אופטימיזציה של תהליך הפירוק ופעילות נוגדת חמצון של תמצית פוליסכריד Cistanche Deserticola על ידי מתודולוגיית פני השטח של תגובה

תַקצִיר:

מַטָרָה:כדי לייעל את תהליך הדחיקה של הפוליסכרידים של Cistanche Deserticola ולחקור את פעילותם הנוגדת חמצון.

נבדקו שיטות המשתמשות בפחמן מופעל כחומר דה -צבע, ההשפעות של 4 גורמים הכוללים מינון פחמן מופעל, טמפרטורת דה -צבע, זמן דה -קולוריזציה ו- pH על קצב הדחיקה וקצב התאוששות הפוליסכריד. בהתבסס על ניסויים בגורמים בודדים, התהליך של התמצית הפוליסכריד של Cistanche Deserticola Polysaccharide באמצעות מתודולוגיית פני השטח של התגובה. בשיטת הערכת פעילות נוגדת חמצון חוץ-חמצונית, יכולת ההפחתה הרדיקלית החופשית של 1, 1- דיפניל -2- picrylhydrazine (DPPH), יכולת הפחתה מוחלטת, יכולת חפירה רדיקלית הידרוקסילית ו- 2,2'-Azino נקבעו ביס (3- ethylbenzothiazole - 6- חומצה סולפונית) מלח דיאמוניום (ABTS) קטיון יכולת ניקוי רדיקלית חופשית של הפוליסכרידים מ- Cistanche Deserticola. תוצאות התנאים של תהליכי הדחיקה האופטימליים לתמצית הפוליסכרידים מ Cistanche Deserticola היו כדלקמן: מינון פחמן פעיל 20%, טמפרטורת דה -קולורציה 37 מעלות, זמן הדחיקה 49 דקות, pH 5.03. בתנאים אופטימליים אלה, שיעור ההחלמה של ההחלמה ושיעור ההתאוששות של הפוליסכריד היו 62.66% ו- 96.16% בהתאמה. לאחר התהפכות, עלו משמעותית את היכולות של רדיקל DPPH של DPPH והידרוקסיל חופשי, ואילו היכולות של רדיקל ABTS של ABTS ירד באופן משמעותי. לסיכום, קל לתפעול את תהליך הדחיקה, עם השפעות דה -צבע טובות ושיעור התאוששות פוליסכריד. יש לו ערך יישום חשוב ומספק בסיס למחקר ופיתוח מאוחר יותר של Cistanche Deserticola polysaccharide.

מילות מפתח: Cistanche Deserticolaפוליסכריד; דה -צבע; מתודולוגיית פני השטח של תגובה; פעילות נוגדת חמצון

CISTANCHEאפקטים של Deserticola

1.2.3 מדידת שיעור התאוששות הפוליסכריד

הכנת העקומה הסטנדרטית:
נעשה שימוש בשיטת חומצה פנול-סולפורית. בערך 0. 0 5 0 0 גרם של תקן גלוקוז (מיובש למשקל קבוע במעלות 105 מעלות) נשקל במדויק ומדלל לבקבוק נפחי של 50 מ"ל כדי להכין את תמיסת המלאי. לאחר מכן, 1.0 מ"ל מתמיסת המלאי נמדדה במדויק ומדוללת ל -10 מ"ל בבקבוק נפחי כדי להשיג תמיסה סטנדרטית של 0.1 מ"ג/מ"ל. פתרונות סטנדרטיים של 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 ו- 100 μl גלוקוז נמדדו במדויק לצינורות צנטריפוגה של 1.5 מ"ל. מים מזוקקים נוספו לכל צינור כדי להפיק נפח כולל של 100 μl. צינור צנטריפוגה נוסף של 1.5 מ"ל המכיל 100 מים מזוקקים שימש כפתרון בקרה ריק. לכל צינור נוספו 100 μl של תמיסת פנול של 5%, מעורבב ביסודיות ואז הוסיפו במהירות 500 μl של חומצה גופרתית מרוכזת. הצינורות היו מערבבים למשך 3 דקות והותירו לעמוד 35 דקות. ואז, 200 μl מתמיסת התגובה הועברו לצלחת באר {32}}, וספיגה נמדדה במהירות של 490 ננומטר באמצעות קורא מיקרו -צלחות אוטומטי. עקומה סטנדרטית תוכננה בספיגה (Y) כציר האנכי וריכוז הגלוקוז (x, ug/ml) כציר האופקי. משוואת העקומה הסטנדרטית שהתקבלה הייתה:

Y = 5.507X – 0.01,
r² = 0.992.

מדידת תוכן פוליסכריד:
חלק של 100 μl מדוללCistanche Deserticolaתמצית פוליסכריד נמדדה במדויק לצינור צנטריפוגה של 1.5 מ"ל. ערך הספיגה נקבע בשיטה שתוארה לעיל, וריכוז הפוליסכריד חושב באמצעות העקומה הסטנדרטית.

מדידת קצב התאוששות הפוליסכריד:
מסת הפוליסכרידים בCistanche Deserticolaחילוץ לפני ואחרי הדחיקה נמדד בשיטה שלמעלה. שיעור ההתאוששות של פוליסכריד חושב באמצעות משוואה (2):

שיעור התאוששות פוליסכריד (%)
קי
אֵיפֹה:

mbeforem _ \ טקסט {לפני} mbefore ו- maftermCistanche Deserticolaפוליסכרידים לפני ואחרי הדחיקה, בהתאמה (G).

Cistanche tubulosa 6

1.2.4 עיצוב ניסיוני של גורם יחיד

ההשפעות של ארבעה מינון פחמן המופעל על ידי גורמים, טמפרטורת הפירוק, זמן הדחיקה, ו- pH-שיעור הדחיקה וקצב התאוששות הפוליסכריד של הפוליסכרידCistanche Deserticolaתמצית פוליסכריד נבדקה.

השפעת מינון פחמן מופעל:
זמן הדחיקה קבועה תוך 30 דקות, טמפרטורת הדחיקה של 50 מעלות ו- pH ב 5.03 (ערך מדגם מדוד). נבדקה ההשפעה של מינון פחמן מופעל על קצב הדחיקה וקצב התאוששות הפוליסכריד.

השפעת טמפרטורת הפירוק:
מינון פחמן מופעל תוקן ב 20% (מ ': מ'), זמן הדחיקה לאחר 30 דקות ו- pH ב -5.03. נבדקה ההשפעה של טמפרטורת הדחיקה על קצב הדחיקה וקצב התאוששות הפוליסכריד.

השפעת זמן הדחיקה:
קבוע מינון פחמן מופעל ב 20%, טמפרטורת הפילוגיזציה של 50 מעלות ו- pH ב -5.03. נבדקה ההשפעה של זמן הדחיקה על שיעור הדחיקה ושיעור התאוששות הפוליסכריד.

השפעת pH:
מינון פחמן מופעל קבוע ב 20% (מ ': מ'), טמפרטורת הדחיקה של 50 מעלות וזמן הדחיקה לאחר 30 דקות. נבדקה השפעת ה- pH על שיעור הדחיקה ושיעור התאוששות הפוליסכריד.

1.2.5 תגובה אופטימיזציה של פני השטח תכנון ניסיוני

בהתבסס על טווחי המצב האופטימליים שזוהו בניסויים של גורם יחיד, שיטת התכנון הניסיוני של Box-Behnken שימשה לניהול תכנון בן ארבעה גורמים, תלת-דרגים לתנאי הדחיקה שלCistanche Deserticolaתמצית פוליסכריד. שיעור הדחיקה ושיעור התאוששות הפוליסכריד שימשו כמדדי הערכה. פרמטרי העיצוב מוצגים בטבלה 1.

cistanche coffee

1.2.6 קביעת פעילות נוגדת חמצון שלCistanche Deserticolaפוליסכרידים

(1) קביעתCistanche Deserticolaיכולת ההפקה הרדיקלית של DPPH של פוליסכרידים

מבוסס על השיטה מאת Kan Jintao et al. [21] עם שינויים קלים, 0. 5 מ"ל של 1. 0 מ"ג/מ"ל פוליסכריד פתרון מימי היה מעורבב עם 2.4 מ"ל של 0. (1, {{1 0}} diphenyl -2- picrylhydrazine) ו- 1.1 מ"ל מים מזוקקים. התערובת הורשתה להגיב בחושך במהירות של 37 מעלות למשך 30 דקות. הספיגה של תמיסת התגובה נמדדה במהירות של 517 ננומטר, וקצב ההפגנות הרדיקלי של DPPH של 1.0 מ"ג/מ"ל פוליסכרידים לפני ואחרי הדחיקה חושבה באמצעות משוואה (3):

שיעור ניקוי רדיקלי של DPPH (%)

{{0}}[1−(A1−A2)A0]×100%= \left[ 1 - \frac{(A_1 - A_2)}{A_0} \right] \times 100 \%= [1 - A0 (A1 −A2)] × 100%

אֵיפֹה:

A1A _1 A1 הוא ספיגת צינור המבחן לדוגמא,

A2A _2 A2 הוא הספיגה כאשר אתנול נטול מים מחליף את תמיסת DPPH,

A {{0}} a _0 a0 הוא הספיגה כאשר מים מזוקקים מחליפים את הדגימה.

(2) קביעת הכוח המפחית הכולל שלCistanche Deserticolaפוליסכרידים

בהתייחס לשיטה מאת Lu Xue et al. [22], 1. 0 מ"ג/מ"ל פוליסכרידים לפני ואחרי הוכנו דה -קולור. דגימה של 5 μL ו -180 μl של FRAP (יון ברזלי הפחתת כוח נוגד חמצון) נוספו פתרון עבודה לצלחת באר {5}}, מעורבבים ביסודיות, ואיפשרו להגיב ב 37 מעלות למשך 5 דקות. הספיגה נמדדה ב 593 ננומטר, והספק המפחית הכולל של הפוליסכרידים התבטא מבחינת ריכוז הפתרון הסטנדרטי של FESO4.

Cistanche extract powder

(3) קביעת יכולת ניקוי רדיקלית הידרוקסיליתCistanche Deserticolaפוליסכרידים

בעקבות השיטה המתוארת בספרות [23] והוראות ערכת המבחנים הרדיקלית של הידרוקסיל, 1. 0 מ"ג/מ"ל פוליסכרידים לפני הוכנה ואחרי דה -קולוריזציה. מים מזוקקים שימשו להחלפת מי חמצן עבור ספיגת קבוצת הביקורת (acontrola _ \ טקסט {Control} Acontrol), ומים מזוקקים שימשו כדי להחליף את הדגימה לספיגת הקבוצה הריקה (Ablanka {}}} \ טקסט {ריק} ablank). ערכי הספיגה נמדדו במהירות של 550 ננומטר, וקצב ההילוך הרדיקלי של הידרוקסיל חושב באמצעות משוואה (4):

שיעור ניקוי רדיקלי הידרוקסיל (%)

= [((acontrol - asample) (acontrol - ablank)] × 100%= \ שמאל [\ frac {(a _ \ טקסט {בקרה} - a _ \}}}}} {} {} {} {} {} {} {} {} {((((} {(((} {(((} {(((} {((} {{ A _ \ טקסט {blank})} \ מימין] \ פעמים 100 \%= [(acontrol −ablank) (acontrol −asampe)] × 100%

אֵיפֹה:

ASAMPLEA _ \ טקסט {לדוגמא} ASAMPLY הוא הספיגה של קבוצת הדגימה,

Acontrola _ \ טקסט {Control} Acontrol הוא ספיגת קבוצת הביקורת,

Ablanka _ \ טקסט {ריק} Allank הוא הספיגה של הקבוצה הריקה.

(4) קביעת ABTCistanche Deserticolaפוליסכרידים

על פי השיטה המתוארת בספרות [24] והוראות ערכת המבחנים הרדיקלית של קטיון קטיון, 1. 0 מ"ג/מ"ל פוליסכרידים לפני הוכנו ואחרי הדחיקה. דגימה של 10 μL הייתה מעורבת עם 20 μl של תמיסת עבודה של מגיב ארבע ו -170 μl של תמיסת עבודה של ABTS, מעורבבת ביסודיות, ואיפרה להגיב בחושך בטמפרטורת החדר למשך 6 דקות. מים מיונים שימשו כבקרה ריקה. הספיגה נמדדה במהירות של 405 ננומטר, וקצב ההפצה הרדיקלי של קטיון קטיון חושב באמצעות משוואה (5):

ABT

= [((bblank - bbespample) bblank] × 100%= \ שמאל [\ frac {(b _ \ טקסט {ריק} - b {}}}}}} {לדוגמא})} {b {{}}}} 100 \%= [bblank (bblank −bsample)] × 100%

אֵיפֹה:

Bblankb _ \ טקסט {ריק} bblank הוא ספיגת התגובה בין מים מזוקקים לפיתרון ABTS,

Bsampleb _ \ טקסט {לדוגמה} bsample הוא ספיגת התגובה בין הפתרון לדוגמה לפתרון ABTS.