מסלולים מולקולריים הקשורים לקידום אריכות ימים ושיפור קוגניטיבי של Cistanche Tubulosa ב-Drosophila
Mar 14, 2022
למידע נוסף:ali.ma@wecistanche.com
Wei-Yong Lin et al
תַקצִיר:
רקע כללי:תהליך ההזדקנות, כולל חוסר תפקוד פיזי והפרעות זיכרון הקשורות לגיל (AMI), נחשבים כמתואמים עם נזקי חמצון מצטברים ומסלולי האיתות של אינסולין/IGF-1. מטרה: המחקר הנוכחי היה להבהיר את ה-in vivo השפעות על עיכוב הזדקנות ושיפור AMI ומנגנונים מולקולריים בסיסיים שלCistanche tubulosa(CT), צמח המשמש ברפואה סינית מסורתית לשיפור התפקוד המיני ולטפל בתפקוד לקוי של הכליות
שיטות:הזבובים, מטופלים ולא מטופלים ב-CT(Cistanche Tubulosa), נצפו עבור תוחלת החיים, עמידות ללחץ חמצוני עם H2O2 או paraquat, בדיקת רעב, התנהגויות קוגניטיביות עם T-maze ורמות תמלול של גנים מכוונים עם RT-PCR כמותי.
תוצאות:מתן CT(Cistanche Tubulosa)האריכה את תוחלת החיים הממוצעת והמקסימלית והגדילה את העמידות ללחץ חמצוני בזבובים. CT(Cistanche Tubulosa)תוספת גם הגבירה את היווצרות הזיכרון בזבובים צעירים ודיכאה את ההזדקנות של AMIupon. מספר גנים ומסלולי איתות, כולל היעד המכניסטי של רשתות rapamycin (mTOR) ו-Notch, זוהו כגורמים להשפעות תרופתיות אלה ולשינויים בביטוי הגנים של קולטני גלוטמט.
סיכום:התוצאות שלנו מצביעות על כך ש-CT(Cistanche Tubulosa)תוספת עשויה לתרום להאטת פנוטיפים של הזדקנות ולהקלה על ירידה קוגניטיבית-התנהגותית בזבובים, מה שמצביע על ישימות פוטנציאלית לשיפור בריאות האדם והפחתת הרגישות להפרעות הקשורות לגיל.
מילות מפתח:הְזדַקְנוּת,Cistanche tubulosa,התנהגות קוגניטיבית, הרב
מבוא
ככל שהאוכלוסייה המבוגרת גדלה ברחבי העולם, הקלה על הזדקנות בריאה ואריכות ימים היא דאגה חיונית יותר ויותר לבריאות הציבור למדע, לחברה ולתחום הטיפול הרפואי. תהליך ההזדקנות הוצע כנשלט על ידי מנגנונים מורכבים, המונעים על ידי משחק גומלין רחב של גורמים גנטיים וסביבתיים. בגלל נזקים הדרגתיים ברמות התא והרקמות, הגיל מהווה גורם סיכון לרגישות למחלות כרוניות כמו סרטן וכן למחלות לב וכלי דם ונוירודגנרטיביות (Kenyon, 2005). ההזדקנות גם מפחיתה פעילות סינפטית, סינתזת חלבון חדש ותפקוד קוגניטיבי. שינויים תפקודיים אלו תורמים להפרעות זיכרון הקשורות לגיל (AMI) (Burke and Barnes, 2010; Schimanski andBarnes, 2010). לכן, פיתוח תרופות לעיכוב פתולוגיה הקשורה לגיל והזדקנות קוגניטיבית עשוי להיות מועיל לאיכות החיים של האדם. במחקר זה, השתמשנו ב- Drosophila melanogaster, שהוא אורגניזם אידיאלי למחקרי הזדקנות in vivo בגלל תוחלת החיים הקצרה שלו, כדי להעריך את יעילות התרופה ולחקור את המנגנונים המולקולריים העומדים בבסיס השיפור של ההזדקנות וה- AMI.
הרבהcistanche, הידוע גם בשמו הסיני Rou CongRong, הוא צמח טפיל המופץ בעיקר במדבריות צפון מערב סין. שני מיני Cistanche, Cistanche deserticolaY. סי מא וCistanchetubulosa(Schrenk) Wight נכללים בפרמקופאה הסינית (מהדורת 2005) בשל המרכיבים הכימיים הדומים שלהם ופעילותם הפרמקולוגית. תמצית הגזע שלהם הייתה בשימוש נרחב במשך אלפי שנים כתרופה טוניקית, בעיקר לטיפול בתסמינים שונים, כולל תפקוד כליות לקוי, אימפוטנציה, אי פוריות ולהקלה על קתרזיס, כפי שמתואר בספרי רפואה סיניים עתיקים. מרכיבים כימיים רבים, כולל שמנים אתריים, פנילתנואידים גליקוזידים (PhGs), אירידואידים, ליגנאנים וסכרידים, בודדו מCistancheמינים, ושני מרכיבי PhG עיקריים, acteoside, andechinacoside נבחרים בדרך כלל כסמנים להערכת האיכות של Herba cistanche בגלל הפעולות הפרמקולוגיות המשמעותיות שלהם (Wang et al., 2012).
Cistanche tubulosaלתמציות (CT) יש פונקציות ביולוגיות שונות הכוללות מווסת פעילות חיסונית, שיפור התפקוד המיני, קידום צמיחת שיער ויתרונות אחרים על נוגדי חמצון, הגנת הכבד, פעילות אנטי-אוסטיאופורטית ואנטי-גידול (Li et al., 2016; Seok et al., 2015 Wang et al., 2012). בנוסף, מחקר במבחנה גילה כי הרבהcistancheתמצית יכולה להגן על נוירונים דמויי דופמין מנזק חמצוני המושרה על ידי H2O2- ולהגביר באופן משמעותי את רמות גורם הגדילה העצבי וגורם נוירוטרופי שמקורו במוח (Lin et al., 2013). Echinacoside מנע מוות של נוירון דופמין במודל העכבר הפגוע ב-MPTP של מחלת פרקינסון (Zhao et al., 2010). יתר על כן, CT(Cistanche Tubulosa)תמצית שיפרה את התפקוד הקוגניטיבי באמצעות הפחתת שקיעת עמילואיד והעלאת רמות אצטילכולין ודופמין במודל עכברוש של מחלת אלצהיימר (AD) (Wu et al., 2014). למרות ההשפעה הטיפולית של הרבהcistancheעדיין נדרש לאשר, בגודל קטן, ניסוי קליני לא מבוקר פלצבו ב-CT(Cistanche Tubulosa)תמציות גליקוזידים הראו כי לתרופה יש פוטנציאל לטפל בחולים עם AD קלה עד בינונית והיא עם תגובות לוואי קלות יחסית, גם לאחר מתן ארוך טווח (Guo et al., 2013). נתונים אלה מצביעים על כך שתמציות גליקוזיד ב-Herbacistancheיש השפעות נוירו-פרוקטטיביות ואנטי-דמנציה. למרות יתרונות שונים של CT(Cistanche Tubulosa)המנגנונים המולקולריים וההשפעות שלו על עיכוב ההזדקנות ושיפור AMI לא הובהרו. במחקר זה, ההשפעות של CT(Cistanche Tubulosa)על הארכה משמעותית של תוחלת החיים נבדקו עמידות משופרת ללחץ סביבתי, ותפקוד קוגניטיבי מדוכא הקשור לגיל כדי לקבוע את התועלת הקלינית האפשרית של CT(Cistanche Tubulosa)בהאטת תהליך ההזדקנות.
חומרים ושיטה
תרופה צמחית
זיהוי המקור שלCistanche tubulosa(Schrenk) Wight(Orobanchaceae) (CT) אומתה ב-Ko Da PharmaceuticalCo. Ltd. (Taoyuan, טייוואן), שם נשמרו דגימות שובר (10,603,205) ומיוצרת רפואת הצמחים המרוכזת ב-CT. בקצרה, הגבעול הבשרני המיובש של CT חולץ במים רתוחים 12- פי כמה במשך שעה אחת ולאחר מכן סינון. התסננים נאספו והועברו לוואקום ולריכוז בלחץ מופחת למשך שעה אחת כדי לקבל תמציות. תמציות ה-CT עורבבו עם עמילן ביחס של 1:1 (w/w) והועברו לגרגר ריסוס להשגת אבקת CT.
תחזוקת מלאי זבובים ומדידות תוחלת חיים
קו הזבובים מהסוג הבר בו נעשה שימוש במחקר זה היה של CantonS, שהתקבל ממרכז המניות של בלומינגטון תסיסנית. הזבובים הועלו ונשמרו בחומר סטנדרטי של קמח תירס ב-25 מעלות בלחות יחסית של 50-60 אחוזים במחזור של 12-שעות בהיר-חושך. זבובים בוגרים מתעוררים נאספו תוך 24 שעות והופרדו לפי מין. מהבגרות המוקדמת, זבובים נוספו עם CT. CT(Cistanche Tubulosa)אבקה הומסה במים והוספה לאמצעי קמח תירס בריכוזים של 5.4,10.8 ו-21.6 מ"ג/מ"ל, שהיו פרופורציונליים למינון היומי האפקטיבי למתן אוראלי בבני אדם. בניתוח תוחלת חיים, עשרים עד שלושים זבובים גידלו בבקבוקון מזון עם או בלי CT(Cistanche Tubulosa); לפחות 250 זבובים בוצעו עבור כל טיפול. בקבוקוני מזון הוחלפו כל 3 עד 4 ימים, וזבובים מתים נספרו באותו זמן
מבחני עמידות ללחץ
זבובים בוגרים נאספו, ולאחר מכן טופלו מראש עם דיאטת ביקורת ללא CT(Cistanche Tubulosa)ודיאטות ניסיוניות בתוספת 5.4, 10.8 ו-21.6 מ"ג/מ"ל של CT למשך 20 ימים ב-25 מעלות. לצורך ניתוח רעב, זבובים הוחזקו בבקבוקונים עם ניירות רטובים בלבד והעריכו את הסיבולת שלהם נגד מתח חמצוני שנגרם כתוצאה מרעב. עבור מבחני עקה חמצונית, הזבובים הועברו לבקבוקונים נטולי מזון המכילים נייר סינון עם מי חמצן (H2O2) (Sigma Aldrich) בתמיסת גלוקוז של 5 אחוזים כדי לאמוד את עמידות הזבובים בפני H2O2-רדיקל הידרוקסיל (OH) -) לחץ. באופן דומה, זבובים הועברו לבקבוקונים המכילים נייר סינון רווי ב-10 מ"מ פראקווט (Sigma-Aldrich), אשר יוצר אניונים סופראוקסיד (O2 -) הגורמים נזק חמצוני לבעלי חיים. זבובים קיבלו ניקוד על תמותה לפחות שלוש פעמים ביום עד שכולם מתו. בוצעו לפחות 250 זבובים לכל טיפול. לצורך טיפוס, למשל, זבובים שנחשפו לפרקוואט במשך 0 ו-16 שעות הונחו בבקבוקון פלסטיק והוצמדו בעדינות לתחתיתם. מספר הזבובים בחלק העליון של הבקבוקון נספר לאחר 18 שניות של טיפוס.
הערכת פוריות
זכרים ונקבות בתולים שניזונו ב-5.4 ו-10.8 מ"ג/מ"ל של CT(Cistanche Tubulosa)במשך 20 ימים שימשו כקבוצות ניסוי. עשר נקבות ניסוי הזדווגו עם מספר שווה של זכרים בתולים, שהיו 9-בני יום ולא עברו CT. באופן דומה, זכרי הניסוי הזדווגו עם נקבות בתולות באותו מצב. לאחר מכן הועברו הזבובים הנשיים לבקבוקון חדש להטלת ביצים למשך 24 שעות, וסך הביצים שהוטלו בבקבוקונים נספרו באופן ידני. אינדקס פוריות חושב כממוצע ייצור הביצים היומי לנקבה. בוצעו לפחות חמישה בקבוקונים לכל טיפול, ובסך הכל זבובים n=50–80.
למידה אסוציאטיבית וזיכרון חוש ריח
זבובים נאספו לאחר הגלימה וטופלו מראש עם 5.4, 10.8 ו-21.6 מ"ג/מ"ל של CT(Cistanche Tubulosa)שימשו כקבוצות ניסוי, וזבובי הביקורת לא עברו CT(Cistanche Tubulosa)למשך 5 ו-20 ימים ב-25 מעלות. ניסוי אימון בודד בוצע על פי מחקר קודם (Dubnau et al., 2001). בקצרה, כ-100 זבובים נחשפו ברצף לשני ריחות, או 3-אוקטנול (OCT, Sigma-Aldrich) או 4-מתיל cyclohexanol (MCH, Sigma-Aldrich). זבובים שנחשפו לריח הראשון (גירוי מותנה, CS פלוס ) צווו עם מכות חשמל של 80V ולאחר מכן קיבלו ריח שני (CS-) ללא זעזועים. יכולת הלמידה נקבעה מיד לאחר האימון והיכולות של 3- ו-{{ הזיכרון של 12}} שעות ביצע את הבדיקות לאחר האימון במשך 3 ו-24 שעות, בהתאמה. כדי לבצע את הבדיקה, הזבובים המאומנים נלכדו בנקודת הבחירה של מבוך T שבו הם נחשפו בו זמנית ל-OCT ו-MCH. מדד ביצועים (PI) חושב כדי לייצג את ההימנעות מריח מותנה. PI של אפס הצביע על התפלגות 50:50, ו-API של 100 הראה התפלגות של 0:100 הרחק מהריח של CS פלוס.
מדידות של רמות תמלול באמצעות PCR כמותי בזמן אמת (qPCR)
זבובים נאספו לאחר הגלימה וטופלו מראש עם 5.4 ו-10.8 מ"ג/מ"ל של CT(Cistanche Tubulosa)במשך 20 ימים ב-25 מעלות שימשו כקבוצות ניסוי, וזבובי הביקורת לא קיבלו CT. ה-RNA הכולל הוצא באמצעות ערכת RNeasy Mini (Qiagen), ו-cDNA הופק מכלל ה-RNA באמצעות תגובת שעתוק הפוכה על ידי שימוש בשעתוק הפוך של cDNA בעל קיבולת גבוהה (Thermo Fisher Scientific). רמות התמלול של גני המטרה נכמתו באמצעות תגובת שרשרת כמותית של פולימראז בזמן אמת (Applied Biosystems ViiATM 7 Real-Time PCR System) באמצעות FastStart SYBR Green Master (Roche) לפי הוראות היצרן. שפע התמלילים היחסי נורמלו באמצעות שיטת סף המחזור ההשוואתית עם גן ahousekeeping, RpLP0, כסטנדרט הפנימי. הבדלי הביטוי היחסיים בגני המטרה של קבוצות הניסוי נורמלו לאלו של קבוצת ביקורת והוצגו כשינוי כפול. הפריימרים של גני המטרה מפורטים בטבלה משלימה 1.
בניית רשת וניתוח
כדי לנתח את הפרשנות הפונקציונלית והתהליכים הביולוגיים המתווכים על ידי הגנים המבוטאים בצורה דיפרנציאלית שזיהינו, נעשה שימוש במסד הנתונים להערה, ויזואליזציה וגילוי משולב (DAVID) לביאור ולנתח את ההעשרה של המסלול והגנים של קיוטו באנציקלופדיה של גנים וגנום (KEGG). אונטולוגיה לגנים אלה (Jiao et al., 2012). כדי לנתח את האינטראקציות הישירות והעקיפות של גנים מבוטאים בצורה דיפרנציאלית, רשימת הגנים הועלתה גם ל-Search Tool for the Retrieval of Interacting Gene/Proteins (STRING) כדי לאחזר את מידע האינטראקציה וליצור רשתות אינטראקציה חלבון (Franceschini et al., 2013).
ניתוח סטטיסטי
כל הניסויים נערכו עם לפחות שלושה שכפולים בלתי תלויים, וניתוחים סטטיסטיים בוצעו עם תוכנת SigmaStat v3.5 (Systat Software, Inc., IL). נתונים על הארכת תוחלת חיים ואתגרי מתח חמצוני בוצעו עם מספר כולל של זבובים שנע בין 250-350, ומבחן הדירוג היומן הוערך עבור ניתוחים שונים. השוואות קבוצתיות להערכת פוריות ובדיקה קוגניטיבית הוערכו על ידי אנליזה חד-כיוונית של שונות (ANOVA), ולאחריה המבחן הפוסט-הוק של דנט. השוואות ניסיוניות אחרות נעשו על ידי ביצוע מבחן t של Student בהשוואה לקבוצת הביקורת. הנתונים מיוצגים כממוצע ± SEM, וערך p של < 0.05="" נחשב="">
תוצאות
תוסף CT (Cistanche Tubulosa) מגדיל את תוחלת החיים של הזבובים
לבחון האם CT(Cistanche Tubulosa)תוספת יכולה להאריך את תוחלת החיים של זבובים, לזבובים נוספו 5.4, 10.8 ו-21.6 מ"ג/מ"ל של CT מיד לאחר הגלימה ב-25 מעלות לאורך כל ההליכים הניסויים. הנתונים שלנו הצביעו על כך ש-CT(Cistanche Tubulosa)תוספת יכולה להאריך את תוחלת החיים של זבובים זכרים ונקבות כאחד. כפי שמוצג באיור. 1A, תוחלת החיים של הזבובים הזכרים הוארך בכל מנות ה-CT(Cistanche Tubulosa). תוחלת החיים הממוצעת של הקבוצות עם תוספת של 5.4,10.8 ו-21.6 מ"ג/מ"ל של CT גדלה באופן משמעותי ב-18.9 אחוזים, 10.3 אחוזים ו-9.9 אחוזים, בהתאמה. CT(Cistanche Tubulosa)גם הגדילה משמעותית את תוחלת החיים המקסימלית של כל קבוצות ה-CT בהשוואה לקבוצת הביקורת מ-88 ל-102, 98 ו-102 ימים לאחר טיפול ב-5.4, 10.8 ו-21.6 מ"ג/מ"ל של CT.(Cistanche Tubulosa), בהתאמה. אצל נשים, CT(Cistanche Tubulosa)העלה משמעותית את תוחלת החיים הממוצעת של קבוצות ה-CT בהשוואה לקבוצת הביקורת (איור 1B). תוחלת החיים הממוצעת גדלה עד 18.8 אחוזים עם 5.4 מ"ג/מ"ל של CT(Cistanche Tubulosa)ו-5.5% ו-6.7% עם 10.8 ו-21.6 מ"ג/מ"ל CT, בהתאמה. כמו כן, ראינו שתוחלת החיים המקסימלית התארכה באופן משמעותי מ-91 ימים (ביקורות) ל-109, 98 ו-102 ימים לאחר טיפול ב-5.4, 10.8 ו-21.6 מ"ג/מ"ל של CT.(Cistanche Tubulosa), בהתאמה; גודל העלייה המקסימלי בתוחלת החיים המקסימלית היה 19.8 אחוזים ב-5.4 מ"ג/מ"ל של CT(Cistanche Tubulosa). התוצאות שלנו מצביעות על כך ש-CT(Cistanche Tubulosa)תוספת תזונה מאריכה משמעותית את תוחלת החיים של זבובים זכרים ונקבות כאחד. כורכומין (10 מיקרומטר) שימש כשליטה חיובית ויעיל בהארכת תוחלת חיים, כפי שמוצג באיור משלים. 1.
תוספת CT מגבירה את העמידות לרעב וללחץ חמצוני
הארכת תוחלת החיים קשורה לעתים קרובות לעמידות מוגברת ללחץ חמצוני במהלך תהליך ההזדקנות. הערכנו אם CT(Cistanche Tubulosa)תוספת מגבירה את העמידות ללחץ חמצוני. זבובים זכרים ונקבות טופלו מראש במינונים שונים של CT(Cistanche Tubulosa)במשך 20 ימים והוערכו לגבי הישרדותם לאחר הרעבה (איור 2A). זמן ההישרדות הממוצע ותוחלת החיים המקסימלית של שני המינים, בהשוואה לאלו של קבוצת הביקורת, הראו עליות משמעותיות בקבוצות ה-CT של 5.4 ו-10.8 מ"ג/מ"ל, אך לא ב-21 .6 מ"ג/מ"ל CT(Cistanche Tubulosa)קְבוּצָה. הזבובים שטופלו מראש הוערכו גם לגבי הישרדותם לאחר אתגרים עם H2O2 ו-paraquat, אשר מייצרים מיני חמצן תגובתיים (ROS) כדי לעורר הזדקנות תאית ומוות תאי. מצאנו את ה-CT הזה(Cistanche Tubulosa)הגן על זבובים זכרים ונקבות נגד רעילות H2O2 והאריך את תוחלת החיים הממוצעת והמקסימלית שלהם (איור 2B, p < 0.01 ו-0.001, ב-5.4 ו-10.8 מ"ג/מ"ל של CT(Cistanche Tubulosa), בהתאמה). נצפתה גם מגמה דומה המראה עמידות מוגברת לאתגר הפרקוואט. זכרים שניזונים בזבובים בכל המינונים של CT, ונקבות, במיוחד אלו עם תוספת של 5.4 מ"ג/מ"ל של CT(Cistanche Tubulosa) (Cistanche Tubulosa), שרד זמן רב יותר מאשר הבקרות (איור 3A, p < 0.001).="" לגבי="" יכולת="" הטיפוס,="" גם="" זבובים="" זכרים="" וגם="" נקבות="" ניתנו="" 10.8="" מ"ג/מ"ל="" של="">(Cistanche Tubulosa)הפגין תפקוד תנועתי מוחלש המושרה על ידי paraquat ב-16 שעות לאחר הפראקוואטchallenge (איור 3B, כולם p < 0.05).="" תוצאות="" אלו="" חושפות="" שתוספי="" ct="" משפר="" את="" העמידות="" ללחץ="" חמצוני="" כלשהו,="" דבר="" המצביע="" על="" כך="">(Cistanche Tubulosa)הארכת תוחלת חיים הנגרמת קשורה להגנה נוגדת חמצון מוגברת.
השפעות של CT (Cistanche Tubulosa) על יכולת הרבייה
מכיוון שתיאוריית ההזדקנות מצביעה על כך שתהליך ההזדקנות משפיע לרעה על הרבייה, בדקנו האם CT(Cistanche Tubulosa)השפיע על הכושר הפרודוקטיבי על ידי ניתוח יכולת הטלת הביצים של זבובים בוגרים. זבובים בוגרים נאספו לאחר הגלימה, מופרדים לפי מין, וניתנו להם 5.4 ו-10.8 מ"ג/מ"ל של CT(Cistanche Tubulosa)למשך 20 ימים. זבובי זכר בתולה או נקבה ניתנו CT(Cistanche Tubulosa)הזדווגו עם 9-זבובים בני יום שלא קיבלו CT(Cistanche Tubulosa). ראינו עליות תלויות מינון במספר הביצים היומי המוטלות לנקבה, כלומר 30.3 אחוז ו-57.2 אחוז זבובים מיושנים שטופלו ב-5.4 ו-10.8 מ"ג/מ"ל של CT(Cistanche Tubulosa), בהתאמה, בהשוואה לבקרות (איור 4, p < 0.05).="" נתונים="" אלה="" מצביעים="" על="" כך="">(Cistanche Tubulosa)תוספת עשויה להקל על כושר הרבייה של נקבות בגיל מבוגר, אך סביר להניח שלא בזכרים מבוגרים.
תוספת CT (Cistanche Tubulosa) משפרת את היכולת הקוגניטיבית
קבענו אם CT(Cistanche Tubulosa)לתוספת יש השפעות מועילות על יכולות למידה וזיכרון, נערך מחזור בודד של אימון אסוציאטיבי חוש הריח. אנו מעריכים את ביצועי הלמידה וכן את הזיכרון 3- ו-24-h, שנחשב לזיכרון לטווח הביניים ולזיכרון לטווח ארוך, בהתאמה. ראשית, לזבובים נוספו מינונים שונים של CT(Cistanche Tubulosa)למשך 5 ימים. יכולת הלמידה הייתה דומה גם בקבוצת ה-CT וגם בקבוצת הביקורת (איור 5A). לגבי זיכרון 3- שעות, ה-CT של 10.8 מ"ג/מ"ל(Cistanche Tubulosa)לקבוצה נטו להיות אינדקס ביצועים (PI) גבוה יותר מאשר לבקרות (איור 5B, 51.5 ± 3.2 לעומת 42.6 ± 2.1), אם כי אין הבדל משמעותי. יתר על כן, 5.4 ו-10.8 מ"ג/מ"ל של CT(Cistanche Tubulosa)שיפר משמעותית את הזיכרון של {{0}} שעות של זבובים בהשוואה לבקרות (איור 5C, PI=41.6 ± 3.6 ו-45.9 ± 3.0 לעומת 29.6 ± 2.9, בהתאמה , p < 0.05="" ו-0.01).="" תוצאות="" אלו="" הצביעו="" על="" כך="" שתוספי="" ct="" משפר="" את="" היווצרות="" הזיכרון="" בזבובים="" צעירים.="" שנית,="" בעוד="">(Cistanche Tubulosa)תוספת הגדילה את אורך החיים וההתנגדות לחמצון של זבובים, קבענו עוד אם התוסף יכול לשפר גם התנהגות קוגניטיבית בזבובים מבוגרים. לזבובים ניתן מזון סטנדרטי עם או בלי 5.4, 10.8 ו-21.6 מ"ג/מ"ל של CT(Cistanche Tubulosa)במשך 20 ימים כדי לחקות הזדקנות; הזבובים בתוספת מינונים אלה של CT(Cistanche Tubulosa)היו בעלי PI גבוהים משמעותית של למידה (67.6 ± 1.9, 72.5 ± 0.5, ו-75.2 ± 1.3, בהתאמה) מאשר לבקרות (58.0 ± 2.0; איור 5D , p < 0.001), מה שמציע ש-CT(Cistanche Tubulosa)יש השפעה מועילה על עיכוב הירידה הקשורה לגיל בלמידה. תוצאות דומות גילו גם כי ה-CT של 5.4 מ"ג/מ"ל(Cistanche Tubulosa)לקבוצה היה שמירת זיכרון יעילה יותר ב-{0}} שעות (איור 5E, 47.5 ± 1.9 לעומת שליטה 37.{{10}} ± 2.9, p < 0.05)="" ו-24-="" h="" בדיקות="" זיכרון="" (איור="" 5f,="" 31.8="" ±="" 3.8="" לעומת="" ביקורת="" 19.3="" ±="" 2.4,="" p="">< 0.01).="" תוצאות="" אלו="" מצביעות="" על="" כך="">(Cistanche Tubulosa)תוספת לא רק משפרת את היווצרות הזיכרון בזבובים צעירים אלא גם מעכבת פגיעה בהתנהגות קוגניטיבית ושומרת על יכולת למידה וזיכרון יעילים יותר עם הגיל.
מסלולים מולקולריים הקשורים לקידום אריכות ימים ושיפור קוגניטיבי של תוספי CT
CT(Cistanche Tubulosa)תוספת גם מדכאת AMI וגם מאריכה את תוחלת החיים. לפיכך, הסברנו שגנים הקשורים ל-AMI ואריכות ימים עשויים להיקבע על ידי הערכת ביטוי דיפרנציאלי בין קבוצת הבקרה ל-5.4 ו-10.8 מ"ג/מ"ל באמצעות qPCR. השינויים בביטוי הגנים של הזבובים שטופלו ב-CT הושוו לאלה של קבוצת הביקורת הוצגו באיור 6A. הביטוי המווסת של מספר גני מטרה, כולל Sirt6, Sir2, Sod,p38b ו-Sirt2, עשוי להיות מעורב בתהליך ההזדקנות. רמות התמלול של S6k, Raptor, Psn, Rpd3 ו-N גם עלו, מה שמרמז על CT(Cistanche Tubulosa)השלמה משנה את העברת האותות של מסלולי TOR ו-Notch. בנוסף, תוספת CT השפיעה באופן משמעותי על ביטוי ה-mRNA של Nmdar1, Nmdar2 ו-SkpA. כדי להדגיש את אינטראקציות החלבון הרלוונטיות ל-CT המאריכות את תוחלת החיים ומשפרות את הלמידה והזיכרון, נוצרה רשת אינטראקציות חלבון המבוססת על ספרות של גנים שנבדקו על ידי qPCR (איור 6B). כל צומת מייצג חלבון אחד, בעוד שכל קצה מציין אינטראקציה אחת מבוססת ספרות. צמתים מקובצים לפי מסלול KEGG והתהליכים הביולוגיים אונטולוגיים של הגנים (GOBP). כפי שמוצג באיור. 6B, האינטראקציה הנוירואקטיבית של ליגנד-קולטן GOBP, המשפיעה על למידה וזיכרון, ועוד הזדקנות GOBPof, המתואמת עם תוחלת החיים, שניהם קשורים למסלול האותות Notch. בנוסף, ה-GOBP של ההזדקנות מושפע ממסלול האיתות mTOR. המשמעות של ביטוי יתר של גנים המושרה על ידי CT על GOBPs ומסלולים אלה מתוארת בסעיף הדיון.
איור 6. ניתוח רשת של גנים מבוטאים בצורה דיפרנציאלית. זבובים שטופלו מראש ב-5.4 ו-10.8 מ"ג/מ"ל של CT(Cistanche Tubulosa)ודיאטות בקרה ב-25 מעלות למשך 20 ימים נאספו לכימות ביטוי גנים דיפרנציאלי. (א) רמות התעתיק היחסיות של גני מטרה לבקרות כומתו באמצעות qPCR. n=4 עבור כל קבוצה. (ב) גנים מווסתים המעורבים בהעברת אותות התא וברשת האינטראקציה שלהם. צמתים מייצגים גנים. גנים עם ביטוי יתר מוקפים בירוק. קצוות מייצגים אינטראקציות בין מוצרי גנים. סוגי אינטראקציה מסומנים על ידי צבעים שונים באיור. (לפירוש ההתייחסויות לצבע באגדת הדמות הזו, הקורא מופנה לגרסת האינטרנט של מאמר זה.)
דִיוּן
חוסר איזון בין יצירה וסילוק של רדיקלים חופשיים על ידי מערכות הגנה נוגדות חמצון אנדוגניות עלול לגרום לנזק חמצוני לרקמות עם הגיל; לפיכך, משערים שרדיקלים חופשיים ממלאים תפקיד קריטי בהזדקנות (Dato et al., 2013). הנה, הראינו ש-CT(Cistanche Tubulosa)תוספת בזבובים מאריכה את תוחלת החיים ומביאה לסבילות גבוהה לנזק חמצוני הנגרם על ידי H2O2 ו-paraquat בשני המינים. המחקרים היו בקורלציה עם CT(Cistanche Tubulosa)ואנטי-הזדקנות, נחקרו פחות, אך תמציות מ-C. deserticola, יכולות להאריך את תוחלת החיים בעכברי 8 (SAM-P8) מואצת עכברים (Zhang et al., 2014) ו- echinacoside, אחת התרכובות העיקריות הקיימות ב-CT , יש השפעות מועילות על הארכת תוחלת החיים וסבילות למתח ב-C. elegans (Wang et al., 2015).
מחקרים אחרונים בבעלי חיים הראו כי לאכינאקוסיד השפעות מגנות נגד רעילות אשכים הנגרמת על ידי ביספנול A ומשפרת את הביוסינתזה של טסטוסטרון על ידי אינדוקציה של אנזימים סטרואידים באשכים, כולל CYP11A1, 3 -HSD ו-CYP17A1 (Jiang et al., 2016). CT(Cistanche Tubulosa)תמצית אתנול גם מקדמת את הכדאיות והאיכות של זרע בחולדות (Wang et al., 2016). למרות המתאם בין CT(Cistanche Tubulosa)ואסטרוגן עדיין צריך לחקור, מחקר אחד דיווח כי אכינאקוסיד מגביר באופן משמעותי את הביטוי של קולטני אסטרוגן, בדומה לקבוצה שטופלה באסטרדיול בחולדות שעברו ניתוח שחלות (Li et al., 2013). מכיוון שכושר הרבייה מתרחש בקורלציה שלילית עם הגיל (Kenyon, 2005), בדקנו האם ל-CT יש יתרונות בזבובים מבוגרים. כושר הרבייה מושפע מ-CT(Cistanche Tubulosa)נצפתה רק בנקבות, מה שמצביע על כך שנקבת זבובים עשויה להגיב יותר ל-CT(Cistanche Tubulosa)תוספת. תוצאות אלו מגלות כי ל-CT עשוי להיות השפעה דמוית הורמוני מין ולעכב את הזדקנות הרבייה, בהתאם לשימוש הקליני ב-CT(Cistanche Tubulosa)לטיפול בהפרעות בתפקוד המיני בבני אדם.
Acteoside יכול להבהיר את ההשפעות המגננות להפחתת אפופטוזיס של נוירונים ואובדן זיכרון במודל עכבר מזדקן המושרה על ידי שילוב של D-galactose ו- AlCl3, מה שמרמז שלCT עשוי להיות פוטנציאל להיות בעל תכונות נוירו-הגנה ושיפור זיכרון (Gao et al., 2015; Peng et al., 2015). הנתונים שלנו הצביעו על כך שיצירת זיכרון השתפרה בזבובים צעירים בתוספת CT. לכן, הערכנו אם CT(Cistanche Tubulosa)תוסף מועיל לשימור זיכרון עם הזדקנות מכיוון שידוע כי תפקודים קוגניטיביים יורדים בהזדקנות רגילה. התוצאות שלנו גילו שניתן לשפר מספר סוגים של AMIs, כולל למידה, 3- ו-24-hmeory, באמצעות CT(Cistanche Tubulosa)תוספת למשך 20 ימים.לפי התוצאות הנ"ל, CT(Cistanche Tubulosa)לתוספת עשויה להיות השפעות מועילות על אורך החיים ושיפור היווצרות הזיכרון וכן לדחות מספיק AMI.
שימוש במודלים של בעלי חיים מקל על זיהוי המנגנונים הפוטנציאליים והתלות בנתיב של CT(Cistanche Tubulosa)להאט את הזדקנות המוח ולדחות AMI ברמה התאית. התמקדנו במנגנונים מולקולריים העומדים בבסיס ההזדקנות, העברה עצבית ולחץ חמצוני והנמקנו שניתן לזהות גנים הקשורים ל-AMI ואריכות ימים על ידי בחינת ביטוי דיפרנציאלי בין קבוצות בקרה ו-CT באמצעות qPCR. מסלול האיתות Notch שמור מאוד בקרב מינים מ-Drosophila ועד לבני אדם; הוא מבטא במערכת העצבים המרכזית של מבוגרים עבור פלסטיות עצבית ומווסת את ההתמיינות העצבית יחד עם חוסר התחושה שלו במהלך ההתפתחות (Presente et al., 2001). עכברים הנושאים מוטציה הטרוזיגטית של Notch סובלים ממחסור בלמידה מרחבית ובזיכרון (Costa et al., 2003). פרסנילין (Psn) נדרש להפעלת המחשוף של Notch לתוך התחום התוך-תאי של Notch ונוקאאוט של Psn גורם לפגיעה בפלסטיות הסינפטית ויצירת זיכרון (Saura et al., 2004). הנתונים שלנו חשפו וויסות-על תלוי-מינון של Notch ו- Psn ב-CT(Cistanche Tubulosa)זבובים בתוספת, עם רמת ביטוי ללא שינוי של קהה, מה שמרמז על מסלול האיתות Notch כמנגנון חזק לשיפור הזיכרון על ידי תוספת CT. בנוסף לאיתות Notch, קולטן N-methyl-D-aspartate (NMDAR), תעלת יונים מונעת על ידי גלוטמט ו-D-סרין בנוירונים, פלסטיות סינפטית שליטה ותפקוד זיכרון (Furukawa et al., 2005). הגנום של Drosophila מכיל שניים יחידות המשנה של NMDAR, Nmdar1 ו-Nmdar2, ושתיהן חיוניות בתפקוד הזיכרון. נוק-דאון Nmdar1 ב-Drosophila פוגע בלמידה ובזיכרון (Xia et al., 2005), ואילו ביטוי יתר של Nmdar2 בעכברים משפר את הלמידה והזיכרון (Tang et al., 2001). הנתונים שלנו הראו עלייה תלוית מינון בוויסות העל של Nmdar1 ו-Nmdar2 בזבובים בתוספת CT, מה שמצביע על מנגנון פוטנציאלי נוסף של שיפור זיכרון על ידי CT(Cistanche Tubulosa)תוספת.
הכיתה O של מסלול התעתוק של קופסת המזלג (FoxO) נשמרת בקרב מינים וקריטית במטבוליזם, סובלנות למתח והארכת תוחלת החיים (Lehtinen et al.,2006). שינויים לאחר תרגום, כולל זרחון, אצטילציה ו-ubiquitylation, מסדירים את הפעילות של FoxOs (van der Horst and Burgering, 2007). וסת מידע שקט 2 (Sir2; ההומולוגית ביונקים ידועה בשם SIRT1) מווסתת את הפעילות של FoxO באמצעות דה-אצטילציה ומשפיעה על תוחלת החיים של בעלי חיים הקשורה למסלול הגדילה דמוי אינסולין (IGF) (Lemieux et al., 2005). Sirt6 גורם לדה-פוספורילציה של FoxO כדי לגרום להארכת תוחלת חיים בעכברים זכרים (Kanfi et al., 2012). הנתונים שלנו חשפו וויסות עלייה של Sir2 ו-Sirt6 בזבובים בתוספת CT, מה שמרמז שוויסות FoxO על ידי חולצות עשוי להיות מנגנון חזק להארכת תוחלת החיים על ידי CT(Cistanche Tubulosa)תוספת. רדיקלים חופשיים המיוצרים במהלך תהליכים מטבוליים גורמים נזק ל-DNA ולחלבונים, ובכך מביאים לקיצור תוחלת החיים. Sir2 הוא גם גן לתגובת עקה חמצונית (Whitaker et al., 2013), ודווח כי סופראוקסיד דיסמוטאז (SOD) מפורש יתר על המידה, הממיר O2- ל-H2O2 ולבסוף ל-H2O באמצעות קטלאז וגלוטתיון פרוקסידאז, דווח כמאריך את תוחלת החיים של זבובים ( לה בורג, 2001). הנתונים שלנו חשפו וויסות-על תלוי-מינון של Sod ו-Sir2 בזבובים בתוספת CT, מה שמצביע על כך שמסלולים נוגדי חמצון עשויים להיות מנגנון חזק להארכת תוחלת החיים על-ידי CT(Cistanche Tubulosa)תוספת.
מסלול מפתח נוסף בהזדקנות מווסת על ידי מתחמי mTOR mTORC1 ו-mTORC2, שניהם מקדמים הזדקנות אורגניזמים באופן שמרני אבולוציוני. אותות מקולטן האינסולין מפעילים את mTORC1 דרך מסלול ה-phosphoinositide3-kinase-Akt כדי לקדם סינתזת חלבון ודלקת ולעיכוב אוטופגיה וגליקוליזה על ידי שימוש בחלבונים שונים במורד הזרם (Johnson et al., 2013). סינתזת חלבון מופעלת על ידי חלבון ריבוזומלי S6 קינאז (S6K), אשר יוצר לולאת משוב שלילי כדי לעכב איתות של קולטן אינסולין (Hands et al., 2009). מטרה מעכבת של mTORC1 היא חלבון Drosophila דומה (sima), שההומולוג שלו ביונקים ידוע כגורם 1 אלפא (HIF1) המושרה בהיפוקסיה. HIF1 ממלא תפקיד מגן מפני נזקים תלויי גיל לכלי דם ונוירונים מוטוריים (Oosthuyse et al., 2001; Rivard et al., 2000). הנתונים שלנו חשפו רמת ביטוי ללא שינוי של תת-יחידות מורכבות של mTOR, כולל Tor, rictor ו-Raptor, ואילו CT(Cistanche Tubulosa)התוסף העלה ויסות תלוי במינון של S6K ו-sima, מה שמרמז על תפקיד מגן של CT(Cistanche Tubulosa)נגד פעילות mTOR.
מסקנות
למרות שזוהו כמה מסלולים מעורבים, אריכות ימים ואינטליגנציה גבוהה תרמו על ידי CT(Cistanche Tubulosa)התערבות עשויה להיות תכונה אפוליגני המושפעת ממשחק הגומלין של גנים מרובים, וגורמים גנטיים אחרים שלא הבהרו עשויים אף הם לווסת את תהליך ההזדקנות. עבור קשישים, שמירה על כושר גופני ויכולות קוגניטיביות רצויות על מנת לדחות או למנוע דמנציה ומחלות כרוניות צריכה להיות רכישה מכרעת ממחקרים על הזדקנות. בגלל CT(Cistanche Tubulosa), המכונה "הג'ינסנג של המדבר", יש השפעה מרפאת ניכרת על חיזוק יאנג הכליות, אשר מזין את כל האיברים ומחדש את המהות החיונית ברפואה הסינית המסורתית, אנו מאמינים שהמחקר שלנו מספק ראיות התומכות בטיפול הקליני של CT(Cistanche Tubulosa)ועשויה לספק תובנה חשובה לפיתוח תרופות חדשות או תוספי מזון כדי לא רק לעכב הזדקנות ומחלות הקשורות לגיל אלא גם לשפר את איכות חיי האדם.
ניגוד עניינים
המחברים מצהירים כי אין להם ניגוד עניינים.
תודות
עבודה זו נתמכה על ידי האוניברסיטה הרפואית של סין (CMU103-S-25); בית החולים האוניברסיטאי הרפואי בסין (DMR-101-065,DMR-103-099); משרד המדע והטכנולוגיה בטייוואן(NSC 102-2632-B-039-001-MY3, MOST 104-2632-B-039-002), ובחלקו על ידי מרכז הניסויים והמחקר הקליני של משרד הבריאות והרווחה של טייוואן של מצוינות (MOHW105-TDU-B-212-133019).
חומרים משלימים
ניתן למצוא חומר משלים הקשור למאמר זה, בגרסה המקוונת, בכתובת doi:10.1016/j.phymed.2017.01.006.
מתוך: 'מסלולים מולקולריים הקשורים לקידום אריכות ימים ושיפור קוגניטיבי שלCistanche tubulosaב-Drosophila' מאתWei-Yong Lin et al
--W.-Y. לין וחב'. / Phytomedicine 26 (2017) 37–44
הפניות
בורק, SN, בארנס, קליפורניה, 2010. סינפסות מזדקרות ודינמיקת מעגל ההיפוקמפוס. מגמות Neurosci. 33, 153–161.
Costa, RM, Honjo, T., Silva, AJ, 2003. למידה וחסרי זיכרון בעכברים מוטנטים Notch. Curr. ביול. 13, 1348–1354.
Dato, S., Crocco, P., D'Aquila, P., de Rango, F., Bellizzi, D., Rose, G., Passarino, G., 2013. חקר התפקיד של שונות גנטית ואורח חיים בחמצון תגובת מתח להזדקנות בריאה ואריכות ימים. Int. י.מול. Sci. 14, 16443–16472.
Dubnau, J., Grady, L., Kitamoto, T., Tully, T., 2001. שיבוש של העברה עצבית בגוף פטריות תסיסנית חוסם שליפה אך לא רכישת זיכרון. טבע 411, 476–480.
Franceschini, A., Szklarczyk, D., Frankild, S., Kuhn, M., Simonovic, M., Roth, A., Lin, J., Minguez, P., Bork, P., von Mering, C. , Jensen, LJ, 2013. STRING v9.1: רשתות אינטראקציה חלבון-חלבון, עם כיסוי ושילוב מוגברים. Nucleic Acids Res. 41, D808–D815.
Furukawa, H., Singh, SK, Mancusso, R., Gouaux, E., 2005. סידור תת-יחידות ותפקוד בקולטני NMDA. טבע 438, 185–192.
Gao, L., Peng, XM, Huo, SX, Liu, XM, Yan, M., 2015. שיפור זיכרון של Acteoside (Verbascoside) במודל עכברים מזדקנים המושרה על ידי שילוב של D-gal ו- AlCl3. פיטוטר. מילון 29, 1131–1136.
Guo, Q., Zhou, Y., Wang, CJ, Huang, YM, Lee, YT, Su, MH, Lu, J., 2013. מחקר פתוח, לא מבוקר פלצבו עלCistanche tubulosaכמוסות גליקוזיד (Memoregain((R))) לטיפול במחלת אלצהיימר בינונית. אמ. ג'יי אלצהיימר דיס. דמן אחר. 28, 363–370.
Hands, SL, Proud, CG, Wyttenbach, A., 2009. תפקידו של mTOR בהזדקנות: סינתזת חלבון או אוטופגיה? Aging (Albany NY) 1, 586–597.
Jiang, Z., Wang, J., Li, X., Zhang, X., 2016. Echinacoside andCistanche tubulosa(Schenk) R. Wight משפר את נזקי האשכים והזרע המושרה על ידי ביספנול A בחולדות באמצעות אנזימים סטרואידוגניים מווסתים על ציר הגונד. J. Ethnopharmacol 193, 321–328.
Jiao, X., Sherman, BT, Huang da, W., Stephens, R., Baseler, MW, Lane, HC, Lempicki, RA, 2012. DAVID-WS: שירות אינטרנט ממלכתי כדי להקל על ניתוח רשימת גנים/חלבונים. ביואינפורמטיקה 28, 1805–1806.
Johnson, SC, Rabinovitch, PS, Kaeberlein, M., 2013. mTOR הוא מאפנן מפתח של הזדקנות ומחלות הקשורות לגיל. טבע 493, 338–345.
Kanfi, Y., Naiman, S., Amir, G., Peshti, V., Zinman, G., Nahum, L., Bar-Joseph, Z., Cohen, HY, 2012. Sirtuin SIRT6 מווסת את תוחלת החיים של גברים עכברים. טבע 483, 218–221.
Kenyon, C., 2005. הפלסטיות של ההזדקנות: תובנות ממוטציות ארוכות-חיים. תא 120, 449–460.
Le Bourg, E., 2001. מתח חמצוני, הזדקנות ואריכות ימים ב- Drosophila melanogaster. FEBS Lett. 498, 183–186.
Lehtinen, MK, Yuan, Z., Boag, PR, Yang, Y., Villen, J., Becker, EB, DiBacco, S., de la Iglesia, N., Gygi, S., Blackwell, TK, Bonni, A., 2006. מסלול איתות MST-FOXO שמור מתווך תגובות של מתח חמצוני ומאריך את תוחלת החיים. תא 125, 987–1001.
Lemieux, ME, Yang, X., Jardine, K., He, X., Jacobsen, KX, Staines, WA, Harper, ME, McBurney, MW, 2005. ה- Sirt1 deacetylase מווסת את מסלול האותות של גורם גדילה דמוי אינסולין ב יונקים. Mech. Dev. 126, 1097–1105.
Li, F., Yang, X., Yang, Y., Guo, C., Zhang, C., Yang, Z., Li, P., 2013. הפעילות האנטי-אוסטיאופורטית של אכינאקוסיד בחולדות שעברו שחלות. Phytomedicine 20, 549–557.
Li, Z., Lin, H., Gu, L., Gao, J., Tzeng, CM, 2016. Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): אחת המתנות הפרמצבטיות הטובות ביותר של הרפואה הסינית המסורתית. פרונט פרמקול. 7, 41.
Lin, S., Ye, S., Huang, J., Tian, Y., Xu, Y., Wu, M., Wang, J., Wu, S., Cai, J., 2013. How do Chinese תרופות המחזקות את הכליה מעכבות אפופטוזיס של נוירון דופמינרגי? ריגן עצבי. מילון 8, 2820–2826.
Oosthuyse, B., Moons, L., Storkebaum, E., Beck, H., Nuyens, D., Brusselmans, K., Van Dorpe, J., Hellings, P., Gorselink, M., Heymans, S. , Theilmeier, G., Dewerchin, M., Laudenbach, V., Vermylen, P., Raat, H., Acker, T., Vleminckx, V., Van Den Bosch, L., Cashman, N., Fujisawa, H., Drost, MR, Sciot, R., Bruyninckx, F., Hicklin, DJ, Ince, C., Gressens, P., Lupu, F., Plate, KH, Robberecht, W., Herbert, JM, Collen , D., Carmeliet, P., 2001. מחיקה של אלמנט התגובה להיפוקסיה במקדם גורם הגדילה של האנדותל של כלי הדם גורמת לניוון נוירון מוטורי. נאט. ג'נט. 28, 131–138.
Peng, XM, Gao, L., Huo, SX, Liu, XM, Yan, M., 2015. מנגנון שיפור הזיכרון של Acteoside (Verbascoside) במודל העכבר המזדקן המושרה על ידי שילוב של D-gal ו- AlCl3. Phytother, Res. 29, 1137–1144.
Presente, A., Andres, A., Nye, JS, 2001. דרישת Notch בבגרות לתפקוד נוירולוגי ואריכות ימים. Neuroreport 12, 3321–3325.
Rivard, A., Berthou-Soulie, L., Principe, N., Kearney, M., Curry, C., Branellec, D., Semenza, GL, Isner, JM, 2000. פגם תלוי גיל בצמיחת אנדותל כלי דם ביטוי גורם קשור לפעילות מופחתת של פקטור 1 הניתנת להיפוקסיה. ג'יי ביול. Chem. 275, 29643–29647.
Saura, CA, Choi, SY, Beglopoulos, V., Malkani, S., Zhang, D., Rao, Shankaranarayana, Chattarji, BS, Kelleher, S., 3rd, RJ, Kandel, ER, Duff, K., Kirkwood , A., Shen, J., 2004. אובדן תפקוד פרסנילין גורם לליקויים בזיכרון ולפלסטיות הסינפטית ואחריו ניוון עצבי תלוי גיל. נוירון 42, 23–36.
Schimanski, LA, Barnes, CA, 2010. סינתזת חלבון עצבית במהלך ההזדקנות: השפעות על פלסטיות וזיכרון. Front Aging Neurosci. 2. Seok, J., Kim, TS, Kwon, HJ, Lee, SP, Kang, MH, Kim, BJ, Kim, MN, 2015. היעילות שלCistanche Tubulosaותוספי תמציות Laminaria Japonica (MK-R7) במניעת נשירת שיער מעוצבת וקידום בריאות הקרקפת. קלינ. נוטר. מילון 4, 124–131.
Tang, YP, Wang, H., Feng, R., Kyin, M., Tsien, JZ, 2001. השפעות דיפרנציאליות של העשרה על תפקוד למידה וזיכרון בעכברים מהונדסים NR2B. נוירופרמקולוגיה 41, 779–790.
van der Horst, A, Burgering, BM, 2007. הדגשת התפקיד של חלבוני FoxO באורך חיים ובמחלות. נאט. כומר מול. תָא. ביול. 8, 440–450.
Wang, T., Chen, C., Yang, M., Deng, B., Kirby, GM, Zhang, X., 2016.Cistanche tubulosaתמצית אתנול מתווך את רמות הורמוני המין של חולדה על ידי אינדוקציה של אנזימים סטרואידיים באשכים. פארם. ביול. 54, 481–487.
Wang, T., Zhang, X., Xie, W., 2012.Cistanche deserticolaYC Ma, "ג'ינסנג במדבר": סקירה. אמ. ג'יי צ'ין. Med. 40, 1123–1141.
Wang, X., Zhang, J., Lu, L., Zhou, L., 2015. השפעת אריכות החיים של echinacoside ב Caenorhabditis elegans בתיווך באמצעות Daf-16. Biosci. ביוטכנולוגיה. Biochem. 79, 1676–1683.
Whitaker, R., Faulkner, S., Miyokawa, R., Burhenn, L., Henriksen, M., Wood, JG, Helfand, SL, 2013. ביטוי מוגבר של Drosophila Sir2 מאריך את תוחלת החיים באופן תלוי מינון. Aging (Albany NY) 5, 682–691.
Wu, CR, Lin, HC, Su, MH, 2014. היפוך על ידי תמציות מימיות שלCistanche tubulosaמחסרים התנהגותיים במודל חולדות דמוי מחלת אלצהיימר: רלוונטיות לתצהיר עמילואיד ותפקוד נוירוטרנסמיטר מרכזי. השלמה של BMC. אלטרנט. Med. 14, 202.
Xia, S., Miyashita, T., Fu, TF, Lin, WY, Wu, CL, Pyzocha, L., Lin, IR, Saitoe, M., Tully, T., Chiang, AS, 2005. קולטני NMDA מתווכים למידה וזיכרון של חוש הריח בתסיסנית. Curr. ביול. 15, 603–615.
Zhang, K., Ma, X., He, W., Li, H., Han, S., Jiang, Y., Wu, H., Han, L., Ohno, T., Uotsu, N., Yamaguchi, K., Ma, Z., Tu, P., 2014. תמציות של Cistanche deserticola יכולות לנטרל חיסון ולהאריך את תוחלת החיים בעכבר מואץ להזדקנות
עכברים מועדים 8 (SAM-P8). Evid. משלים מבוסס. אלטרנטיבה. Med. 2014, 601383.
Zhao, Q., Gao, J., Li, W., Cai, D., 2010. השפעות נוירוטרופיות ונוירו-הצלה של Echinacoside במודל העכבר התת-חריף MPTP של מחלת פרקינסון. מח. 1346, 224–236.