, 8295–8302 (2005).

63. Paxinos, G. & Watson, C. Te Rat Brain in Stereotaxic Coordinates: כריכה קשה. (Elsevier, 2006).