שיטה לזיהוי חומרים פעילים כימיים של Cistanche

זיהוי רכיבים כימיים של Cistanche Deserticola באמצעות מערכת X500R QTOF

Li Yuejie, Cheng Haiyan, Liu Ting, Li Lijun, Jin Wenhai SCIEX, מרכז תמיכה ליישומים באסיה פסיפיק (שנחאי), סין

מבוא

Cistanche deserticolaהוקלט לראשונה ב-"Shen Nong Materia Medica"; זה ידוע גם בתור "Dayun", "Rousong Rong" ו-"Zong Rong". כרפואת צמחים מסורתית, יש לה תכונות של הזנת יאנג הכליות, שיפור זרימת הדם, פועל כחומר משלשל, גירוי חיסוני והשפעות אחרות[1]. בשנת 1983, המלומד היפני H. Kobayashi ואחרים החלו לחקור את ההרכב הכימי שלCistanche Deserticola[2], ומאז הוא הפך לנושא פופולרי בחקר הרפואה הסינית שעורר עניין רב הן בארץ והן בחו"ל במהלך 30 השנים האחרונות.Cistanche Deserticolaשייך לקבוצת הצמחים המכילים פנוליםגליקוזידים, אירידואידים, ושלהםגליקוזידים, וליגננים והןגליקוזידים.

quadrupole time-of-flight (QTOF) ספקטרומטריית מסה היא כלי רגיש וספציפי לזיהוי רכיבי רפואה סינית שהפכו בהדרגה חיוניים למחקר. טכנולוגיה זו התגברה על אתגרים טכניים מסורתיים עם ניתוחים רטרוספקטיביים של הזרקות בודדות המאפשרות מיצוי של נתונים חשובים ורכישה מקיפה ביותר של מידע לדוגמה. שימוש בנתוני מסה מדויקת וברזולוציה גבוהה של TOF-MS ו-TOF-MS/MS מאפשר ניתוח איכותני בו-זמני, ספציפי מאוד ולא ממוקד. עם זאת, המורכבות של פעולת המכשיר והשימוש בתוכנה הגבילה במידה ניכרת את התפשטות ופיתוח טכנולוגיה זו. כאן אנו מציגים מערכת QTOF חדשה המשתמשת בנתיב TOF חדש ומהפכני מבוסס גיאומטריה מסוג N, תוכנה אינטואיטיבית וטכניקות משקל מולקולרי מדויקות שקל יותר להשתמש בהן בזיהוי רכיבי רפואה סינית.

היתרונות של שיטה זו הם כדלקמן:

1. ה-X500R משתמש בעיצוב ממשק גז וילון אוויר טורבו VTM העמיד והמאושר בתעשייה, בעל תכונה חזקה נגד זיהום;

2. תוכנת SCIEX OS שילבה פונקציות רכישה, עיבוד ודיווח בפלטפורמה אחת; הממשק אינטואיטיבי, קל לשלוט בו, ויש לו תיקון אוטומטי בלחיצה אחת על מנת להבטיח שאנליסטים עם כל רמה של מומחיות יוכלו להשיג נתונים אמינים באיכות גבוהה;

3. שימוש בתוכנת SCIEX OS לעיבוד נתונים לזיהוי רכיבי רפואה סינית הם פשוטים ומאפשרים מיצוי מהיר של מידע שימושי, ובכך;

4. הוא שואב תוצאות זיהוי מדויקות ואמינות יותר מספריות רפואה סינית המכילות ספקטרום MS/MS;

5. מאגרי מידע ברזולוציה גבוהה של MS/MS של רפואה סינית מבוססים על הרכיבים הפעילים של TCM "הפרמקופיה הסינית" חלק 1; כולל הפניות לרכיבים בפרמקופיה וחומרים פעילים בצמחי המרפא, יש כמעט 900 תרכובות

cistanche deserticola improving efficacy

cistanche deserticola משפר את היעילות

תהליך ניסוי

1. שימוש במצב TOF-MS-IDA MS/MS, להזריק דגימה ולהשיג בו-זמנית יונים מקדימים ראשוניים וספקטרים משניים מקבילים;

2. שימוש בתוכנת SCIEX OS סריקה ממוקדת, אישור של תרכובות יעד וספקטרים משניים יחד עם סקר של תקני רפואה סינית ושיטות התאמה יכולים להגביר את הדיוק ואת תפוקת העבודה.

3. זרימת העבודה הזיהוי הלא ממוקדת של SCIEX OS Software משתמשת בחיפושי ספריות ובחיפושים לא ידועים שלמים ב- ChemSpider כדי לאמת תוצאות, מה שמבטיח שיותר רכיבים מזוהים עם זרימת עבודה פשוטה יותר.

Chinese medicin identification procedure

דוגמאות ושיטת עיבוד מקדים

מקור לדוגמה:

נרכש מבתי מרקחת בשנחאי בצורה פרוסה

שיטת עיבוד מקדים:

1. פרוסות נמחצו ליצירת אבקה;

2. 0.9 מ"ג נשקלו והוטבלו ב-3 מ"ל מתנול למשך 40 דקות;

3. הדגימה משלב 2) עברה אולטרסאונד למשך שעה אחת;

4. בוצעה צנטריפוגה והסרה של הסופרנטנט לשימוש כדגימה.

acteoside in cistanche (4)

תנאי כרומטוגרפיה נוזלית (LC).

עמודה כרומטוגרפית: XSelect HSS T3, 2.1*150 מ"מ, 3.5 מיקרומטר;

שלב נייד: נעשה שימוש בחליפת גרדיאנט

שלב נייד: A הוא 0.1 אחוז מים חומצת פורמית-2mM NH4FA

B הוא 95 אחוז אצטוניטריל-5 אחוז מים-2mM NH4FA

קצב זרימה: 0.5 מ"ל/דקה

טמפרטורת עמודה: 40ºC

כמות שהוכנסה: 5µL

שיטת ספקטרומטריית מסה:

שיטת סריקה: TOF MS-IDA-15 סינון איכותני MS/MS

פרמטרים של מקור יונים ESI:

גז מסך אוויר CUR: 35psi; מתח IS: 5500V/-4500V

טמפרטורת מקור: 600ºC

גז אטום GAS1: 55psi; גז עזר GAS2: 60psi

חיפוש מצב מכשור:

בנגיעה אחת (בחר ב-MS Check בצד ימין למטה), מצב תיקון TOF-MS ו-TOF-MS/MS אוטומטי לחלוטין מבטיח שאנליסטים בכל רמת מומחיות יכולים להשיג נתונים מדויקים, אמינים וניתנים לשחזור.

BPCs מצבי יונים חיוביים ושליליים:

נוהל זיהוי תרכובות

1. תהליך עבודה ממוקד של זיהוי רכיבים

1.1: חיפוש נוסחאות מולקולריות

נדרשים רק שם התרכובת הכימית והנוסחה המולקולרית; ניתן להזין אותם ישירות או לייבא באמצעות פונקציית ההעתקה וההדבקה של Excel ליצירת שיטת עיבוד

לאחר יצירת טבלת תוצאות, ניתן לראות תוצאות כמותיות ואיכותיות באותו חלון. מערכת חיווי אדום/ירוק משמשת לציון דיוק מסה, זמן שמירה, סוג איזוטופ וביטחון בזיהוי על ידי התאמת מסד נתונים.

תוכנת SCIEX OS מאפשרת למשתמשים לסנן תוצאות ולהציג רק את התרכובות העומדות בקריטריוני הקבלה ונופלות במרווחי סמך שהוגדרו על ידי המשתמש. זה יכול למצוא במהירות תוצאות ממוקדות במסדי נתונים גדולים.

מסד הנתונים של TCM של ספקטרום MS/MS מאפשר התאמה משנית ומניב תוצאות אמינות יותר (צבע אפור במסד הנתונים מציין נתוני MS/MS)

הספרות מכילה שמות ונוסחאות מולקולריות של פנוליםגליקוזידרכיבים פעילים. באמצעות התהליך הנ"ל לזיהוי מרכיבי המטרה, נקבע שהדגימה מכילה 39 סוגים של גליקוזידים פנוליים:

cistanche component form

חוץ מהפנוליגליקוזידרכיבים פעילים, Cistanche מכיל גם מספר רב של תרכובות כגון אירידואידים, גליקוזידים וליגננים. תוצאות הזיהוי הן כדלקמן:

רשימת הזיהוי של האירידואידים, הגליקוזידים והליגנאנים:

cistanche iridoids, glycosides and lignans identification list

1.2: חיפוש במסד נתונים:

53 תרכובות התקבלו מזיהוי תואם במסד הנתונים של TCM: 43 יונים חיוביים, 22 יונים שליליים ו-12 חזרות, המפורטות להלן. מלבד פנולי פעילגליקוזידים, אירידואידים, גליקוזידים וליגננים, Cistanche מכיל גם

2. ניתוח רכיבים לא ממוקד

ניתן לבצע זיהוי רכיבים לא ממוקדים באמצעות פונקציית החיפוש המובנית ChemSpider כדי לקבוע את הסיווג והסוג של לא ידועים. לזיהוי רכיבים לא ממוקדים, פשוט בחרו במצב "לא ממוקד" וחיפוש הנוסחה המולקולרית יפתח שיטת עיבוד. זרימת העבודה היא כדלקמן:

עבור אלמונים מוחלטים, תוצאות החיפוש של נוסחאות מולקולריות מוצגות בחלון דפדפן שיא בחלק התחתון של ספקטרום המסה של TOF MS; עם חיפוש במסד הנתונים של ChemSpider, התוצאות רשומות לפי עדיפות, והמידע המבני המתקבל ב-ChemSpider מושווה אוטומטית לספקטרום MS/MS המתקבל, ומספק משוב משני לזיהוי מהיר.

סיכום

1. רכישת נתונים מהירה ברזולוציה גבוהה; זריקה בודדת הניבה נתוני TOF MS ו-MS/MS ברזולוציה גבוהה, עם 39 רכיבים פנוליים גליקוזידים ניתנים לזיהוי ו-16 אירידואידים, ליגנאנים וגליקוזידים;

2. מסד נתונים TCM של ספקטרה משנית מספק מידע התאמה נוסף, והתוכנה מספקת באופן אוטומטי ציון התאמה של מסד הנתונים. באמצעות הניקוד ניתן לזהות בקלות, במהירות ובדייקנות את רכיבי הרפואה הסינית;

3. המכשיר פשוט ובעל תיקון אוטומטי בלחיצה אחת על מנת להבטיח שאנליסטים עם כל מידה של מומחיות יוכלו להשיג נתונים מהימנים ואיכותיים;

4. גרסת התוכנה החדשה של SCIEX OS משלבת רכישת נתונים, עיבוד (כמותי ואיכותי), תצוגה, דיווח וניהול מסד נתונים. הוא פותר את הקשיים איתם מתמודדים משתמשים רבים עם ממשק אינטואיטיבי וקל לשימוש;

5. זרימות העבודה הממוקדות והלא ממוקדות הן פשוטות, ומדריך השיטה המובנה מסייע למשתמשים ליצור שיטות בצורה מדויקת ומהירה.

acteoside in cistanche have good effcts to antioxidant