הבדלים בהרכב וביעילות הרפואית של מוצרי גלם ומוצרים מעובדים בקיטור יין מ- Cistanches Herba Ⅱ

Sep 10, 2024

2.3.3 זיהוי משקל גוף וטמפרטורת גוף

חולדות הוזנו בהסתגלות במשך שבוע אחד, תועדו כיום 0, ומשקל הגוף וטמפרטורת פי הטבעת תועדו; לאחר הזרקת הידרוקורטיזון נתרן סוקסינאט ניתנה ברציפות במשך 14 ימים, היא תועדה כ-14 יום, ומשקל הגוף וטמפרטורת פי הטבעת נרשמו; לאחר מודלים מוצלחים, הטיפול התרופתי בוצע על פי סכימת המינון למשך 30 יום, מתועד כ-44 יום, ומשקל הגוף וטמפרטורת פי הטבעת נרשמו.


2.3.4 זיהוי תדירות פעילות ספונטנית

מספר פעילויות החולדות בתוך 5 דקות תועד באמצעות מקליט פעילות ספונטנית של חולדה רב תכליתית. החולדות הונחו במכשיר הפעילות הספונטנית, 3 הדקות הראשונות היו תקופת ההסתגלות, ומספר הפעילויות הספונטניות של החולדות נספר על ידי המקליט ב-5 הדקות האחרונות. החדר צריך להיות שקט, יש לשמור על טמפרטורת החדר ב-18-22 מעלות, והלחות צריכה להישמר ב-45%-65%. מספר הפעילויות הספונטניות ב-0, 14 ו-44 ימים נרשם בהתאמה.


2.3.5 זיהוי אינדקס סרום

לאחר הרדמה של החולדות, נאסף דם מאבי העורקים הבטן, הונח בצינור קרישה, ובוצע בצנטריפוגה במהירות של 2,000 r/min במשך 15 דקות כדי לזהות את התוכן של T, E2, CREA ו-BUN נַסיוֹב.

Buy Cistanche With 25% Echinacoside and 9% Acteoside

CISTANCHE באיכות גבוהה למחלת כליות

שירות תומך של Wecistanche

דוא"ל:wallence.suen@wecistanche.com

ווטסאפ/טלפון:+86 15292862950

2.3.6 חישוב אינדקס איברים

לאחר הרדמה של החולדות ואיסוף דם, הוסרו הכליות, האשכים, האפידדימיס, שלפוחית ​​הזרע והערמונית, ניגבו בנייר סינון והמסה נשקללה מיד. מדד האיברים חושב על סמך מסת החולדה.

אינדקס איברים=מסת איבר/מסת גוף


2.3.7 זיהוי רקמות

לאחר הוצאת אשכי החולדה, המסה נשקללה והוכנסה מיד למקרר של -80 מעלות להקפאה. לפני המדידה, הם הוצאו, הופשרו, ונוספו תמיסת מלח פיזיולוגית מקוררת מראש כדי ליצור הומוגנית רקמה בתנאי אמבט קרח, והוכנה הומוגנית רקמה של 10%. ההומוגנית עברה מיד בצנטריפוגה של 5,000 r/min למשך 10 דקות, והסופרנטנט נלקח לשימוש. על פי דרישות הערכה, שיטת ההידרוקסילמין שימשה לקביעת תכולת SOD ברקמת האשכים, ושיטת TBA שימשה לקביעת תכולת ה-MDA ברקמת האשכים.



image

איור 2 דיאגרמת זרם יונים הכוללת של Cistanches Herba ו-Cistanches Herba מבושלים ביין במצב יונים שליליים


3 תוצאות

3.1 הבדלים בהרכב של Cistanche deserticola לפני ואחרי עיבוד

3.1.1 דיאגרמת זרימת יונים כוללת

במחקר זה, גלאי ספקטרומטר המסה השתמש במצב יונים שליליים של מקור יינון אלקטרוספריי (ESI-). איור 2 מציג את דיאגרמת זרימת היונים הכוללת של דסרטיקולה Cistanche גולמית ומוצרים מבושלים ביין במצב יונים שליליים. ניתן לראות כי ההרכב של דגימות Cistanche deserticola מורכב מאוד, ויש הבדלים ברורים בין Cistanche deserticola גולמי למוצרים מבושלים ביין. בנוסף, על ידי חיפוש במסד הנתונים הקיים והתייעצות עם ספרות רלוונטית עבור הרכב יסודות והתאמת תרכובות, זוהו בסך הכל 45 תרכובות, כפי שמוצג בטבלה 3.

טבלה 3 תרכובות מזוהות בדגימות Cistanches Herba



3.1.2 תוצאות PCA

דיאגרמות ה-PCA של מוצרי Cistanche deserticola גולמיים ומוצרים מבושלים ביין מוצגים באיור 3, שניתן לאגד בנפרד. ניתן לקבוע שחייבים להיות הבדלים בהרכב של Cistanche deserticola לפני ואחרי העיבוד.


3.1.3 תוצאות OPLS-DA

לאחר עיבוד OPLS-DA, דיאגרמת S-Plot מוצגת באיור 4. שני הקצוות של העקומה בצורת S באיור מייצגים את הסמנים האופייניים עם התרומה הגדולה ביותר בכל קבוצה. על ידי ניתוח נתוני יונים מקטעים עם ערכי VIP גדולים מ-1 בשני הקצוות של העקומה בצורת S והשוואה עם הביקורת, זוהו ארבעה מרכיבים דיפרנציאליים: echinacoside (tR=8.39 min, m/z 785. 250 9), verbascoside (tR=11.51 דקות, m/z

623.198 1), isoverbascoside (tR=13.38 min, m/z623.198 1) ו-tubuloside B (tR=18.41 min, m/z 665. 208 7).

HIGH-QUALITY CISTANCHE FOR KIDNEY DISEASE

משקה סיטנשה באיכות גבוהה למחלת כליות

3.2 תוצאות ניסויים בבעלי חיים

3.2.1 תצפית מצב כללי

לאחר הדוגמנות, החולדות הראו סדרה של תסמינים כמו חיבת חום ופחד מקור, התכרבלות וקשת גב, חוסר תחושה, שיער עמום ומבולגן, גפיים קרות, ירידה בתיאבון, משקל גוף צלול ושתן צלול. לאחר מתן, התסמינים לעיל בכל קבוצה השתפרו באופן משמעותי.


3.2.2 שינויים בתזונה ובפעילות רצונית של חולדות לאחר דוגמנות

לאחר הזרקה מתמשכת של הזרקת הידרוקורטיזון נתרן סוקסינאט למשך 14 ימים, נמדדו משקל הגוף, מספר הפעילויות הרצוניות תוך 5 דקות וצריכת המזון, צריכת המים ותפוקת השתן של חולדות בכל קבוצה כדי לקבוע אם המודל של מחסור בכליות יאנג. הוקם בהצלחה. התוצאות מוצגות בטבלה 4. כפי שמוצג בטבלה 4, לאחר 14 ימים של מתן הידרוקורטיזון, בהשוואה לקבוצה הרגילה, כל הקבוצות הראו ירידה במשקל הגוף, ירידה בצריכת מזון, עלייה בצריכת מים, עלייה בתפוקת השתן, וירידה בפעילות רצונית, והיו הבדלים משמעותיים (P < 0.05). על פי התיאור של כמה תסמונות חוסר יאנג בכליות במינוח האבחון והטיפול הקליני של הרפואה הסינית המסורתית: "פחד מגפיים קרות וקרה, במיוחד מתחת למותניים ולברכיים, עור חיוור או כהה, שתן צלול וארוך, מתן שתן תכוף בשעה לילה, לשון חיוורת עם פרווה לבנה, דופק חלש וכו'." בשילוב עם התבוננות במצב כללי לאחר דוגמנות, הסימפטומים לאחר דוגמנות תאמו את התיאור של מחסור ביאנג בכליות, מה שמצביע על כך שהדוגמנות הצליחה.

לֹא.תִרכּוֹבֶתt/דקהמצב יינוןנוסחה מולקולריתערך תיאורטי (מ/ז)ערך ניסוי (מ/ז)שגיאה (×10⁻⁶)מידע על קטעים (מ/ז)
1סוכר ענבים0.79[M–H]C₆H₁₂O₆179.055179.0550.2097, 89
2טאנין ענבים0.81[M–H]C₁₅H₁₄O₈331.139331.1391.53295, 313, 311
3סורביטול0.88[M–H]C₁₂H₂₂O₁₁341.108341.1081.50179, 161, 143, 131
4חצי סוכר חלב1.10[M–H]C₆H₁₂O₆181.071181.0712.68163, 101
5חומר תזונה על בסיס צמחי C1.20[M–H]C₂₈H₄₃O₁₂561.197561.197-0.01543, 461, 399
6סוכר אורנים1.21[M–H]C₁₆H₂₀O₈341.123341.1241.63179, 161, 143, 131, 119
7חומצה סוקסינית1.52[M–H]C₄H₄O₄117.018117.0193.4099, 73
8חומר תזונתי ב' על בסיס צמחי2.04[M–H]C₂₈H₃₃O₁₃577.192577.192-0.03297, 208, 183, 178, 171, 153
9תה פלבנואידים2.20[M–H]C₇H₆O₆N₂164.071164.0721.00103
10תמצית אגס בייג'ינג3.73[M–H]C₁₄H₁₂O₁₁373.113373.1155.48355, 327, 297
11תמצית גוג'י ברי4.28[M–H]C₂₀H₂₄O₁₈461.169461.1690.00485, 293, 215, 197, 167
12תמצית עלי אננס4.74[M–H]C₁₁H₁₂O₇487.145487.1460.88389, 179
13תמצית פרחי היביסקוס4.63[M–H]C₂₄H₂₈O₁₀537.197537.1970.00501, 415, 375, 357
148- -הידרוקסילקטון5.27[M–H]C₁₂H₂₀O₈241.096241.0970.04213, 189
15Rhizoma Dioscoreae6.10[M–H]C₁₈H₂₄O₈361.115361.1132.20309, 163, 137
16תמצית פרחי קש6.82[M–H]C₁₅H₂₁O₁₀327.108327.1091.00307, 195
17אבקת דבורים7.20[M–H]C₁₄H₂₈O₈437.472437.4720.00393, 373, 355
18-קרוטן7.53[M–H]C₂₉H₄₆O₁₆629.192629.1920.00617, 479, 459, 315, 221
19בטטה סגולה7.70[M–H]C₁₇H₂₄O₉371.134371.1340.00349, 328
20תמצית אגס בייג'ינג8.02[M–H]C₁₇H₂₄O₉371.134371.1340.00349, 328
21תמצית פריחת אפרסק8.09[M–H]C₂₈H₄₀O₁₂561.197561.1970.00543, 461, 399
22תמצית ג'ינסנג10.39[M–H]C₈H₁₈O₈799.266799.2660.03417, 439, 543, 561
23תמצית תה אולונג10.63[M–H]C₂₄H₃₄O₁₆539.149539.1490.10637, 621, 471, 473
24תמצית עלי לוטוס11.51[M–H]C₂₇H₃₄O₁₂549.197549.1970.00197, 153, 135
25תמצית פרחים שעירים11.51[M–H]C₂₉H₄₈O₁₆623.197623.196-0.21387, 531
26תמצית יריות במבוק11.51[M–H]C₃₇H₄₈O₂₁827.261827.259-1.92461, 315, 135, 297, 161
27תמצית חרצית11.60[M–H]C₂₁H₃₀O₉429.118429.1180.00663, 625, 413
286-אצטיל פלבון12.32[M–H]C₁₈H₁₈O₆345.118345.1190.02301, 281
29תמצית פירות לונגן13.41[M–H]C₁₈H₁₈O₈417.154417.159-0.11165, 119, 327, 129, 27


image

איור 3 דיאגרמת ניתוח רכיבים ראשית של CistanchesHerba (1) ו- Cistanches Herba מבושלים ביין (2)

image

איור 4 S-חלקה של ציסטאנצ'ס הרבה וצ'יסטאנצ'ס חרבה המבושלת ביין


טבלה 4 שינויים בתזונה ובפעילות אוטונומית של חולדות לאחר דוגמנות (xs ±, n=10)

קְבוּצָהמשקל גוף (ג)24 שעות צריכת מזון (ג)24 שעות צריכת מים (מ"ל)תפוקת שתן 24 שעות (מ"ל)ספירת פעילות ספונטנית של 5 דקות
נוֹרמָלִי285.14 ± 9.2615.81 ± 2.1920.86 ± 3.5911.09 ± 2.57100.4 ± 14.7
דֶגֶם226.67 ± 12.14*11.92 ± 3.69*32.53 ± 4.65*15.58 ± 6.38*72.7 ± 11.6*
יחסי ציבור222.89 ± 9.87*10.65 ± 4.20*31.54 ± 3.55*19.36 ± 5.20*68.9 ± 18.0*
PW219.16 ± 10.75*12.37 ± 3.42*29.11 ± 4.78*16.01 ± 3.96*62.8 ± 14.9*
JK230.02 ± 7.95*10.22 ± 2.26*34.57 ± 5.36*19.13 ± 7.57*69.3 ± 11.3*

הערות:
השוואה לקבוצה הרגילה: *P < 0.05.
*P < 0.05 לעומת קבוצה רגילה.

טבלה 5 שינויים במשקל הגוף של חולדות במהלך מחזור המינון (xs ±, n=10)

קְבוּצָהמשקל גוף (ג)0 d14 d44 d
נוֹרמָלִי
192.12 ± 5.48285.14 ± 9.26430.02 ± 6.14
דֶגֶם
187.24 ± 4.56*226.67 ± 12.14*328.33 ± 14.77*
יחסי ציבור
185.07 ± 5.11222.89 ± 9.87*345.25 ± 8.22*#
PW
183.48 ± 6.44219.16 ± 10.75*362.17 ± 7.82*#Δ
JK
194.13 ± 5.90230.02 ± 7.95*356.94 ± 7.47*#

הערות:
*P < 0.05 לעומת קבוצה רגילה.

*P<{{0}}.05 לעומת קבוצה רגילה; #P<0.05 לעומת קבוצת מודל; △P<0.05 לעומת PRgroup. אותו דבר כמו להלן.


3.2.3 שינויים במשקל הגוף של חולדות

בהתבסס על השינויים במשקל הגוף של שלוש פעמים ב-0, 14 ו-44 ימים, נותחו ההשפעה של הזרקת im hydrocortisone sodium succinate על משקל הגוף של חולדות והתאוששות משקל הגוף של חולדה לאחר טיפול התערבותי תרופתי. התוצאות מוצגות בטבלה 5.

ניתן לראות מטבלה 5 כי לאחר שבוע של האכלה אדפטיבית, משקל הגוף של החולדות עלה והיה מאוזן יחסית. משקלי הגוף של החולדות היו כולם (200±20) גרם. לא היה הבדל משמעותי בין הקבוצות, מה שמעיד על כך שסביבת האכלה ותנאי התזונה מתאימים להישרדותן של חולדות. לאחר 14 ימים של מתן הידרוקורטיזון, בהשוואה לקבוצה הרגילה, פחתה העלייה במשקל הגוף של החולדות בקבוצת המודל ובכל קבוצת תרופות, והיה הבדל משמעותי (P<0.05). The body weight of the rats in the normal group was

HIGH-QUALITY CISTANCHE WHISKEY FOR KIDNEY DISEASE

3.2.4 שינויים בטמפרטורת הגוף של חולדות

בהתבסס על השינויים בטמפרטורת הגוף של שלוש פעמים ב-0, 14 ו-44 ימים, נותחו ההשפעה של הזרקה תוך שרירית של הזרקת הידרוקורטיזון נתרן סוקסינאט על טמפרטורת הגוף של חולדות והתאוששות טמפרטורת הגוף של חולדות לאחר התערבות תרופתית . התוצאות מוצגות בטבלה 6.


3.2.5 שינויים בפעילות הספונטנית של חולדות

בהתבסס על השינויים במספר הפעילויות הספונטניות ב-3 ימים ב-0, 14 ו-44 ימים, ההשפעה של Im Hydrocortisone Sodium Succinate Injection על מספר הפעילויות הספונטניות בחולדות והחלמה של מספר הספונטניות נותחו פעילויות בחולדות לאחר טיפול התערבות תרופתי. התוצאות ראו טבלה 7.

ניתן לראות מטבלה 7 כי 14 ימים לאחר הזרקת הידרוקורטיזון, בהשוואה לקבוצה הרגילה, מספר הפעילויות הספונטניות תוך 5 דקות מקבוצה אחרת ירד באופן משמעותי, והיה הבדל משמעותי (P<0.05). One month after administration, compared with the model group, the number of spontaneous activities of rats in each Cistanche deserticola administration group increased (P<0.05); compared with the normal group, there was no significant difference in the number of spontaneous activities of rats in each Cistanche deserticola administration group; Compared with the JK group, there was no significant difference in the number of spontaneous activities among the Cistanche deserticola administration groups. It shows that Cistanche deserticola extract can increase the number of spontaneous activities in rats with kidney-yang deficiency, and after 30 days of treatment, the number of spontaneous activities is close to that of normal rats.


3.2.6 מדד איברים

לאחר 30 יום של מתן רציף, החולדות צמו במשך 12 שעות והוקרבו. נמדדה איכות האיברים. ההשפעות של מודל המחסור ביאנג הכליות המושרה על ידי הידרוקורטיזון על איברי החולדות ומתן תמציות שונות של Cistanche deserticola נצפו מרמת האיברים. התאוששות של איברי חולדה לאחר נטילת התרופה. לאחר מתן הידרוקורטיזון, משקל הגוף של החולדות השתנה מאוד, וגם מסת האיברים השתנתה באופן משמעותי. ניסוי זה השתמש במדד האיברים כאינדיקטור שיש לקחת בחשבון

ההשפעות על האיברים נצפו לפני ואחרי מתן. התוצאות מוצגות בטבלה 8.

ניתן לראות מטבלה 8 שבהשוואה לקבוצה הרגילה, לאחר הזרקה תוך שרירית של הידרוקורטיזון נתרן succinate בחולדות, אינדקס האיברים של הכליות, האשכים, האפידימיס והערמונית בקבוצת המודל ירדו כולם (P<0.05), indicating that hydrocortisone-induced The kidney-yang deficiency model in rats will cause changes in the indexes of the kidneys, testicles, epididymis and prostate, but has little effect on the seminal vesicles.

בסך הכל, בהשוואה לקבוצת המודל, השתפרו מדדי האיברים של כל קבוצת מתן, מה שמצביע על כך שכדורי Cistanche deserticola גולמיים, Cistanche deserticola יין ו-Jingui Shenqi Pills יכולים להקל על הירידה באינדקס האיברים במודל של מחסור בכליות-יאנג.


מנקודת המבט של כל איבר, בהשוואה לקבוצת המודל, קבוצת היין Cistanche deserticola יכולה להגדיל משמעותית את אינדקס האיברים של הכליה (P<0.05). Comparing different drug administration groups, the wine Cistanche deserticola group is better than the raw Cistanche deserticola group (P<0.05). ; From the perspective of testicular index, compared with the model group, each administration group can significantly increase the organ index of the testis (P<0.05). Comparing different administration groups, the wine Cistanche deserticola group has a significant advantage over the raw Cistanche deserticola group. (P < 0.05); from the perspective of epididymal index, compared with the model group, each administration group can significantly increase the organ index of the epididymis (P < 0.05); from the perspective of seminal vesicle index, compared with the model group , the wine Cistanche deserticola group can significantly improve the organ index of the seminal vesicles (P<0.05). Comparing different administration groups, the wine Cistanche deserticola group is significantly better than the raw Cistanche deserticola group (P<0.05); from the perspective of the prostate, compared with the model group In comparison, the raw Cistanche deserticola group and the wine Cistanche deserticola group could significantly increase the prostate organ index (P<0.05).


3.2.7 איתור מדדי תפקוד כליות

BUN ו-CREA משקפים את תפקוד הכליות. CREA בסרום הוא התוצר הסופי של חומר אורגני המכיל חנקן, ו-BUN בסרום הוא התוצר הסופי העיקרי של חילוף החומרים של חלבון. שניהם מופרשים בעיקר באמצעות סינון גלומרולרי [10-11]. כאשר תפקוד הכליות נפגע, תפקוד הסינון הגלומרולרי פוחת והריכוזים של שניהם עולים. רמות BUN בדם ו-CREA בדם משקפות את מצב תפקוד הכליות: ככל שרמותיהם גבוהות יותר, כך הפגיעה בתפקוד הכליות חמורה יותר. בניסוי זה, התכולה של BUN ו-CREA בסרום חולדות זוהתה כדי להעריך את ההשפעות של כל קבוצת מתן על תפקוד הכליות בחולדות עם מחסור בכליות-יאנג המושרה על ידי הידרוקורטיזון.

כפי שניתן לראות מטבלה 9, בהשוואה לקבוצה הרגילה, תכולת ה-BUN וה-CREA בקבוצת המודל עלו, והיה הבדל משמעותי (P<0.05), indicating that hydrocortisone caused kidney damage to rats. Compared with the model group, the wine Cistanche deserticola and raw Cistanche deserticola groups can reduce the content of CREA (P<0.05), thereby alleviating kidney damage to a certain extent.

Cistanche desertiloca

3.2.8 זיהוי אינדיקטור הורמוני מין

הכליות מהוות את הבסיס של המולד וממלאות תפקיד חשוב בצמיחה, התפתחות ותהליכי חיים של האדם. הרפואה הסינית המסורתית מאמינה שהכליות מנהלות את הרבייה, והקשר בין הכליות למערכת הרבייה הדוק מאוד. יותר ויותר חוקרים מצאו שלמטופלים עם מחסור בכליות-יאנג יש שינויים משמעותיים בציר ההיפותלמוס-יותרת המוח-גונדאלי, שלעיתים מלווים בסימפטומים של ירידה בהורמוני מין כמו T ו-E2 [12]. בניסוי זה, התוכן של T ו-E2 בסרום נמדד כדי לקבוע את ההשפעות של כל קבוצת מתן על הורמוני המין בחולדות עם מחסור בכליות-יאנג המושרה על ידי הידרוקורטיזון.

כפי שניתן לראות מטבלה 10, בהשוואה לקבוצה הרגילה, התוכן של T ו-E2 בקבוצת המודל ירד (P<0.05), indicating that hydrocortisone can cause a decrease in rat sex hormone levels. Compared with the model group, each administration group was able to significantly increase the levels of T and E2 in serum (P<0.05) and improve the decrease in sex hormones induced by hydrocortisone. Comparing different administration groups, the wine Cistanche deserticola group was better than the raw Cistanche deserticola group (P<0.05). Generally speaking, wine Cistanche deserticola has obvious performance in increasing T and E2 in the serum of rats with kidney yang deficiency, which is consistent with literature reports that phenylethanol glycosides, the main components of wine Cistanche deserticola, have hormone-like effects [13].


3.2.9 זיהוי אינדקס נוגד חמצון

SOD הוא נוגד חמצון המשקף את יכולת הגוף לנקות רדיקלים חופשיים, בעוד ש-MDA הוא התוצר הסופי של תגובת הלחץ החמצוני ויכול לשקף את מידת הנזק החמצוני לגוף. בניסוי זה, תכולת SOD ו-MDA באשכים נמדדה כדי לקבוע את פעילות נוגדת החמצון של כל קבוצת מתן כנגד מודל המחסור ביאנג הכליות המושרה על ידי הידרוקורטיזון.


כפי שניתן לראות מטבלה 11, בהשוואה לקבוצה הרגילה, תכולת ה-SOD בקבוצת המודל ירדה (P<0.05). After 1 month of administration, compared with the model group, the SOD content in the raw Cistanche deserticola group and the wine Cistanche deserticola group increased. Compared with the normal group, the MDA content in the model group increased (P<0.05), indicating that the testicular tissue of rats with kidney-yang deficiency induced by hydrocortisone was oxidatively damaged. After being given Cistanche deserticola extract or Jingui Shenqi Pill positive medicine, each administration group was able to significantly reduce the content of MDA in testicular tissue and alleviate the oxidative damage caused by hydrocortisone. Taken together, both raw Cistanche deserticola and wine Cistanche deserticola can improve the body's ability to resist oxidative damage and alleviate oxidative damage caused by hydrocortisone.


(1) קיבוץ: חולדות קיבלו גישה חופשית למים ולתזונה. לאחר שבוע אחד של האכלה אדפטיבית, הם חולקו באופן אקראי ל-5 קבוצות (טבלה 2), עם 10 חולדות בכל קבוצה, כלומר קבוצה רגילה, קבוצת מודל, קבוצת Cistanche deserticola גולמית (PR), קבוצת Cistanche deserticola מבושל ביין (PW) , ובקרה חיובית Jinkui Shenqi Pill group (JK). (2) דוגמנות: פרט לקבוצה הרגילה, לארבע הקבוצות האחרות הוזרקו כולן עם הזרקת הידרוקורטיזון נתרן סוקסינאט im, במינון של 20 מ"ג/ק"ג, למשך 14 ימים רצופים. לקבוצה הרגילה הוזרק אותה מינון של מי מלח רגיל. המצב הכללי של החולדות בכל קבוצה נצפה כדי לקבוע אם הן הראו תסמינים כמו פחד מקור, העדפה לחום, איברים קרים, שתן צלול וארוך, גב מכורבל וקמור, שיער עמום ומבולגן ודיכאון נפשי. במקביל, נמדדו משקל הגוף, מספר הפעילויות הספונטניות, צריכת מזון, צריכת מים, תפוקת שתן ואינדיקטורים נוספים של החולדות בכל קבוצה.

אולי גם תרצה