Xican Li 1,2,*,† ID , יולו שיה 1,2,†, קה לי 3,4, אייז'י וו 1,2,*, הונג שיה 1,2, צ'יאן גואו 1,5,

פנגוי שו 1, ירקינגול מאלשיבק 1, וויי ז'או 6, ג'יאסונג גואו 7 ודונגפנג צ'ן 3,4

איש קשר:joanna.jia@wecistanche.com

1 בית הספר לרפואת צמחים סינית, אוניברסיטת גואנגג'ואו לרפואה סינית, גואנגג'ואו 510006, סין; xieyulu1900@163.com (י.י.); xiehongxh1@163.com (ה.י.); 15622178307@163.com (ש.ג.); 15228738137@163.com (P.X.); pandiphd@163.com (י.מ.)

2 מעבדת מחקר ופיתוח חדשנית של TCM, אוניברסיטת גואנגג'ואו לרפואה סינית,

510006 גואנגג'ואו, סין

3 בית הספר למדעי הרפואה הבסיסיים, אוניברסיטת גואנגג'ואו לרפואה סינית, גואנגג'ואו 510006, סין; ys1090992678@163.com (ק.ל.); chen888@gzucm.edu.cn (D.C.)

4 מרכז המחקר לרפואה אינטגרטיבית בסיסית, אוניברסיטת גואנגג'ואו לרפואה סינית,

510006 גואנגג'ואו, סין

5 בית הספר למדעי הרפואה הבסיסיים, אוניברסיטת התרופות גואנגדונג, גואנגג'ואו 510007, סין

6 בית הספר לרפואה של ג'ונגשאן, אוניברסיטת סון יאט-סן, דרך ג'ונגשאן מס ' 74. 2, גואנגג'ואו 510080, סין; zhaowei23@mail.sysu.edu.cn

7 המחלקה להיסטולוגיה ואמבריולוגיה, האוניברסיטה הרפואית הדרומית, גואנגג'ואו 510515, סין;

† מחברים אלה תרמו באותה מידה לעבודה זו.

התקבל: 24 בינואר 2018; התקבל: 20 בפברואר 2018; פורסם: 23 פברואר 2018

תקציר: המחקר ניסה לחקור את תפקידם של שאריות סוכר ומנגנונים של פנוליפנילפרופנואידחמצון.אקטאוסידיחד עם האפיוסייד פורסיתוסיד B והרמנוסייד שלה,

poliumoside, נחקרו באופן יחסי באמצעות בדיקות נוגדות חמצון שונות. בשלושה מבחנים מבוססי העברת אלקטרונים (ET) המבוססים על העברת אלקטרונים (FRAP, CUPRAC, PTIO·-נבלות ב-pH 4.5), הרמות נוגדות החמצון היחסיות נשלטות באופן גס כאקטאוזיד>פורסיתוסיד B > פוליומוסייד. סדר כזה נצפה גם ב

בדיקת PTIO מעורבת ב-H+-transfer--scavenging ב-pH 7.4, ובשלושה מבחני נבלות רדיקליות מרובות-מסלולים מעורבים, כלומר ABTS+·-נבלות, DPPH·-נבלות, ו· O2.-scavenging. בספקטרום UV-vis, כל אחד מהם הציג תזוזה אדומה ב-335 364 ננומטר ושתי פסגות חלשות (480 ו-719 ננומטר), כאשר הן מעורבות עם Fe2+; עם זאת,אקטאוזידנתן את הספיגה החלשה ביותר.

בכרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים אולטרה-ביצועיים בשילוב עם ספקטרומטריית מסות טנדם של יינון אלקטרוספריי (UPLC.ESI.Q.TOF.MS/MS), לא נמצאה שיא של היווצרות אדוקט רדיקלי (RAF). בדיקת MTT גילתה כי פוליומוזיד הפגין את הכדאיות הגבוהה ביותר של תאי גזע מזנכימליים שמקורם במח עצם כתוצאה מחמצון. לסיכום,אקטאוזידפורסיתוסיד B ופוליומוזיד עשויים להיות מעורבים במספר מסלולים להפעלת הפעולה נוגדת החמצון, כולל ET, H+-transfer או Fe2+-chelating, אך לא RAF., העברת ET ו- H+ עלולה להיות מעוכבת על ידי rhamnosyl ו apiosyl moieties; עם זאת, ניתן לשפר את פוטנציאל ה-Fe2+-chelating על-ידי שתי שאריות סוכר (במיוחד rhamnosyl moiety). ההשפעה הכללית של rhamnosyl ו apiosyl moieties היא לשפר את ההשפעות נוגדות חמצון או cytoprotective.

מילות מפתח:אקטאוזיד; אפיוזיל; פורסיתוסיד ב';פנילפרופנואידגליקוזידים; פוליומוסייד; rhamnosyl

cistanche יש את ההשפעה של אנטי חמצון

1. מבוא

לאחרונה, אקטאוזיד (verbascoside, איור 1), פנוליפנילפרופנואידגליקוזידנמצא כי היא מתרחשת בוורווין ובצמחים אחרים [1], משפרת את היעילות של העברה גרעינית של תאים סומטיים לכלבים (SCNT) במהלך תהליך שיבוט הכלבים [2]. בנוסף, אקטאוזיד יכול להגן על תאי נוירובלסטומה SH-SY5Y אנושיים מפני נזקים הנגרמים על-ידי α-עמילואיד [3] ופיברובלסטים בעור האדם מפני נזק הנגרם על-ידי קרני רנטגן [4]. האפיוזיד פורסיתוסיד B שלו (איור 1) מופץ גם הוא בצמחים [5], ונצפה כמפעיל השפעות נוירו-הגנתיות חזקות עם חלון זמן טיפולי נוח [6]. ההשפעות המועילות האלה על תאים ורקמות נחשבות קשורות להגנה על כמה ביו-מולקולות, כגון שומנים ודנ"א. למעשה, הודגם כי אקטאוזיד והציסטנוסייד F האנלוגי שלו מעכבים חמצון של שומנים מיטוכונדריאליים בחולדות [7]. חמצון שומנים ידוע כתוצאה של עקה חמצונית תאית ובסופו של דבר ממיני חמצן תגובתי (ROS).

איור 1. המבנים (משמאל) ומודלים המבוססים על קונפורמציה מועדפת של כדור ומקל (מימין) של שלושה מודלים טבעייםפנילפרופנואידגליקוזידים(אקטאוזיד, פורסיתוסיד ב', ופוליומוסייד).

מהיבט של הגנה על דנ"א, אקטאוזיד ונגזרותיו יכולים לתקן במהירות רדיקלי דנ"א, כגון 2'-דאוקסיאדנוסין-5'-מונופוספט (dAMP) ו-2'-דאוקסיגואנוזין-5'-מונופוספט (dGMP) [8]. הרדיקלים המשניים האלה של דאוקסינוקלאוטיד יכולים לפגוע עוד יותר בתאים באופן חמצוני ולהוביל למוטגנזה ולסרטן [9]. המחקר הביופיזי הצביע על כך שאקטאוזיד ונגזרותיו יכולים לעגון בחריצים מינוריים של הדנ"א ולתקן במהירות נזק חמצוני כזה לדנ"א [10]. מודל ה-ball-stick המבוסס על קונפורמציה מועדפת מציע (איור 1, מימין) שהמולקולות האלה הן פרולות ויכולות להגיע בקלות ללולאה של הדנ"א, וכך הן מסוגלות לתקן במהירות את הנזק של רדיקלי הדנ"א [8].

עם זאת, מנקודת המבט של הביוכימיה, התיקון מתממש למעשה באמצעות מסלול נבלות ROS (כלומר, נוגד חמצון). כאמור, הדור של קטיונים רדיקליים דאוקסינוקלאוטידים הוא בסופו של דבר מהתקפה של ROS, כולל רדיקלים חופשיים (למשל, · מולקולות רדיקליות OH [11]) ומולקולות מחמצנות (למשל, H2O2 [12]). מאמינים כי טיהור ROS מוריד ביעילות את מצב החמצון של התאים [13,14] ומשפר את איכות תאי הגזע [12,15]. לכן, יש צורך ללמוד את היכולת נוגדת החמצון שלהם ועוד לדון במנגנונים אפשריים.

במחקר זה, שלושה פנוליםפנילפרופנואידגליקוזידים(אקטאוזיד, פורסיתוסייד B ופוליומוסייד) נחקרו באופן יחסי באמצעות מבחני נוגדי חמצון שונים, כולל בדיקת 2-פניל-4,4,4,5,5-טטרה-מתילימידזולין-1-אוקסיל-3-תחמוצת רדיקלית (PTIO·) בדיקת נבלות, בדיקת 2-פניל-4,4,5,5,5-טטרה-מתילימידזולין-1-אוקסיל-3-אוקסיל-3-תחמוצת-תחמוצת(PTIO·6-חומצה סולפונית( ABTS+·)→ בדיקת נבלות,

בדיקה של 1,1-דיפניל-2-פיקריל-הידרזין (DPPH·) וכן · O2.-בדיקת נבלות כמו גם Fe2+-chelating UV-spectra ניתוח. לאחר מכן, מוצרי התגובה שלהם עם DPPH· נקבעו באמצעות כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים במיוחד בשילוב עם ניתוח ספקטרומטריית מסות טנדם של יינון אלקטרוספריי (UPLC.ESI.Q.TOF.MS/MS). לבסוף, ההשפעה הציטופו-הגנתית שלהם כלפי תאי גזע מזנכימליים שמקורם במח העצם (bmMSCs) הוערכה באמצעות

3-(4,5-דימתילתיאזול-2-yl)-2,5-דיפניל (MTT) בדיקה. כפי שניתן לראות באיור 1, ההבדל בין שלושת הפנוליםפנילפרופנואידגליקוזידים(כלומר, אקטוסיד, פורסיתוסיד B ופוליומוסייד) הוא סוג הגליקוזיד: פורסיתוסיד B הוא אפיוסייד של אקטאוזיד, בעוד שפוליומוסייד הוא רמנוסייד של אקטוסיד. לפיכך, מחקר השוואתי זה מסייע גם בהבנת התפקידים של אפיוזיל ורמנוזיל בנוגד חמצוןאפקטים.

אפקט הלבנת ציסטנצ'ה על העור למניעת חמצון

2. תוצאות

2.1. מבחנים להפחתת מתכות (FRAP ו-CUPRAC)

במחקר ביצענו שני מבחנים להפחתת מתכות, כלומר בדיקת FRAP ובדיקת CUPRAC. כפי שהודגם ב-Suppl. 1, acteoside ונגזרותיו הגדילו את האחוזים היחסיים של FRAP (או Cu2+-מפחית הספק) ב-0-10 βg/L באופן תלוי מינון. סדר הרמות היחסיות שלהם להפחתת מתכות ירד בערך בסדר האקטאוזיד > פורסיתוסיד B > פוליומוסיד (טבלה 1).

טבלה 1. ערכי ה- IC50 של אקטאוזיד, פורסיתוסיד B ופוליומוסייד באופן שונהחמצוןמבחנים.

2.2. PTIO·-מבחן נבלות

בדיקת ה-PTIO·-נבלות פותחה לאחרונה על-ידי המעבדה שלנו [16]. ניתן להשתמש בו כדי להעריך את רמות נוגדי החמצון ולחקור את המסלולים נוגדי החמצון. כפי שמוצג בנספח 1, אקטאוזיד ונגזרותיו יכולים לטרוף בהצלחה את PTIO· ב-pH 4.5 וב-pH 7.4. עם זאת, על פי ערכי IC50 בטבלה 1, רמות ה-PTIO היחסיות שלהם באותו ערך pH היו שונות זו מזו. כמו כן, כל אקטאוזיד ונגזרותיו הציגו רמות שונות של PTIO·-נבלות בין pH 4.5 ל-pH 7.4. באופן כללי, רמות ה-PTIO--נבלות ב-7.4 היו גבוהות יותר מאלו שב-pH 4.5.

2.3. ABTS+·-נבלות ו-DPPH·-מבחני נבלות

ABTS+·-נבלות ו-DPPH·-נבלות נמצאות כיום בשימוש נרחב למחקרים נוגדי חמצון של תרכובות או תמציות טהורות. כפי שניתן לראות ב- Suppl. 1, אקטאוזיד ונגזרותיו תלויי ריכוז הגדילו באופן תלוי את אחוזי הנבלות של ABTS+·-נבלות או DPPH·-.

עם זאת, במונחים של ערכי ה-IC50 בטבלה 1, רמות ה-ABTS+·-נבלות היחסיות שלהם נמצאו בסדר של אקטאוזיד > פורסיתוזיד B > פוליומוזיד > Trolox. סדר דומה ניתן היה להבחין גם במבחן ה-DPPH·-נבלות.

2.4. ניתוח UPLC.ESI.Q.TOF.MS/MS של DPPH· מוצרי תגובה

תוצר התגובה של DPPH· עם כל אחד משלושהפנילפרופנואידגליקוזידיםנחקר באמצעות ניתוח UPLC.ESI.Q.TOF.MS/MS. בניתוח (Suppl. 2), אף אחד משלושת הגליקוזידים הפנילפרופנואידים לא הפיק את שיא המוצר של RAF. לשם השוואה, נמצא כי חומצה קפאית מניבה תוצר דימר (m/z 359–360, Suppl. 2).

2.5. ניתוח UV-Vis-Spectra של מוצרי Fe2+-Chelating

מכיוון ש- UV-vis-spectra יכול לאפיין קומפלקסים של מתכות, המחקר השתמש אפוא ב- UV-vis-spectra כדי לנתח את תגובת Fe2+-chelating האפשרית עם שלושהפנילפרופנואיד גליקוזידים. כפי שניתן לראות באיור 2, כל אחד מהם יכול לייצר תזוזה של באתוכרום (335 ננומטר●364 ננומטר) בספקטרום ה-UV. בינתיים, כל אחד מהם יכול לספק שתי פסגות מול ספקטרום חלשות בספקטרום הנראה (480 ננומטר ו-719 ננומטר) ולהוביל למראה ירוק בהיר. עם זאת, עוצמת השיא הייתה בסדר יורד של פוליומוסיד > פורסיתוסיד B > אקטאוזיד.

2.6. בדיקת חמצון אוטומטי של פירוגלול עבור אניון סופראוקסיד (· O2.) ניקוי

בדיקת החמצון האוטומטי של פירוגלול שופרה על ידי המעבדה שלנו בשנת 2012 [17]. הוא שימש להערכת · O2.-פוטנציאל נבלות במחקר הנוכחי. כפי שניתן לראות ב- Suppl. 1, כל האקטאוזיד ונגזרותיו יכולים להגדיל באופן תלוי מינון את · O2.-אחוזי נבלות. עם זאת, הפעילות הביולוגית היחסית ירדה בסדר הפוליומוזיד > פורסיתוסיד B > אקטאוזיד, על פי ערכי IC50 בטבלה 1.

2.7. השפעה ציטופו-הגנתית כלפי bmMSCs בעלי סטרס חמצוני (MTT Assay)

כדי להעריך את ההשפעות הציטופוקטיביות של אקטאוזיד ונגזרותיו, ביצענו בדיקת MTT. בבדיקה, bmMSCs נפגעו על ידי מגיב חמצוני H2O2, bmMSCs הפגועים טופלו לאחר מכן על ידי acteoside ונגזרותיו. ערכי A490nm שימשו להערכת ההשפעות הציטופיות היחסיות. כפי שניתן לראות בטבלה 2, כל אקטאוזיד ונגזרותיו העלו באופן תלוי מינון את ערכי A490nm. עם זאת, באותו ריכוז, poliumoside נתן את הערכים הגבוהים ביותר A490nm.

3. דיון

הפעולה נוגדת החמצון של תרכובות פנוליות טבעיות ידועה כמעורבת בהעברת אלקטרונים (ET) [18,19]. לפיכך, נעשה שימוש נרחב בכמה מבחני הפחתת מתכות המבוססים על ET כדי להעריך רמות נוגדות חמצון של פנוליקים, כגון מבחני FRAP ו- CUPRAC. יש למלא את הנחיות בדיקת ה-FRAP עם pH נמוך מ-3.6. סביבה חומצית כזו דיכאה בהצלחה את יינון H+ מפנוליקים; לפיכך, בדיקת FRAP נחשבת לתהליך ET בלבד [20,21]. האפקטיביות של acteoside ונגזרותיו במבחן FRAP מרמזת כי כאשר acteoside ונגזרותיו פועלים כחמצוןהם עשויים להשתמש במסלול ET כדי להפעיל את פעולתם נוגדת החמצון.,

חוץ מזה, ביצענו גם בדיקת CUPRAC במאגר pH 7.4. כפי שניתן לראות ב-Suppl. 1, אקטאוזיד ונגזרותיו הגדילו באופן תלוי מינון את אחוזי ההספק המפחיתים את ה-Cu2+, מה שמצביע על כך שהם יכולים להישאר פוטנציאל ET ב-pH פיזיולוגי. עם זאת, פוטנציאל ה-ET שלהם פחת בסדר הבא: אקטאוזיד > פורסיתוסיד B > פוליומוסייד (טבלה 1). דינמיקה זו מצביעה בבירור על כך שאפיוזיל מואטי בפורסיתוסיד B ו-rhamnosyl moiety בפוליומוסייד הורידו את פוטנציאל ה-ET.

cistancheהוא מעכב טירוסינאז

כדי לבחון את האפשרות ש-ET מתרחשת במהלך תהליכי הנבלה הרדיקלית שלהם, רדיקל חופשי ממוקד חמצן PTIO· הוצג במחקר. עדויות מחזוריות של וולטמטריה גילו כי PTIO·-נבלות מתחת ל-pH 5.0 היא תגובת אלקטרון-חמצון-חיזור יחיד [22]. התצפית כי אקטאוזיד ונגזרותיו יכולים לטרוף ביעילות את ה-PTIO· רדיקלי ב- pH 4.5, מציע את האפשרות של ET במהלך תהליכי הנבלה הרדיקלית שלהם. ברור שממצא זה תומך עוד יותר בתוצאות הנ"ל ממבחני FRAP ו- CUPRAC, ובתוצאות קודמות כי אלקטרון תורם (e) הוא תכונה של פנוליחמצון[23]. ב-pH פיזיולוגי 7.4, לעומת זאת, החיבור של PTIO -נבלות אינו רק מסלול ET אלא כולל גם מסלול העברת פרוטונים (H+). במהלך התהליך, הוצע ל-PTIO לקבל H+ מפנוליקים כדי לייצר את שיא המוצר ([PTIO-H]+) [16]. מאחר שהעברה H+-מלווה תמיד ב-ET במנגנונים מדורגים או סינכרוניים [24], המכפלה המציאותית (או הסופית) היא מולקולה [PTIO-H] [22]. ה-PTIO·-נבלות ב-pH 7.4 (Suppl. 1) מרמז על כך שלאקטאוזיד ונגזרותיו יש גם פוטנציאל העברת H+. ערכי IC50 (טבלה 1) ציינו כי

פוטנציאל ההעברה היחסי של H+ היה בסדר יורד של אקטאוזיד > פורסיתוסיד B > פוליומוסייד. ברור שגם האפיוזיל והראמנוזיל מואטי החלישו את פוטנציאל העברת ה-H+במהלך התהליך נוגד החמצון.

כפי שנדון קודם לכן, במהלך התהליך נוגד החמצון של פנוליקים, ET מלווה בדרך כלל בהעברת פרוטונים (H+) ליצירת מספר מנגנונים נוגדי חמצון [24], כגון העברת מימן-אטום (HAT) [23,25-27], העברת אלקטרונים-פרוטון רציפה (SEPT) [26,27], העברת פרוטון רציף של פרוטון חד-אלקטרוני (SPLET) [26], והעברת אלקטרונים מצומדים לפרוטונים (PCET) [24-26,28].

לדוגמה, ABTS+·-נבלות, תגובה הנשלטת על ידי העברת אלקטרונים בודדים (SET) [29], הוכחה גם היא כמושפעת מרמות H+ לאחרונה [30]. ABTS+·-נבלות הן, אם כן, בדיקה נוגדת חמצון רב-מסלולית [21,31]. העובדה שאקטאוסייד ונגזרותיו עלולים לנגח את ABTS+· רדיקלים מצביעים על כך שהפעולה נוגדת החמצון שלהם עשויה להיות מתווכת גם באמצעות מסלולים מרובים. השערה זו מאוששת עוד יותר על ידי הראיות מבדיקת DPPH·-נבלות, תגובה הכוללת מסלולים מרובים של HAT, ET, SEPT ו-PCET [26,32]. עם זאת, הניתוח הכמותי המבוסס על ערכי IC50 (טבלה 1) גילה כי בהיבטים מבוססי ABTS+·-נבלות ו-DPPH·-נבלות מרובי מסלולים, אקטאוזיד היה עדיף על האפיאוזיד פורסיסטוסייד B והפוליומוסייד של רמנוזיד. לפיכך, ניתן להסיק כי אפיקוזיל וראמנוזיל מואטיות מעכבות בסופו של דבר פוטנציאלים מרובי מסלולים (במיוחד ET ו-H+-transfer) במהלך תהליך הנבלה של רדיקלים חופשיים. כפי שצוין על ידי המחברים ואחרים [14,26], במהלך התהליך נוגד החמצון, עלולה להתרחש גם תגובה של חיל האוויר המלכותי. עם זאת, כדי לאמת את האפשרות של חיל האוויר המלכותי, שלושפנילפרופנואידגליקוזידיםיחד עם חומצה קפאית נחקרו באמצעות ניתוח UPLC.ESI.Q.TOF.MS/MS. נמצא כי חומצה קפאית מניבה מוצר דימר, בעוד ששלושהפנילפרופנואידגליקוזידיםלא הפיק שום שיא של מוצר RAF.

ממצא זה מצביע בבירור על כך ששלושהפנילפרופנואידגליקוזידיםלא יכולים לעבור את מסלול ה-RAF כדי להפעיל את הפעולה נוגדת החמצון שלהם. מאחר ששלושה גליקוזידים פנילפרופנואידים יכולים להיחשב כאסטרים של חומצה קפאית (איור 1), הבדל כזה בין חומצה קפאית לבין אסטרים של חומצה קפאית מצביע גם על כך שמואיטי ענק עשוי לעכב את יצירת ה-RAF.

יחד, מהיבט של טיהור רדיקלים חופשיים, אקטאוזיד ונגזרותיו עשויים לעבור מסלולים מרובים כדי להפעיל את פעולתם נוגדת החמצון. מסלולים נוגדי חמצון אלה לפחות מעורבים בהעברת ET ו-H+ (אך לא RAF). הממצאים שלנו נתמכים בחלקם על ידי המחקר התיאורטי שלפיו אקטאוזיד יכול להפעיל את הפעולה נוגדת החמצון דרך מסלול ה-SPLET. בתהליך זה, אקטאוזיד עשוי תחילה לבצע דה-פרוטונציה (H+-transfer) כדי להניב אניון. ההערכה היא שהדפרוטונציה מתרחשת בקטכול מואטי עם חומציות חלשה. לאחר מכן, האניון תרם אלקטרונים כדי להוליד צורה רדיקלית פנוקסית [33]. עם זאת, רדיקלים פנוקסיים עם הצמדת p-u יציבים במידה מסוימת. כמובן, מבחינה זו, עבודה ניסיונית נוספת נדרשת בעתיד.

ראוי להזכיר כי עקה חמצונית תאית יכולה לנבוע גם ממתכות מעבר (במיוחד Fe2+). יון Fe2+, לעומת זאת, יכול להפוך את מולקולת H2O2 למזיקה ביותר · רדיקלי OH באמצעות תגובת פנטון (Fe2+ + H2O2 ● Fe3+ + · הו + אוי.). לכן, הנחתה של רמות Fe2+ יכולה לעכב ביעילות · רדיקלי OH לשחרור עקה חמצונית תאית. למעשה, ברזל-כלאט על ידי פנולי טבעיחמצוןכעת פותחה כטיפול יעיל בכמה מחלות של עקה חמצונית [34,35].

במחקר הנוכחי, אקטאוזיד ונגזרותיו הוצעו כ-Fe2+-chelators יעילים על ידי השינויים בספקטרוסקופיה ובצבעי התמיסה (איור 2). אף על פי כן, אקטאוזיד נחות משני הגלוקוזידים בכלציה Fe2+ ופורסיתוסייד B עם אפיוזיל מואטי נחותה מפוליומוסייד עם רמנוזיל מואטי. בהתבסס על ההשוואה של הקונפורמציות המועדפות שלהם (איור 1, מימין), מוצע כי אפיוזיל (או rhamnosyl) moiety יכול לסייע לליגנד הראשי (פנילפרופנואידקבוצה) ב chelating Fe2 +. אפקט סינרגטי כזה ללא ספק מחזק את יכולת ה-Fe2+-chelating ומגדיל את פסגות ה-UV-vis. עם זאת, רמנוזיל יעיל יותר מאפיוזיל ביכולת ה-Fe2+-chelating שלו. ניתן לייחס את ההבדל לעובדה שרמנוזיל מופיע בצורה הקסוציקלית (כלומר,/-L-rhamnopyranosyl), בעוד שאפיוזיל נמצא בצורה פנטציקלית (כלומר, α-D-apiofuransyl). ידוע שצורה הקסוציקלית גדולה ויציבה יותר. לפיכך, רמנוזיל הקסוציקלי יעיל יותר בהשוואה לאפיוזיל פנטציקלי ביכולת ה-Fe2+-chelating שלו.

כדי לבחון אם אקטאוזיד ונגזרותיו יכולים לטרוף את ROS, ערכנו בדיקה של פירוגאול אוטוקסידציה. כפי שניתן לראות ב- Suppl. 1, כולם יכלו לטרוף ביעילות את · או2. רדיקלי, ROS טיפוסי המתרחש בתאים. עם זאת, הפעילות הביולוגית היחסית ירדה בסדר הפוליומוזיד > פורסיתוזיד B > אקטאוזיד. סדר זה מקביל גם לזה של האפקטים הציטופוקטיביים (טבלה 2). ממצא זה מצביע על כך שההשפעה הכללית של rhamnosyl moiety או apiosyl moiety היא לשפר את ההשפעות של ROS-נבלות או ההגנה על הציטופים.

cistancheיש אתפונקציהשלהלבנהעור

4. חומרים ושיטות

4.1. כימיקלים ובעלי חיים

Acteoside (מספר CAS: 61276-17-3, 97%), פורסיתוסיד B (מספר CAS: 81525-13-5, 97%) התקבלו מ- BioBioPha (קונמינג, סין, Suppl. 3). Poliumoside (מספר CAS: 94079-81-9, 97%) בודד על ידי הצוות שלנו מהצמח הסיני המסורתי Callicarpa pei H.T. Chang (Suppl. 3). DPPH·, (o)-6-הידרוקסיל-2,5,7,8-טטרה-מתילכרומן-2-חומצה קרבוקסילית (Trolox), 2,9-דימתיל-1,10-פננתרולין (ניאו-קופרוין), 2,4,6-טריפירידילטריאזין (TPTZ) ופרוגלול נרכשו מחברת המסחר סיגמא-אולדריץ' שנגחאי (שנגחאי, סין). (NH4)2ABTS [2,2→-אזינוביס (3-אתילבנזן-תיאזולין-6-מלח דיאמוניום חומצה סולפונית)] התקבל מחברת אמרסקו כימית (סולון, אוהיו, ארה"ב). PTIO· רדיקל נרכשה מ TCI פיתוח ושות', בע"מ (שנגחאי, סין). חומצה קפאית נרכשה מהמכון הלאומי להדברת מוצרים פרמצבטיים וביולוגיים (בייג'ינג, סין). מדיום הנשר המהונדס של דולבקו (DMEM), סרום בקר עוברי (FBS) וטריפסין נרכשו מגיבקו (גרנד איילנד, ניו יורק, ארה"ב). ערכת הבדיקה Annexin V/propidium iodide (PI) נרכשה מחברת Invitrogen (קרלסבד, קליפורניה, ארה"ב). כל שאר הריאגנטים היו בדרגה אנליטית.

חולדות ספראג-דאולי (SD) בגיל 4 שבועות התקבלו ממרכז החיות של אוניברסיטת גואנגג'ואו לרפואה סינית. הפרוטוקול של ניסוי זה בוצע תחת פיקוחה של הוועדה המוסדית לאתיקה של בעלי חיים באוניברסיטת גואנגג'ואו הסינית (מספר אישור 20170306A).

4.2. מבחנים להפחתת מתכות (FRAP ו-CUPRAC)

מבחני הפחתת מתכות כוללים את מבחן ההספק להפחתת מתכות Fe3+ ואת מבחן ההספק המפחית Cu2+. הבדיקה להפחתת Fe3+ הוקמה על ידי בנצי וזן ונקראת באופן רשמי FRAP [20]. הפרוטוקול הניסיוני של בדיקה זו תואר בדו"ח קודם [9]. בקצרה, ריאגנט FRAP הוכן טרי על ידי ערבוב 10 mM TPTZ, 20 mM FeCl3, ו 0.25 M אצטט חיץ ביחס של 1:1:10 ב pH 3.6. דגימת הבדיקה (x = 4-20 βL, 0.05 מ"ג/מ"ל) נוספה ל-(20 . x) βL של 95% אתנול ואחריה 80 βL של ריאגנט FRAP. לאחר דגירה של 30 דקות בטמפרטורת הסביבה, הספיגה נמדדה ב-595 ננומטר באמצעות קורא מיקרו-פלטה (Multiskan FC, Thermo Scientific, שנגחאי, סין). כוח ההפחתה היחסי של המדגם חושב באמצעות הנוסחה הבאה:

כאשר Amax היה הספיגה המקסימלית של תערובת התגובה עם הדגימה, ואמין הוא הספיגה המינימלית במבחן. A הוא ספיגת המדגם.

Cu2+-הפחתת כוח יכול גם לאפיין את רמת נוגדי החמצון ולכן נקרא CUPRAC. בדיקה זו בוצעה על פי שיטה שפורסמה בעבר [36]. בקצרה, 12 βL של תמיסה מימית CuSO4 (10 mmol/L), 12 βL של תמיסה אתנולית ניאו-קופרוין (7.5 mmol/L) ו-(75 . x) βL של תמיסת חיץ CH3COONH4 (0.1 mol/L, pH 7.5) נוספו לבארות עם נפחים שונים של דגימה (0.05 mg/mL, 4-20 βL). הספיגה ב-450 ננומטר לאחר 30 דקות נמדדה באמצעות קורא המיקרו-פלטה הנ"ל. ההספק היחסי של CUPRAC חושב באמצעות הנוסחה עבור FRAP. Amax היה הספיגה המקסימלית של תערובת התגובה עם sample, ו Amin הוא הספיגה המינימלית במבחן. A הוא ספיגת המדגם.

cistancheיש את ההשפעות של הלבנת העור

Pls לחץ כאן לחלק 2