ניתוחים מורפולוגיים של ביטוי נפרין בגלומרולונפרופתיה מתקדמת

איש קשר:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

תַקצִיר:

במחקר זה התמקדנו בנפרין, אחת ממולקולות המפתח בסרעפת החריצים של פודוציטים, שכן למרות שהיו דיווחים על הביטוי שלו בבני אדם וחולדות, לא דווח על נוכחותם במרמוסטים נפוצים. חקרנו ביטוי נפרין ושינויים בגלומרולי, בהתאם להתפתחות של גלומרולונפרופתיה פרוגרסיבית ספונטנית במרמוסטים נפוצים. 19 מרמוסטות נפוצות בגיל שנתיים עד עשר הוערכו. הכליה נבדקה במיקרוסקופיה עם המטוקסילין ואאוזין וצביעה אימונוהיסטוכימית עבור נפרין. הנגעים סווגו לשלוש דרגות על פי מערכת דירוג נגעים כלייתית שדווחה בעבר. האזור החיובי לנפרין נמדד בניתוח מורפומטרי, וחושב היחס חיובי לנפרין. ביטוי נפרין נצפה לאורך לולאת הנימים הגלומרולרית בתבנית ליניארית מתמשכת בדרגות נגעים כליות 0 עד 2 ובדפוס ליניארי או גס לא רציף בדרגה 3. ביטוי נפרין נטה לרדת באופן משמעותי בהתאם לדרגת הנגעים הכלייתיים . הוצע לשינוי בביטוי הנפרין תפקיד חשוב בהתקדמות של נגעים בכליות.

מילות מפתח:נפרין, מרמוסט,גלומרולונפרופתיה, כִּליָה, פָּתוֹלוֹגִיָה

הטבות cistanche במדברוצמח Cistancheהוא טוב עבורכִּליָה

מבוא

גלומרולונפרופתיה מתקדמת ספונטנית במרמוסים נפוצים (Callithrix jacchus) ידועה כמתרחשת לעתים קרובות החל מגיל שנתיים, כאשר חומרת הנגע מתקדמת עם הגיל. דיווחנו בעבר על נגעים ראשוניים ומתקדמים של נפרופתיה במרמוסים נפוצים1. שינויים גלומרולריים ראשוניים של נפרופתיה בשלבים מוקדמים מאופיינים בהכחדת תהליכי כף הרגל של פודוציטים ועיבוי חלקי של קרום הבסיס הגלומרולרי, הנראה כגורם לדליפת חלבון מהגלומרולי, וניתן לצפות בהם באולטרה מיקרוסקופיה אך לא במיקרוסקופ אור1-3. יתר על כן, אימונוגלובולין ממלא תפקיד חשוב בהתקדמות של נפרופתיה1, 2. IgM מופקד על המזנגיום בשלב מוקדם של גלומרולונפרופתיה, ובעקבות השקיעה הראשונה של IgM, אזור ההפקדה מתרחב לכל הגלומרולוס, ו-IgA ו-IgG הם הופקד עם התקדמות2. ניתן לראות יציקות Hyaline המצביעות על דליפת חלבון מהגלומרולי במיקרוסקופ אור עם התקדמות הגלומרולונפרופתיה4. פרוטאינוריה מחמירה את ההתקדמות של נגעים טובולו-אינטרסטיציאליים במרמוסים נפוצים4, כמו בבני אדם5, 6, ובמחקר שנערך לאחרונה על הגלומרולי, פרוטאינוריה עשויה להיגרם על ידי הפרעות בסרעפת השסע, ובכך מקשרת בין תהליכי כף הרגל הסמוכים (פדיצילים) של פודוציטים. דיאפרגמת החריץ היא קומפלקס צומת בין-תאי הקיים בין תהליכי כף הרגל סמוכים, וזוהו כמה מולקולות הקשורות להיווצרותה3. ירידה בביטוי של מולקולות אלו או חוסר תפקוד של הסרעפת השסע נחשבה קשורה להתקדמות של פרוטאינוריה3. נפרין, אחת ממולקולות המפתח המתבטאות בסרעפת החריצים של פודוציטים, היא גליקופרוטאין המורכב מ-1241 חומצות אמינו ומהווה סמן ביולוגי ידוע המשמש לניטור ההפרעה בסרעפת השסע7-10. מולקולות הקשורות לסרעפת חריצים לא נחקרו בנפרופתיה של מרמוסטות נפוצות, אם כי ידוע ששינוי בתהליכי כף הרגל של פודוציטים והתקדמות פרוטאינוריה מתרחשים בהן. יתרה מכך, היו דיווחים על ביטוי של נפרין בבני אדם וחולדות 7-12 אך לא במרמוסטים. לכן, חקרנו ביטוי נפרין בגלומרולי ושינויים בביטוי נפרין, בהתאם להתקדמות הנגע, על ידי ניתוחים אימונוהיסטוכימיים.

cistanche tcm

חומרים ושיטות

חיות

מחקר זה אושר על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים של המוסד המרכזי לחיות ניסוי (CIEA; קוואסאקי, יפן) ובוצע בהתאם לתקנות לניסויים בבעלי חיים של ה-CIEA המבוססות על ההנחיות להתנהלות נכונה של ניסויים בבעלי חיים (מועצת המדע של יפן, 2006). הוערכו 19 מרמוסטות נפוצות (11 זכרים ו-8 נקבות) מ-CLEA Japan Inc. (טוקיו, יפן). גילם נע בין שנתיים ל-10 שנים בזמן הנתיחה. החיות שוכנו בכלובים בחדר בעלי חיים שנשמר בטמפרטורה של 26 ± 3 מעלות ולחות של 55 ± 20 אחוזים. הם הוזנו ב-LCMS-1M (CLEA Japan Inc., טוקיו, יפן) ובמי ברז. החיות הוקרבו באופן אנושי תחת הרדמה עם נתרן פנטוברביטל עקב סיבות שונות למות (כגון סינטקסיס, עקמומיות של חוליות מותניות, פריקת מפרק הלסת התחתונה וכו'). לא בוצעה בדיקת שתן מכיוון שלא ניתן היה לדגום שתן.

היסטופתולוגיה

הכליותהוזלו במי מלח, ואחריו 4 אחוז פרפורמלדהיד, ולאחר מכן קבועים בפורמלין נייטרלי מבוצר של 10 אחוז לבדיקה מיקרוסקופית. הדגימות הוטבעו בפרפין, נחתכו בעובי של 5 מיקרומטר, והוצבעו בהמטוקסילין ואאוזין (HE). הנגעים סווגו כנגעים גלומרולריים, צינוריים ואינטרסטיציאליים בהתבסס על קריטריונים שפורסמו1. דרגות נפרופתיה חולקו לארבע קבוצות: דרגה 1 (3 זכרים ונקבה אחת), דרגה 2 (3 גברים ו-5 נשים), דרגה 3 (זכר אחד ו-3 נקבות) ודרגה 4 (3 גברים) (טבלה 1).

עבור אימונוהיסטוכימיה, נוגדן חד שבטי נגד התחום החוץ תאי ממקור אנושינפרין(1:1,000, נפריןg{{0}}, Santa Cruz Biotechnology, Inc., Dallas, TX, ארה"ב) שימשה כנוגדן העיקרי. קטעי ה-5-מיקרומטר עברו דה-פראפין, הוזרמו מחדש, טופלו ב-3% מי חמצן בטמפרטורת החדר למשך 5 דקות, ולאחר מכן חוממו באוטוקלאב ב-121 מעלות למשך 20 דקות בתמיסת אחזור יעד (pH 6.0, Dako, Glostrup, דנמרק). לאחר הקירור, החתכים הודגרו עם הנוגדן הראשוני ב-4 מעלות למשך הלילה. פולימר IgG אנטי עכבר מצומד פרוקסידאז (Histofine Simple Stain Rat MAX-PO(MULTI), Nichirei Bioscience Inc., טוקיו, יפן) שימש כנוגדן משני לשיטה המבוססת על פולימרים13. המקטעים הודגרו עם הנוגדן הפולימרי המשני בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות והתוצרים המגיבים הודגמו באמצעות 3,3'-diaminobenzidine ככרומוגן. צביעה נגדית בוצעה עם המטוקסילין. עבור הביקורת השלילית, הנוגדן הראשוני הושמט.

ניתוח מורפולוגי

לניתוח מורפולוגי, הגלומרולי עם ההילום הגלומרולרי הוגשו לבדיקה, ו-16 עד 28 גלומרולים נלכדו על כל שקף (טבלה 1) באמצעות סורק שקופיות שלם (Aperio AT2, Leica Microsystems Inc., Buffalo Grove, IL, ארה"ב) ותוכנה מתאימה לצפייה בשקופיות פתולוגיות (Aperio ImageScope, Leica Microsystems Inc.) באותה רזולוציה וגודל תמונה.נפריןאזורים חיוביים ושלמים של גלומרול חושבו באמצעות תוכנת ניתוח תמונה (Image-Pro V10, Mediacybenetics Inc., Rockville MD, ארה"ב) על ידי ציור אזור מעניין סביב הגלומרולוס, על פי דוח קודם14. כל האזור הגלומרולרי הוגדר כאזור שניתן להבחין בו מהרקע הלבן. ספי הצבע לחישובנפריןאזורים חיוביים נקבעו בהתאם לכל מצב צביעה. הספים לאדום, ירוק וכחול היו 37–67, 31–77 ו-32–88, בהתאמה. היחס החיובי לנפרין חושב על ידי חלוקת המדידות של ה-נפרין-אזור חיובי מעל האזור הגלומרולרי. ניתוח סטטיסטי בוצע באמצעות מבחן Jonckheere (רמת מובהקות: 5 אחוז, מבחן חד-צדדי) כדי להעריך את המגמה בין דרגת נפרופתיה לביטוי שלנפרין.

costanche

תוצאות

הציונים הפתולוגיים והדרגות של נגעים כלייתיים בודדים מוצגים בטבלה 1. כפי שדווח בדוח הראשון שלנו1, דרגת הנגע נטתה לעלות עם הגיל ולא היה הבדל מיני ברור. התוצאות של צביעה אימונוהיסטוכימית שלנפריןמוצגים באיור 1, והנפריןיחס חיובי מוצג באיור 2 ובטבלה 1. בין הציונים והציונים בטבלה 1, דרגת הנגע הכלייתי, הנגזרת מהציון הכולל של כל נגע כלייתי, וציון גבס היאליין שימשו להשוואה עםנפריןיחס חיובי (איור 2 ו-3). מקרים בודדים בטבלה 1 מוצגים בסדר עולה של דרגת הנגע הכלייתי. ביטוי נפרין נצפה יחד עם הלולאה הנימית הגלומרולרית בדפוס ליניארי רציף בדרגות 0 עד 2 (איור 1A-C) ותבנית ליניארית או גרגירית בלתי רציפה בדרגות 3 (איור 1D). בדגימת הבקרה השלילית, אין תגובה חיובית עבורנפריןנצפה בכל אתר.

ההשוואה של הנפריןיחס חיובי לדרגת נגע כלייתי מוצג באיור. 2. במקרים בדרגת נגע כליות 0, הממוצע ± סטיית התקן (SD) שלנפריןיחס חיובי היה 5.66 ± 1.18 אחוזים, והערכים המקסימליים, המינימליים והחציונים היו 6.84 אחוזים, 4.27 אחוזים ו-5.76 אחוזים, בהתאמה. במקרים של דרגה 1, הממוצע ± SD היה 3.99 ± 1.61 אחוזים, והערכים המקסימליים, המינימליים והחציוניים היו 5.69 אחוזים, 1.19 אחוזים ו-4.35 אחוזים, בהתאמה. במקרים של דרגה 2, הממוצע ± SD היה 3.82 ± 2.25 אחוזים, והערכים המקסימליים, המינימליים והחציונים היו 6.71 אחוזים, 1.58 אחוזים ו-3.49 אחוזים, בהתאמה. במקרים דרגה 3, הממוצע ± SD היה 2.52 ± 1.02 אחוזים, והערכים המקסימליים, המינימליים והחציוניים היו 3.67 אחוזים, 2.17 אחוזים ו-2.17 אחוזים, בהתאמה. באופן קולקטיבי, הבדלים אינדיבידואליים בביטוי נפרין היו קטנים במקרים של דרגה 0, אך גדולים במקרים של דרגה 1 ומעלה, וביטוי חיובי נמוך זוהה באופן ספורדי.נפריןהביטוי נטה לרדת בהתאם לדרגת הנגעים הכלייתיים (איור 2). הייתה מגמה נמוכה משמעותית בין דרגת הנגע הכלייתי לביןנפרין-יחס חיובי לפי מבחן Jonckheere (p=0.0166). ציון הגבס ההיאליני בהשוואה לדרגת הנגע הכלייתי מוצג באיור 3. במקרים עם ציון הגבס ההיאליני של 0, הממוצע ± SD של יחס חיובי של נפרין היה 5.40 ± 1.32 אחוזים, במקרים של ציון 1 הוא היה 4.10 ± 1.70 אחוזים, ובציון 2 מקרים, זה היה 3.37 ± 1.98 אחוזים. הייתה מגמה נמוכה משמעותית בין ציון הגבס ההיאליני לבין היחס החיובי של נפרין לפי מבחן Jonckheere (p=0.0654).

דִיוּן

ירידה בנפרין הייתה בקורלציה עם התקדמות הנגעים הכלייתיים במהלך התפתחות של מרמוסט גלומרולונפרופתיה. הנוגדן האנטי-נפרין בשימוש במחקר זה זיהה את התחום החוץ-תאי בצד ה-N-טרמינלי. תחום חוץ תאי זה יוצר אינטראקציה עם מולקולות NEPH1 ויוצר מבנה דמוי רוכסן בתוך הסרעפת החריץ15. לוקליזציה של נפרין בגלומרולי נורמליים היא לאורך הלולאה הנימית הגלומרולרית ותבנית הצביעה היא תבנית ליניארית של גרגירים עדינים מתמשכים הן בחולדות והן בבני אדם11, 12, 16-18. הצביעה שבוצעה במחקר זה מתאימה; מה שאושר על ידי התצפית שדפנות הנימים במגע עם האזור המזנגיאלי לא נצבעו, בעוד אלו שהיו במגע עם הפודוציטים היו. בתנאים חריגים, כגון תסמונת נפרוטית בבני אדם או נפרוזיס אמינונוקלאוזיד פורומיצין בחולדות, דפוס הצביעת הנפרין בגלומרולי הוא בלתי רציף וגרגירי גס, ועוצמת הצביעה האימונוהיסטוכימית חלשה יותר מאשר בגלומרולי רגילה11, 16, 17 במחקר הנוכחי. , דפוס הביטוי הנפרין בכיתות 0 עד 2 היה תקין; עם זאת, דפוס הצביעה בדרגות 3 היה דומה לזה של מצבים חריגים. בחקירה קודמת של ביטוי נפרין גלומרולרי ב-Crl: חולדות CD(SD) עם מחלת שינוי מינימלית, ביטוי נפרין היה שלם, למרות שתהליכי כף הרגל של פודוציטים הראו כיסוק במיקרוסקופ אלקטרוני ללא שינויים מורפולוגיים ברורים שנצפו במיקרוסקופ אור18. במחלת הכליות הנפוצה של חולדות, נפרופתיה מתקדמת כרונית (CPN), הוכח שאלבומינוריה המלווה ב-CPN בשלב מוקדם עשויה לגרום לפחות שינויים בחדירות הגלומרולרית כתוצאה מכשל בספיגה חוזרת של אלבומין מהאבובים הפרוקסימליים19. בבני אדם, היו כמה מחקרים על הפחתה של ביטוי נפרין בשינויים קלים10 או במחלות כליה אחרות14, 16. מצד שני, היה דיווח על ביטוי נפרין שלם בנפרוזה מינימלית של שינוי20. נוכחות או היעדרו של שינוי בביטוי של נפרין במחלה נפרוטית של שינוי מינימלי עדיין נידונים. למעשה, היה קשה לאשר את העלייה או הירידה של תגובת הנוגדנים של נפרין על ידי תצפית חזותית בנפרופתיה של מרמוסט, אך ניתן היה לזהות את השינוי בכליה כולה על ידי ניתוח תמונה. החקירה שלנו מציעה שהחריגה של דיאפרגמות חריצים של הגלומרולוס עשויה להיות מעורבת בהתקדמות של נפרופתיה במרמוסטים נפוצים עקב ירידה בנפרין. הטרנספורמציה של דפוס הצביעה החיובי של נפרין, מהדפוס ליניארי לדפוס הגרגירי, דווחה במודל חיה של חולדה של מחלה נפרוטית במהלך התפתחות הנגע 11, 16, 21. יש קשר בין חריגות בקרום החריץ לבין פרוטאינוריה דווח לעתים קרובות22, 23; לפיכך, הועלתה השערה כי פרוטאינוריה עשויה להיגרם כתוצאה מתפקוד לקוי של הסרעפת. במחקר שלנו על נפרופתיה של מרמוסט, התקדמות חדירות החלבון הגלומרולרית כתוצאה מתפקוד לקוי של הסרעפת עשויה להתרחש מכיוון שהמאפיינים המורפולוגיים של גבס היאליני נצפו רק במקרים ללא שינויים tubulointerstitial. במחקר זה, לא נצפה הבדל מובהק סטטיסטית בין ציון השינויים המורפולוגיים של גבס ההיאלין לבין הירידה בביטוי הנפרין. עם זאת, ביטוי נפרין נוטה לרדת בהתאם לציון הגבס ההיאליני, המהווה אינדיקטור לבריחת חלבון מהגלומרולוס.

בחקירה הקודמת שלנו, מחיקה של תהליכי כף הרגל נצפתה בשלב מוקדם של נפרופתיה של מרמוסט ואזור תהליך כף הרגל הפגוע הורחב בהתאם לדרגת הנגע הכלייתי. טבלה 2 מציגה את הקשר בין שיעור ההפחתה של נפרין במחקר זה לבין ממצאי מיקרוסקופ אלקטרונים עבור כל דרגת נגע כלייתי ממחקר קודם. משערים שהמחיקה נובעת מהתמוטטות שלד האקטין של תהליכי כף הרגל24. נפרין עובר דה-פוספורילציה כאשר קרום החריץ נבנה, והוא נקשר לאקטין דרך CD2AP ו-podocin25, 26. כאשר סרעפת חריץ נפצעת, מולקולות נפרין מתקבצות, מה שגורם לזירחון נפרין, פילמור אקטין ותהליכי חיסול כף הרגל26. זרחון נפרין מתרחש גם במהירות בעקבות השראת ביטול תהליך כף הרגל במודל פרוטמין סולפט בעכברים27. נפרין הוא חלבון הידבקות גלומרולרי הקשור להתבגרות פודוציטים, התמיינות, היווצרות תהליך ואיתות24. החקירה שלנו הראתה כי קיים מתאם בין הפחתת ביטוי נפרין, כפי שנקבע על ידי אימונוהיסטוכימיה, לבין התקדמות בדרגת נגע כלייתי, דבר המצביע על הרחבה של מחיקת תהליכי כף הרגל של פודוציטים. עם זאת, לא ברור אם חריגות בתסביך חלבון הסרעפת גורמות לנזק לתהליכי כף הרגל של פודוציטים או שפגיעה בפודוציטים גורמת לשינויים בסרעפת הסרעפת והפחתת נפרין. מכיוון שנפרין מעורב גם בהתמיינות פודוציטים, סבורים שקשר זה יובהר עוד יותר על ידי נתונים על התחדשות והתמיינות של פודוציטים.

לסיכום, התוצאות שלנו מספקות מידע עלנפריןביטוי בגלומרולונפרופתיה מתקדמת במרמוסטים נפוצים. ניתוח מורפולוגי גילה מגמה נמוכה יותר שלנפריןביטוי בפודוציטים בגלומרולונפרופתיה מתקדמת של מרמוסטים נפוצים, ושינוי שלנפריןהוצע לביטוי תפקיד חשוב בהתקדמות של נגעים בכליות.

חשיפה של ניגודי עניינים פוטנציאליים:

המחברים מצהירים כי אין להם ניגוד עניינים.

הכרה:

המחברים רוצים להודות למר טקאיושי איטו על הסיוע הטכני המצוין שהם סיפקו. המחברים מודים גם לגב' קאנאי טמאצוקי ולמר ג'יימס הארדה על העריכה השפה של כתב היד.

סוטה

הפניות
1. Yamada N, Sato J, Kanno T, Wako Y, and Tsuchitani M. מחקר מורפולוגי של גלומרולונפרופתיה מתקדמת במרמוסים נפוצים (Callithrix jacchus). טוקסיקול פאתול. 41: 1106–1115. 2013.
2. Yamada N, Hashimoto N, Kamiie J, Doi T, Sato J, Inoue T, Shirota K, ו-Tsuchitani M. קשר בין שקיעת אימונוגלובולינים ונגעים מוקדמים של גלומרולונפרופתיה מתקדמת במרמוסים נפוצים צעירים. וטרינר פאתול. 55: 173–176. 2018.
3. Cara-Fuentes G, Clapp WL, Johnson RJ, ו-Garin EH. פתוגנזה של פרוטאינוריה במחלת שינוי מינימלי אידיופטית: מנגנונים מולקולריים. רופא ילדים נפרול. 31: 2179–2189. 2016.
4. Isobe K, Adachi K, Hayashi S, Ito T, Miyoshi A, Kato A, Suzuki M. נגעים ספונטניים גלומרולריים ו-tubulointerstitial במרמוסים נפוצים (Callithrix jacchus). וטרינר פאתול. 49: 839–845. 2012.
5. אדי א.א. פרוטאינוריה ופגיעה אינטרסטיציאלית. השתלת חוגה של Nephrol. 19: 277–281. 2004.
6. Hingorani S, Gooley T, Pao E, Sandmaier B, ו-McDonald G. ציטוקינים בשתן לאחר HCT: עדות לדלקת כליות בפתוגנזה של פרוטאינוריהכִּליָהמַחֲלָה. השתלת מח עצם. 49: 403–409. 2014.
7. Kestilä M, Lenkkeri U, Männikkö M, Lamerdin J, McCready P, Putala H, Ruotsalainen V, Morita T, Nissinen M, Herva R, Kashtan CE, Peltonen L, Holmberg C, Olsen
A, ו- Tryggvason K. גן משובט מיקום לחלבון גלומרולרי חדש--נפרין-- עובר מוטציה בתסמונת נפרוטית מולדת. מול תא. 1: 575–582. 1998.
8. Langham RG, Kelly DJ, Cox AJ, Thomson NM, Holthöfer H, Zaoui P, Pinel N, Cordonnier DJ, and Gilbert RE. פרוטאינוריה והביטוי של חלבון הסרעפת פודוציט, נפרין, בנפרופתיה סוכרתית: השפעות של עיכוב אנזים הממיר אנגיוטנסין. סוכרת. 45: 572–1576. 2002.
9. Welsh GI, ו-Saleem MA. מולקולת חתימת נפרין של הפודוציט הגלומרולרי? ג'יי פאתול. 220: 328–337. 2010.
10. van de Lest NA, Zandbergen M, IJpelaar DHT, Wolterbeek R, Bruijn JA, Bajema IM ו-Scharpfenecker M. אובדן Nephrin יכול לשמש כדי לחזות הפוגה ותוצאה כלייתית ארוכת טווח בחולים עם מחלת שינוי מינימלי.כִּליָהInt Rep. 3: 168–177. 2017.
11. Kawachi H, Koike H, Kurihara H, Yaoita E, Orikasa M, Shia MA, Sakai T, Yamamoto T, Salant DJ, and Shimizu F. שיבוט של נפרין עכברוש: ​​ביטוי בפיתוח גלומרולי ובמצבים חלבוניים.כִּליָהInt. 57: 1949–1961. 2000.
12. Luimula P, Ahola H, Wang SX, Solin ML, Aaltonen P, Tikkanen I, Kerjaschki D, and Holthöfer H. Nephrin במחלה גלומרולרית ניסיונית.כִּליָהInt. 58: 1461–1468. 2000.
13. Janardhan KS, Jensen H, Clayton NP, והרברט RA. אימונוהיסטוכימיה בפתולוגיה חקירתית וטוקסיקולוגית. טוקסיקול פאתול. 46: 488–510. 2018.
14. Koop K, Eikmans M, Baelde HJ, Kawachi H, De Heer E, Paul LC, and Bruijn JA. ביטוי של מולקולות הקשורות לפודוציטים באדם נרכשכִּליָהמחלות. J Am Soc Nephrol. 14: 2063–2071. 2003.
15. Gerke P, Huber TB, Sellin L, Benzing T ו- Walz G. Homodimerization והטרודימריזציה של חלבוני הפודוציטים הגלומרולריים נפרין ו-NEPH1. J Am Soc Nephrol. 14: 918–926. 2003.
16. Doublier S, Ruotsalainen V, Salvidio G, Lupia E, Biancone L, Conaldi PG, Reponen P, Tryggvason K, ו-Camussi G. חלוקה מחדש של Nephrin על podocytes היא מנגנון פוטנציאלי של פרוטאינוריה בחולים עם תסמונת נפרוטית נרכשת ראשונית. אם ג'יי פאתול. 158: 1723–1731. 2001.
17. Kawakami H, Kamiie J, Yasuno K, Kobayashi R, Aihara N, ו- Shirota K. דינמיקה של הכמות המוחלטת של נפרין בפודוציט בודד בחולדות נפרומיצין aminonucleoside nephrosis של פורומיצין מחושב על ידי גישה כמותית של פרוטאומיקה גלומרולרית עם מצב ניטור תגובה נבחר. השתלת חוגה של Nephrol. 27: 1324–1330. 2012.
18. יאסונו K, Honda K, Hakamata S, Kai K, ומורי K. מחלת השינוי המינימלי שלכִּליָהבחולדה צעירה של ספראג דאולי. J Toxicol Pathol. 31: 55–59. 2018.
19. אוברט LA, ופרייזר KS. מעורבות של מערכת רנין-אנגיוטנסין תוך-כלית בפתוגנזה של נפרופתיה מתקדמת כרונית, המגשרת על פער המידע בין דיסציפלינות. טוקסיקול פאתול. 47: 799–816. 2019.
20. Patrakka J, Ruotsalainen V, Ketola I, Holmberg C, Heikinheimo M, Tryggvason K, and Jalanko H. Expression of nephrin in pediatricכִּליָהמחלות. J Am Soc Nephrol. 12: 289–296. 2001.
21. Saran AM, Yuan H, Takeuchi E, McLaughlin M, ו- Salant DJ. המשלים מתווך חלוקה מחדש של נפרין ופירוק אקטין בנפרופתיה קרומית ניסיונית.כִּליָהInt. 64: 2072–2078. 2003.
22. Gagliardini E, Benigni A, Tomasoni S, Abbate M, Kalluri R ו-Remuzzi G. הורדה ממוקדת של נפרין חוץ-תאי בנפרופתיה IgA אנושית. Am J Nephrol. 23: 277–286. 2003.
23. Wakamatsu A, Fukusumi Y, Hasegawa E, Tomita M, Watanabe T, Narita I, and Kawachi H. Role of calcineurin (CN) inכִּליָהפודוציט גלומרולרי: מעכב CN שיפר פרוטאינוריה על ידי עיכוב הפיזור מחדש של CN בסרעפת החריץ. Physiol Rep. 4: e12679. 2016.
24. Garg P. סקירה של ביולוגיה של podocyte. Am J Nephrol. 47 (תוספת 1): 3–13. 2018.
25. Ichimura K, Kurihara H, ו- Sakai T. ארגון חוט האקטין של תהליכי כף הרגל בפודוציטים של חולדה. J Histochem Cytochem. 51: 1589–1600. 2003.
26. Ronco P. Proteinuria: האם הכל בכף הרגל? J Clin Invest. 117: 2079–2082. 2007.
27. Verma R, Kovari I, Soofi A, Nihalani D, Patrie K, and Holzman LB. מעורבות אקטודומיין של Nephrin מביאה להפעלת Src kinase, זרחון נפרין, גיוס Nck ופילמור אקטין. J Clin Invest. 116: 1346–1359. 2006.