תפקוד נוירואנדוקריני-אימוני של Cistanche Deserticola ומוצרי אידוי יין האורז שלו בדגם חולדה המושרה על ידי גלוקוקורטיקואידים-Ⅰ

1. הקדמה

Cistanche deserticola, אשר נקרא "ג'ינסנג מדברי", הוא רפואה סינית מסורתית אשר שימשה במשך מאות שנים כצמח יאנג-טוניק עבורממריץ את הכליה ומחזק את היאנג[1]. שמונה מינים ווריאציה אחת שלCistanche Herba תועדו בסין ורקCistanche deserticolaYC מא וCistanche tubulosa(Schenk) Wight מתועדים בפרמקופאה הסינית [2]. מחקרים פרמקולוגיים הוכיחו זאתCistanches Herbaהפגין הגנה עצבית [3], אימונומודולטורית [4], מגן על הלב [5], נוגד עייפות [6], אנטי דלקתי [7], מגן על הכבד [8], נוגד חמצון [9], אנטיבקטריאלי [10], משלשל [11] ואנטי גידולים אפקטים [12]. הספקטרום הרחב של פעילויות ביולוגיות מדווחות של סוג זה יוחס להרכב הפיטוכימי המורכב והמגוון שלו.Cistanche deserticolaמכיל פנילאתנואיד גליקוזידים, אירידואידים, פוליסכרידים [13] וכו'. תכולת הגליקוזידים פנילתנואידים היא הגבוהה ביותר בחומרי המרפא המקוריים [14].

CISTANCHE TUBULOSA טבעי לחיזוק הכליה PHGS75% ECH 30% ACT 12%

עיבוד של Materia Medica סינית (CMM) היא טכניקה פרמצבטית מסורתית למילוי הדרישות השונות לטיפול, ניפוק והכנת הכנות על פי תורת הרפואה הסינית המסורתית. אותם מוצרים מעובדים נקראים חתיכות מרתח, המשמשות במרפאות. העיבוד נועד להגביר את היעילות כדי להפחית את הרעילות של תרופות גולמיות. פרמקופיה סינית משנת 2015 תיעדה כי ניתן להשתמש בפרוסות עבות של Cistanche (CD) ו-Cistanche מאודה ביין אורז (WCD) כחתיכות מרתח במרפאה. קבוצת המחקר שלנו הראתה שהאפקט המששל הוקל, וההשפעות האנטי-אייג'ינגיות וההשפעות הממריצות של הכליות-יאנג הוגברו לאחר אידוי של Cistanche עם יין אורז [15].

התפקוד של ציר ההיפותלמוס-יותרת המוח- בלוטת יותרת הכליה-תימוס (HPAT) מופרע בתסמונת החסר בכליות-יאנג [16]. לחולים עם מחסור בכליות-יאנג יש גם חוסר תפקוד חיסוני נרחב. תפקוד לקוי של ציר HPA קשור קשר הדוק לכשל חיסוני. תיאוריית הרשת הנוירואנדוקרינית-אימונית (NEI) מראה שהמערכת החיסונית והנוירואנדוקרינית חולקות ליגנדים וקולטנים רבים [17], וההיפותלמוס נחשב לציר המקשר בין הנוירואנדוקרינית למערכות החיסון.

במחקר זה, שיכפלנו מחסור בכליות-יאנג בחולדות מודל עם הזרקת קורטיקוסטרואידים אקסוגנית וחקרנו את המנגנון של המחסור בכליות-יאנג בתגובה למוצרים מעובדים שונים של Cistanche deserticola מנקודת המבט של תפקוד אנדוקריני-אימוני.

2. חומרים ושיטות

2.1. חומרים וריאגנטים

Cistanche deserticola נאסף מ-Alashan Neimenggu בשנת 2019.5 וזוהה כגבעולים הבשרניים היבשים של Cistanche deserticola YC Ma על ידי פרופ' יאנג'ון ז'אי (בית הספר לרוקחות, אוניברסיטת ליאונינג לרפואה סינית מסורתית, סין). דגימות השוברים נשמרו במרכז הטכנולוגי של ליאונינג.

תרכובות סטנדרטיות של אג'וגול נרכשו מ-Chengdu Pure Chem-Standard Co., Ltd. (צ'נגדו, סין); cistanoside F,echinacoside, cistanoside A ואיזואקטאוזידנרכשו מחברת Must (Sichuan China); acteoside נרכש מ- Dalian Meilun Bio. Co., Ltd. (Dalian, סין). אצטוניטריל ומתנול בדרגת MS נרכשו מ- Merck KGaA (Darmstadt, גרמניה). חומצה פורמית בדרגת HPLC נרכשה מ-Merck KGaA (Darmstadt, גרמניה). יין אורז נרכש מ-Zhejiang Brand Tower Shaoxing Wine Co., Ltd (Zhejiang, סין).

קורטיקוסטרון (CAS: 50-22-6, טוהר > 98%, TCI Shanghai Development Ltd. Co.), כדורי chinkuei shin chewan (Beijing Tongrentang Technology Development Co., Ltd.), עכברוש ACTH, CRH, T, IL{{ ערכות זיהוי ELISA 2}}, IFN-c, TNF- , IL-2 ו-IL-10 נרכשו מ-Nanjing Jiancheng Co., Ltd. ערכת קורטיזול ELISA של חולדות סופקה על ידי BOSK Co., נוגדן CD4 עכברוש, נוגדן CD8a (מס' 561833 ו-559976), RBC lysate (Solarbio, R1010), תמיסת חיץ PBS (Solarbio, P1020-500), TRIzol (MAN0001271), CaM ו-actin פריימרים במעלה הזרם ומורד הזרם סופקו על ידי Guangzhou Invitrogen Co. Kit לשעתוק הפוך (מס' RR037A) וערכת סינתזת cDNA (מס' 10000068167) סופקו על ידי Bole Life Medicine Products (Shanghai) Co., Ltd. Chloroform, isopropanol, 75% אתנול, ו-urethane התמיסות היו כולן טהורות מבחינה אנליטית ומיוצרות על ידי Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. מים Ultrapure הופקו על ידי מערכת Milli-Q (18.2 MΩ, Millipore, MA, ארה"ב).

2.2. מכשירים ניסויים

סמן אנזים (תרמו, דגם 3530911931), מכונת שטיפת לוחות אוטומטית (דגם HBS- 4009), מד כוח דחיפה של תצוגה דיגיטלית (דגם VICTOR- 50N), צנטריפוגה הקפאה במהירות גבוהה (דגם Sigma 3k15 ), ספקטרופוטומטר אולטרה-מיקרו (דגם B-50Q), מגבר גנים (דגם L96G), PCR כמותי הקרינה בזמן אמת (דגם StepOne), ציטומטר זרימה (דגם AC66051710132), מיקרוטום פרפין (דגם Laika), מיקרוסקופ (Olympus , דגם BS-53), ובמכשיר מים טהורים (דגם F7JA36507) נעשה שימוש.

2.3. הכנת דגימות עבור UPLC-Q-TOF-MS וניסויים פרמקולוגיים

WCD עובד מאותה אצווה שלCistanche deserticolaבמעבדה שלנו. להכנת WCD, חלקי CD יבשים (עובי 5 מ"מ) (100 גרם) הוזרעו ביין אורז (30 מ"ל), אודו בלחץ גבוה (1.25 kPa) למשך 4 שעות, ולאחר מכן יובשו ב-55 מעלות.

האבקות הגסות של CD ו-WCD הושרו ב-0 כפול 95% אתנול למשך 0.5 שעות, חולצו ברפלוקס 3 פעמים בכל פעם למשך שעה אחת, וסוננו, והתסננים שולבו 3 פעמים. האתנול הוחזר בלחץ מופחת, והתמצית הושגה למתן. התמצית (1 מ"ל) נוספה ל-50% מתנול, והביאה את הנפח הכולל ל-20 מ"ל, ואוחסנה ב-4 מעלות לניתוח תוכן.

NATURAL CISTANCHE TUBULOSA לשיפור התפקוד המיני PHGS75% ECH 30% ACT 12%

2.4. תנאים של UPLC-QqQ-MS לניתוח תמציות CD ו-WCD

2.4.1. תנאים אנליטיים של LCThMS

מערכת UPLC-MSThMS עם תוכנת MassLynx 4.1 Analyst שימשה לביצוע רכישת ועיבוד הנתונים. העמודה האנליטית הייתה Acquity UPLC BEH C18 (1{{10}}0 מ"מ × 2.1 מ"מ, 1.7 מיקרומטר) בטמפרטורה של 40 מעלות צלזיוס. השלב הנייד היה 0.1% תמיסה מימית של חומצה פורמית (A) ואצטוניטריל המכילה 0.1% חומצה פורמית (B). שיפוע הפליטה היה 0.00-1.00 דקות עם 3% B, 1.01-2.00 דקות עם 3%-11.5% B, 2.01-3.{{29 }} דקות עם 12% B, 3.01–4.00 דקות עם 15% B, 4.01–5.00 דקות עם 20% B, 5.01–6.00 דקות עם 22 % B, 6.01–8.00 דקות עם 25% B, ו-8.01–9.00 דקות עם 10% B. קצב הזרימה היה 0.3 mLTh דקות, ונפח ההזרקה היה 1.0 μL.

הספקטרומטר המסה המשולש מרובע של Waters (Xevo TQD, Waters Corp., Milford, MA, ארה"ב) מצויד במקור יינון אלקטרוספריי (ESI) שימש במצב יונים שליליים. גז ההמסה היה חנקן עם קצב זרימה של 500 LThh בטמפרטורה של 250 מעלות. כל התרכובות שזוהו נמדדו במצב ניטור תגובה מרובה (MRM); טבלה 1 מציגה את פרמטרי האנרגיה, וטבלה 2 מציגה את עקומות הכיול עבור הרכיבים המנותחים.

2.4.2. הכנת חומרי ייחוס

Tubuloside A (3.02 מ"ג), אכינאקוסיד (3.00 מ"ג), 2'-אצטילקטאוזיד (2.34 מ"ג), אקטאוזיד (2.45 מ"ג), איזואקטאוזיד (0.61 מ"ג), ציסטנוסיד F ( 2.14 מ"ג), סלידרוסיד (3.39 מ"ג), חומצה גניפוסידית (2.84 מ"ג), אג'וגול (1.58 מ"ג) וקטלפול (2.39 מ"ג) הומסו במתנול להכנת תמיסה. תמיסת המניות דוללה במתנול כדי לקבל את הריכוזים המתאימים לתמיסות הסטנדרטיות הפועלות. כל התמיסות המוכנות אוחסנו ב-4 מעלות לפני השימוש.

2.5. הכנה וקיבוץ של דגמי בעלי חיים

חולדות זכר SD (180–220 גרם) נרכשו מחברת Liaoning Changsheng Biotechnological Co., מספר היתר בעלי חיים: SCXK (Liao) 2015–0001. כל החולדות נשמרו עם גישה חופשית למזון ומים ב-25 מעלות ולחות יחסית של 30-50%. החיות אוכסנו במשך 7 ימים לפני הניסויים.

מאה חולדות חולקו באופן אקראי ל-10 קבוצות: קבוצת ביקורת ריקה (BC), קבוצת ביקורת מודל (MC), קבוצת ביקורת חיובית (PC), קבוצת ביקורת יין אורז (WC), קבוצת CD במינון גבוה (CD קבוצת -HD), קבוצת CD במינון בינוני (CD-MD), קבוצת CD במינון נמוך (CD-LD), קבוצת WCD במינון גבוה (WCD-HD), קבוצת WCD במינון בינוני (WCD-MD), וכן קבוצת WCD במינון נמוך (WCD-LD). המינונים של CD-HDThWCD-HD, CD-MDTh WCD-MD ו-CD-LDThWCD-LD היו 5.48 gTh(ק"ג ∙ ד), 2.74 gTh (ק"ג ∙ ד) ו-1.37 gTh(ק"ג ∙ ד), בהתאמה. המינון עבור קבוצת ה-PC היה 1.646 gTh(ק"ג ∙ d), ולקבוצת WC, 1 mLTh100 גרם למשך 40 ימים. ביום השישי לאחר המתן, החולדות הוזרקו תת עורית עם תרחיף מי קורטיקוסטרון (קורטיקוסטרון + 0.1% dimethyl sulfoxide + 0.1% Tween-80 + 0.9% נתרן כלוריד) למעט לקבוצת BC [18]. ריכוז הקורטיקוסטרון היה 5 gThL, והמינון היה 0.1 mLTh100 גרם. החולדות בקבוצת ה-BC קיבלו תמיסת מלח רגילה + 0.1% dimethyl sulfoxide + 0.1% Tween- 80 + 0.9% נתרן כלורי בהזרקה באותו מינון.

2.6. קביעת פונקציות ציר HPA

2.6.1. מבחן משקל, טמפרטורה והחזקה

בדיקת משקל נעשתה כל 3 ימים, והחום נלקח כל 6 ימים. במהלך הניסוי. ביום ה-39, החוזק המרבי של הגפה האחורית נמדד במד אחיזה. החולדות הונחו על במות חלקות, מה שגרם לגפיים האחוריות לתפוס את המוט. החולדות יתפסו באופן אינסטינקטיבי כל חפץ כדי למנוע תנועה לאחור כאשר הזנב נמשך עד שכוח המשיכה יעלה על האחיזה. כאשר החולדה איבדה את אחיזתה, הקדם-מגבר יכול להקליט אוטומטית את כוח האחיזה המרבי.

2.6.2. קביעת רמת ה-T, CRH, ACTH, CORT וקורטיזול בסרום

שעה לאחר המתן האחרון, החולדות הורדמו על ידי הזרקה תוך צפקית של תמיסת urethane (20 gTh100 מ"ל). לאחר מכן, דגימות הדם נאספו, עברו צנטריפוגה ב-3500 r למשך 15 דקות כדי להשיג את הסרום, ואוחסנו ב-20 מעלות. הריכוזים של T, CRH, ACTH, CORT וקורטיזול נמדדו עם ערכות ELISA של חולדה לפי הוראות היצרן.

2.6.3. תצפיות במיקרוסקופ

המבנה המורפולוגי של רקמת בלוטת יותרת הכליה נצפה על ידי צביעת HE. רקמת יותרת הכליה מקובעת ב-10% פרפורמלדהיד, מיובשת באתנול, הופכת לשקופה על ידי תמיסת קסילן, הוטבעה בשיטות קונבנציונליות, חתוכה לפרוסות בעובי של 4 מיקרומטר, הוסרה שעווה עם תמיסת קסילן, הולחמה עם שיפוע אתנול, ולאחר מכן צובעת בהמטוקסלין ואאוזין פתרון צביעה. לאחר שנעשתה שקופה עם קסילן, הצלחת נאטמה במסטיק ניטרלי ונצפה במיקרוסקופ.

2.6.4. צביעה אימונוהיסטוכימית של ביטוי חלבון Bax, Bcl-2, Caspase-3, Fas ו-FasL בבלוטת יותרת הכליה

חלקי יותרת הכליה של חולדה מקובעים בפורמלין, מוטבעים בפרפין, עברו שחרור מהפראפין והוסרו לאחר חיתוך בעובי של 4 מיקרומטר. לחסימת פעילות פרוקסידאז אנדוגנית, החתכים הודגרו מראש בגוש מי חמצן למשך 0 דקות. חתכים נטבלו ב-0.01 M ציטראט (pH 6.0) וחוממו לרתיחה. התהליך חזר על עצמו לאחר 5-10 דקות. לאחר הקירור, החלקים נשטפו עם PBS (pH 7.2-7.6) 1-2 פעמים, הושארו בטמפרטורת החדר למשך כ-5 דקות, ונשטפו עם PBS (pH 7.2-7.6) 2-3 פעמים. תמיסת חסימת BSA 5% נוספה בטמפרטורת החדר, והנוזל העודף על הקטע נוער כעבור 20 דקות. נוגדנים ראשוניים מדוללים ספציפיים ל-FasTh FasL, Bcl-2ThBax ו-caspase-3 (1:100 מדולל ב-PBS) נוספו והודגרו ב-37 מעלות למשך שעה אחת או 4 מעלות למשך הלילה. המקטעים נשטפו 2-3 פעמים עם PBS (pH 7.2-7.6). לאחר מכן, נוספו IgG נגד עכברים של עז ביוטיניל, והחלקים יובשו ב-20-37 מעלות למשך 20 דקות ונשטפו עם PBS (pH 7.2-7.6) 4 פעמים למשך 5 דקות. לאחר כביסה יסודית ב-PBS, החתכים הודגרו עם תערובת של ריאגנטים A ו-B למשך 30 דקות, הודגרו עם PBS למשך 45 דקות, ולבסוף פותחו עם מצע DAB (DAKO) למשך 30 דקות לפני שהם נצבעו מעט עם המטוקסילין, התייבשו, ורכוב.

NATURAL CISTANCHE TUBULOSA להגברת התחושה המינית PHGS75% ECH 30% ACT 12%

2.7. קביעת פונקציות חיסון

2.7.1. חישוב מדד האיברים החיסוניים

שעה לאחר המתן האחרון, החולדות הורדמו על ידי הזרקה תוך-צפקית של תמיסת urethane (20 gTh100 מ"ל), ולאחר מכן הוסרו הטחול ובלוטת התימוס ונשקלו מיד במכסה מנוע סטרילי. מקדמי המשקל של הטחול או התימוס (%) � משקל הטחול או התימוס (מ"ג) משקל הגוף (g).

2.7.2. זיהוי של תת-קבוצות לימפוציטים מסוג T בדם היקפי

ספלנוציטים והמוציטים הודגרו עם הנוגדנים החד שבטיים אנטי-CD4 (PE) ואנטי-CD8 (FITC) למשך 30 דקות בחושך. נוספו 2 מ"ל של ליסט אריתרוציטים, והתמיסה עורבבה במערבולת. התמיסה הושארה בחושך למשך 10 דקות וצנטריפוגה למשך 5 דקות. הסופרנטנט הושלך, ולאחר מכן התמיסה נשטפה 3 פעמים עם PBS קר כקרח והוחלה מחדש בתמיסת PBS מחדירת. לפחות 10,000 תאים נותחו על ידי ציטומטריית זרימה תוך שעה אחת מכל צביעה של Mab.

2.7.3. קביעת הרמה של IL-10, IL-6, IL-2, TNF- ו-IFN-c בסרום

שעה אחת לאחר המתן האחרון, החולדות הורדמו על ידי הזרקה תוך צפקית של תמיסת urethane (20 gTh100 מ"ל), ודם נלקח מאבי העורקים הבטן. הדם עבר צנטריפוגה ב-3500 r למשך 15 דקות כדי להשיג את הסרום ואוחסן ב-20 מעלות. הריכוזים של IL-10, IL-6, IL-2, TNF- ו-IFN-c זוהו עם ערכות ELISA של חולדה לפי הוראות היצרן.

2.8. ביטוי של CaM ברקמות היפותלמוס והיפופיזה

RNA כולל הופק מרקמות ההיפותלמוס וההיפופיזה על ידי TRIzol. שעתוק הפוך בוצע על 10 μL של RNA כולל לפי הוראות היצרן. כמויות שוות של cDNA נותחו באמצעות qPCR בנוכחות צבע קושר dsDNA (Promega, ארה"ב) ו-CFX 96 Real-Time PCR System (Bio-Rad, ארה"ב) כדי להסתכל על הגנים השונים בתנאים של הפעלה ראשונית ב- 95 מעלות למשך 10 דקות, 40 מחזורי דנטורציה ב-95 מעלות למשך 15 שניות, והארכת חישול ב-60 מעלות למשך דקה אחת.

פריימרים עבור CaM ו-actin ניתנים בטבלה 1, ו-actin שימש כבקרה פנימית. כל דגימה נורמלה על ידי שימוש בהבדל בספים קריטיים (Ct) בין גן המטרה לבין -אקטין. המשוואה הבאה שימשה לתיאור התוצאה: ΔΔCt � (Ct target gene − Ct -actin gene) קבוצת ניסוי - (Ct target gene − Ct -actin gene) קבוצת ביקורת. לאחר מכן הושוו רמות ה-mRNA של כל דגימה, תוך שימוש בגן ​​היעד של הביטוי 2- ΔΔCt. ממוצע התוצאות של כל קבוצה (טבלה 3).

2.9. ניתוח סטטיסטי

כל הנתונים נותחו באמצעות תוכנת SPSS (גרסה 19.0, SPSS Institute Inc., Chicago, IL). הבדלים בין הקבוצות נותחו באמצעות ניתוח שונות של שיטות חוזרות ונשנות (ANOVA). התוצאות הובעו כממוצע ± סטיית תקן (SD) באמצעות תוכנת GraphPad Prism (גרסה 6.0, סן דייגו, קליפורניה, ארה"ב). הבדלים עם ערך P קטן מ-0.05 נחשבו מובהקים סטטיסטית.

3. תוצאות ניסויים

3.1. UPLC-QqQ-MSAnalysis

כדי להשיג את ההפרדה הטובה ביותר, צורת השיא וזמן ניתוח קצר, התנאים הכרומטוגרפיים, כולל עמודה, שלב נייד ותוכנית שיפוע, נחקרו בניסוי המקדים שלנו. הכרומטוגרמות האופייניות עם מצב MRM מוצגות באיור 1.

מטבלה 4, אנו יכולים לראות שתכולת הגליקוזידים של פנילאתנואידים ב-WCD עלתה בהשוואה לאלו של CD, במיוחד עבור echinacoside ו-acteoside, בעוד שתכולת האירידואידים ירדה ב-WCD.

3.2. תקנה לפונקציית ציר HPA

3.2.1. מבחן משקל, טמפרטורה והחזקה

החולדות של קבוצת ה-MC וקבוצות הניסוי הראו תסמיני מחסור בכליות-יאנג בהדרגה לאחר שקיבלו קורטיקוסטרון. התסמינים, כגון ירידה במשקל, היפותרמיה, אובדן ברק שיער, צניחת רוח, פיגור בתגובה וירידה משמעותית בצריכת מים ובפעילות, השתפרו מאוד בקבוצות CD ו-WCD. איור 2(א) מציג את השינויים במשקל. המשקל של כל אחת מקבוצות התרופות עלה, במיוחד בקבוצות CDHD ו-WCD-HD. העלייה במשקל בקבוצת MC הייתה הנמוכה ביותר. איור 2(ב) מציג את שינויי הטמפרטורה, שהיו הנמוכים ביותר בקבוצת MC, והטמפרטורה עלתה בקבוצות WCD-HD, WCD-MD ו-WCD-LD.

איור 2(ג) מראה שכוח ההחזקה גדל עבור קבוצת ה-BC וכל אחת מקבוצות הניסוי, וקבוצת WCD-MD הייתה הגבוהה ביותר, מה שהוכיח שסימני חולשה שנגרמו על ידי מחסור בכליות-יאנג השתפרו לאחר מתן.

3.2.2. רמות של T, CRH, ACTH, CORT וקורטיזול

איור 3 מראה שבהשוואה לאלו של קבוצת ה-BC, רמת ה-T, CRH, ACTH ו-CORT בסרום החולדות ירדה (P < 0.01) ורמת הקורטיזול ירדה (P < 0.05) בקבוצת MC. בהשוואה לאלו של קבוצת MC, רמת ה-T בקבוצות WCD-HD ו-WCD-MD עלתה (P < 0.01), רמת ה-CRH ב-WCD-LD, קבוצות WCD-MD ו-WC השתפרו (P < 0.01), התוכן של ACTH עלה בקבוצות CD-HD, WCD-MD ו-WCD-HD (P < 0.01), רמת CORT שודרגה ב- קבוצות CD-MD, WCD-MD ו-WCD-HD (P < 0.01) ושיפור בקבוצות CDHD ו- WCD-LD (P < 0.05), ורמת הקורטיזול עלתה בכל אחת מקבוצות התרופות.

3.2.3. תוצאות של תצפית במיקרוסקופ

ניתן לחלק את רקמת בלוטת יותרת הכליה לשכבת קליפת המוח ולשכבת המדולה. השכבות הקורטיקליות כוללות שכבות כדוריות, צרורות ורשתיות. התאים מכילים יותר שומנים, ושכבת המדולה מורכבת בעיקר מתאי פיאוכרומוציטומה וכמות קטנה של רקמה סיבית. כפי שמוצג באיור 4, מצאנו שהכל תקין בקבוצת ה-BC, בעוד שבקבוצת MC, לקליפת האדרנל הייתה היפרפלזיה ברורה, ניוון תאי וצפיפות גוברת. הרצועה הבולבוסית התעבה, והאזור הפאשקולרי השקוף, ה-Zona reticularis הצר ותאים קטנים יותר הראו צביעה לא אחידה וגודש נימי. בקבוצת ה-PC, הגבולות של קליפת המוח והמדולרי היו גלויים. התאים של הרצועות הכדוריות והצרורות היו מסודרים באופן שווה, והמבנה המורפולוגי שוחזר. אותו שיקום טוב יותר נצפה בקבוצות WCD, וההשפעות בקבוצת WCD-MD היו טובות יותר מאלו של קבוצות WCD-HD ו-WCD-LD. המורפולוגיה של בלוטת יותרת הכליה בקבוצות ה-CD לא הייתה טובה כמו זו בקבוצות ה-WCD.

NATURAL CISTANCHE TUBULOSA לשיפור התפקוד המיני PHGS75% ECH 30% ACT 12%