חלק 1 Cistanche Tubulosa (Schenk) תמצית Wight משפרת את ביצועי ההינדלימב ומחלישה את ביטוי ה-IId/IIx של שרשרת כבדה של Myosin בעכברים משותקים יצוקים

למידע נוסף אנא צרו קשר עם:Joanna.jia@wecistanche.com

1מחלקה למדע נוירו-רפואי, המכון לרפואה טבעית, אוניברסיטת טויאמה, 2630 Sugitani, Toyama 930-0194, יפן 2המחלקה לרפואה מזרחית יפנית, בית הספר לתארים מתקדמים ברפואה ומדעי התרופות, אוניברסיטת טויאמה, 2630 Sugitani, Toyama 930-0194, יפן

ההתכתבות צריכה להיות מופנית לצ'יהירו טוהדה; chihiro@inm.u-toyama.ac.jp

התקבל ב-14 ביוני 2019; תוקן ב-13 בספטמבר 2019; התקבל ב-17 בספטמבר 2019; פורסם ב-22 באוקטובר 2019

עורך אקדמי: וון-יי קאנג

זכויות יוצרים © 2019 יושיוקי קימברה ואח '. זהו מאמר בגישה פתוחה המופץ תחת רישיון הייחוס של Creative Commons, המתיר שימוש, הפצה ושכפול ללא הגבלה בכל מדיום בתנאי שהיצירה המקורית מצוטטת כראוי.

ניוון שרירי השלד נתקל במצבים קליניים רבים, אך טרם נקבע טיפול תרופתי.Cistanche tubulosa(שנק) Wight היא תרופה צמחית המשמשת ברפואה היפנית והסינית המסורתית. במחקר הנוכחי חקרנו את ההשפעה שלC. תמצית טובולוסה(CTE) על שריר מנוון in vivo. חקרנו גם את אימוביליזציה של יציקת יציקה אחורית בעכברים והמצאנו סוג חדש של יציקה משתקת אחורית, המורכבת מסרט דמוי ספוג וצינור פלסטיק דק. בשיטה זו, 3 מתוך 4 קבוצות של עכברים (n 11 לכל קבוצה) הושלכו-משותקים בגפיים האחוריות ונתנו להם CTE או רכב במשך 13 יום. הליך בושה בוצע בעכברים של הקבוצה הרביעית שאליה הועבר הרכב. לאחר מכן, שרירי ה-triceps surae (TS) נכרתו. כדי לנתח את ההשפעה של מערכת הגבס החדשנית וניהול CTE על ניוון שרירים, הערכנו את המשקל הרטוב של TS ואת אזור החתך של מיופייבר (CSA). קבענו גם את רמות הביטוי MyHC IId/IIx על ידי כתם מערבי, מכיוון שהעלייה שלהם היא סימן היכר של ניוון שרירים לא בשימוש, מה שמרמז על שינוי מסוג מיופייבר איטי למהיר. יתר על כן, ביצענו שני מבחנים של ביצועי ההחלקה האחורית. שיטת האימוביליזציה של השחקנים החדשנית הפחיתה משמעותית את המשקל הרטוב של TS ואת מיופייבר CSA. זה לווה בהידרדרות בתפקוד hindlimb ועלייה בביטוי MyHC IId/IIx. ניהול CTE לא שינה את המשקל הרטוב של TS או את מיופייבר CSA; עם זאת, הוא הראה מגמה של הקלה של אובדן תפקוד אחורי ושל דיכוי של ביטוי MyHC IId/IIx מוגבר בעכברים משותקים יצוקים. שיטת האימוביליזציה האחורית החדשנית שלנו גרמה למעשה לניוון שרירים. CTE לא השפיע על מסת השריר, אך דיכא את המעבר מסוג מיופייבר איטי למהיר בעכברים משותקים יצוקים, מה שגרם להידרדרות בתפקוד האחורי.

ל-Cistanche deserticola יש השפעות רבות, לחץ כאן כדי לדעת עוד

1. מבוא

התנאים הפתופיזיולוגיים הקשורים לאטרופיה של שרירי השלד כוללים סרקופניה [1], מטמון [2], וניוון שרירי השלד המושרה על ידי גלוקוקורטיקואידים [3]. ניוון שרירי השלד נגרם גם על ידי שימוש ממושך [4], שיכול לנבוע ממנוחה במיטה [5], מריחת גבס לטיפול בשברים או בפציעות ברצועות [6], או טיסה לחלל [7]. מאז מחלות שונות יכול לגרום למצב זה, זה משפיע על אחוז גדול של האוכלוסייה.

פעילות גופנית נאותה וטיפולים תזונתיים חיוניים לטיפול בניוון שרירים [8]. בנוסף, מחקרים מסוימים דיווחו כי אמצעי נגד פרמקולוגיים, כולל מודולטורים סלקטיביים של קולטן אנדרוגן, נוגדנים חד-שבטיים אנושיים נגד מיוסטטין ואגוניסטים סלקטיביים של קולטן גרלין, יעילים [9]; עם זאת, גישות אלה עדיין לא מבוססות.

התנאים האטרופיים של השריר שתוארו לעיל מלווים בשינוי בפרופיל סוג מיופייבר והפחתת מסת השריר. חוסר שימוש בשרירים הנגרם כתוצאה מאובדן השפעה עצבית ופריקה מכנית גורם להסטה איטית למהירה מסוג מיופייבר, ושינוי בפרופיל האיזופורם של השרשרת הכבדה של מיוזין (MyHC) [10], המאותת על ידי תוספת של רמות הביטוי MyHC IId/IIx [11, 12]. תזוזה מסוג מיופייבר מהיר עד איטי מושרית במקום זאת על-ידי מתן גלוקוקורטיקואידים, מטמון, אלח דם וגורמים אחרים [10].

ציסטנצ'ההיא תרופה צמחית שמקורה בCistanche deserticolaי. ג. מא,C. tubulosa(שנק) Wight, או C. salsa (C. A. Mey) Beck, על פי הפרמקופיאה היפנית [13]. ברפואה היפנית המסורתית (קמפו) וברפואה הסינית, הוא משמש לטיפול ב"תסמונת עשיית כליות", המאופיינת באי פוריות, חולשת שרירים מערכתית (במיוחד בגב ובגפיים התחתונות) וחולשת עצם [14, 15]. ידוע שהוא מכיל מרכיבים שונים, כולל אקטאוזיד, אכינאקוסיד ואיזואקטאוזיד [16]. תמציתו של צמח זה, או המרכיבים הכימיים שלו, הראתה השפעות אירוביות, הפטו ונוירו-טקרטיביות; אנטי-אייג'ינג, אנטי-אטי, אנטי-אנטי-אטיגי, מעורפל, ואפקטים אפרודיזיאקים; פעילות נוגדת חמצון ואנטי דלקתית; והיכולת לשפר את הזיכרון והלמידה [15, 16]. עם זאת, היעילות של צמח זה למנוע או לטפל במחלות בזבוז שרירים לא אושרה. לכן, במחקר הנוכחי, חקרנו את ההשפעות שלC. tubulosaתמצית (CTE) כטיפול בניוון שרירים.

לשם כך, השתמשנו באימוביליזציה של יציקת יציקה אחורית כדי לגרום לניוון שרירים בעכברים, תוך התמקדות, במיוחד, בחומרים המשמשים בגבס. דווח על מגוון מערכות יציקה, כולל טיח של יציקות פריז [17], יציקות פיברגלס [18], צינורות מיקרוצנטריפוגה מפוליפרופילן [19], התקנים דמויי חליפת ריסון העשויים מרשת כותנה ופלדה [20], פיפטות פלסטיק עם ריפוד ספוג פרוקסימלי [21], יציקות עשויות סרט תחבושת לא אלסטי וחוט פלדה מצופה ויניל [22], החדרת חוטים בשילוב עם לוחות מתכת [23], ושימוש במהדק עור כירורגי [24]. גבס אידיאלי צריך להיות זעיר פולשני ולא טראומטי כדי למנוע שינויים דלקתיים, כי דלקת יכולה לגרום לאטרופיה בשרירים [25]. בנוסף, מבחני ביצועים אחוריים עם הגבס אמורים להיות אפשריים בשלבים הסופיים של הניסוי. יתר על כן, צוות השחקנים צריך להיות קל לטיפול ללא ידע או כישורים מיוחדים; זה צריך להיות קל, זול, קל לרכישה, ולא צריך לדרוש התקנים מיוחדים ליישום והסרה.

דווח על מודלים שונים של בעלי חיים של בזבוז שרירים. פריקה Hindlimb שימשה לעתים קרובות [11, 12] אך יש לה מספר בעיות, כולל נמק הזנב, אשר יכול לגרום לדלקת מערכתית [25]; סטייה של נוזלי הגוף לצד הקאודלי, וכתוצאה מכך לחריגות בכלי הדם האחוריים [26]; מיקרו-כבידה יוצאת דופן על החלק האחורי, שיכולה להשפיע מאוד על ביטוי חלבונים, כולל זה של אנזימים מיטוכונדריאליים [27]. כל הגורמים הללו יכולים להשפיע על מהלך בזבוז השרירים. שיטה אחרת גורמת לניוון שרירים על ידי שלילת השריר מתשומות עצביות (לדוגמה, באמצעות טרנסקציה עצבית סיאטית) [28]; מאחר ששרירים כפופים לגורמים טרופיים מתאי עצב סופניים [29], שיטה זו, שמובילה למצב יוצא דופן של ניתוק עצבים כמעט מוחלט, יכולה לשנות את תהליך ניוון השרירים. בעלי חיים הנתונים להפרעות מערכתיות המעוררות ניוון שרירים, כגון סוכרת [30], אי ספיקת כליות [31], מתן קורטיקוסטרואידים [32], והזדקנות או הזדקנות מואצת [33, 34], יכולים לשמש כמודלים למחלות אנושיות; עם זאת, תנאים מערכתיים אלה יכולים גם להפריע לתהליך של ניוון שרירים.

לפיכך, בחרנו באימוביליזציה של הגבס האחורי כדי לגרום לניוון שרירים, וביקשנו ליצור שיטה חדשנית לביצועה בעכברים, שבאמצעותה חקרנו את ההשפעות של CTE על ניוון שרירים.

ציסטנצ'החטיפי תוספי תזונהכליהמחלהומגבירחוזק

2. חומרים ושיטות

2.1. חומר צמחי ומיצוי.

CTE נרכשה מ- Alps פרמצבטיקה תעשיית ושות', בע"מ (הידה, גיפו, יפן).

גבעולים בשרניים של C. tubulosa נאספו משינג'אנג אויגור אפטונום ריון, הרפובליקה העממית של סין. בסך הכל 193 ק"ג של אבקות מעורבות של C. tubulosa היו שקועים ב-1,883 ליטר של 30% אתנול. התערובת הועתקה במשך 2 שעות בטמפרטורה של 55–64 מעלות צלזיוס. תפוקת התמצית הייתה 7.2% והכילה 3.36% אקטאוזיד ו-12.72% אכינאקוסיד.

2.2. עכברים.

עכברים בוגרים ddY (בני 12 שבועות) זכרים (Japan SLC, Shizuoka, Japan) שוכנו בנפרד בכלובי פלסטיק ונשמרו במחזור אור/חושך של 12 שעות בוויבריום מווסת טמפרטורה (25 ± 2 מעלות צלזיוס). כל בעלי החיים הורשו לגשת למים ולצ'או (מלאי Labo MR; תאגיד נוסאן, יוקוהמה, קנגאווה, יפן).

כל הניסויים והפרוטוקולים בבעלי חיים בוצעו בהתאם להנחיות לטיפול ושימוש בחיות מעבדה בקמפוס סוגיטני של אוניברסיטת טויאמה. מספר האישור לניסויים בבעלי חיים הוא A2016INM-3. נעשו כל המאמצים למזער את מספר בעלי החיים שבהם נעשה שימוש.

2.3. אינדוקציה של ניוון שרירים הינדים וניהול CTE.

העכברים חולקו ל-4 קבוצות (n 11 לכל קבוצה): ביום השני, כל העכברים היו מורדמים, ושיערם הוסר מהירך לקרסול עם קרם דפילציה (קרם אפילט; קראצ'י, טוקיו, יפן). לאחר מכן, 3 מתוך 4 קבוצות יצוקות (+) קבוצות היו משותקות יצוקות על פי הנוהל הבא, כפי שמוצג באיורים 1(א)–1(ז):

שלב 1. חתכו סרט איטום קצף גומי EPDM (Cemedine Corporation, טוקיו, יפן) לרצועה של 12 8 25 מ"מ (איור 1(a)).

שלב 2. החזיקו את החלק האחורי בתנוחת הקרסול הפלנטרית ועטפו אותו בעדינות רבה במפרק הקרסול עם סרט איטום (איור 1(b)).

שלב 3. חותכים מכסה בידוד PVC רך TIC-22 (תאגיד ניצ'יפו, אוסקה, יפן), ומכסים את שרוול סרט האיטום. השתמש בקלטת דו-צדדית (PRO SELF שימושי לחתוך קלטת דו-צדדית J-1300; Nitoms Inc., טוקיו, יפן) כדי לגרום להם לדבוק (איור 1(c)).

שלב 4. לאסוף את הקצוות החתוכים של הכובע; לחתוך סרט דבק עמיד למים בעל ביצועים גבוהים (סרט כוח; Asahipen Corporation, אוסקה, יפן) לגודל של כ-4 48 מ"מ ולתקן את הקצוות שנאספו (איור 1(ד)).

שלב 5. שים חתיכה קטנה (כ- 5 30 מ"מ) של סרט רדיד אלומיניום (AL-30; תאגיד ניצ'יבאן, טוקיו, יפן) בצד הקדמי של הקצה העליון של הכובע (איור 1(e)).

שלב 6. לחתוך את סרט הפלסטיק (סרט בידוד חשמלי ויניל מס '21; Nitto Denko Corporation, אוסקה, יפן) לכ-19 × 40 מ"מ, ועוטפים את המכסה (איור 1(f)).

שלב 7. בצע את אותו הליך על החלק האחורי הקונטרה-צדדי (איור 1(g)).

תקופת האימוביליזציה ששימשה במחקר הנוכחי הייתה 13 יום, והיציקות הוחלפו אם התרחש אחד או יותר מהמצבים הבאים: בצקת דוושה חמורה, נמק אחורי, כיבים חמורים בעור, התרופפות הגבס עקב הרס, או נקע יצוק מהקרסול. בקבוצה הנותרת בוצע רק דפילציה (הליך שיימינג), והרכב (מי מלח פיזיולוגיים) ניתן במשך 13 יום מהיום שלאחר הדפילציה (יום 2). מבין 3 קבוצות היציקות (+), 2 קיבלו CTE (50 ו-100 מ"ג/ק"ג/יום; יציקה (+)/קבוצת CTE-50 וקבוצת יציקה (+)/CTE-100), ואחת ניתנה להן קבוצת רכב (יצוקה (+)/קבוצת רכב), גם היא מהיום השני. CTE הומס לתוך מלח פיזיולוגי וניתן מדי יום באמצעות גאבאג' דרך הפה במשך 13 יום.

2.4. הערכת תפקוד הינדלימב וכוח שרירים הינדלימב.

ביום ה-14, העכברים של קבוצת הגבס (+) הורדו שוב לאחר מתן CTE, והיציקות הוסרו. למחרת (יום 15), כל העכברים נבדקו לתפקוד אחורי וחוזק שרירים, באמצעות שתי הבדיקות הבאות:

2.4.1. מדידת מהירות ההליכה.

משטח עץ מרובע ברוחב 15 מ"מ הוחזק אופקית במרחק של כ-50 ס"מ מהקרקע. לאחר מכן הונח העכבר על הרציף, ומהירות ההליכה הוערכה כאשר החיה חצתה את הרציף על ידי רישום ידני באמצעות שעון עצר את הזמן להליכה למרחק של 50 ס"מ. לפני כן, כל עכבר הורגל לפלטפורמה על ידי חצייתה פעמיים כאימון.

2.4.2. בדיקת תקלה ברגל.

כדי להעריך את חוזק השרירים האחוריים, ביצענו את "מבחן תקלת כף הרגל", שבו כל עכבר הונח שוב על הרציף, ומספר החלקות האחוריות מהפלטפורמה הועתק. בדיקה זו היא גרסה שונה של מבחן המוט הסטטי, שבו מוטות אוויריים קבועים באמצעות מהדק G, ועכברים עשויים לחצות אותם [35]. בדיקת תקלות בכף הרגל בוצעה שלוש פעמים, ונרשם מספר הנפילות הממוצע בשלושת המפגשים. היה מרווח מנוחה של לפחות 15 דקות בין הפגישות.

2.5. ניתוחים היסטולוגיים ומורפומטריים של שריר ה-Triceps Surae.

לאחר הערכת תפקודם של העכברים האחוריים, עכברים הורדו עמוקות והורדמו על ידי זלוף מלח פיזיולוגי. לאחר מכן, שרירי ה-triceps surae (TS) נכרתו משני צידי האחוריים; דגימות מהחלק האחורי השמאלי תוקנו ב-4% פרפורמלדהיד בתמיסת PBS למשך 24 שעות, ולאחר מכן הועברו לתמיסת סוכרוז של 30% ב-PBS, והודגרו להגנה על קריו-פרוטקציה וקריו-אקטציה. בעקבות זאת, חתכים בעובי 12 מיקרומטר נחתכו לאורך הציר המשני מאזור אמצע הבטן של כל שריר באמצעות קריוסטאט (Leica 3050S; מערכות לייקה, נוסלוך, גרמניה). שבעה עד עשרה קטעים רציפים הותקנו על מגלשות זכוכית מצופים אנטי-טריפ (MAS- GP Type A, תעשיית הזכוכית Matsunami, אוסקה, יפן), יובשו מיד באמצעות מייבש שיער, אוחסנו בטמפרטורה של 30 מעלות צלזיוס, והוכתמו בכתמי המטוקסילין-אאוסין (צביעת H-E, מעבדות ScyTek, לוגן, יוטה, ארצות הברית). חתך מייצג אחד לכל חיה, שבו נבחרה בבירור פרוסת הציר הקצר של כל מיופייבר, ואזור החתך שלה (CSA) נמדד באמצעות Image J (המכונים הלאומיים לבריאות, בת'סדה, מרילנד, ארצות הברית).

2.6. כתם מערבי.

סך החלבון מה-TS הימני הופק בשיטה הבאה. ה-TS הימני נטחן באמצעות מספריים ומיד הוקפא בחנקן נוזלי, אוחסן בטמפרטורה של 30 מעלות צלזיוס, ומאוחר יותר הומוגני כדי ליצור ליאסט רקמה. השרירים המופשרים דוגרו בקור כקרח במשך 30 דקות בתמיסת תמצית חלבון של 2 מ"ל M-PER (פירס ביוטכנולוגיה, רוקפורד, אילינוי, ארה"ב) ולאחר מכן הומוגנית. לאחר מכן הומוגנטים נעשו צנטריפוגות בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס ו-4,000 גרם במשך 10 דקות, וסופרנאטים נאספו.

10 מיקרוגרם של חלבון כולל בכל שריר ליזוזט הועמסו והופרדו על ידי נתרן דודציל סולפט-פוליאקרילאמיד ג'ל אלקטרופורזה (SDS-PAGE), ואחריו אלקטרו טרנספר על קרום ניטרוצלולוז (0.2 מיקרומטר, #1620112, מעבדות ביו-ראד, הרקולס, קליפורניה, ארצות הברית). קשירה לא ספציפית נחסמה עם 5% חלב יבש ללא שומן (אבקת חלב רזה, 190-12865, FUJIFILM Wako Pure Chemical Industries, אוסקה, יפן) ב-Tris-buffered מלוחים עם 0.05% Tween 20 (TBS-T). הממברנות דוגרו במהלך הלילה בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס עם נוגדן ראשוני שהומס בתמיסה משפרת חיסונית Can Get Signal 1 (טויובו, אוסקה, יפן). לאחר תסיסה ושטיפה עם TBS-T, הממברנות דוגרו במשך שעה אחת בטמפרטורת החדר עם פרוקסידאז חזרת - (HRP-) מצומד נוגדן משני מדולל בתמיסת משפר אימונוריאקציה Can Get Signal 2 (טויובו, אוסקה, יפן). אותות על הממברנות זוהו באמצעות אלקטרוכימילומינסנציה באמצעות לומינול. ניתוח דחיסותומטרי בוצע לאחר מכן באמצעות תוכנת CS Analyzer (אטו, טוקיו, יפן). הנוגדנים נבחרו ודוללו באופן הבא: נוגדן חד שבטי אנטי-MyHC IId/IIx של עכברים (1: 1000, שיבוט A4.1025, #05-716, מרק מיליפור, ברלינגטון, מסצ'וסטס, ארצות הברית), נוגדן חד-שבטי נגד עומסים נגד GAPDH (1: 3500, G041 ABM, ונקובר, קנדה), ונוגדן משני IgG פולי-קלוני מצומד ב-HRP (1: 2000, Abcam, Cam- bridge, בריטניה).

2.7. ניתוחים סטטיסטיים.

כל התוצאות מבוטאות כממוצע ± שגיאת תקן של הממוצע (SEM). המובהקות הסטטיסטית של ההשוואות בין הקבוצות אומתה על ידי מבחני ANOVA חד-כיווניים ופוסט-הוק דאנט או מבחן ה-HSD של טוקי; מבחן קרוסקל-וואליס והמבחנים שלאחר הוק דאן; או ANOVA דו-כיווני עם אמצעים חוזרים ונשנים והמבחן של פוסט הוק דאנט. המבחן של סמירנוב-גרוב שימש להחרגת חריגות. עבור כל ההערכות הסטטיסטיות, ערכי p הנמוכים מ- 0.05 נחשבו למובהקים סטטיסטית, וכל הניתוחים בוצעו באמצעות GraphPad Prism 6 (תוכנת GraphPad, לה ג'ולה, קליפורניה, ארצות הברית).

ציסטנצ'התוספי תזונה אנטי אייג'ינג ומגבירים את החוזק

3. תוצאות

3.1. בריאות בעלי חיים והשפעת CTE על משקל הגוף.

במראה הוויזואלי, החלקים האחוריים של עכברים משותקים יצוקים היו כולם אטרופיים, בהשוואה לאלה של עכברי קבוצת השחקנים ()/כלי רכב. אימוביליזציה של הגבס גרמה לאובדן משמעותי של משקל הגוף עד סוף שלב המחקר. לעומת זאת, השינויים במשקל הגוף לא היו משמעותיים בעכברי קבוצת הגבס ()/הרכב. שתי קבוצות הגבס (+)/CTE לא הראו שינויים משמעותיים במשקל הגוף בהשוואה לקבוצת הגבס (+)/הרכב (איור 2).

סיבוכים חמורים בעכברים האחוריים של עכברים משותקים, כגון נמק עור או גנגרנה, לא נצפו וגם לא היו התנהגות חריגה בוויבריום. עם זאת, סיבוכים קלים, כולל בצקת בכף הרגל, כיבים שטחיים בעור ורובור של האחוריים, נצפו בכל העכברים המשותקים יצוקים (איור 1(h)). גם התרופפות ופריקה של הגבס, שהובילו להחלפת הגבס, נצפו ברוב המקרים.

3.2. השפעת CTE על חוזק השרירים וביצועי השרירים.

קבוצת הגבס (+)/כלי הרכב הציגה מספר גדל משמעותית של החלקות אחוריות במבחן התקלות בכף הרגל (איור 3(a)), ומהירות ההליכה הייתה איטית משמעותית מזו שבקבוצת הגבס ( )/vehicle (איור 3(b)).

טיפול ב-CTE הביא לנטייה תלוית מינון לירידה בהחלקות האחוריות. בקבוצת הגבס (+)/CTE-100, הטיפול נטה להפחית (p 0.0604) החלקות אחוריות בהשוואה לקבוצת הגבס (+)/הרכב (איור 3(a)). באשר למהירות ההליכה, הן קבוצות הגבס (+)/CTE-50 והן קבוצות הגבס (+)/CTE-100 לא הציגו הבדלים משמעותיים במהירות ההליכה בהשוואה לקבוצת הגבס (+)/רכב, אם כי הייתה מגמה קלה ולא משמעותית של תלוית מינון למהירות גבוהה יותר (איור 3(b)).

3.3. משקל רטוב של TS ומיופייבר CSA.

המשקל הרטוב של ה-TS ירד באופן משמעותי עם אימוביליזציה של הגבס בהשוואה לקבוצת הגבס ()/קבוצת הרכב (איור 4(a)). ניהול CTE לא השפיע על המשקל הרטוב של TS.

כמו כן נותח ממוצע המיופייבר CSA בכל קבוצה. בקבוצת הגבס (+)/רכב נמצאה ירידה משמעותית במיופייבר CSA בהשוואה לקבוצת הגבס (+)/רכב (איור 4(ב)). מיופייבר CSA סווג ונותח עוד יותר לפי התפלגות תדרים, כפי שמוצג באיור 4(c). מחלקת ה-CSA השכיחה ביותר בקבוצת הגבס ()/רכב הייתה גדולה מזו שבקבוצת הגבס (+)/רכב; אחוז המיופיברים בקבוצת CSA של 1350- 2250 μm2 היה, או נטה להיות, גבוה משמעותית בקבוצת הגבס ()/רכב מאשר בקבוצת הגבס (+)/רכב, והמגמה ההפוכה ניכרה בקבוצות CSA class 0 900 μm2 (איור 4(c)). התפלגות CSA לא הושפעה מניהול CTE בשתי קבוצות היציקות (+)/CTE, בהשוואה לקבוצת הגבס (+)/הרכב (איור 4(c)). תמונות מיופייבר מייצגות מוצגות באיור 4(ד).

3.4. השפעת CTE על רמות ביטוי MyHC IId/IIx ב- TS.

הכתם המערבי בוצע בשש דגימות מייצגות מכל קבוצה (איור 5(a)). דגימות אלה נבחרו על סמך הנגזרת שלהן מבעלי חיים שהפגינו ביצועי בדיקת תקלות בכף הרגל הקרובים ביותר לערכים הממוצעים עבור הקבוצות שלהם.

בקבוצת הגבס (+)/רכב, MyHC IId/IIx הוגדל באופן ניפיקנטי בהשוואה לקבוצת הגבס ()/הרכב. עלייה זו דוכאה באופן תלוי מינון על ידי מתן CTE. בקבוצת הגבס (+)/CTE-100, ביטוי MyHC IId/IIx נטה לרדת בהשוואה לקבוצת הגבס (+)/רכב (עמ' 0.0810) (איור 5(b)). ביטוי GAPDH, ששימש כבקרה פנימית, לא היה שונה באופן משמעותי בין קבוצות (איור 5(c)).

ציסטנצ'הלטובולוסה יש השפעות רבות