חלק שני כיצד אכינאקוסיד מטפל בנזק חמצוני של DNA ומעכב אפופטוזיס של תאים?

לחץ כאן לחלק ראשון

למידע נוסף אנא צור קשר:Joanna.jia@wecistanche.com

ל- Cistanche deserticola השפעות רבות, לחץ כאן כדי לדעת יותר

3. נִסיוֹנִי סָעִיף

3.1. תאים ו כימיקלים

קו תאים אדנוקרצינומה של המעי הגס SW480 אנושי נרכש מ-ATCC. התאים תורבו במדיום נשר שונה (DMEM) של Dulbecco (Gibco, Grand Island, NY, ארה"ב) המכיל 10% סרום בקר עוברי (FBS) (Gibco) ו-1% (v/v) פניצילין-סטרפטומיצין (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ארה"ב) ב-37 מעלות באווירה לחה המכילה 5 אחוז CO2.אכינאקוסיידנרכש מחברת Yuanye Biotechnology, שנחאי, סין (HPLC > 98 אחוז). פתרונות מלאי הוכנו ב-DMSO (Sigma-Aldrich), ופתרונות עבודה הוכנו במדיום תרבית תאים.

3.2. מבחן הכדאיות של MTT

תאים נזרעו ב96-צלחות באר ב-1 × 104 תאים לבאר במשך 12 שעות, ולאחר מכן הודגרו בנוכחותאכינאקוסיידאו 0.01 אחוז DMSO למשך 24 או 48 שעות. בסופו של דבר, 20 μL של תמיסת MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide) (5 מ"ג/ מ"ל ב-PBS, pH 7.2) (Invitrogen, Carlsbad, CA, ארה"ב) נוספה לכל באר, והצלחות הודגרו במשך 4 שעות. לאחר הסרת המדיום המכיל MTT, נוספו 150 μL של DMSO לכל באר. הצלחות הודגרו על גבי שייקר צלחות למשך 10 דקות, והספיגה ב-570 ננומטר נמדדה על ידי קורא מיקרו-צלחות BioRad 680 (הרקולס, קליפורניה, ארה"ב). כל ניסוי נערך פעמיים בשלושה עותקים. הנתונים נותחו באמצעות תוכנת GraphPad Prism (סן דייגו, קליפורניה, ארה"ב).

3.3. בדיקת היווצרות מושבות

תאים נזרעו ב6-צלחות באר בצפיפות של 1 × 104 לבאר במשך 12 שעות ולאחר מכן הודגרו בנוכחותאכינאקוסיידאו {{0}}.01 אחוז DMSO למשך 10 ימים. הצלחות נשטפו עם PBS, והתאים נקבעו במתנול קר כקרח והוצבעו בתמיסת סגול קריסטל (Sigma-Aldrich) (0.5 אחוז ב-25 אחוז מתנול). התמונות צולמו לאחר שהצלחות יובשו למשך הלילה. גבישי הסגול הגבישיים הומסו ב-70 אחוז אתנול, והספיגה ב-595 ננומטר נמדדה על ידי קורא מיקרו-צלחות BioRad. הנתונים נותחו באמצעות תוכנת GraphPad Prism.

3.4. ניתוח פיצול DNA עם פלואורסצנטי DAPI הַכתָמָה

לאחר טיפול תרופתי, תאים בצלחות הבאר {{0}} נשטפו פעם אחת ב-PBS, קבועים ב-4 אחוז פרפורמלדהיד (PFA) (Sigma-Aldrich) קר כקרח ב-PBS למשך 20 דקות, ולאחר מכן נצבעו ב-4 ,6-דיאמידינו-2- פנילינדול (DAPI) (Sigma-Aldrich) (0.2 ug/mL) למשך 10 דקות בטמפרטורת החדר. לאחר שטיפה עם PBS, תאים נאטמו ב-VECTASHIELD Monting Medium (Vector Laboratories, Burlingame, CA, ארה"ב). מורפולוגיה גרעינית צולמה במיקרוסקופ פלורסנט אולימפוס.

Echinacoside ב-cistanche יכול להגביר את המערכת החיסונית

3.5. ניתוח מחזור התא

תאים נזרעו ב96-צלחות באר ב-1 × 104 תאים לבאר במשך 12 שעות, ולאחר מכן הודגרו בנוכחותאכינאקוסיידאו {{0}}.01 אחוז DMSO למשך 24 שעות. בסופו של דבר, תאים נקצרו עם טריפסין (Invitrogen), נשטפו ב-PBS פעמיים, ולאחר מכן קבוע עם אתנול קר כקרח (70 אחוז) למשך שעתיים ב-20 מעלות. תאים קבועים נשטפו פעמיים ב-PBS קר והוצעו מחדש ב-300 μL של PBS שהוכן טרי עם 0.1 אחוז Triton X-100, 0.2 מ"ג/מ"ל RNase A ללא DNase (Sigma), 10 ug/mL Propidium Iodide (PI) (רוש, אינדיאנפוליס, אינדיאני, ארה"ב). לאחר דגירה ב-37 מעלות בחושך במשך 20 דקות, התאים סוננו דרך רשת ניילון (Falcon, BD Bioscience, San Jose, CA, ארה"ב), שהועמסו ל-FACSCalibur cytometer (BD Biosciences). הנתונים נותחו באמצעות תוכנת ModFit (Topsham, ME, ארה"ב).

3.6. ניתוח אפופטוזיס

תאים נזרעו ב96-צלחות באר ב-1 × 104 תאים לבאר במשך 12 שעות, ולאחר מכן הודגרו בנוכחותאכינאקוסיידאו 0.01 אחוז DMSO למשך 24 שעות. בסופו של דבר, תאים נבדקו באמצעות ערכת זיהוי אפופטוזיס של Annexin V-FITC (בסט, שנחאי, סין) לפי הוראות היצרן. תאים נשטפו פעמיים עם PBS ולאחר מכן הושעו מחדש במאגר מחייב. 5 μL כל אחד של Annexin V-FITC ו- Propidium Iodide (PI) (Roche) נוספו ברצף והתאים הודגרו במשך 15 דקות בחושך בטמפרטורת החדר. התאים הועמסו על ציטומטר הזרימה FACSCalibur (BD Biosciences). הנתונים נותחו באמצעות תוכנת Cell Quest (BD Biosciences).

3.7. צביעה אימונופלורסנטית של 53BP1

תאי SW480 נזרעו על גבי כיסויים עגולים בצלחות של 24-בארים. לאחר טיפול עםאכינאקוסיידאו {{0}}.01 אחוז DMSO למשך 24 שעות, תאים תוקבעו עם 4 אחוז PFA למשך 20 דקות ונחסמו עם 15 אחוז FBS (0.1 אחוז טריטון X-100) ​​למשך שעה אחת בחדר טֶמפֶּרָטוּרָה. תאים קבועים הודגרו במשך 2 שעות בטמפרטורת החדר עם נוגדן אנטי -53BP1 ארנבת (Bethyl Laboratories, Montgomery, TX, ארה"ב) מדולל 1:1000 בתמיסה החוסמת, ולאחר מכן צביעה עם Cy3- מצומד נוגדן משני לעז נגד ארנב (Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, PA, ארה"ב) מדולל 1:500 במאגר חוסם למשך שעה אחת בטמפרטורת החדר. לאחר כביסה ב-PBS למשך 3 × 5 דקות, כיסויי הכיסוי נאטמו על שקופיות זכוכית ב-VECTASHIELD Monting Medium עם DAPI. התמונות צולמו על ידי מיקרוסקופ קונפוקאלי של Zeiss LCM 510 (Carl Zeiss, Jena, גרמניה).

3.8. 8-בדיקת שילוב oxoG

8-oxoG תוך תאי נמדד על ידי צביעה עם Alexa 488-מצומד אבידין (Invitrogen) [25]. תאים נזרעו על גבי כיסויים עגולים בצלחות של 12-בארים. לאחר טיפול עםאכינאקוסיידאו {{0}}.01 אחוז DMSO במשך 24 שעות, תאים תוקבעו עם מתנול קר כקרח למשך 20 דקות ולאחר מכן דגירה במלח מלוח טריס (TBS) (Fisher Scientific, Rockford, IL, ארה"ב) עם 0.1 אחוז Triton X-100 (Sigma-Aldrich) למשך 15 דקות. הדגימות נחסמו ב-TBS עם 0.1 אחוז Triton X-100 ו-15 אחוז FBS למשך שעה אחת בטמפרטורת החדר ולאחר מכן נצבעו עם Alexa 488-אבידין מצומד (0.5 ug/mL) בתמיסת חסימה למשך שעה ב 37 מעלות. לאחר כביסה ב-PBS למשך 3 × 5 דקות, כיסויי הכיסוי נאטמו על שקופיות זכוכית במדיום הרכבה VECTASHIELD עם DAPI (מעבדות וקטור). התמונות צולמו ונותחו על ידי מיקרוסקופ קונפוקאלי של Zeiss LCM 510.

3.9. כתם מערבי אָנָלִיזָה

תאים שגדלו וטופלו בצלחות של {{0}}בארות גורדו במאגר RIPA (150 mM NaCl, 1.0 אחוז IGEPAL CA-630, {{12 }}.5 אחוז נתרן דאוקסיכולאט, 0.1 אחוז SDS ו-50 מ"מ טריס, 1 מ"מ PMSF, pH 8.0) (Sigma). ריכוז החלבון הכולל נמדד על ידי ערכת BCA (Dingguo, Changchun, סין) לפי הוראות היצרן. דגימות עברו דנטורציה ב-95 מעלות למשך 10 דקות, הופרדו על 4 אחוז -12 אחוז SDS-PAGE ג'ל, ולאחר מכן הועברו לממברנות PVDF (Millipore, Billerica, MA, ארה"ב). ממברנות נחסמו בחלב נטול שומן של 5 אחוזים ב-TBST למשך 2 שעות והודגרו עם נוגדנים ראשוניים (Bcl-2, sc-492, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA; Bax, Santa Cruz , sc-493; to c, Santa Cruz, sc-7159; p21, ab109520, Abcam, Cambridge, MA, USA; caspase 3, Abcam, ab32042; PARP, Bioss, bs-2318 R; 53BP1, Bethyl Laboratories, A300-272A) למשך הלילה ב-4 מעלות. לאחר שטיפה עם PBS, ממברנות הודגרו עם נוגדנים משניים מצומדים ב-HRP (Jackson ImmunoResearch Laboratories) והוצגו עם ערכת זיהוי סופג של ECL Western (Transgen Biotech, Changchun, סין). התמונות נלכדו ונותחו על ידי אימג'ר (Tanon, שנחאי, סין).

3.10. מדידה של סלולר ROS

ROS תוך תאי נמדד על ידי ציטומטריית זרימה באמצעות ערכת בדיקת ROS מבוססת תאים (Beyotime Biotechnology, Haimen, סין; S0033). בסוףאכינאקוסיידבטיפול, התאים נשטפו פעמיים עם PBS והודגרו עם 10 מיקרומטר דיאצטט דיכלורופלואורססין (DCFH-DA) למשך 30 דקות ב-37 מעלות. לאחר מכן, התאים עברו טריפסין ונותחו על ידי ציטומטר הזרימה FACSCaliber (BD Biosciences). רמות ROS תוך תאיים באו לידי ביטוי כעוצמת הקרינה הממוצעת של DCF של התאים.

3.11. מדידה של ממברנה מיטוכונדריאלית פוטנציאל

פוטנציאל הממברנה המיטוכונדריאלי נמדד באמצעות צבע JC-1 (Beyotime Biotechnology, C2006) בהתאם להוראות היצרן. שליטה ואכינאקוסיידתאים שטופלו הודגרו עם JC-1 למשך 20 דקות ולאחר מכן נבדקו עם מיקרוסקופ ניאון אולימפוס.

3.12. ניתוח סטטיסטי

ניתוח סטטיסטי בוצע באמצעות תוכנת GraphPad Prism. המובהקות חושבה באמצעות ניתוח חד כיווני של שונות (ANOVA) וp < 0.05="" was="" considered="" statistically="" significant.="" results="" were="" expressed="" as="" mean="" ±="">

אכינאקוסיידבcistanche: הגנה עצביתאפקטים

4. מסקנות

במחקר זה, בדקנו את ההשפעות שלאכינאקוסיידעל מגוון קווי תאים סרטניים אנושיים. באופן מפתיע, מצאנו את זה

Cistancheלדסרטיקולה יש השפעות רבות, לחץ כאן כדי לדעת יותר

עיכב את התפשטותם של הפטומה SK-HEP-1 אנושית, סרטן השד MCF-7 ו-SW480 סרטן המעי הגס. ניתוחים נוספים מצאו כי Echinacoside עצר תאי SW480 בשלב G1, וגרם לאפופטוזיס תלוי קספאז על ידי הפעלת מסלול האפופטוזיס הפנימי הקשור למיטוכונדריה. עצירת מחזור התא הייתה קשורה לוויסות מעלה של חוסם G1/S-CDK ומעכבי סינתזת DNA CDKN1B (p21), ואפופטוזיס היה קשור להורדת ויסות של החלבון האנטי-אפופטוטי Bcl-2 ולוויסות עלייה של Bax פרו-אפופטוטי, כמו גם אובדן פוטנציאל הממברנה המיטוכונדריאלית. העלייה המשמעותית של צורה מחומצנת תוך תאית של גואנין, 8-oxoG, מעידה על כך שהייתה חמצון מוגבר של dNTPs ו/או מולקולות DNA, מה שייתכן שגרם לעצירת מחזור התא ולאפופטוזיס בתאי סרטן SW480. בעוד המנגנונים שבבסיסאכינאקוסיידעדיין יש לאפיין את ההשפעות של הנזק החמצוני והאפופטוזיס, תוצאות אלו תומכות ב-Echincoside כפיגום כימי חדש לפיתוח תרופות אנטי סרטניות.

תודות

מחקרים אלו נתמכו על ידי מענק ממחוז ג'ילין (מספר מענק: 20130101120JC) ועל ידי קרן מחקר מאוניברסיטת ג'ילין (מספר פרויקט: 450091099029).

תרומות מחבר

Liwei Dong ביצע את רוב עבודת הניסוי, ניתח את הנתונים וכתב את כתב היד; Debin Yu ו- Nuoting Wu עשו את בדיקת MTT ויצירת מושבות; הונגה וואנג וג'יאג'ינג ניו עשו את ניסויי הצביעה החיסונית והכתם המערבי; יה וואנג עזר במחזור התא ובניסויים באפופטוזיס; וג'יהואה זו פיתחו את הרעיון, ניתחו את הנתונים ופיקחו על יישום המחקר הזה ועל כתיבת כתב היד. כל המחברים אישרו את כתב היד שהוגש.

ניגוד עניינים

המחברים אינם מצהירים על ניגוד עניינים.

אכינאקוסיידבcistancheפחיתאנטי דלקתי

הפניות

1. Jiang, Y.; טו, PF ניתוח של מרכיבים כימיים במינים של Cistanche.J. Chromatogr.2009,

1216, 1970–1979.

2. וואנג, ט.; ג'אנג, X.; שי, ו.Cistanche deserticolaYC Ma, "ג'ינסנג מדברי": סקירה.אמ. ג'יי צ'ין. Med.2012, 40, 1123–1141.

3. פרימן, סי; Spelman, K. הערכה קריטית של אינטראקציות תרופות עםאכינצאה spp.

מול. נוטר. Food Res.2008, 52, 789–798.

4. Hudson, JB יישומים של phytomedicineאכינצאה purpurea(Purple Coneflower) במחלות זיהומיות.J. Biomed. ביוטכנולוגיה.2012, 2012, 769896.

5. ג'אנג, ד'; לי, ה.; Wang, JB Echinacoside מעכב פרפור עמילואיד של HEWL ומגן מפני נוירוטוקסיות הנגרמת על ידי A.Int. ג'יי ביול. מקרומול.2015, 72, 243–253.

6. וו, י.; לי, ל.; הלך.; Li, YQ השפעות הגנה של echinacoside על רעילות כבד הנגרמת על ידי פחמן טטרכלוריד בחולדות.טוקסיקולוגיה2007, 232, 50–56.

7. לי, X.; גו, ג; יאנג, ה.; Qiu, J.; גו, ט.; Wen, T. Echinacoside משפר את D-galactosamine בתוספת ליפופוליסכריד פגיעה חריפה בכבד בעכברים באמצעות עיכוב של אפופטוזיס ודלקת.סקנד. J. Gastroenterol.2014, 49, 993–1000.

8. שי, ה.; ז'ו, ח.; צ'נג, סי; ליאנג, י.; Wang, Z. Echinacoside מעכב הזדקנות תאית של תאים פיברובלסטיים אנושיים MRC-5.פרמזי2009, 64, 752–754.

9. וואנג, ש.; ג'נג, ג'; טיאן, ש.; ג'אנג, י.; שן, ל.; פאק, י.; שן, י.; Qian, J. Echinacoside משפר את התפקוד ההמטופואטי בעכברים 5-בהשראת FU.Life Sci.2015, 123, 86–92.

10. ג'יה, י.; גואן, ש; גואו, י.; Du, C. Echinacoside ממריץ שגשוג תאים ומונע אפופטוזיס של תאים בתאי MODE-K אפיתל במעי על ידי ויסות עלייה של ביטוי גורם הגדילה המשתנה- 1.J. Pharmacol. Sci.2012, 118, 99–108.

11. Morikawa, T.; נינומיה, ק.; אימאמורה, מ.; אקקי, ג'; פוג'יקורה, ש.; פאן, י.; יואן, ד.; יושיקאווה, מ.; ג'יה, X.; לי, ז;et al.Acylated phenylethanoid גליקוזידים, echinacoside ו acteoside מCistanche tubulosa, לשפר את סבילות הגלוקוז בעכברים.ג'יי נאט. Med.2014, 68, 561–566.

12. יאנג, X.; לי, פ.; יאנג, י.; שן, ג'; זו, ר.; ז'ו, פ.; ג'אנג, סי; יאנג, ז.; Li, P. יעילות ובטיחות של echinacoside במודל אוסטאופניה של חולדה.Evid. משלים מבוסס. אלטרנט. Med.2013, 2013, 926928.

13. קואנג, ר.; שמש, י.; Zheng, X. דיכוי תחמוצת החנקן מעורב בהשפעה המגינה של אכינאקוסיד על פגיעה בתאי PC12 שנגרמה על ידי H2O2-.נאט. לְדַרבֵּן. Commun.2010, 5, 571–574.

14. שיונג, ש.; קדותא, ש; תני, ת.; Namba, T. השפעות נוגדות חמצון של פנילאתנואידים מ

Cistanche deserticola. ביול. פארם. שׁוֹר.1996, 19, 1580–1585.

15. ג'אנג, י.; דו, י.; לה, ו.; וואנג, ק.; קיפר, נ.; ג'אנג, ג'יי חיזור בקרת הישרדותם של תאים בריאים וחולים.נוגד חמצון. אות חיזור.2011, 15, 2867–2908.

16. רוסו, MT; Blasi, MF; Chiera, F.; פורטיני, פ.; דגן, פ.; מקפרסון, פ.; Furuichi, M.; נקאבפו, י.; קארן, פ.; אקווילינה, ג.;et al.מאגר הטריפוספטים ה-deoxynucleoside מחומצן הוא תורם משמעותי לאי יציבות גנטית בתאים חסרי תיקון.מול. תָא. ביול.2004, 24, 465–474.

17. ונטורה, I.; רוסו, MT; דה לוקה, ג'; Bignami, M. נוקלאוטידים פורין מחומצנים, חוסר יציבות גנום וניוון עצבי.מוטאט. מילון2010, 703, 59–65.

18. ראג'נדראן, פ.; ננדקומאר, נ.; רנגרג'אן, ט.; פלניסוואמי, ר.; Gnanadhas, EN; לקשמינראסאיה, יו.; גופאס, ג'; Nishigaki, I. נוגדי חמצון ומחלות אנושיות.קלינ. צ'ים. אקטה2014, 436, 332–347.

19. ראי, פ.; אונדר, TT; יאנג, ג'יי ג'יי; McFaline, JL; פאנג, ב.; דדון, PC; Weinberg, RA חיסול מתמשך של נוקלאוטידים מחומצנים הכרחי כדי למנוע התחלה מהירה של הזדקנות תאית.פרוק. נאטל. אקד. Sci. ארה"ב2009, 106, 169–174.

20. דניקולה, GM; Karreth, FA; Humpton, TJ; גופינתן, א.; ווי, ג; Frese, K.; מנגל, ד.; יו, KH; Yeo, CJ; Calhoun, ES;et al.שעתוק Nrf2 המושרה על ידי אונקוגן מקדם ניקוי רעלים של ROS וגידול גידולים.טֶבַע2011, 475, 106–109.

21. סנטוס, מ.א.; Faryabi, RB; Ergen, AV; יום, AM; מלאכובסקי, א.; קנלה, א.; אונוזווה, מ.; לי, JE; קאלן, ע.; גוטיירז-מרטינז, פ.;et al.התמיינות הנגרמת על ידי נזקי DNA של תאים סרטניים כמחסום אנטי סרטני.טֶבַע2014, 514, 107–111.

22. סיין, ו'; איברהים, MX; לרסון, E.; Nilsson, JA; לינדהל, פ.; Bergo, MO נוגדי חמצון מאיצים את התקדמות סרטן הריאות בעכברים.Sci. תרגום Med.2014, 6, 221–215.

23. האריס, IS; Treloar, AE; אינואה, ש.; סאסאקי, מ.; גריני, סי; לי, KC; יונג, KY; ברנר, ד.; Knobbe-Thomsen, CB; קוקס, מ.א.;et al.מסלולי נוגדי חמצון של גלוטתיון ותיורדוקסין מתחברים כדי להניע את התחלתה והתקדמות הסרטן.תא סרטן2015, 27, 211–222.

24. וונג, HS; Ko, KM Herba Cistanches מגרה מחזור חיזור גלוטתיון תאי על ידי מיני חמצן תגובתיים הנוצרים מנשימה מיטוכונדריה בקרדיומיוציטים H9c2.פארם. ביול.2013, 51, 64–73.

25. Struthers, L.; פאטל, ר.; קלארק, ג'יי; Thomas, S. זיהוי ישיר של 8-oxo deoxyguanosine ו-8-oxoguanine על ידי אבידין והאנלוגים שלו.אנאלי. Biochem.1998, 255, 20–31.

26. גשר, ג.; רשיד, ש; Martin, SA תיקון אי התאמה של DNA ונזקי DNA חמצוני: השלכות על ביולוגיה וטיפול בסרטן.סרטן2014, 6, 1597–1614.

27. Caldecott, KW תיקון שבירה חד-גדילית ומחלה גנטית.נאט. לְהַאִיץ. ג'נט. 2008, 9, 619–631.

28. וורד, IM; מין, ק.; ואן דורסן, י. Chen, J. p53 Binding protein 53BP1 נדרש לתגובות נזק ל-DNA ודיכוי גידולים בעכברים.מול. תָא. ביול.2003, 23, 2556–2563.

29. Nakabeppu, Y. רמות התא של 8-אוקסו גואנין ב-DNA או במאגר הנוקלאוטידים ממלאות תפקידים מרכזיים בקרצינוגנזה ובהישרדות של תאים סרטניים.Int. י.מול. Sci.2014, 15, 12543–12557.

30. קולוסי, ד.; ברנדי, ג.; Bazzoli, F.; Ricciardiello, L. מסלולים מולקולריים המעורבים בסרטן המעי הגס: השלכות על התנהגות ומניעת מחלות.Int.J. מול. Sci.2013, 14, 16365–16385.

31. סאטלי, א.; מיטרה, א; Brownlee, Z.; שיה, X.; בליסטר, ש.; אוברמן, MJ; קופץ, ש.; אליס, LM; מנג, QH; Li, S. תאי גידול במחזור במחזור אפיתל-מזנכימליים לוכדים לזיהוי התקדמות הגידול.קלינ. Cancer Res.2015, 21, 899–906.

32. ליאו, X.; Lochhead, P.; נישיהארה, ר.; Morikawa, T.; קוצ'יבה, א.; ימאוצ'י, מ.; אימאמורה, י.; Qian, ZR; באבא, י.; שמע, ק.;et al.שימוש באספירין, מוטציה בגידול PIK3CA והישרדות סרטן המעי הגס.N. Engl. J. Med.2012, 367, 1596–1606.

33. דומינגו, ע.; כנסייה, DN; סיבר, או.; רממורתי, ר.; יאנאגיסאווה, י. ג'ונסטון, E.; דוידסון, ב.; קר, DJ; טומלינסון, IP; Midgley, R. הערכה של מוטציית PIK3CA כמנבא לתועלת מטיפול תרופתי נוגד דלקת לא סטרואידי בסרטן המעי הגס.ג'יי קלין. אונקול.2013, 31, 4297–4305.

34. אחמד, ד.; Eide, PW; איילרצן, IA; דניאלסן, ס"א; Eknaes, M.; הקטואן, מ.; לינד, GE; Lothe, RA תכונות אפיגנטיות וגנטיות של 24 שורות תאים סרטן המעי הגס.אונקוגנזה2013, 2, doi:10.1038/oncsis.2013.35.