עלה נים (Azadirachta Indica A. Juss) תמצית אתנולית על תפקוד הכבד והכליות של חולדות

edmund.chen@wecistanche.com

מבוא

לפיתוח תרופות ממוצרים טבעיים יש את תשומת הלב של העולם כיום. למוצרים הטבעיים יש מבנה כימי ייחודי, מייצרים מגוון פעילויות ביולוגיות ובעלי תכונות דמויות תרופות [1]. בנוסף, תרגול רפואה באמצעות מוצרים טבעיים מתרחש מאז התקופה הפרהיסטורית במניעה וטיפול במחלות שונות. מוצרים טבעיים מציעים יתרונות רבים במונחים של יעילות וסלקטיביות של יעד המולקולה, כך שניתן להשתמש בהם שוב ושוב כדי לספק את הצורך הדחוף של תרופות ביעילות [2]. מוצרים טבעיים מכילים תרכובות פעילות עם השתלה [8, 9], אנטי היפרגליקמי, אנטי כיב, אנטי פטרייתי, אנטיבקטריאלי, אנטי דלקתי, אימונומודולטורי, אנטי מוטגני, אנטי סרטן, אנטי מלריה, אנטי ויראלי, נוגד חמצון [10-12], אנטי פוריות [13, 14], וכן אמצעי מניעה [9, 11]. חלקים שונים של צמח הנים בודדו בהצלחה, מכילים יותר מ-140 תרכובות כימיות [10], ושימשו כתרופות צמחיות במשך אלפי שנים [14]. נים מכיל תרכובות ראשוניות שונות כולל נגזרות שומן, פחמימות וחלבונים ותרכובות משניות כגון פלבנואידים, סטרואידים, ספונינים, טרפנואידים, אלקלואידים, גליקוזידים וטאנינים [7-15]. צמחי נים הם עניין עולמי בגלל יעילותם מבלי להראות תופעות לוואי. בנוסף, השימוש בצמח הנים באופן מסורתי הוא בטוח למדי, ויותר מ-75 אחוז מהרפואה המסורתית משתמשת בתמצית עלי נים. בנוסף, ההיסטוריה של השימוש בו, מדיווחים קיימים, אינה מעידה על תופעות לוואי כלשהן מעלי נים. עם זאת, הערכת בטיחות מקיפה של השימוש בתכשירים של עלי נים מעולם לא נעשתה [11].

CISTANCHE ישפר את תפקוד הכליות/כליות

המחקר הקודם מדווח כי לתמצית עלי הנים יש השפעות רעילות על הכבד וכִּליָה [4, יא]; עם זאת, דיווחים אחרים מראים שתמצית עלי הנים יכולה להגן על הכבדכִּליָהמנזק [16–18]. ב-Aceh Besar Regency, מחוז אצ'ה, אינדונזיה, האנשים המקומיים השתמשו בעלי נים כירק והשתמשו בהם כדי למנוע הריון מבלי לדעת את תופעות הלוואי. פלוס בטיחותם של עלי נים עד כה עדיין לא ברורה. עד כה, למיטב ידיעתנו, ישנם עדיין מחקרים מוגבלים שמעריכים את ההשפעה של תמצית אתנולית עלי נים על כבד ותפקוד כליות. במחקר הנוכחי, המטרה הייתה לחקור את ההשפעה של מתן תמצית אתנולית עלי נים על הכבדתפקוד כליותבאמצעות בחינת הריכוז של AST, ALT, אוריאה וקריאטינין וכבד היסטופתולוגיכִּליָהבחולדות זכרים.

מילות מפתח:תפקוד כליות; רקמות כליות; אי ספיקת כליות; מחלת כליות; שֶׁל הַכְּלָיוֹת

חומרים ושיטות

אוסף דגימות עלי נים.עלי הנים נאספו מכפר Kajhu, Aceh Besar Regency, מחוז אצ'ה, אינדונזיה, בספטמבר 2019. זיהוי עלי הנים בוצע ב- Bogoriense Herbarium, Biology Research Center, Indonesian Institute of Sciences (LIPI), בוגור, אינדונזיה (1454) /IPH.1.01/If.07/VII/2019), והוא מצוין כ- Azadirachta indica A. Juss.הכנת תמצית האתנול של עלה הנים.עלי נים טריים נאספו, נשטפו, ייובשו באוויר ומעכו לייצור אבקה גסה. יתר על כן, האבקה הגולמית חולטה עם אתנול 70 אחוז למשך 7 ימים. בנוסף, התסנין התאדה על ידי שימוש במאייד סיבובי ב-50 מעלות לייצור תמציות צמיגות.ניסוי בבעלי חיים.חיות הניסוי היו 24 חולדות Wistar זכרים עם משקל גוף של 150-250 גרם. חולדות עברו התאקלמות למשך 7 ימים וחולקו באופן אקראי לארבע קבוצות (T0, T1, T2 ו-T3) שכן כל קבוצה הכילה 6 חולדות. T0 היא קבוצת הביקורת ללא טיפול ו-T1, T2 ו-T3 הן קבוצות הטיפול שהיו

נתן את תמצית עלה הנים עם 100, 200 ו-300 מ"ג/ק"ג משקל גוף, בהתאמה. התמצית ניתנה דרך הפה באמצעות צינור קיבה במשך 48 ימים, ודגימות דם נלקחו ביום ה-49 כדי לקבוע את הריכוזים של AST, ALT, אוריאה וקריאטינין, ולאחר מכן כבד וכִּליָהרקמות נאספו כדי להעריך היסטופתולוגיה. במהלך המחקר, חולדות קיבלו מזון ומים סטנדרטיים באופן חופשי.

ניתוח ביוכימי.דגימות הדם (2-3 מ"ל) נלקחו מהלב באמצעות מזרק סטרילי. בנוסף, הדם הועבר לצינור Eppendorf והושאר בטמפרטורת החדר (30 מעלות) למשך 10 דקות. הדם עבר צנטריפוגה למשך 10 דקות ב-3000 סל"ד. סרום פלוס e הופרד ואוחסן במקרר (0 20 מעלות). יתר על כן, AST, ALT, אוריאה וקריאטינין בדם נבדקו באמצעות מנתח כימיה (Rayto RT-1904C). פלוס הליך קביעה של ריכוזי AST, ALT, אוריאה וקריאטינין בוצע על פי פרוטוקול היצרן.

בדיקת היסטופתולוגיה. The כבד וכִּליָהשל חולדות נקבעו בתמיסת פורמלין מבוקרת ניטראלית של 10 אחוזים למשך 24 שעות, התייבשו בסדרת אלכוהול, ופונו בתמיסת קסילול ולאחר מכן הטמעה על גוש הפרפין. רקמות המוטבעות בבלוק הפרפין נחתכו באמצעות מיקרוטום סיבובי לעובי של 4 מיקרומטר, הותקנו על שקופיות זכוכית, נצבעו בהמטוקסילין ואאוזין, ונבדקו במיקרוסקופ אור בהגדלה של 10 × 10.ניתוח סטטיסטי.הנתונים מנותחים באמצעות ניתוח שונות (ANOVA חד כיווני) ואחריו מבחן הפוסט-הוק של דאנקן באמצעות SPSS 24. ערך p<0.05 was="" considered="" statistically="">

CISTANCHE ישפר כאבי כליות/כליות

תוצאות ודיון

ריכוז AST ו-ALT 6e. פלוס e ריכוז AST של T0, T1, T2 ו-T3 היה 290.9 ± 202.5 U/L, 277.2 ± 167.2 U/L, 421.3 ± 2{ {28}}1.5 U/L ו-366.3 ± 276.9 U/L, בהתאמה. ריכוז פלוס e של AST בקבוצות T2 ו-T3 נטה לעלות בהשוואה ל-T{{30}} (קבוצת ביקורת). עם זאת, ריכוזי AST בקבוצות T1, T2 ו-T3 לא הראו הבדל משמעותי מקבוצת T0 (p>0.05). פלוס e ריכוז ALT של T0, T1, T2 ו-T3 היה 108.6 ± 23.1 U/L, 116.3 ± 51.9 U/L, 105.9 ± 15.2 U/L ו-95.9 ± 36.2 U/L, בהתאמה. פלוס e ריכוז ALT בקבוצות T2 ו-T3 נטה לרדת בהשוואה ל-T0 (קבוצת ביקורת).

עם זאת, ריכוזי ALT בקבוצות T1, T2 ו-T3 לא הראו הבדל משמעותי מקבוצת T0 (p > 0.05) (טבלה 1). האנזים AST הוא סמן אחד ששימש להערכת נוכחות של נזק לכבד. בנוסף, האנזים שיחק תפקיד בתהליך של גלוקונאוגנזה כדי לזרז את ההמרה של קבוצת האמינו חומצה אספרטית לחומצה קטוגלוטרית לייצור חומצה אוקסלואצטית. אנזים AST נמצא באיזואנזימים ציטוסוליים ומיטוכונדריאליים של הכבד, שרירי השלד, שרירי הלב,כליות,מוח, לבלב, ריאות, לויקוציטים ותאי דם אדומים. עם זאת, אנזים AST זה פחות רגיש וספציפי להערכת נזק לכבד [19]. למרות שלא היו הבדלים משמעותיים בריכוזי AST בקבוצות הטיפול (T1, T2 ו-T3) בהשוואה לקבוצת הביקורת (T0), ריכוז ה-AST נטה לעלות בקבוצות T2 ו-T3 בהשוואה ל-T 0 (קבוצת בקרה). ייתכן שהעלייה בתוספת e הייתה מאוחרת בגלל התרכובות הפעילות של תמציות עלי הנים כגון פלבנואידים, טאנינים, ספונינים, אלקלואידים וסטרואידים, אך התרכובות הפעילות של תמצית אתנול עלי נים אינן מזוהות כמגבירות AST. עלייה באנזים AST אינה מלווה בהכרח בפגיעה בכבד מכיוון שאנזים זה אינו ספציפי רק בכבד אלא גם ברקמות גוף אחרות.

מחקר זה מצא גם כי האנזים ALT נוטה לרדת בקבוצת הטיפול (T1, T2 ו-T3) בהשוואה לקבוצת הביקורת (T0), אך הירידה באנזים ALT לא הייתה מובהקת סטטיסטית. אנזימי ALT היו מנבא טוב יותר לנזק לכבד מאשר אנזימי AST מכיוון שהאנזים הציטוזולי הזה נמצא בריכוזים הגבוהים ביותר בכבד והיה ספציפי יותר בהערכת הנזק של תפקודי הכבד [20]. בנוסף, האנזים שיחק תפקיד בגלוקוניאוגנזה על ידי זרז העברה של קבוצות אמינו מאלנין לחומצה קטוגלוטרית לייצור חומצה פירובית [19]. ALT כלל 496 חומצות אמינו ונמצא בהפטוציטים של הציטוזול. פעילות האנזים ALT בכבד הייתה בערך פי 3000 מפעילות הסרום, כך שבמקרה של נזק כבד או מוות, ALT המשתחרר מתאי כבד פגומים יגביר את הפעילות הנמדדת של אנזים ALT בסרום [21].

CISTANCHE ישפר דיאליזה של כליות/כליות

מוחמד ועוד. [22] מצא שתמצית האתנול של עלה הנים גרמה לירידה באנזימי AST ו-ALT של חולדה. לתמצית האתנול של עלה הנים לא היו תופעות לוואי על הכבד, והיא אף משמשת כהגנה על הכבד. המחקר שנערך על ידי Haque et al. [23] מצא גם שתמצית עלי הנים לא גרמה לשינויים בפעילות הסרום התקינה של אנזימי AST ו-ALT בחולדות זכרים. Bhangra et al. [24] דיווח כי מתן 500 מ"ג/ק"ג משקל גוף של תמצית עלי הנים בחולדות הנגרמות על ידי אקמול הפחית את הנזק לכבד, כפי שצוין על ידי ריכוזי AST ו-ALT נורמליים ותצפיות היסטופתולוגיות. תוצאות המחקר שנערך על ידי Dkhil et al. [17] הצביע על השפעה מגנה של התמצית המתנולית של עלי נים עם מינון של 500 מ"ג/ק"ג משקל גוף לכבד על החולדה המושרה על ידי ציספלטין. מאליק וחב'. [25] דיווח כי לתמצית המתנולית של עלה הנים לא הייתה השפעה רעילה על כבד החולדות אפילו במינונים גבוהים. תכולת נוגדי החמצון של תמצית עלי הנים נתנה אפקט מגן על הכבד. המחקר שנערך על ידי Hartono ו-Prabowo [26] מצא שתמצית האתנול של עלה הנים על חולדות על ידי השראת מינונים גבוהים של אקמול למשך עשרה ימים יכולה גם להפחית את פעילות האנזים ALT בחיות ניסוי. הירידה באנזים ALT נבעה מהתרכובת הפעילה של תמצית עלי הנים, שתפקדה כהגנה על הכבד על ידי עיכוב נזקי כבד חמצוני. נוגדי החמצון יכולים להפחית את הרדיקלים החופשיים להזדווגות על ידי ניקוי ישיר אשר מפחית את היווצרותם של מיני חמצן תגובתיים (ROS) שיש להם השפעות רעילות על הפוספוליפידים של הממברנה וגורמים לספקטרום רחב של נזק לתאים. נוגדי החמצון יכולים להפחית מתח חמצוני לתאי הכבד, ופעילות האנזים ALT בדם תפחת.

ריכוז האוריאה והקריאטינין.ריכוז האוריאה של T{{0}}, T1, T2 ו-T3 היה 51.1 ± 7. 0 מ"ג/ד"ל, 55.6 ± 8.5 מ"ג/ד"ל, 44.5 ± 5.4 מ"ג/ד"ל, ו 48.4 ± 3.4 מ"ג/ד"ל, בהתאמה. ריכוזי אוריאה בקבוצות T1, T2 ו-T3 הראו הבדלים משמעותיים מקבוצת T0 (p < 0.{{30}}5).="" ריכוז="" הקריאטינין="" של="" t0,="" t1,="" t2="" ו-t3="" היה="" 0.22="" ±="" 0.{{40}}4="" מ"ג/ד"ל,="" {{44="" }}.24="" ±="" 0.03="" מ"ג/ד"ל,="" 0.21="" ±="" 0.03="" מ"ג/ד"ל="" ו-0.25="" ±="" 0.03="" מ"ג/ד"ל,="" בהתאמה.="" ריכוזי="" קריאטינין="" בקבוצות="" t1,="" t2="" ו-t3="" לא="" הראו="" הבדל="" משמעותי="" מקבוצת="" t0="" (p=""> 0.05) (איור 1). הכִּליָהבעל תפקיד חשוב בהפרשת חומרי פסולת ורעלים כגון אוריאה, קריאטינין וחומצת שתן; יש לו גם תפקיד בוויסות נפח הנוזל החוץ-תאי, האוסמולאליות, ריכוזי האלקטרוליטים וייצור ההורמונים. פלוס יחידה פונקציונלית שלכִּליָההוא הנפרון המורכב מהגלומרולוס, צינוריות פרוקסימליות, צינוריות דיסטליות ותעלות איסוף [27]. תוצאות פלוס e הראו שיש הבדלים משמעותיים בריכוזי אוריאה בקבוצות הטיפול (T1, T2 ו-T3) בהשוואה לקבוצת הביקורת (T0), וריכוז האוריאה ירד בקבוצות T2 ו-T3 בהשוואה ל-T0 (קבוצת בקרה). אוריאה היא תרכובת המכילה חנקן שנוצרת בכבד כתוצר סופי של חילוף החומרים של החלבון ומחזור האוריאה. כ-85 אחוז מהשטח מופרש דרך ה-כליות, והשאר מופרש דרך מערכת העיכול. אוריאה בסרום עולה במצבי ניקוי כליות כמו במצבים אקוטיים וכרונייםאי ספיקת כליות. אוריאה יכולה לעלות גם במצבים אחרים כגון דימום במערכת העיכול העליונה, התייבשות, תהליך קטבולי ודיאטה עתירת חלבון [27].במחקר זה חלה ירידה בריכוז האוריאה בקבוצת הטיפול בהשוואה לקבוצת הביקורת. מצוין כי תמצית האתנול של עלה הנים לא השפיעה עלתפקוד כליותשל החולד הזכר. על פי Guyton and Hall [28], סך אוריאה בדם נקבע על ידי חלבון תזונתי ויכולתכליותלהפריש אוריאה. אם הכליות היו פגומות, אוריאה הייתה מצטברת בדם. מצביע על עלייה ב-urea בפלזמהאי ספיקת כליותבביצוע תפקיד הסינון שלו. בתוספת תנאי שלאי ספיקת כליות, המתאפיין ברמות גבוהות מאוד של אוריאה בפלזמה, ידוע בשם אורמיה.

אוריאה היא התוצר הסופי של חנקן שמקורו בקטבוליזם של חלבון וחומצות אמינו, המיוצר על ידי הכבד, ומופץ לכל הנוזלים התוך-תאיים והחוץ-תאיים. בתוך הכִּליָה, אוריאה מסוננת מהדם על ידי גלומרולי ונספגת מחדש בחלקה על ידי מים. אוריאה מוגברת היא אינדיקטור לכך שקצב הסינון הגלומרולרי נמוך. ריכוז מוגבר של אוריאה קשורמחלת כליותאו כישלון, חסימת דרכי השתן על ידיכִּליָהאבנים, אי ספיקת לב, התייבשות, חום, הלם ודימום במערכת העיכול.המחקר מצא גם שלא היו הבדלים משמעותיים בריכוזי קריאטינין בקבוצות הטיפול (T1, T2 ו-T3) בהשוואה לקבוצת הביקורת (T0). מצוין שתמצית האתנול של עלי הנים לא גרמה נזק לחולדהכִּליָה.קריאטינין משמש בדרך כלל כמדד שלתפקוד כליות. ריכוז קריאטינין מושפע לא רק מהתוצר של מסת השריר אלא גם מושפע מתפקוד השרירים, הרכב השרירים, הפעילות, התזונה והמצב הבריאותי. ריכוז מוגבר של קריאטינין נמצא גם בניוון שרירים, אנמיה, לוקמיה והיפרתירואידיזם [29]. קריאטינין הוא הסמן הנפוץ ביותר להערכהתפקוד כליות.ריכוז קריאטינין מספק אינדיקטור לפעולת הגלומרולוס. קריאטינין הוא תוצר לוואי של קריאטין פוספט בשרירים ומיוצר במהירות קבועה על ידי הגוף. על פי רוב, קריאטינין מתנקה מהדם לחלוטין על ידיכליות. קריאטינין מוגבר מראה ירידה בניקוי על ידיכליות. סרום קריאטינין הוא הערכה מדויקת יותר שלתפקוד כליותמאשר אוריאה [27].

מונים וחב'. [16] מצא כי מתן תמצית עלי הנים במינון של 500 מ"ג/ק"ג משקל גוף במשך חמישה ימים בחולדות לא גרם לשינויים בריכוזי אוריאה וקריאטינין בחולדה. Kepala et al. [30] גם מצא שהחולדה שניזונה מתמצית עלי הנים במינון של 500 מ"ג/ק"ג משקל גוף במשך 14 ימים גרמה לירידה בריכוזי אוריאה וקריאטינין בחולדה שנגרמה על ידי ציספלטין עבורנזק לכליות. תמצית האתנול של עלה הנים פעלה כהגנת נפרונזק לכליות.המחקר שנערך על ידי Somsak et al. [18] מצא כי לתמצית מי עלי הנים במינונים של 1000 ו-2000 מ"ג/ק"ג משקל גוף לא היו השפעות רעילות על חולדות. תמצית עלי הנים יכולה לשמש כמועמדת להגנה על כליות מפני נזקכליות.

ההיסטופתולוגיה של הכבד והכליות.התצפיות ההיסטופתולוגיות בכבד בקבוצת הביקורת (איור 2(א) ובקבוצת הטיפול במינונים של 100 מ"ג/ק"ג (איור 2(ב)), 200 מ"ג/ק"ג (איור 2(ג)) ו-300 מ"ג/ק"ג. (איור 2(ד)) הראה שהכבד, הוורידים המרכזיים ותאי ההפטוציטים נראו תקינים (איור 2).כִּליָהתצפיות היסטופתולוגיה בקבוצת הביקורת (איור 3(א)) ובקבוצת הטיפול במינונים של 100 מ"ג/ק"ג (איור 3(ב)), 200 מ"ג/ק"ג (איור 3(ג)) ו-300 מ"ג/ק"ג ( איור 3(ד)) הראה מראה תקין של הגלומרולוס והצינוריות הפרוקסימלית והדיסטלית. בנוסף לא היה שינוי היסטולוגי בכִּליָה(איור 3).

הכבד וכליותהם איברים בעלי תפקיד חשוב בחילוף החומרים והפרשת תרופות או חומרים אחרים. במחקר הוכח כי מתן תמצית אתנול של עלי נים במינונים של 100, 200 ו-300 מ"ג/ק"ג לא גרם לחריגות ולפגיעה בכבד החולדות. כבד פלוס e בחולדות שטופלו הראה את המבנה הכללי התקין של הכבד ומראה תקין של ורידים מרכזיים ותאי הפטוציטים. פלוס e liver histopathology עוקבת אחר תוצאות הניתוח של האנזימים AST ו-ALT אשר הראו כי לא היה הבדל משמעותי בין קבוצת הביקורת והטיפול. למרות שהייתה עלייה באנזים AST בקבוצת ה-200 ו-300 מ"ג/ק"ג בהשוואה לקבוצת הביקורת, ההיסטופתולוגיה של הכבד נראתה תקינה. אנזים AST אינו ספציפי לנזק לכבד. AST נמצא בעיקר בתאי הדם האדומים, בשרירי הלב והשלד, וכןכליות. AST פחות רגיש לכבד מאשר ALT [19].

הכִּליָהתצפיות היסטופתולוגיות לאחר מתן תמצית אתנול של עוזב נים במינונים של 100, 200 ו-300 מ"ג/ק"ג לא הראו הבדלים בהשוואה לביקורת. הכִּליָהבחולדות מטופלות הראו את הכללית הרגילהמבנה שלכִּליָהומראה תקין של הגלומרולוס והאבובים. ממצא זה נתמך על ידי ניתוח של אוריאה וקריאטינין בדם חולדות שלא הראה הבדל משמעותי בין קבוצת הביקורת והטיפול. אוריאה וקריאטינין הם פרמטרים ביוכימיים שהם האינדיקטורים העיקריים שלהםתפקוד כליות. עם זאת, קריאטינין הוא הערכה מדויקת יותר שלתפקוד כליותמאשר אוריאה [27]. זה עולה בקנה אחד עם כמה מהדיווחים הקודמים שלפיהם לתמצית עלי הנים יש השפעות פוטנציאליות להגנת הכבד ולכליות [31]. Kusuma et al. [32] מצא שתמצית אתנול עלי הנים לא השפיעה על קוטר הפטוציטים, קוטר אונות הכבד ומשקל הכבד בחולדה. לעומת זאת, מחקרם של קצאיאל וחב'. [33] מצא כי מתן תמצית המתנול של עלי נים במינונים של 500, 1000 ו-2000 מ"ג/ק"ג גרם להפרעות בכבד ובכליות של חולדות שטופלו בהשוואה לבקרות. הבדל זה בתוצאות נבע כנראה ממינוני התמצית השונים של עלי הנים. התוצאות מחקר זה מצביעות על כך שתמצית האתנול של עלי נים מקאג'ו לא גרמה נזק לכבד וכליותשל חולדות זכרים. פלוס זה נובע מהתרכובת הפעילה של תמצית האתנול של עלי הנים שהוא נוגד חמצון. המחקרים הקודמים מראים שתמצית אתנול עלי הנים מ-Kajhu מכילה פלבנואידים, אלקלואידים, טאנינים, ספונינים וסטרואידים [34]. פלוס e תרכובות פעילות הפועלות כנוגדי חמצון הם פלבנואידים. לתמצית אתנול עלה נים יש פעילות נוגדת חמצון חזקה [35]. בנוסף, תמצית האתנול של עלי נים מ-Kajhu בטוחה לכבד ולכליות של חולדות זכרים.

CISTANCHE ישפר אי ספיקת כליות/כליות

מסקנות

התמצית האתנולית של עלי הנים לא גרמה נזק לכבד וכִּליָהשל חולדה זכר כפי שצוין על ידי ניתוח של אנזימי AST, ALT, ריכוז אוריאה וקריאטינין וכבד היסטופתולוגיכִּליָה. עם זאת, נדרשת חקירה נוספת לצורך הערכת בטיחות מקיפה של תמצית עלי הנים במינונים שונים כדי לקבל תמונה ברורה של בטיחות עלי הנים לרפואה.