מלטונין מונע חדירת לימפוציטים T לכליות של חולדות עם יתר לחץ דם, המושרה על ידי דיאטה עתירת מלח, על ידי מניעת ביטוי של כימוקינים ליגנד CXCR3
Mar 14, 2022
למידע נוסף:ali.ma@wecistanche.com
אריאל ביאר1, רואן חשאב2, יהונתן שרעבי1,2,3, אהוד גרוסמן1,2,3ואבשלום ליבוביץ1,2,3,*
1רפואה ד', המרכז הרפואי חיים שיבא, תל-השומר 5262000, ישראל; arielbier@gmail.com (AB);Yehonatan.Sharabi@sheba.health.gov.il (YS); Ehud.Grossman@sheba.health.gov.il (EG)2 Hypertension Unit, the Chaim Sheba Medical Center, Tel-Hashomer 5262000, Israel;rawankhasbab@gmail.com3הפקולטה לרפואה סאקלר, אוניברסיטת תל-אביב, תל-אביב 6997801, ישראל*
תקציר: במחקר קודם הדגמנו זאתמלטוניןמונעכִּליָהנזק במודל של יתר לחץ דם המושרה על ידי מלח על ידי הפחתת מתח חמצוני. שיערנו שהאפקט הזה כרוך בתכונות האימונומודולטוריות של smelatonin. חולדות רגישות למלח In vivo Study-Dahl (DSS) קיבלו מזון רגיל, דיאטה עתירת מלח (HSD), או HSD ומלטונין(30 מ"ג/ק"ג/יום) במים שלהם במשך 8 שבועות.כליותנקצרו לבידוד ואפיון לימפוציטים מיידי על ידי ציטומטריית זרימה (CD3 פלוס CD4 פלוס ו-CD3 פלוס CD8 פלוס ) ועבור כימוציטים כימוציטים (בעיקר CXCLכימוקינים) מחקרי ביטוי גנים. תאי מזנגיה (RMC) מחקר במבחנה, חולדה, תורבו במדיום עתיר מלח ללא ועםמלטונין. HSD היה קשור להסתננות כלילית משמעותית של לימפוציטים CD4 פלוס ו-CD8 פלוס T בהשוואה לביקורת. מלטונין הפחית משמעותית את חדירת הלימפוציטים בכליות. HSD הגביר באופן משמעותי את ביטוי ה-mRNA של CXCLכימוקיניםהוספת מלטונין ל-HSD ביטלה השפעה זו. טיפול בתאי RMC במלח הגביר את הביטוי של CXCL10 ו-CXCL11 אך לא של CXCL9. מוֹסִיףמלטוניןלתקשורת התרבות מנעו את הגידול הזה. טיפול בחולדות שניזונו מ-HSD במלטונין הפחית את ביטוי ה-chemoattractantmRNA של לימפוציטים בכליות וקשור להפחתה משמעותית של חדירת לימפוציטים T בכליות. למלח עשויה להיות השפעה ישירה על תאי כליה המייצרים כימוקין, אשר קהה על ידי טיפול במלטונין.
מילות מפתח:מלטונין; מלח; לימפוציטים מסוג T; לַחַץ יֶתֶר;כִּליָה; CXCL 9; CXCL 10; CXCL 11
1. הקדמה
יתר לחץ דם (HTN) הוא גורם סיכון קרדיווסקולרי מוביל שניתן לשינוי. עקב הזדקנות האוכלוסייה, השכיחות של HTN עולה בהתמדה, ומגיעה עד ל-30 אחוז בגילאים מתקדמים [1]. למרות אפשרויות טיפול רפואיות שונות, השליטה העולמית ב-HTN גרועה. ההשלכות של HTN בלתי מבוקר הן הרסניות, ויוצרות השפעה שלילית עצומה על בריאות הציבור [2].
גורמים התנהגותיים, סביבתיים וגנטיים שונים מעורבים בפתוגנזה של HTN. תכולת המלח הגבוהה בתזונה המערבית הוערכה כתורם עיקרי ל-HTN וקשורה לעלייה בתחלואה ובתמותה. הנחיות ויוזמות ציבוריות ממליצות להפחית את צריכת המלח לאוכלוסייה הכללית. עם זאת, לא כל אדם עשוי להפיק תועלת מהגבלה זו, מכיוון שהפתופיזיולוגיה המחברת רגישות למלח ל-HTN אינה מובנת במלואה וזקוקה לשיפור הבנה מכניסטית [3]. לפיכך, אסטרטגיות חדשות הן חיוניות להבנה ושליטה טובה יותר של HTN, מה שהופך פרדיגמות מחקר חדשות לצורך מיידי.
דלקת ולחץ חמצוני נמצאו מעורבים בפתוגנזה של HTN חיוני. תוך כדי מחקר אחר הטריגרים שמתחילים וממשיכים תהליכים אלה, מודלים ניסיוניים רבים של HTN מצביעים על מעורבות התגובה החיסונית ההסתגלותית [4].
לחץ כדייתרונות Cistanche ותופעות לוואי לתפקוד הכליות
רמזים המחברים חסינות אדפטיבית ל-HTN כבר קיימים מאז שנות ה-60. עם זאת, רק לאחרונה, עם הבנה טובה יותר של מערכת החיסון, ניתן היה להשיג התקדמות בכיוון זה. מחקר חלוצי של Guzik וחב'. הוכיח כי אנגיוטנסין (Ang) II או מלח HTN של דהאוקסיקורטיקוסטרון (DOC) הוקהה בעכברי rag1-/-, אשר חסרים בלימפוציטים T ו-B, והעברה מאמצת של תאי T, אך לא B, יכולה לשחזר את תגובת ה-BP [5]. מאז מאמר זה, רכיבי חסינות מאמצים שונים נמצאו רלוונטיים לפתוגנזה של HTN ברוב המודלים הנפוצים של בעלי חיים. גם תפקידם של תאי T במודל HTN המושרה על ידי מלח נחקר בהרחבה. מחקרים במבחנה מראים שמלח עשוי לדחוף התמיינות תאי T נאיבית לתאי TH17 [6]. עבודות רבות in vivo במודלים של HTN המושרה על דיאטה עתירת מלח (HSD), כגון חולדות רגישות למלח Dhal (DSS), מראים חדירת תאי T כלייתית נרחבת [7-9].
בין התהליכים הפיזיולוגיים הרבים,של מלטוניןהמעורבות בוויסות לחץ הדם היא אינטואיטיבית במקצת. הדפוס הצירקדי של לחץ הדם מעודד מחקר מקיף לגבי מלטונין ו-HTN. עבודות רבות בעבר, בבני אדם ובמודלים ניסיוניים, חיברו רמות נמוכות של מלטונין ל-HTN [10]. ישנם כמה נתונים קליניים המצביעים על כך שתוספת מלטונין עשויה לטפל ב-HTN, בעיקר עבור חולים עם HTN לילי [11]. חוסר העקביות של נתונים אלה, לעומת זאת, מעלה שאלות לגבי האם תכונות מלטונין שאינן צירקדיות מעורבות גם בוויסות לחץ הדם.
התכונות האנטי דלקתיות והנוגדות חמצון של מלטונין הצביעו על כך שמלטונין יוצר אינטראקציה עם מערכת החיסון. נתונים מתעוררים השפיעו על תפקידו של איתות מלטונין בהתפתחות, הפעלה, התמיינות וזיכרון של תאי T. יש הוכחות לכךמלטוניןקולטנים של ממברנה וגרעין נמצאים על תאי T [12,13].מלטוניןמשפיע על ייצור ציטוקינים רבים המעורבים בתגובה חיסונית, כגון אינטרפרון (IFN) - שהוא מווסת ציר של תגובת Th1 [14].
לחץ חמצוני ותגובת תאי T, על פי כמה חוקרים, פועלים בשיתוף פעולה בקידום התפתחות של HTN ונזק ליתר לחץ דם באיברים [15]. בעבודה הקודמת שלנו, הוכחנו זאתמלטוניןמפחית מתח חמצוני מקומי (כלייתי) ומונע פיברוזיס כליות ופרוטאינוריה הנגרמת על ידי מלח במודל חולדה HTN רגיש למלח (מודל DSS) [16]. מכיוון שללחץ חמצוני יש תפקיד מרכזי בתגובה חיסונית אדפטיבית הקשורה ל-HTN, שיערנו שהתכונות האימונומודולטוריות של מלטונין אחראיות לתפקיד המגן שלו ב-HTN המושרה על ידי HSD.
מטרת מחקר זה היא להעריך האםמלטוניןמקטין את תגובת תאי T המושרה על ידי מלח ולהבהיר את המנגנונים האחראים להשפעה זו.
2. חומרים ושיטות
2.1. בעלי חיים ופרוטוקול מחקר
פרוטוקול המחקר אושר על ידי הוועדה המוסדית לאתיקה של בעלי חיים במרכז הרפואי שיבא בישראל. מצב בריאותם נוטר על ידי מדידת משקל הגוף ותצפית כללית יומית לתנועה ולמצבים בריאותיים של כל חיה. חולדות זכרים רגישות למלח Dahl, בני ארבעה שבועות (RGD Cat# 1582190, RRID: RGD_1582190), שוכן במתקן לבעלי חיים בכלובים רגילים (שתי חולדות לכל כלוב) בטמפרטורה של 22 מעלות צלזיוס עם מחזור חושך של 14 הלייט/10 שעות. החולדות נשמרו על דיאטת מלח רגילה וקיבלו מי ברז לשתות באופן חופשי לתקופת הסתגלות של חמישה ימים. לאחר מכן חולקו החולדות לשלוש קבוצות (n=8), בהתאם לתזונה, במשך תקופה של 8 שבועות. לפי ועדת האתיקה, בעלי חיים שהראו סימני מחלה וסבל היו אמורים להקריב.
קבוצת הביקורת ניזונה מתזונה סטנדרטית לחולדות (2018 SC; Teklad Envigo, מדיסון, WI, ארה"ב) ומי ברז; קבוצת הדיאטה עתירת המלח (HSD) קיבלה דיאטת מלח מועשרת תואמת (4 אחוזים) (TD.120485; Teklad Envigo, מדיסון, WI, ארה"ב) ומי ברז, והמלטוניןהקבוצה ניזונה מאותה דיאטת מלח מועשר (4 אחוזים) עם מלטונין (M5250; סיגמא, רחובות, ישראל) (30 מ"ג/ק"ג ליום) במי השתייה. משקל גוף וצריכת מים נמדדו מעת לעת. כמות המלטונין הנכונה הומסה בצורכי מי הגפרור לכל כלוב על מנת לספק את המינון הנכון לכל חיה. יום אפס מוגדר כיום תחילת צריכת HSD ומלטונין. בסוף המחקר, החולדות הוקרבו על ידי הרדמה עמוקה עם 3 אחוז איזופלורן (עומק ההרדמה שאושר על ידי לחיצת כף הרגל האחורית) והכליותנקצרו. שתי הכליות הוסרו ונכרתו. הכליות נלקחו לניתוח ציטומטריית זרימה למעט מספר מנות שהוסרו במהירות והוקפאו בנוזל N2 ואוחסנו ב-80 ◦C. רקמות קפואות שימשו למיצוי RNA.
סימפטומים של מחלת כליות Cistanche
2.2. PCR של תמלול הפוך בזמן אמת בזמן אמת
רמות ביטוי mRNA של גנים הובררו ב-כִּליָהרקמה על ידי זמן אמת כמותי transcriptase-PCR (qRT-PCR). רנ"א הכולל הופק מרקמת הכליה באמצעות ערכת NucleoSpin RNA (MACHERY-NAGEL, Düren, גרמניה). שעתוק הפוך בוצע באמצעות ערכת שעתוק רבת קיבולת cDNAReverse Transcription של Applied Biosystems (Applied Biosystems, Foster City, CA, ארה"ב). תגובות qRT-PCR בוצעו באמצעות Power SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems,Warrington, בריטניה) ומערכת ה-PCR בזמן אמת Applied Biosystems 7500. תנאי הרכיבה היו: שלב בודד ראשון של 95 ◦C למשך 0.20 דקות ולאחר מכן 40 מחזורים של שלב ההיתוך למשך 3 שניות ב-95 ◦C ושלב ממושך של 30 שניות ב-60 ◦C. בתום 40 המחזורים, בוצע עיקול נמס. התת-יחידה P0 (Rplp0) של גבעול החלבון הריבוזמלי שימש כבקרה פנימית. הפריימרים מפורטים בטבלה 1.
טבלה 1. רשימת הפריימרים של חולדות בשימוש במחקר זה.
2.3. בידוד תאי T מהכליות
לאחר הסרת הקפסולה הכלייתית, השנייםכליותנטחנו והוקנו עם הבוכנה של מזרק של 2 מ"ל דרך מסננת תאים 100 מיקרומטר ב-RPMI 1640 המכילה 2 מ"ל-גלוטמין, 10 אחוז FBS, 10 ug/mL DNase 1 (Stem Cells Technologies, Cambridge, MA , ארה"ב) ו-0.1 אחוז קולגנאז מסוג IV (CLS 4, Worthington Decatur, AL, ארה"ב). התמיסה הודגרה למשך 25 דקות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. תמיסת כביסה (DPBS/2 אחוז FBS/2 מ"מ EDTA) נוספה להומוגנית הכליות כדי להגיע ל-45 מ"ל וסוננה דרך מסננת תאים של 70 מיקרון. התמיסה עברה צנטריפוגה ב-400× גרם/7 דקות. והגלולה הושעתה בתמיסת כביסה של 5 מ"ל וסוננה דרך מסננת תאים של 40 מיקרומטר וצנטריפוגה מחדש ב-400× גרם/7 דקות. הכדור הוחלף מחדש ב-3 מ"ל FBS (10 מ"מ EDTA) והורכב בשכבות Histopaque-1083 (Sigma, רחובות, ישראל), וצנטריפוגה ב-20 ◦C ב-400×g/30 דקות כשהבלם כבוי. שכבת התאים החד-גרעיניים המונחת מעל ה-Histopaque הוסרה, נשטפה בתמיסת כביסה פעמיים, והושעתה בתמיסת כביסה של 5 מ"ל לניתוח flowcytometric.
2.4. ציטומטריית זרימה
מכל קבוצה,כליותנותחו 5-7 חולדות. עבור כל דגימה, 1 × 106 תאים נלקחו. תאים חד-גרעיניים מבודדים הודגרו עם סמנים חוץ-תאיים: אנטי-CD3 (Thermo Fisher Scientific Cat# 12-0030-82, RRID:AB_465493) ובקרה איזוטיפ שלו (Thermo Fisher Scientific Cat# 12-4742-41, RRID :AB_10753770), אנטי-CD4 (Thermo FisherScientific Cat# 17-0040-80, RRID:AB_1210581) ובקרת האיזוטיפ שלו (Thermo Fisher Scientific Cat# 17-4724-81, RRID: AB_470188), אנטי-CD8 (Thermo Fisher Scientific Cat# 25-0084-82, RRID:AB_10548361) ובקרת האיזוטיפ שלו (Thermo Fisher Scientific Cat# 25-4714-80,RRID: AB_657914). כל התאים נותחו באמצעות ציטומטריית זרימה (BD FACSCalibur Flow Cytometry System, RRID: SCR_000401) באמצעות תוכנת FlowJo (FlowJo, RRID: SCR-008520).
תפקוד Cistanche-כליות
2.5. תרבית תאים
קו תאי החולדה המשני, RMC (ATCC Cat# CRL{{0}}, RRID: CVCL_0506), הושג מ-ATCC®. התא תורבה במדיום נשר שונה של Dulbecco (01-055-1A, תעשיות ביולוגיות, בית העמק, ישראל) עם 4 מ"מ L-גלוטמין שהותאמו להכיל 1.5 גרם/ליטר נתרן ביקרבונט ו-4.5 גרם/ליטר גלוקוז והוספה עם 0.4 מ"ג/מ"לLG418 ו-15 אחוז סרום בקר עוברי. מלטונין התקבל מסיגמא (M5250 רחובות, ישראל). A 250 מ"ממלטוניןמלאי נעשה באתנול. תאים תורבו בתנאים רגילים או בעלי מלח גבוה (הוספת 80 מ"מ NaCl למדיום) ללא או עם מלטונין (0.5 מ"מ). הטיפול במלטונין נקבע 45 דקות לפני הוספת NaCl למדיום. כל הניסויים היו בצלחות של 6 באר עם 3 × 105 תאים לבאר ובוצעו על ידי 6 ניסויים עצמאיים.
2.6. ניתוח סטטיסטי
הנתונים מוצגים כממוצע ± SEM ניתוחים סטטיסטיים בוצעו באמצעות IBMSPSS Statistics, RRID: SCR_019096. ניתוח שונות של שונות (ANOVA) ושיטת Tukey הפוסט-הוקית בחנו את ההבדלים בין הקבוצות. נתוני qPCR בזמן אמת נותחו באמצעות DataAssist, RRID: SCR_014969.
3. תוצאות
3.1. מלטונין מגן על חולדות הצורכות HSD
גיל החולדות במהלך מחקר זה היה 4-13 שבועות. בגיל זה, רווחתם של החולדות מסומנת על ידי עלייה במשקל שהוצגה על ידי קבוצת הביקורת [17]. עם זאת, HSDgroup הגיעה לרמה ביום 30 ובתוספת שלמלטוניןל-HSD שיפר את התופעה הזו (איור 1א). קבוצת HSD הציגה שיעור תמותה גבוה, כאשר 50 אחוז מהחולדות מתו או סבלו ממצב קליני המצריך המתת חסד על פי כללי ועדת האתיקה של בעלי חיים, במהלך תקופת הניסוי. תוספי מלטונין מנעו את התמותה של החולדות באופן משמעותי, כאשר רק אחת מתוך שמונה חולדות מתה ביום 58, בסוף תקופת הניסוי (איור 1B).
איור 1.מלטוניןשיפור בלחץ הדם והישרדות ב-HSD. חולדות DSS טופלו במשך 9 שבועות עם HSD עם ובלי מלטונין. דיאטה עתירת מלח הפחיתה את משקל הגוף מיום 36 ומלטונין מיתנה את ההשפעה הזו (A). HSD העלה את שיעור התמותה מהיום הרביעי0. טיפול ב-HSD-fedrats במלטונין משפר את הישרדותם. (ב). (n=8) *-p פחות או שווה ל-0.05 מלח ומלח בתוספת מלטונין לעומת שליטה. #-p פחות או שווה ל-0.05 מלח לעומת בקרה ומלח בתוספת מלטונין. HSD - דיאטה עתירת מלח.
3.2. מלטונין מונע חדירת תאי T בכליות הנגרמת על ידי HSD
בודדנו תאים מה-כִּליָהוהעביר אותם לסמן תאי T, CD3. תאי CD3 פלוס הוגדרו ל-CD4 ו-CD8. גם CD3 פלוס CD4 פלוס וגם CD3 פלוס CD8 פלוס היו גבוהים משמעותית ב-HSD (5.18 ± 1.62 ו-4.6 ± 0.75 אחוזים, בהתאמה) בהשוואה לבקרה (0.16 ± {{18} }.{{20}}2ו-0.95 ± 0.15 אחוזים, בהתאמה) ומלטוניןהשלמה ל-HSD הפחיתה את תאי CD3 פלוס CD4 פלוס ו-CD3 פלוס CD8 פלוס חזרה לרמות בקרה (0.68 ± 0.21 ו-1.37 ± 0.45, בהתאמה) (איור 2א-ד).
איור 2. מלטונין מונע חדירת תאי T אלכִּליָה. תאי T בודדו מכליות של חולדות והועברו ל-CD3. התאים החיוביים של התקליטור3-הוסגרו עבור CD4 ו-CD8. מלטונין (C) הפחית גם את CD3 פלוס CD4 פלוס וגם CD3 פלוס CD8 פלוס בהשוואה ל-HSD ללא מלטונין (B) ללא הבדל מקבוצת הביקורת (A). ניתוח עבור כל החולדות מוצג ב-(D) (n=7-8). HSD - דיאטה עתירת מלח. *-p פחות או שווה ל-0.05 לעומת שליטה. #-p פחות או שווה ל-0.05 לעומת מלח בתוספת מלטונין.
3.3. מלטונין מפחית כימוקינים מסוימים בכליות שהיו מווסתים ב-HSD
הגיוס של תאי T לרקמות דלקתיות מוסדר על ידי ביטוי כימוקין מקומי. לכן, מדדנו את הביטוי של שתי משפחות כימוקינים אצל החולדותכליות: משפחת הליגנדים הכימוקינים (CXC motif) (CXCL) ומשפחת הליגנדים הכימוקינים (C-Cmotif) (CCL).
עבור משפחת CXCL, CXCL 9, 10 ו-11 אשר מושכים תאי T לרקמת המטרה שלהם באמצעות הקולטן CXCR3 על תאי T, הווסרו באופן משמעותי בחולדות HSD. ההשלמה שלמלטוניןל-HSD הפחיתו את הביטוי שלהם בחזרה לרמות בקרה. אותו דפוס זוהה עבור CXCL 1 ו-16. עם זאת, עבור CXCL12, לא זוהה שום וויסות עלייה ב-HSD (איור 3A).
עבור משפחת ה-CCL, CCL 2, 4, 12, 17, 19 ו-CX3CL1 לא הראו הגברת ויסות ב-HSD. CCL3 היה מווסת ב-HSD, אך לא זוהה שינוי משמעותי עם הוספת מלטונין לתזונה. עבור CCL7 עלייה משמעותית בהס"ד והורדה משמעותית בתוספת שלמלטוניןל-HSD זוהה (איור 3B).
איור 3. Upregulation שלכליותכימוקיניםב-HSD עם ובלי מלטונין. הביטוי של משפחת ליגנד כימוקין (מוטיב CXC) (CXCL) (A), משפחת ליגנד כימוקין (מוטיב CC) ו-CX3CL1 (B) נקבע בחולדות. (n=7–8) *-p פחות או שווה ל-0.05 לעומת שליטה. #-p פחות או שווה ל-0.05 לעומת מלח בתוספת מלטונינג. HSD - דיאטה עתירת מלח.
3.4. ההשפעה הישירה של מלטונין על קו תאי RMC Mesangial
לאחר מכן התמקדנו ב-CXCL9, 10 ו-11 המושכים תאי T על ידי קישור לקולטן CXCR3. קבענו את הביטוי של אלהכימוקיניםבתאי RMC שהם קו תאים מזנגיאלי של חולדה.
טיפלנו בתאים עם 80 mM NaCl ללא ועם 0.5 mMמלטונין. ריכוז זה של NaCl העלה משמעותית את הביטוי של CXCR10 בפי 2.4 ± 0.26- בהשוואה לבקרה, והתוספת של 0.5 mM מלטונין ירדה באופן משמעותי הביטוי הזה ל-1.4 ± 0.{{10}}פיפול בהשוואה לבקרה (איור 4A). עבור CXCL11, 80 mM NaCl הגדיל משמעותית את הביטוי פי 3 ± 0.48- בהשוואה לבקרה, והוספה של 0.5 mM מלטונין הפחיתה באופן משמעותי את הביטוי הזה ל-1.8 ± 0.{{22 }}קפל בהשוואה לבקרה (איור 4B). CXCL9 לא זוהה בתאי RMC.
איור 4. מלח העלה ויסות של ביטוי CXCL10 ו-CXCL11 בשורת תאים mesangial שבה הטיפול במלטון הוריד את הביטוי שלו. RMC (קו תאי מזנגיאלי של חולדות) טופלו במלח 80 mM עם ובלי 0.5 mM מלטונין. CXCL10 (A) ו-CXCL11 (B) הווסרו על ידי טיפול במלח ותוספת שלמלטוניןלצמצם את הרגולציה הזו. הגרפים מציגים 6 ניסויים עצמאיים. *-p פחות או שווה ל-0.001 לעומת פקד #-p פחות או שווה ל-0.005 לעומת מלח 80 mM ומלטונין 0.5 mM. $-p פחות או שווה ל-0.05 לעומת מלח 80 mM ומלטונין 0.5 mM.
4. דיון
ההשפעה המיטיבה שלמלטוניןעל HTN הוכח במחקרים קודמים והוצע כדרך פעולה אפשרית עבור HTN עמיד לטיפול [18]. במחקר הראשון שלנו, התמקדנו בעקה חמצונית וחשפנו שמלטונין מפחית מתח חמצוני המושרה על ידי HSD. במחקר הנוכחי, התמקדנו בהשפעה החיסונית הסתגלותית והראינו שמלטונין משפר את ההישרדות של חולדות שניזונו עם HSD. השפעה זו קשורה להפחתה בתאי T החודרים לכליה ולהורדת הוויסות שלכִּליָהביטוי כימוקין.
נתונים היסטוריים מראים שחולדות DSS הצורכות HSD מפתחות HTN חמור ומציגות שיעורי תמותה גבוהים יותר [19]. Dahl עצמו דיווח בעת ביסוס המודל שכאשר חולדות DSS הונחו על HSD (8 אחוז NaCl) בגמילה (גיל 21-23 ימים), הן פיתחו במהירות HTN וכולן מתו עד השבוע ה-16 של האכלת מלח [20]. מאוחר יותר, לאחר כמה שינויים בזן, Rapp et al. דיווחו כי כל החולדות מתו תוך שמונה שבועות מה-HSD (8 אחוזים NaCl) [21]. לחולדות במחקר שלנו היה שיעור תמותה גבוה אך לא הגיע ל-100 אחוז, כנראה בגלל האחוז הנמוך יותר (4 אחוז) של מלח בתזונה שלהם. למרות זאת, ברור שכךמלטוניןתוסף מנע באופן משמעותי את תמותה של חולה.
עלייה במשקל היא סמן לרווחת החולדות בגיל 4-13 שבועות. DSS ratsoriginate מ-Sprague Dawley, שהוא זן מאופיין היטב. בגיל החולדות שהשתמשנו בהן בניסויים שלנו, החולדות אמורות לעלות במשקל באופן עקבי [22]. במחקרים רבים על בעלי חיים, הפחתת משקל נחשבת לאחת מ"נקודות הסיום" של הניסויים [23]. ממספר מחקרים, ברור ש-HSD בחולדות DSS מביא לשיעורי עלייה במשקל נמוך יותר בהשוואה לבקרות [24,25]. בהתאם למחקרים אלו, ראינו גם הבדלי משקל בין הקבוצות. כאן, החולדות לא עלו במשקל לאחר ארבעה שבועות של HSD. מלטונין עצר את ההשפעה הזו של ה-HSD גם כן, שכן החולדות שטופלו במלטונין המשיכו לעלות במשקל, אם כי פחות מהבקרות.
היכולת שלמלטוניןלהורדת לחץ הדם במודלים של בעלי חיים התגלה בסוף שנות השבעים של המאה ה-20 [26-28]. מאז, זה דווח במספר דגמים אחרים, כגון שתזונה עתירת פרוקטוז גורמת לתסמונת מטבולית בחולדות בעלות יתר לחץ דם ספונטנית [29,30]. המחקרים שלנו בתחום זה הם הראשונים להראות שמלטונין ממלא תפקיד ב-HTN המושרה על ידי מלח על ידי מניעת נזק לאיברים והפחתת תמותה.
במחקר זה, הראינו ש-HSD גורם לחדירת לימפוציטים מסוג T ל-כִּליָה, תהליך שתואר בחולדות DSS בעיקר על ידי קבוצתו של מטסון [31–33]. התפקיד המרכזי של תהליך החדירה זה במודל ה-DSS הוכח על ידי מחקרים רבים שראו כי חולדות DSS חסרות תאי T מוגנות מפני HTN המושרה על ידי HSD והעברת ספלנוציטים מחמירה HTN רגיש למלח [34].
מלטונין יכול להשפיע על תאי T בהיבטים שונים (לסקירה, ראה [35]). מחקר זה הראה זאת לראשונהמלטוניןמפחית את המשיכה של תאי CD4 plus ו-CD8 plus Tcells ל-כִּליָהב-HSD. השפעה זו של מלטונין עשויה להיות המנגנון המדגיש את השפעתו המיטיבה במודל זה.
היכולת של מלטונין להפחית את חדירת תאי T תוארה במודל העכברים האוטואימונית (EAE). ב-EAE, מלטונין הוכח כמפחית את החדירה של תאי CD4 פלוס T ותאי Th17 לתוך מערכת העצבים המרכזית [36,37].
משיכת תאי T לרקמה ספציפית מווסתת בעיקר על ידי ריכוזים גבוהים מקומיים שלכימוקיניםשהם ציטוקינים כימוקטיים השולטים על דפוסי הנדידה והמיקום של תאי מערכת החיסון. שתי משפחות כימוקינים גדולות המעוררות חדירת תאי T הן משפחות הכימוקינים של מוטיב CXC (CXCL) ו-CC motif ligand (CCL) [38].
Cistanche לשיפור תפקוד לקוי של הכליות
במחקר שלנו, לא מצאנו דפוס קבוע בתגובת משפחת CCL ל-HSDand toמלטונין. מתוך התשעכימוקיניםבמשפחה זו, רק CCL7 ו-CLL21 נצפו כמגבירים את הביטוי שלהם עקב HSD, ותוספי מלטונין הפחיתו את זה. HSD הגביר את הביטוי של CCL3, אך לא זוהתה הפחתה בחולדות שטופלו במלטונין. מחקר שנערך לאחרונה באותו מודל הראה ש-HSD מגביר את הוויסות של CCL2 ב-theכִּליָהעל ידי שימוש בשיטת RNA-Seq [39]. עם זאת, מחקר זה בדק את הרמות בימים 3 ו-21 לאחר תחילת הדיאטה. במחקר שלנו, בדקנו את הרמות לאחר שמונה שבועות. יתכן שביטוי הכימוקין משתנה במהלך תקופת HSD.
לעומת זאת, הרמות של רוב משפחת CXCL, כולל CXCL 1, 9, 10, 11 ו-16, עלו בחולדות שטופלו ב-HSDמלטוניןתוספת זו ביטלה את התוספת הזו. רק CXCL12 לא הראה עלייה בתגובה ל-HSD.
CXCL9, CXCL10 ו-CXCL11, הנקראים "ליגנדים ל-CXC chemokine receptor 3 הניתנים לאינטרפרון", נגרמות על ידי IFN- והם הליגנדים של ה-CXC chemokine receptor 3(CXCR3). מחקרים in vivo הוכיחו את חשיבותם בהפעלה ובגיוס של לימפוציטים T לאיבר המטרה [40-42]. Youn et al. הראו, בחולים עם יתר לחץ דם אנושיים, גם חדירת כליות של תאי T וגם רמות מוגברות במחזור של כל שלושת ה-CXCR3כימוקינים, מה שמצביע על כך ש-CXCR3 והליגנדים שלו רלוונטיים לתאי T המעורבים ב-HTN אנושי [43]. מחקר אחר הוכיח ש-CXCL10 מוגבר בחולים עם יתר לחץ דם, ורמותיו נמצאות בקורלציה לערכי לחץ הדם שלהם [44].
בשל מחקרים אלו, התמקדנו ב-CXCL9, CXCL10 ו-CXCL11. תרביתנו את קו תאי החולדה המזנגיאלי וטיפלנו בהם ב-80 מ"מ NaCl ו-0.5 מ"מ מלטונין. מצאנו ש-CXCL 10 ו-11 מווסתים בתאים והמלטונין מבטל את הגובה הזה. התוצאות שלנו מצביעות על כך שהשפעת המלח בהעלאת CXCL 10 ו-11, וההשפעה ההפוכה שלמלטוניןשניהם זוהו ישירות בתאים מנזגיאליים. לעומת זאת, CXCL9 לא זוהה בתאים אלה.
למחקר שלנו יש מגבלות. בתוצאות ה-FACS שלנו, רבים מה-CD3 plus היו כפול שליליים עבור CD4 ו-CD8. אותן תוצאות נראו במחקר של Mattson מ-2010 [31]. עם זאת, במחקרים עדכניים יותר מקבוצתו של מטסון, תאי CD3 plus CD4-CD8-היו מעטים מאוד [32,33,45,46]. הירידה המשמעותית בתאי CD3 השלילי הכפול יכולה להיות תוצאה של הוספת סמן CD45 ורק ניתוח התאים שהיו חיוביים ל-CD45, וזה מה שבוצע במחקרים המאוחרים של Mattson. ייתכן שהאוכלוסיה הגדולה של CD3 plus CD4-CD8- היא חפץ. עם זאת, אין חפץ ידוע עבור אוכלוסיית התאים CD3 פלוס CD4 פלוס ו-CD3 פלוס CD8 פלוס.
5. מסקנות
לסיכום, דיאטה עתירת מלח קשורה לחדירת תאי T לתוךכליותשל חולדות DSS. מלח גם הגביר את הביטוי של חומרים כימיים ספציפיים לתאי T בכליה. טיפול עםמלטונין(30 מ"ג/ק"ג/יום) ביטל את ההשפעות הללו (מלטוניןמפחית את החדירה הנגרמת על ידי HSD של תאי T לתוך הכליות יחד עם הפחתה בביטוי כימוקין ליגנד CXCL3).
המחקר שלנו במבחנה הוכיח שמלח ומלטונין עשויים לווסת את הביטוי הכימוטרלי על ידי השפעה ישירהכִּליָהתאים.
תרומות מחבר: מושגיות, AL; ניתוח פורמלי, AB ו-RK; חקירה, RK;מתודולוגיה, AB ו-AL; כתיבה - טיוטה מקורית, AB ו-AL; כתיבה - סקירה ועריכה, YSand EG כל המחברים קראו והסכימו לגרסה שפורסמה של כתב היד.
מימון: מחקר זה לא קיבל מימון חיצוני.
הצהרת ועדת הביקורת המוסדית: פרוטוקול המחקר אושר על ידי הוועדה המוסדית לבעלי חיים במרכז הרפואי שיבא, פרוטוקול מס' 1219/19/אנים ופרוטוקול משרד הבריאות מס' 16418.
הצהרת הסכמה מדעת: לא רלוונטי.
הצהרת זמינות נתונים: הנתונים המוצגים במחקר זה זמינים על פי בקשה מהמחבר המקביל.
תודות: המחברים מודים לזהבה שבתאי על התמיכה הטכנית המצוינת ולמייקל קנובסקי על שירותי העריכה שלו.
ניגודי עניינים: המחברים אינם מצהירים על ניגוד עניינים.
הפניות
1. אולסן, MH; Angell, SY; אסמה, ש.; Boutouyrie, P.; בורגר, ד.; Chirinos, JA; דמשקנו, א.; Delles, C.; Gimenez-Roqueplo, AP;Hering, D.; et al. קריאה לפעולה ואסטרטגיית מסלול חיים להתמודדות עם הנטל העולמי של לחץ דם מוגבר על הדורות הנוכחיים והעתידיים: ועדת Lancet בנושא יתר לחץ דם. Lancet 2016, 388, 2665–2712. [CrossRef]
2. O'Brien, E. ועדת Lancet בנושא יתר לחץ דם: טיפול בנטל העולמי של לחץ דם מוגבר על הדורות הנוכחיים והעתידיים. ג'יי קלין. יתר לחץ דם 2017, 19, 564–568. [CrossRef]
3. אודונל, מ.; מנטה, א.; Yusuf, S. צריכת נתרן ובריאות הלב וכלי הדם. Circ. מילון 2015, 116, 1046–1057. [CrossRef]
4. Schiffrin, EL מנגנוני שיפוץ של עורקים קטנים, טיפול נגד יתר לחץ דם ומערכת החיסון ביתר לחץ דם.Clin. תחקור. Med. 2015, 38, E394–E402. [CrossRef]
5. Guzik, TJ; Hoch, NE; בראון, KA; מקאן, לוס אנג'לס; רחמן, א.; דיקלוב, ש.; גורונזי, ג'; Weyand, C.; האריסון, DG תפקידו של ה-Tcell ביצירת יתר לחץ דם המושרה על ידי אנגיוטנסין II ותפקוד לקוי של כלי הדם. J. Exp. Med. 2007, 204, 2449–2460. [CrossRef][PubMed]
6. קליינווייטפלד, מ.; מנזל, א.; טיץ, י. קווקן, ח.; יוסף, נ.; לינקר, ר"ע; מולר, DN; Hafler, DA נתרן כלוריד מניע מחלה אוטואימונית על ידי אינדוקציה של תאי TH17 פתוגניים. טבע 2013, 496, 518–522. [CrossRef]
7. Mattson, DL; לונד, ה.; גואו, סי; רודמילר, נ.; Geurts, AM; Jacob, H. מוטציה גנטית של רקומבינציה המפעילה גן 1 inDahl חולדות רגישות למלח מחלישה יתר לחץ דם ונזק לכליות. אמ. J. Physiol. רגיל. מספר שלם. Comp. פיזיול. 2013, 304, 407–414. [CrossRef]
8. Mattson, DL חודרים לתאי חיסון בכִּליָהביתר לחץ דם רגיש למלח ופגיעה כלייתית. אמ. J. Physiol. רן. Physiol.2014, 307. [CrossRef] [PubMed]
9. לו, X.; קראולי, דלקת SD ביתר לחץ דם רגיש למלח ונזק לכליות. Curr. Hypertens Rep. 2018, 20. [CrossRef][PubMed]
10. בייקר, י. Kempinski, K. תפקיד שלמלטוניןבוויסות לחץ דם: תרופה נוגדת יתר לחץ דם. קלינ. Exp. Pharm.Physiol. 2018, 45, 755–766. [CrossRef] [PubMed]
11. גרוסמן, ע.; לאדון, מ.; Zisapel, N. השפעת מלטונין על לחץ דם לילי: מטה-אנליזה של ניסויים מבוקרים אקראיים. Vasc. ניהול סיכוני בריאות. 2011, 7, 577–584. [CrossRef] [PubMed]
12. פוזו, ד.; דלגדו, מ.; פרננדס-סנטוס, JM; Calvo, JR; Gomariz, RP; Martin-Lacave, I.; אורטיז, ג.ג; Guerrero, JM ביטוי של mRNA קולטן Mel1a-מלטונין בתת-קבוצות T ו-B של לימפוציטים מהתימוס והטחול של חולדה. פאסב ג'יי אוף. Publ. Fed.Am. Soc. Exp. ביול. 1997, 11, 466–473. [CrossRef]
13. Guerrero, JM; פוזו, ד.; García-Mauriño, S.; אוסונה, סי; מולינרו, פ.; Calvo, JR מעורבות של קולטנים גרעיניים בייצור משופר של IL-2 על ידי מלטונין בתאי Jurkat. אן. NY Acad. Sci. 2000, 917, 397–403. [CrossRef] [PubMed]
14. פארז, מ.פ; מסנקפרוני, תעודת זהות; Mendez-Huergo, SP; יסטה, א.; Murugaiyan, G.; גארו, LP; Balbuena Aguirre, ME; פאטל, ב.; ישראלית, מ.סי; ז'ו, ג; et al.מלטוניןתורם לעונתיות של הישנות טרשת נפוצה. Cell 2015, 162, 1338–1352. [CrossRef] [PubMed]
15. קיראבו, א.; פונטנה, ו'; דה פאריה, נגמ"ש; לופרנה, ר.; Galindo, CL; וו, ג'; Bikinyeva, AT; דיקלוב, ש.; שיאו, ל.; Chen, W.; et al. חלבונים שעברו שינוי באיזוקטל DC מפעילים תאי T ומעודדים יתר לחץ דם. ג'יי קלין. תחקור. 2014, 124, 4642–4656. [CrossRef][PubMed]
16. ליבוביץ, א.; וולקוב, א.; וולושין, ק.; שמש, ג; Barshack, I.; גרוסמן, E. מלטונין מונעכִּליָהפציעה במודל של יתר לחץ דם המושרה על ידי דיאטת מלח על ידי הפחתת מתח חמצוני. J. Pineal Res. 2016, 60, 48–54. [CrossRef] [PubMed]
17. הוקינס, פ.; Morton, DB; בורמן, או.; דניסון, נ.; הונס, פ.; ג'נינגס, מ.; ליין, ש.; מידלטון, ו'; Roughan, JV; Wells, S.; et al. מדריך להגדרה ויישום פרוטוקולים להערכת רווחה של חיות מעבדה: דוח אחד עשר של קבוצת העבודה המשותפת של BVAAWF/FRAME/RSPCA/UFAW בנושא חידוד. מַעבָּדָה. אנים. 2011, 45, 1–13. [CrossRef]
18. סימקו, פ.; רייטר, RJ; פאוליס, ל.מלטוניןכחלופה רציונלית בטיפול השמרני של יתר לחץ דם עמיד.Hypertens Res. 2019, 42, 1828–1831. [CrossRef] [PubMed]
19. Rapp, JP Dahl חולדות רגישות למלח ועמידות למלח. יתר לחץ דם 1982, 4, 753-763. [CrossRef]
20. דאל, ל"ק; Knudsen, KD; היינה, מ.א.; Leitl, GJ השפעות של בליעת עודף מלח כרונית. שינוי של יתר לחץ דם ניסיוני בחולדה על ידי שינויים בתזונה. Circ. מילון 1968, 22, 11–18. [CrossRef] [PubMed]
21. ראפ, JP; Dene, H. התפתחות ומאפיינים של זנים מרובים של חולדות רגישות למלח Dahl ועמידות למלח. Hypertens 1985,7, 340-349. [CrossRef]
22. ברואר, מ.; גרייס, מ.; קוץ, CM; Koya, V. ניתוח השוואתי של מאפייני הצמיחה של חולדות Sprague Dawley המתקבלות ממקורות שונים. מַעבָּדָה. Anim Res. 2015, 31, 166–173. [CrossRef]
23. טלבוט, ס"ר; בירנת, ש.; בלייך, א.; ואן דייק, RM; ארנסט, ל.; Häger, C.; Hilgers, SOA; קוגל, ב.; קוסקה, I.; קולה, א.; et al.הגדרת הפחתת משקל גוף כנקודת קצה אנושית: הערכה קריטית. מַעבָּדָה. אניים 2020, 54, 99–110. [CrossRef] [PubMed]
24. גשקה, ש.; קרצ'מר, א.; שרקובסקה, י. Evgenov, OV; לורנץ, ב.; האק, א.; הוכר, ב.; סטאש, J.-P. גירוי guanylatecyclase מסיס מונע שיפוץ רקמה פיברוטית ומשפר את ההישרדות בחולדות Dahl הרגישות למלח. PLoS ONE 2011, 6,e21853. [CrossRef] [PubMed]
25. וואנג, י.; מו, ג'יי ג'יי; ליו, FQ; רן, KY; Xiao, HY; יאנג, ז.; Yuan, ZY מעבר אפיתל-למזנכימלי המושרה על ידי מלח בחולדות הרגישות ל-Dahlsalt תלוי בלחץ דם מוגבר. בראז. J. Med. ביול. מילון כומר חזיות. Pesquisa Med. אי ביול. 2014, 47, 223–230. [CrossRef]
26. הולמס, SW; Sugden, D. Proceedings: השפעת המלטונין על יתר לחץ דם המושרה על ידי pineallectomy בחולדה. בר. J. Pharm.1976, 56, 360P–361P.
27. זנובוני, א.; Zanoboni-Muciaccia, W. יתר לחץ דם ניסיוני בחולדות שעברו אצטרובל. Life Sci. 1967, 6, 2327–2331. [CrossRef]
28. זנובוני, א.; פורני, א.; Zanoboni-Muciaccia, W.; Zanussi, C. השפעת כריתת אצטרובל על לחץ דם עורקי וצריכת מזון ומים בחולדה. J. Endocrinol. תחקור. 1978, 1, 125–130. [CrossRef] [PubMed]
29. Pechánová, O.; זיכה, י. פאוליס, ל.; זנב, ו.; Dobesová, Z.; Kojsová, S.; Jendekova, L.; Sládková, M.; דובינובה, I.; Simko, F.; et al. ההשפעה של N-אצטילציסטאין ומלטונין בחולדות בוגרות בעלות יתר לחץ דם ספונטנית עם יתר לחץ דם מבוסס. יורו J.Pharmcol. 2007, 561, 129–136. [CrossRef] [PubMed]
30. ליבוביץ, א.; פלג, ע.; שרעבי, י.; שבתאי, ז; שאמיס, א.; גרוסמן, E. תפקידו שלמלטוניןבפתוגנזה של יתר לחץ דם בחולדות עם תסמונת מטבולית. אמ. J. Hypertens 2008, 21. [CrossRef] [PubMed]
31. דה מיגל, סי; דאס, ס.; לונד, ה.; Mattson, DL לימפוציטים T מתווכים יתר לחץ דם וכִּליָהנזק ברגישים למלח של Dahl. אמ. J. Physiol. רגיל. מספר שלם. Comp. פיזיול. 2010, 298, R1136–R1142. [CrossRef] [PubMed]
32. אוונס, LC; פטרובה, ג.; קורת', ט.; יאנג, סי; Bukowy, JD; Mattson, DL; Cowley, AW לחץ זלוף מוגבר מניע חדירת תאי T-כליה בחולדה הרגישה למלח Dahl. יתר לחץ דם 2017, 70, 543-551. [CrossRef]
33. עבאיס-בטד, ג'.מ; אלשיך, א.ג.; פאן, X.; Fehrenbach, DJ; Dasinger, JH; לונד, ה.; רוברטס, ML; קריגל, AJ; Cowley, AWJ; Kidambi, S.; et al. השפעות תזונתיות על יתר לחץ דם רגיש למלח Dahl, נזק לכליות ותעתיק T Lymphocyte.Hypertens 2019, 74, 854–863. [CrossRef] [PubMed]
34. פרנבך, דיג'יי; Dasinger, JH; לונד, ה.; זמג', ג'; Mattson, DL העברת ספלנוציטים מחמירה אצל יתר לחץ דם רגישים למלח. Exp. פיזיול. 2020, 105, 864–875. [CrossRef] [PubMed]
35. רן, ו.; ליו, ג'; חן, ש; יין, ג'; וואנג, ג'; טאן, ב.; וו, ג.; באזר, FW; פנג, י.; לי, ט.; et al. איתות מלטונין בתאי T: פונקציות ויישומים. J. Pineal Res. 2017, 62. [CrossRef]
36. Álvarez-Sánchez, N.; קרוז-צ'מורו, I.; לופז-גונסאלס, א.; Utrilla, JC; Fernández-Santos, JM; מרטינז-לופס, א.; Lardone,PJ; Guerrero, JM; Carrillo-Vico, A. Melatonin שולט באנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיוני על ידי שינוי האיזון T effector/רגולטורי. התנהגות המוח. חיסון. 2015, 50, 101–114. [CrossRef]
37. חן, ש.-ג'; Huang, S.-H.; חן, ג'-ו.; וואנג, ק.-צ.; יאנג, י.-ר.; ליו, פ.-פ.; לין, G.-J.; Sytwu, H.-K.מלטוניןמשפר את ביטוי האינטרלוקין 10 ומדכא כימוטקסיס כדי לעכב דלקת באתרו ולהפחית את חומרת ה-autoimmuneencephalomyelitis ניסיוני. Int. Immunopharmacol. 2016, 31, 169–177. [CrossRef] [PubMed]
38. Griffith, JW; סוקול, CL; ברק, לספירהכימוקיניםוקולטני כימוקין: מיקום תאים להגנה וחסינות המארח.Annu. כומר אימונול. 2014, 32, 659–702. [CrossRef] [PubMed]
39. אלשיך, א.ג.; Dasinger, JH; עבאיס-בטד, JM; Fehrenbach, DJ; יאנג, סי; קאולי, AWJ; Mattson, DL CCL2 מתווך חדירת לויקוציטים מוקדמים בכליות במהלך יתר לחץ דם רגיש למלח. אמ. J. Physiol. רן. פיזיול. 2020, 318, F982–F993. [CrossRef][PubMed]
40. ליו, ל.; קלהאן, חבר הכנסת; הואנג, ד.; Ransohoff, RM Chemokine receptor CXCR3: חידה בלתי צפויה. Curr. חלק עליון. Dev. Biol.2005, 68, 149–181. [CrossRef] [PubMed]
41. חתן, JR; לוסטר, ליגנדים AD CXCR3: פונקציות מיותרות, שיתופיות ואנטגוניסטיות. אימונול. Cell Biol. 2011, 89,207–215. [CrossRef] [PubMed]
42. ואן ראמדונק, ק.; Van den Steen, PE; לייקנס, ש.; ואן דאם, ג'; Struyf, S. CXCR3 ligands במחלות וטיפול. CytokineGrowth Factor Rev. 2015, 26, 311–327. [CrossRef] [PubMed]
43. Youn, J.-C.; יו, HT; לים, BJ; קו, MJ; לי, ג'; Chang, D.-Y.; צ'וי, י"ש; לי, ש.-ה.; קאנג, ש.-מ.; ג'אנג, י.; et al. ImmunosenescentCD8 פלוס תאי T וקולטן כימוקין CXC מסוג 3כימוקיניםמוגברים ביתר לחץ דם בבני אדם. Hypertens 2013, 62, 126–133. [CrossRef] [PubMed]
44. Stumpf, C.; אור, ג; ילמז, א.; לבצ'וק, פ.; קלינגהאמר, ל. שניידר, מ.; דניאל, WG; שמידר, RE; Garlichs, רמות CDSerum של Th1 chemoattractant interferon-gamma-inducable protein (IP) 10 מוגברות בחולים עם יתר לחץ דם מהותי. Hypertens Res. 2011, 34, 484–488. [CrossRef] [PubMed]
45. Rudemiller, NP; לונד, ה.; פריסטלי, JRC; אנדרס, BT; Prokop, JW; יעקב, ח"י; Geurts, AM; כהן, אי.פי; Mattson, DL Mutation of SH2B3 (LNK), מועמד למחקר אסוציאציה רחב גנום ליתר לחץ דם, מחליש יתר לחץ דם רגיש למלח Dahl דרך אפנון דלקתי. יתר לחץ דם 2015, 65, 1111–1117. [CrossRef] [PubMed]
46. ווייד, ב.; פטרובה, ג.; Mattson, DL תפקידם של גורמים חיסוניים ביתר לחץ דם המושרה על ידי אנגיוטנסין II ונזק לכליות בחולדות הרגישות ל-Dahlsalt. אמ. J. Physiol. רגיל. מספר שלם. Comp. פיזיול. 2018, 314, R323–R333. [CrossRef] [PubMed]
