פעילות רב-כיוונית של באקוצ'יול נגד מנגנונים סלולריים של הזדקנות פנים - עדות ניסויית לגישה טיפולית הוליסטית חלק 1

תַקצִיר

מַטָרָה: הזדקנות העור היא תהליך רב-פקטורי הכולל היווצרות של מיני חמצן תגובתיים, דלקת רצופת עם יכולת מופחתת של תאי האפידרמיס והעור, וכתוצאה מכך נזק למטריצה ​​החוץ-תאית. שיטות טיפול דרמו-קוסמטיות אפקטיביות צריכות לתת מענה אידיאלי לסימני ההיכר הללו בגישה הוליסטית. כאן, קבענו את פרופיל הפעילות התואם של Bakuchiol, מרוטרפן שמקורו בצמח, במערך של מחקרים חוץ-גופיים, ו-in vivo והשווינו אותו לרטינול, הנחשב כיום לתקן הזהב בקוסמטיקה אנטי-אייג'ינג מקומית.

גליקוזיד של cistanche יכול גם להגביר את הפעילות של SOD ברקמות הלב והכבד, ולהפחית באופן משמעותי את תכולת הליפופוסצין וה-MDA בכל רקמה, תוך ניקוי יעיל של רדיקלי חמצן תגובתיים שונים (OH-, H₂O₂ וכו') ומגן מפני נזקי DNA הנגרמים על ידי OH-רדיקלים. לגליקוזידים פנילתנואידים של Cistanche יש יכולת ניקוי חזקה של רדיקלים חופשיים, יכולת צמצום גבוהה יותר מאשר ויטמין C, משפרים את פעילות ה-SOD בתרחיף זרע, מפחיתים את תכולת ה-MDA ובעלי השפעה הגנה מסוימת על תפקוד קרום הזרע. פוליסכרידים של Cistanche יכולים להגביר את הפעילות של SOD ו-GSH-Px באריתרוציטים וברקמות ריאה של עכברים מתבגרים שנגרמו על ידי D-galactose, כמו גם להפחית את תכולת ה-MDA והקולגן בריאה ובפלזמה, ולהגדיל את תכולת האלסטין. אפקט ניקוי טוב על DPPH, הארכת זמן ההיפוקסיה בעכברים מזדקנים, שיפור הפעילות של SOD בנסיוב, ועיכוב ניוון פיזיולוגי של ריאות בעכברים מזדקנים בניסוי. עם ניוון מורפולוגי תאי, ניסויים הראו כי ל-Cistanche יש יכולת נוגדת חמצון טובה ובעלת פוטנציאל להיות תרופה למניעה וטיפול במחלות הזדקנות העור. יחד עם זאת, לאכינאקוסיד ב-Cistanche יש יכולת משמעותית לסלק רדיקלים חופשיים של DPPH והוא יכול לנקות מיני חמצן תגובתיים, למנוע פירוק קולגן הנגרמת על ידי רדיקלים חופשיים, וגם יש לו אפקט תיקון טוב על נזקי אניון רדיקלים חופשיים של תימין.

לחץ על Antioxidant Cistanche Tubulosa

【למידע נוסף:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

שיטות: היכולת והעוצמה נוגדת החמצון של באקוצ'יול ורטינול נותחו על ידי מדידת הפחתת 2,2'-דיפניל-1- picrylhydrazyl (DPPH) באמצעות דעיכה בספיגה שלו וספקטרוסקופיה של תהודה ספין אלקטרונים, בהתאמה. השפעות על פרוסטגלנדין E2 (PGE2), גורם מעכב נדידת מקרופאגים (MIF), גורם גדילה פיברובלסט 7 (FGF7), קולגן מסוג I ו-VII (COL1A1, COL7A1), רמות פיברונקטין (FN) וכן מטבוליזציה של טטרזוליום מסיס במים 1 (WST-1) נקבעו בפיברובלסטים עוריים אנושיים. התחדשות אפידרמיס הוערכה תוך שימוש במודל של ריפוי פצעים במבחנה. רמות החלבון של FN נותחו אקס-וויזו לאחר טיפול בפורמולה המכילה באקוצ'יול, רטינול או כלי רכב באמצעות נוזל שלפוחית ​​שאיבה. שיפור במצב העור נקבע in vivo במחקר השוואת פנים מפוצלות לאחר מריחת בקוצ'יול או רכב.

תוצאות: בניגוד לרטינול, בקוצ'יול הפגין יעילות נוגדת חמצון גבוהה. רמות PGE2 ו-MIF ירדו באופן משמעותי הן על ידי Bakuchiol והן על ידי רטינול. Bakuchiol אך לא רטינול העלה משמעותית את רמות החלבון FGF7. רמות חילוף החומרים של WST-1 הוגברו באופן משמעותי על ידי בקוצ'יול ורטינול. יישום Bakuchiol ורטינול הוביל להגדלה משמעותית של רמות החלבון COL1A1, COL7A1 ו-FN. פצעים בתוספת באקוצ'יול אך לא רטינול הראו עלייה משמעותית בהתחדשות האפידרמיס. מבחינה קלינית, אזורים שטופלו בפורמולה המכילה Bakuchiol הראו עלייה מובהקת סטטיסטית בערכי חלבון FN לאחר יישום של 4-שבוע בהשוואה לאזורים לא מטופלים ואזורים שטופלו בכלי.

סיכום: נתונים אלה מספקים עדות ליעילות הרב-כיוונית של באקוצ'יול נגד סימני היכר תאיים של הזדקנות העור. פרופיל הפעילות שלו חולק כמה מאפיינים משותפים עם רטינול, אך מדגים כמה השפעות חיוביות שלא היו ידועות עד כה במחקרים שלנו, כלומר גירוי של מרכיב המטריצה ​​החוץ-תאית הקריטי FN, והתחדשות אפידרמיס מואצת וריפוי פצעים.

מילות מפתח

אנטי אייג'ינג, בקוצ'יול, ביסוס תביעה in vivo/ex vivo/in vitro, רטינול, פיזיולוגיה/מבנים של העור

מבוא

עור מבוגר מאופיין בקמטים, פיגמנטציה לא אחידה, חספוס העור ורפיון. סימנים קליניים אלו הם תוצאה של שינויים מבניים ומטבוליים הנגרמים על ידי תהליכי הזדקנות פנימיים וחיצוניים. הזדקנות פנימית מיוחסת לגורמים הכוללים קיצור טלומרים, דלקת כרונית, מוטציות יחידות ב-DNA המיטוכונדריאלי ורדיקלים חופשיים [1]. עור מבוגר כולל הפחתה של מערכות נוגדי החמצון שלו[2]. כמו כן, קצב התפשטות התאים יורד עקב תהליך ההזדקנות הביולוגי המוביל לאובדן מבנה ותפקוד העור. הזדקנות חיצונית מופעלת בעיקר על ידי קרינת UV והשפעות סביבתיות. עלבונות אלו מביאים לנזק לעור המחזק את הירידה הכרונולוגית ומאיץ את ההזדקנות העורית. עור האדם מאבד עוד יותר את היכולת להתמודד עם מצבים דלקתיים לאורך ההזדקנות, וכתוצאה מכך מצב פרו-דלקתי כרוני.

היישום המקומי של רטינואידים כגון חומצה רטינואית, רשתית או רטינול נחשב כסטנדרט הזהב הקליני לטיפול אנטי אייג'ינג יעיל [3, 4]. המנגנונים המולקולריים של רטינואידים תוארו בהרחבה [5-10]. רטינואידים מקומיים מפחיתים ביעילות סימני הזדקנות גלויים כמו קמטים, רפיון או חספוס [4, 11] ומפחיתים דה-פיגמנטציה של עור פגום בפוטו, כולל livedo reticularis ו-actinic lentigines [12]. עם זאת, טיפול מקומי ברטינואידים יכול להוביל ליובש וגירוי בעור תלויי ריכוז [13]. מכיוון שיישום רטינול גורם לתגובות שליליות קלות בהשוואה לרטינואידים אחרים כגון חומצה רטינואית [6, 14], הוא פעיל בשימוש נרחב בטיפול קוסמטי בהזדקנות הפנים.

בניגוד לרטינול אשר מיושם במוצרי טיפוח לעור מאז 1984 [15], בקוצ'יול זכה לתשומת לב רק לאחרונה כתרכובת אנטי-אייג'ינג מקומית. Bakuchiol הוא מרוטרפן (איור 1) שמקורו בזרעי Psoralea corylifolia. הוא שימש ברפואה ההודית והסינית המסורתית במשך מאות שנים [16, 17] והוא נסבל היטב [18]. ל-Bakuchiol הוצע להפגין פונקציות דמויות רטינול, שכן במודל תחליפי עור, שני החומרים מראים דפוסי ביטוי גנים דומים במבחנה [19] ושיפור של פגיעה בפוטו בעור in vivo [20]. לפיכך, הוא מכונה גם אנלוגי רטינואיד פונקציונלי שמקורו בצמח [21]. מחקרים נוספים הדגימו השפעות נוגדות חמצון [19, 22-24], אנטי דלקתיות [19, 25-27], אנטיבקטריאליות [28] וכן השפעות אנטי-פרוליפרטיביות ואנטי-גידוליות [29, 30] של בקוצ'יול.

כדי לשפר ולדחות ביעילות את תהליכי הזדקנות העור הרב-גורמיים, יש לטפל במנגנונים תאיים שונים בגישה משולבת. Bakuchiol מווסת בו זמנית מטרות שונות והופך אותה לתרכובת מבטיחה בהקשר זה. כיוון שמתח חמצוני ודלקתי קשורים קשר הדוק להזדקנות העור, מניעתם על ידי בקוצ'יול עשויה לקדם את מצב העור הכללי. עם זאת, איכות העדויות המדעיות הנוכחיות הוערכה לאחרונה באופן ביקורתי [31]. בהקשר זה, קבענו את היכולות (i) נוגדות חמצון ו-(ii) נוגדות דלקת של בקוצ'יול ורטינול ובחנו את יכולתם לשפר את חילוף החומרים התאי וסינתזה של פקטור גדילה 7 המסוכמת כ-(iii) פעילות התא. עוד ניתחנו האם Bakuchiol ו-retinol משפיעים על הביטוי של רכיבי ECM מסוימים (iv) ומשפרים (v) התחדשות אפידרמיס ואפיתל מחדש. לבסוף, מחקר in vivo נערך כדי לאמת את יכולת האנטי-אייג'ינג הקלינית של בקוצ'יול בעור אנושי.

חומרים ושיטות

חומרי בדיקה

Bakuchiol הושג מ-Sytheon Ltd (Boonton, ניו ג'רזי, ארצות הברית). רטינול נרכש מסיגמא-אלדריץ' (סנט לואיס, מיזורי, ארצות הברית). עבור ניסויים בתרבית תאים, שני חומרי הבדיקה היו מדוללים טריים ב-DMSO (Merck, Darmstadt, גרמניה). עבור תמיסות המניות של DMSO, הריכוז המיושם של חומרי הבדיקה היה פי 1000-מעל הריכוז הגבוה ביותר שיושם בתרבית תאים והניב 0.1 אחוז DMSO במדיה או במאגר. דילולים נוספים בוצעו באמצעות מדיה או חיץ עם 0.1 אחוז DMSO. לפיכך, כל הניסויים בתרבית תאים בוצעו בנוכחות 0.1 אחוז DMSO. עבור מחקרים in vivo, רטינול מקומי פותח באותו כלי כמו באקוצ'יול.

מחקרים במבחנה

קביעת יכולת נוגדת החמצון

Bakuchiol, רטינול (שניהם מיושמים בריכוז סופי של 100μM), או הטרולוקס בסטנדרט גבוה (Merck, ריכוז סופי של 25μM) דוללו ב-DMSO. בקצרה, 30μL של תרכובות אלו (ריכוז גבוה פי 10- מריכוז הבדיקה הסופי) נוספו לצלחת 96-תחתונה שטוחה היטב. לאחר מכן, 270μL של 39ug/mL DPPH (Merck, מדולל בתערובת מים/אתנול של 1:1) נוספו במהירות לכל באר והניב ריכוז סופי של 10 אחוז DMSO. כביקורת, תמיסת DPPH הודגרה עם DMSO חסרי חומרי בדיקה. יתר על כן, בקרות ריקות בוצעו על ידי דגירת בקוצ'יול או רטינול עם מים/אתנול (1:1) או רק תערובת מים/אתנול (1:1) המכילה 10 אחוז DMSO בהיעדר DPPH. לאחר 10, 30 ו-60 דקות, הספיגה ב-524nm נמדדה באמצעות קורא מיקרו-צלחות Spark multimode (Tecan, Männedorf, שוויץ). אותות של פקדים ריקים הופחתו.

קביעת הכוח נוגד החמצון

HDFs הוזרעו בצלחות של {{0}} באר עם 150 000 תאים/באר במדיום של 2 מ"ל המכיל 10 אחוז סרום עגל והודגרו במשך 24 שעות. לאחר מכן, המדיום הישן נזרק, והתאים טופלו במדיום המכיל 2 אחוז סרום עגל ובאקוצ'יול או רטינול בריכוז סופי של 10 מיקרומטר. HDFs בקרה נוספו עם 0.1 אחוז DMSO חסר Bakuchiol או רטינול. בקרות ריקות בוצעו על ידי דגירה של מדיום ללא תאים. לאחר 24 שעות, המדיום המותנה הועבר לעמודות ספין של רכז חלבון Vivaspin (5000 MWCO; Sartorius, Göttingen, גרמניה) ורוכז בערך פי 10-. הנפחים של כל הסופרנטנטים הבינוניים הושוו על ידי הוספה מחדש של הזרימה דרך. רמות חלבון FGF7 של המדיום המותנה המרוכז נותחו באמצעות ערכת ELISA זמינה מסחרית בהתאם להוראות היצרן (Bio-Techne GmbH). המדידות בוצעו באמצעות Spark multimode microplate reader (Tecan). אותות שהתקבלו מבקרים ריקים הופחתו ורמות החלבון FGF7 נורמלו למספר התאים הכולל שנקבע באמצעות מונה תאים (שרביט, מרק).

קביעת חילוף החומרים של WST-1

HDFs נזרעו בצלחות באר {{0}} עם 3000 תאים/באר במדיום של 100μL המכיל 10 אחוז סרום עגל והודגרו במשך 24 שעות. המדיום המדולדל הושלך, והתאים טופלו במדיום של 100μL המכיל רטינול או בקוצ'יול בריכוז סופי של 1 מיקרומטר או 10 מיקרומטר, בהתאמה. HDFs בקרה נוספו עם 0.1 אחוז DMSO חסר Bakuchiol או רטינול. כביקורת נוספת, תאים טופלו ב-10 אחוז triton-X (Merck). בקרות ריקות בוצעו על ידי דגירה של מדיום ללא תאים. לאחר 72 שעות, התאים נצבעו באמצעות מגיב התפשטות התאים הזמין מסחרית WST-1 בהתאם להוראות היצרן (Merck). הספיגה נמדדה ב-450 ו-620 ננומטר באמצעות קורא מיקרו-צלחות Tecan infinity M200 (Tecan). ההבדל במדידות אלו שימש לניתוח. אותות של פקדים ריקים הופחתו.

קביעת רמות החלבון COL1A1 ו-COL7A1

HDFs נזרעו בצלחות {{0}}באר עם 10  000 תאים/באר במדיום של 100μL המכיל 10 אחוז סרום עגל והודגרו במשך 24 שעות. Bakuchiol או רטינול דוללו במדיום של 100μL ללא סרום עגל, והוספו למדיום הנוכחי בריכוז סופי של 1 μM או 10 μM, בהתאמה. הביקורת נוספה במדיום ללא סרום בנפח 100μL והניב ריכוז של 0.1 אחוז DMSO המתאים לטיפול ברטינול ובקוצ'יול. כסטנדרט גבוה, 10 ng/mL גורם גדילה משתנה (TGF-) ו-11ug/mL נתרן אסקורבט (שניהם Merck). בקרות ריקות בוצעו על ידי דגירה של מדיום ללא תאים. לאחר 4 שעות, רמות החלבון COL1A1 ו-COL7A1 של המדיום המותנה נותחו באמצעות ערכות ELISA זמינות מסחרית בהתאם להוראות היצרן (Novus Biologicals, Littleton, קולורדו, ארצות הברית). המדידות בוצעו באמצעות Spark multimode microplate reader (Tecan). אותות של פקדים ריקים הופחתו. רמות החלבון COL1A1 ו-COL7A1 נורמלו לכמות החלבון הכוללת של תא תאי אשר נקבעה באמצעות ערכת בדיקת חומצה ביצינצ'ונינית זמינה מסחרית (Thermo Fisher Scientific) בהתאם להוראות היצרן. תנאי מוקדם לשימוש בתוצאות היה התגובה החיובית של התאים ל-TGF ונתרן אסקורבט ברמה גבוהה.

לצורך ניתוח רמות החלבון COL7A1 לאחר זמן דגירה ממושך, נזרעו HDF בצלחות 96-בארות עם 3000 תאים/באר במדיום של 100μL המכיל 10 אחוז סרום עגל. כל הטיפולים, הביקורות והאנליזה בוצעו כמתואר לעיל, למעט הבקוצ'יול ורטינול שימשו רק בריכוז סופי של 10 מיקרומטר. תאים נקצרו כאשר הושגה תת-מפגש, בפרט, לאחר 72 או 96 שעות.

קביעת רמות חלבון FN

HDFs נזרעו בצלחות {{0}} באר עם 10 000 תאים/באר במדיום של 100μL המכיל 10 אחוז סרום עגל והודגרו במשך 24 שעות. המדיום הישן הוחלף במדיום המכיל 2 אחוז סרום עגל ובאקוצ'יול או רטינול בריכוז סופי של 10 מיקרומטר. הביקורת נוספה עם 0.1 אחוז DMSO חסר Bakuchiol או רטינול. בקרות ריקות בוצעו על ידי דגירה של מדיום ללא תאים. לאחר 24 שעות, רמות חלבון FN של המדיום המותנה נותחו באמצעות ערכת ELISA זמינה מסחרית בהתאם להוראות היצרן (R&D Systems, מיניאפוליס, מינסוטה, ארצות הברית). המדידות בוצעו באמצעות Spark multimode microplate reader (Tecan). אותות של פקדים ריקים הופחתו. רמות חלבון FN נורמלו לכמות החלבון הכוללת של תאי תא שנקבעה כאמור.

קביעת התחדשות האפידרמיס במודל ריפוי פצעים חוץ גופית

הניסויים נערכו כפי שתואר קודם [34]. לטיפול במודלים של ריפוי פצעים, באקוצ'יול או רטינול הודללו ב-DPBS והוספו בריכוז סופי של 100μM לאזור הפצע (5 μL לכל פצע). לפצעי הייחוס נוספו אותה כמות של DPBS המכילה 0.1 אחוז DMSO ללא בקוצ'יול או רטינול. פצעים נוספים נותרו ללא טיפול כביקורת נוספת. דגמי ריפוי פצעים הודגרו במשך 43 שעות ב-95 אחוזי לחות, 5 אחוזים CO2 ו-37 מעלות. לאחר מכן, הדגימות הוקפאו במהירות באיזופנטן מקורר מראש בחנקן נוזלי, ואוחסנו ב-80 מעלות. אפיתליזציה מחדש הוערכה בחתכים קריוסטטים מוכתמים בהמטוקסלין וב-eosin על ידי מדידת אורך האפידרמיס המתחדש באמצעות מיקרוסקופ Leica DMLS (10×), מצלמת Leica MC 170 HD CCD ותוכנת Leica LAS V4.9 (Leica Microsystems, וצלאר, גרמניה). הכימות בוצע בצורה עיוורת.

מחקרים in vivo I ו-II

עבור שני מחקרים in vivo, ההמלצות של הגרסה הנוכחית של הצהרת הלסינקי והקו המנחה של הוועידה הבינלאומית להרמוניזציה של שיטות קליניות טובות נצפו כמתאימות למחקר קוסמטי. פרוטוקול המחקר אושר על ידי ועדת האתיקה העצמאית פרייבורג (קוד feki 08/2610). בשני המחקרים, כל המתנדבים סיפקו הסכמה מדעת בכתב. לנבדקים היה עור בריא, השתייכו לסוג העור של פיצפטריק I עד III וההתחלה, או שינוי של תרופות הורמונליות, היו קריטריון אי-הכללה.

במהלך תקופת התניה מוקדמת של 10-יום ולאורך כל תקופת המחקר, נדרשו הנבדקים להימנע מחשיפה ל-UV באזורי הבדיקה. פעילויות מקדמות זיעה נאסרו 24 שעות לפני הערכות שנקבעו.

חוקר הדגים את היישום הנכון של תכשירים תוך שימוש בכמות התואמת את משטר טיפוח העור הרגיל של נבדקים.

מחקר I: קביעת חוץ וחי של רמות חלבון FN

מתוך 52 נבדקים שנרשמו למחקר מבוקר הרכב זה, 33 נבדקים השלימו את המחקר, ונתונים של 31 נבדקים (30-64 שנים, גיל ממוצע: 50.9 שנים) נכללו בניתוח הנתונים. נשירה התרחשה עקב מגיפת ה-SARS-CoV-2 ומסיבות אישיות (13 נבדקים) וכן עקב תגובות אי התאמה (חמישה נבדקים, שנגרמו על ידי טיפול ברטינול). תגובות אי התאמה בתיווך רטינול כמו גם בעיות דגימה גרמו למספר שונה של נבדקים שנבדקו עבור כל מצב (ראה תוצאות לפרטים).

שבעה ימים לפני הערכות שנקבעו, נאסר השימוש במוצרי טיפוח, חומרי ניקוי וסבונים על האמות. ביום הלימוד הראשון הוקמו ארבעה אזורי בדיקה על האמות הפנימיות. על שני אזורי בדיקה, שני ניסוחים של ורום הונחו כדי להכיל {{0}}.5 אחוזים בקוצ'יול או 0.15 אחוז רטינול, בהתאמה. בחוות דעת שפרסמה הוועדה המדעית לבטיחות צרכנים בשנת 2016, ריכוז הרטינול המיושם נחשב לטיפול קוסמטי [35]. בשני אזורי הבדיקה האחרים נעשה שימוש ברכב המתאים, או שהאזור נותר ללא טיפול. מיקום מקומות הטיפול הותמר. לאחר 4 שבועות של יישום פעמיים ביום של תכשירי בדיקה, חזרו המתנדבים למכון הבדיקה. בכל אזור בדיקה נוצרו שלוש שלפוחיות יניקה (בקוטר 7 מ"מ) כפי שתואר קודם [36, 37]. בקצרה, כוסות יניקה מותאמות אישית הונחו על אזורי הבדיקה והופעל ואקום של 550-850 mbar. לאחר כ-90-150 דקות, כאשר נוצרו שלפוחיות יניקה, הוואקום שוחרר, והנוזל נשאב מהשלפוחית ​​באמצעות מחט 24-. נוזלים הוקפאו מיד ב-80 מעלות על קרח יבש עד לניתוח. רמות חלבון FN כומתו בדגימות נוזלי שלפוחיות יניקה באמצעות ערכת ELISA זמינה מסחרית (R&D Systems). המדידות בוצעו באמצעות Spark multimode microplate reader (Tecan). רמות FN נורמלו לרמות החלבון הכוללות של דגימות נוזל שאיבה שלפוחית ​​שנקבעו כאמור.

מחקר II: קביעת שיפור במצב העור ב-vivo

בסך הכל, 43 מתנדבות נרשמו למחקר השוואת פנים מפוצלות זה מבוקר רכב. על פי הערכות רפואיות, הנבדקים הראו סוגי עור מעורבים (עור יבש, רגיל, שמן ומעורב). 34 נבדקים (39-66 שנים, גיל ממוצע: 56.2 שנים) השלימו את המחקר ונכללו בניתוח. נשירה נגרמה כתוצאה מבעיות טכניות ואי התאמה (שמונה נבדקים), וכן מתגובות אי התאמה (נושא אחד, שנגרם מטיפול ברכב ובקוצ'יול).

שבועיים לפני תחילת המחקר ובמהלך כל תקופת המחקר, נדרשו המתנדבים להימנע משימוש במוצרי שיזוף עצמי או טיפולים קוסמטיים אינטנסיביים לפנים (למשל הסרת שכבות עור שטחיות). במהלך תקופת ההתניה המוקדמת של 10-היום ולאורך כל המחקר, הנבדקים התבקשו להימנע מביצוע איפור קבוע, טיפולי ריסים וגבות, מסכות עיניים ומדבקות. שלושה ימים לפני ההערכה הראשונה, הנבדקים התבקשו להימנע משימוש במוצרי טיפוח לפנים. בערב שלפני הציון המתוכנן, נדרשו הנבדקים להפסיק את היישום של מוצרי קוסמטיקה דקורטיביים.

ב-7 הימים הראשונים של שלב המיזוג המוקדם של ה10-יום, הנבדקים קיבלו צנצנת קרם המכילה את קרם הרכב הלימודי (חסר כל מידע על התוכן) ומרחו אותו פעמיים ביום על כל הפנים שלהם. בתחילת הדרך, המתנדבים ביצעו דירוג עצמי. במיוחד, הם העריכו ויזואלית את המראה הכללי של עור הפנים שלהם על ידי התבוננות ברעננות ובזוהר שלו וכן בכל סימני הזדקנות העור. לפיכך הוחל סולם אנלוגי ויזואלי שנע בין 1 (מאוד עייף, מיושן) ל-10 (טרי מאוד, ללא סימנים של עור מבוגר). לאחר מכן, הנבדקים קיבלו שתי צנצנות שמנת עיוורות המכילות את הוורום (רכב המכיל 0.5 אחוז באקוצ'יול) או את הרכב, בהתאמה, ללא כל מפרט על התוכן. במהלך תקופת המחקר של 12 שבועות, צד פנים אחד טופל פעמיים ביום עם verum בעוד שצד הפנים השני טופל פעמיים ביום עם הרכב. הקצאת הטיפולים לאתרי הבדיקה הותמרה. לאחר 12 שבועות של שימוש קבוע, המתנדבים ביצעו שוב את הדירוג העצמי כאמור.

ניתוח סטטיסטי

ניתוחים סטטיסטיים בוצעו באמצעות Microsoft Excel עבור Office 365 (Microsoft Corporation, Redmond, וושינגטון, ארצות הברית), SAS Software Package עבור Windows V9.4 (SAS Institute GmbH, Heidelberg, גרמניה) ו-GraphPad Prism V8 (GraphPad Software, San Diego , קליפורניה, ארצות הברית).

ההתפלגות הנורמלית של הנתונים הוערכה באמצעות בדיקת Shapiro–Wilk. אם אושרה ההתפלגות הנורמלית, בוצע ניתוח מדידה חוזרת של שונות (RM-ANOVA) עם השוואה פוסט הוק זוגית. אם השערת הנורמליות נדחתה, הדרגות שעברו טרנספורמציה של Blom של הנתונים המקוריים הוערכו באמצעות RM-ANOVA עם השוואה פוסט-הוקית זוגית, או שהנתונים המקוריים הוערכו באמצעות מבחן דירוג סימנים של Wilcoxon. כל הבדיקות הסטטיסטיות היו דו-צדדיות ברמת מובהקות של אלפא=0.05.

תוצאות

מחקרים במבחנה

קביעת השפעות נוגדות חמצון

כדי לנתח את (i) ההשפעות נוגדות החמצון של בקוצ'יול ורטינול, ביצענו שני מבחנים שונים באמצעות DPPH כמולקולת גלאי.

יכולת נוגדת חמצון

היכולת נוגדת החמצון נקבעה על ידי מדידת הפחתת DPPH באמצעות ריקבון הספיגה שלו. ה-Trolox בסטנדרט גבוה הראה יכולת נוגדת חמצון מוגברת משמעותית ביחס לבקרה (p=0.0000 עבור כל נקודות הזמן המצוינות) המאמת מדידה נכונה (איור 2א). לגבי הביקורת, הספיגה בדגימות שטופלו בבאקוצ'יול הופחתה באופן משמעותי גם בכל נקודות הזמן שנחקרו (10 דקות: p=0.0003, 30 ו-60 דקות: p=0.0000 ) המדגים יכולת נוגדת חמצון מוגברת. לעומת זאת, רטינול לא הראה יכולת נוגדת חמצון משמעותית בהשוואה לביקורת.

【למידע נוסף:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】