חלק Ⅱ:Cistanche Tubulosa Phenylethanoid Glycosides מעוררים אפופטוזיס של תאי קרצינומה הפאטו-תאיים על ידי נתיבים תלויי מיטוכונדריה ו-MAPK ומשפרים את ההשפעה האנטי-גידולית באמצעות שילוב עם Cisplatin

איש קשר: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 דוא"ל:audrey.hu@wecistanche.com

הערכנו עוד יותר את ההשפעה האימונוסטימולטורית של CTPG(Cistanche Tubulosa Phenylethanoid Glycosides) על עכברים. לאחר הזרקת ip, הזרקת sc ומתן IG של CTPG (200 ו-400 מ"ג/ק"ג), לא היה שינוי משמעותי במצב העכברים בהשוואה לקבוצה שלא טופלה. גם למשקל הגוף של עכברים לא היה הבדל משמעותי בין קבוצות שטופלו ב-CTPG וקבוצות לא מטופלות (איור 7A). אינדקס הלב, הכבד, הטחול, הריאות, הכליות והתימוס של עכברים היו דומים בכל הקבוצות למעט אינדקסי הטחול של עכברים בקבוצת הזרקת 400 מ"ג/ק"ג CTPG ip (טבלה 1). התוצאות הצביעו על כך שלמינונים שנבחרו של CTPG לא היו תופעות לוואי בעכברים. הטחול הוא איבר הגנה חיסוני חשוב ביונקים, והתפתחותו משפיעה ישירות על תפקוד החיסון של הפרט ועל יכולתו להתנגד למחלות. מדד האיברים החיסוניים משקף את ההתפתחות והתפקוד החיסוני של איברי החיסון. הטחול מכיל מגוון תאי חיסון, לרבות תאי T, תאי B, תאי קטל טבעיים (תאי NK), מקרופאגים, תאים דנדריטים (DCs) ואחרים, אשר ממלאים תפקיד חשוב במערכת החיסון.30 דווח על כך. שפוליסכרידים יכולים להגדיל את מספר תאי החיסון כדי לשפר את זה של הגוףחֲסִינוּת.31 כאשר הזרקת IP של CTPG הגדילה משמעותית את אינדקס הטחול (הגדלה 0 פי 55), ניתחנו עוד יותר את מספר תאי החיסון השונים בטחול. התוצאות הראו כי הזרקת ip של CTPG הגדילה באופן משמעותי את מספר תאי T (תאי CD3 פלוס CD19−) (עלו פי 0.49), תאי B (תאי CD3-CD19 פלוס) (עלייה 0 פי 49), ותאי NK (תאי CD3-CD19-CD49b פלוס) (עלו פי 1.63) בהשוואה לקבוצה שלא טופלה. תאי CD4 פלוס ו-CD8 פלוס T, כתתי-הסוגים העיקריים של תאי T, ממלאים תפקיד חשוב בתגובה החיסונית התאית הספציפית לאנטיגן.32 לכן, ניתחנו עוד את המספר ומצב ההפעלה של תאי CD4 פלוס ו-CD8 פלוס T בתאי T טְחוֹל. התוצאות הצביעו על כך שהזרקת IP של CTPG לא רק הגדילה משמעותית את מספר תאי CD4 פלוס ו-CD8 פלוס T (הגדילה פי 0.55 ו-0.34, בהתאמה), אלא גם שיפרה את מצב ההפעלה של תאי CD4 פלוס T (תאי CD4 פלוס CD44 פלוס) (עלו פי 0.84) (איור 7B), תוצאות אלו מצביעות על כך של-CTPG הייתה תפקוד שיפור חיסוני.

השילוב של CTPG(Cistanche Tubulosa Phenylethanoid Glycosides) ו-Cisplatin הפגינו השפעה אנטי-גידולית חזקה על דגם H22 Tumor Mouse

מקובל כי כימותרפיה או הקרנות עלולים להוביל לפרוגנוזה לקויה ולגרום לתופעות לוואי רבות, אשר עשויות לנבוע מדיכוי מערכת החיסון ומפגיעה ברקמות ואיברים תקינים. לפוליסכרידים מ-TCM יש השפעות שיפור מערכת החיסון ומקלים על הנזק של איברי חיסון ותאי חיסון הנגרמים על ידי כימותרפיה, למשל, chitosan33 ו-Lycium barbarum polysaccharides.34 התוצאה לעיל הראתה ש-CTPG(Cistanche Tubulosa Phenylethanoid Glycosides) יכול לשפר את תופעות הלוואי של ציספלטין על מערכת החיסון. לכן, ההשפעה האנטי-גידולית של CTPG בשילוב עם cisplatin הוערכה במודל עכבר הגידול H22. כפי שמוצג באיור 8A, CTPG לבד, cisplatin לבד, והשילוב של CTPG וציספלטין (CTPG בתוספת cisplatin) דיכאו באופן משמעותי את צמיחת הגידול H22 בהשוואה לקבוצת הביקורת. CTPG בתוספת cisplatin הראו השפעה מעכבת חזקה יותר מזו של CTPG וציספלטין בלבד. ביום ה-20, נפחי הגידול בקבוצת הביקורת, cisplatin לבד, CTPG בלבד ו-CTPG פלוס cis platin היו כ-1707.8, 722.5, 1033.8 ו-367.5mm3, בהתאמה. באותו יום, הגידולים נאספו לצורך תצפית חזותית (איור 8B) והשוואת משקל (איור 8C). CTPG בתוספת cisplatin הראו השפעות טיפוליות טובות יותר על מודל העכבר הגידול H22 מאשר CTPG או cisplatin לבד. משקל הגידול בקבוצת CTPG פלוס ציספלטין היה נמוך מזה בקבוצות אחרות. תוצאות אלו מצביעות על כך שהפעילות האנטי-גידולית של CTPG וציספלטין גורמת להשפעות סינרגיות.

משקל הגוף של עכברים נמדד כדי לשקף את המצב הבריאותי של העכברים. משקל הגוף ירד בצורה יוצאת דופן לאחר טיפול בציספלטין, דבר המצביע על רעילות מערכתית חמורה הנגרמת על ידי ציספלטין. 35 לשם השוואה, CTPG בשילוב עם ציספלטין הביא לשיפור משמעותי בירידה במשקל הגוף שנגרמה על ידי ציספלטין, בעוד ש-CTPG.(Cistanche Tubulosa Phenylethanoid Glycosides) לבד לא הייתה השפעה משמעותית על משקל הגוף של עכברים (איור 8D). האיברים כולל הטחול, הלב, הכבד, הריאות, הכליה והתימוס בודדו גם הם כדי לחשב אינדקסים של איברים. בהשוואה לקבוצה שלא טופלה, מדד הטחול ירד משמעותית ועלה על ידי cisplatin ו-CTPG, בהתאמה. CTPG בתוספת cisplatin התאושש מדדי טחול בהשוואה ל-cisplatin בלבד. מדדי איברים אחרים לא הראו הבדל משמעותי בין כל הקבוצות (טבלה 2). CTPG(Cistanche Tubulosa Phenylethanoid Glycosides) בשילוב עם Cisplatin Enhanced theחֲסִינוּתשל עכברי גידול.

התוצאות לעיל הראו כי CTPG(Cistanche Tubulosa Phenylethanoid Glycosides) הגביר את החסינותשל עכברים ועיכבו את האפופטוזיס של ספלנוציטים המושרה על ידי ציספלטין. עוד חקרנו האם ההשפעה האנטי-גידולית של CTPG בתוספת cisplatin נמצאת בקורלציה עם חסינות מוגברת. בתהליך התרחשות והתפתחות הגידול, מערכת החיסון של הגוף ממלאת תפקיד מעקב חיסוני חשוב, וחסינות תאית בתיווך תאי T משחקת תפקיד מפתח. לתאי CD4 פלוס T יש את הפונקציה של סיוע לחסינות תאית ותגובה חיסונית הומורלית, ותאי CD8 פלוס T הם תאי המשפיעים העיקריים של תגובה חיסונית, שיכולים להרוג באופן ספציפי תאי מטרה ולמלא תפקיד חשוב בחסינות הגידול ובחסינות אנטי-ויראלית.32 הטחולים של עכברים נושאי גידול נאספו כדי לזהות את מספר תאי T ותאי B על ידי ציטומטריית זרימה. התדירות והמספרים של תאי T כולל תאי CD4 פלוס ו-CD8 פלוס T בקבוצת CTPG פלוס ציספלטין היו גבוהים משמעותית מאלו שבביקורת (עלו פי 0.55 ו-0.7, בהתאמה) וקבוצות ציספלטין (עלו פי 0.92 ו-1.16 פעמים, בהתאמה) (איור 9A ו-B). בהשוואה לקבוצת הביקורת, CTPG לבדה גם העלתה חלקית את מספר תאי CD4 פלוס ו-CD8 פלוס T למרות שלא היה הבדל משמעותי. לתדרים ולמספרים של תאי B לא היה הבדל משמעותי בין כל הקבוצות.

תאי מדכאי מיאלואיד (MDSCs) ותאי T רגולטוריים (Tregs) מתרחבים בגידולים ומעכבים תגובות חיסוניות אנטי-גידוליות; הם מדכאים את ההפעלה וההתרחבות של תאי CD4 פלוס T, את התפקוד של תאי T אפקטורים, את ההפעלה ו/או התפשטות, ויצירת ציטוקינים של תאי CD4 פלוס ו-CD8 פלוס T, התפשטות תאי B וייצור אימונוגלובולינים ומתג המעמדות, הפונקציות הציטוטוקסיות של NK ושל תאי T הורגים טבעיים (NKT), והתפקוד וההתבגרות של DCs.36-38 התדרים והמספרים של MDSCs (CD11b ועוד Gr-1 פלוס ), מקרופאגים (CD11b ועוד Gr -1-), וטרגס (Tregs טבעי: CD4 פלוס CD25 פלוס Foxp3 פלוס; Tregs המושרה: CD4 פלוס CD25-Foxp3 פלוס ) בטחול של עכברי גידול נותחו על ידי ציטומטריית זרימה. בהשוואה לקבוצת הביקורת, התדירות והמספר של MDSCs ירדו באופן משמעותי לאחר הזרקה עם ציספלטין בלבד (ירידה פי 1.56) או בשילוב עם CTPG(Cistanche Tubulosa Phenylethanoid Glycosides) (ירד 0.62 פעמים). גם מספרם של מקרופאגים CD11b בתוספת Gr-1- ירדו באופן משמעותי למרות שלא היה שינוי משמעותי בתדרים שלהם (איור 9C). בנוסף, CTPG(Cistanche Tubulosa Phenylethanoid Glycosides) לבד וטיפול ב-CTPG בתוספת ציספלטין הפחיתו באופן משמעותי את התדרים של Tregs המושרה (ירידה של {{0}}}.33 ו-0.37 פעמים, בהתאמה) (איור 9D). תוצאות אלו הצביעו על כך שהאפקט האנטי-גידולי של CTPG בתוספת cisplatin עשוי להיות מתאם עם החסינות המוגברת המאופיינת במספר המוגבר של תאי T וירידה במספרים של MDSCs ו-Tregs.