Lipidomics: תובנה חדשה לגבי מחלת כליות

איש קשר: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 דוא"ל:audrey.hu@wecistanche.com

Ying-Yong Zhao, Nosratola D. Vaziri, Rui-Chao Lin

תַקצִיר

עקב השכיחות של סוג-2 סוכרת ויתר לחץ דם, כרוניכִּליָהמחלה (CKD) התגלתה כבעיה מרכזית בבריאות הציבור ברחבי העולם. CKD מביא למוות מוקדם ממחלות לב וכלי דם מואצות וסיבוכים שונים אחרים. גילוי מוקדם, ניטור קפדני של תפקוד הכליות ותגובה להתערבות טיפולית הם קריטיים למניעת התקדמות CKD וסיבוכיה. לרוע המזל, סמנים ביולוגיים מסורתיים של תפקוד כליות אינם רגישים מספיק או ספציפיים כדי לזהות שלבים מוקדמים של המחלה כאשר ההתערבות הטיפולית היא היעילה ביותר. לכן, סמנים ביולוגיים רגישים יותר שלכִּליָהמַחֲלָהדרושים לאבחון מוקדם, ניטור וטיפול יעיל. CKD גורם לשינויים עמוקים במטבוליזם של שומנים וליפופרוטאין, אשר בתורם תורמים להתקדמות של CKD ולסיבוכים הקרדיווסקולריים שלו. ליפידים ומטבוליטים שמקורם בשומנים ממלאים תפקידים מגוונים וחשובים ביותר במבנה ובתפקוד של תאים, רקמות וביו-נוזלים. ליפידומיקה היא ענף של מטבולומיקה, המקיפה את המחקר העולמי של שומנים ותפקודם הביולוגי בבריאות ובמחלות כולל זיהוי של סמנים ביולוגיים לאבחון, פרוגנוזה, מניעה ותגובה טיפולית למחלות שונות. סקירה זו מסכמת את ההתפתחויות האחרונות ב-lipidomics ויישומה למגווןכִּליָהמחלותכולל גלומרולונפריטיס כרונית, נפרופתיה IgA, אי ספיקת כליות כרונית, קרצינומה של תאי כליה, נפרופתיה סוכרתית ואי ספיקת כליות חריפה במחקר קליני וניסיוני. טכנולוגיות אנליטיות, ניתוח נתונים, כמו גם סמנים ביולוגיים מטבוליים ידועים כיום של מחלות כליה מטופלים. נדונות נקודות מבט עתידיות ומגבלות פוטנציאליות של ליפידום.

Cistanche deserticola מונעכִּליָהמַחֲלָה, לחץ כאן כדי לקבל את המדגם

1. הקדמה

עקב השכיחות של סוג-2 סוכרת ויתר לחץ דם, כרוניכִּליָהמַחֲלָה(CKD) התגלה כבעיה מרכזית בבריאות הציבור ברחבי העולם. CKD גורם לנכות ומוות מוקדם ממחלות לב וכלי דם מואצות והסיבוכים הנלווים לה [1]. מצבים פתולוגיים רבים כוללים הפרעות גנטיות, מטבוליות, רעילות, אימונולוגיות, זיהומיות, המודינמיות, מכניות ואחרות המובילות להתפתחות והתקדמות שלכִּליָהמַחֲלָה. גילוי מוקדם, ניטור קפדני של תפקוד הכליות ותגובה להתערבות טיפולית הם קריטיים לאבחון בזמן ולמניעת התקדמות CKD וסיבוכיו. לרוע המזל, סמנים מסורתיים של תפקוד כליות אינם רגישים או ספציפיים מספיק כדי לזהות CKD וסיבוכים קרדיווסקולריים או אחרים שלו בשלב מוקדם כאשר ההתערבות הטיפולית היא היעילה ביותר. לדוגמה, הסמנים הביולוגיים הנפוצים ביותר, קרי, קריאטינין בסרום, אוריאה ופינוי קריאטינין, מושפעים במידה רבה מגורמים שאינם תלויים בתפקוד ובמבנה הכליות הפנימיות. בהקשר זה, מסת השריר משפיעה באופן משמעותי על קריאטינין, צריכת חלבון ומאזן נוזלים מווסתים אוריאה, והשימוש במעכבי אנזים הממיר אנגיוטנסין או חוסמי קולטן לאנגיוטנסין, כמו גם צריכת חלבון בתזונה, משפיע על פינוי קריאטינין. לכן, יש צורך לפתח סמנים ביולוגיים רגישים וספציפיים לגילוי מוקדם של מחלת כליות ולמעקב אחר התקדמותה ותגובתה להתערבות טיפולית. תובנה על ההבדלים הדינמיים בוויסות הגנטי, החלבון והמטבוליטים, האינטראקציה והתפקוד במחלות כליה עשויה לזהות סמנים ביולוגיים אבחנתיים ופרוגנוסטיים ויעדים טיפוליים חדשים [2-4].

CKD מביא לשינויים עמוקים במטבוליזם של שומנים וליפופרוטאינים [5-7]. הפרעות השומנים הקשורות, בתורן, תורמות להתקדמות של CKD וסיבוכים קרדיווסקולריים ואחרים [8-10]. Lipidomics, המחקר העולמי של שומנים בתוך תאים, רקמות וביו-נוזלים, כולל ניתוח של מיני שומנים ושפע שלהם כדי להבהיר את התפקוד הביולוגי, לוקליזציה תת-תאית ופיזור רקמות. שומנים במשקל מולקולרי קטן כגון חומצות שומן, גליצרוליפידים, גליצרופוספוליפידים (GPs) וספינגוליפידים משרתים תפקידים מגוונים ומורכבים בבריאות ובמחלות. הם ממלאים תפקידים חשובים בוויסות של נורמליכִּליָהתפקוד ופתוגנזה שלכִּליָהמַחֲלָה. מחקרים קודמים הראו ביטוי מוגבר של ציקלואוקסיגנאז גלומרולרי-1 או -2 במודלים אשפוזיים ובעלי חיים של גלומרולונפריטיס [11-13] והגברת ביטוי של ציקלואוקסיגנאז גלומרולרי-2 במודלים אשפוזיים ובעלי חיים של זאבת נפריטיס [13,14]. הוכח כי עיכוב ציקלואוקסיגנאז משפר דלקת נפריטיס פסיבית של Heymann ודלקת זאבת בחיות ניסוי [14-16]. Leukotrienes, הקשורים לפציעה גלומרולרית דלקתית ולמוצר lipoxygenase (12-hydroxyeicosatetraenoic acid), מתווך אנגיוטנסין II וגורם גדילה משתנה{10}}גרמו להתרחבות מסנגיאלית בנפרופתיה סוכרתית (DN) [17]. 20-חומצות Hydroxyeicosatetraenoic ו- epoxyeicosatrienoic היו מעורבות במספר צורות של פגיעה בכליות, כולל פגיעה כלייתית בתסמונת מטבולית [18-20] והוכח כי סרמידים ממלאים תפקיד בפתוגנזה של פגיעה כלייתית חריפה. יחד, ישנן עדויות מתגברות התומכות בתפקידם של שומנים ומטבוליטים שמקורם בשומנים בפתוגנזה של מחלת כליות. לפיכך, ניתוח של מתווכים שומנים מרכזיים התגלה ככלי חשוב באבחון, פרוגנוזה וטיפול במחלת כליות.

מאמר זה סוקר את ההתקדמות האחרונה בשימוש בליפידומיקה בבירור הפתוגנזה והפוטנציאלטיפול בכִּליָהמַחֲלָה.

2. מחלת כליות

ביולוגיה מערכות מאפשרת ניתוח בזמן של רשתות רגולטוריות וביולוגיות במטבוליזם של התא [21-23]. אפיון מקיף של מחלות כליות יכול לספק מידע חשוב ואינטגרטיבי כדי לאפיין טוב יותר את הקשרים המולקולריים העומדים בבסיס הפתופיזיולוגיה הזו על מנת לפתח סמנים אמינים וספציפיים יותר לאבחון, פרוגנוזה, מניעה ותגובה טיפולית [2,24]. הצמיחה של ביולוגיה מערכות ופיתוח של כלים ניסויים וחישוביים חדשים אפשרו את החיבור של מנגנוני ויסות גן-תא-איבר ברמות מרובות כדי לשלב את הביולוגיה המולקולרית והתאית שלכִּליָהמבנה ותפקוד [25–29]. ליפידים ממלאים תפקידים מגוונים וחשובים במערכות ביולוגיות, כולל מבנה דו-שכבתי של הממברנה, אחסון אנרגיה, העברת אותות, וגם מספקים תמיכה פונקציונלית לחלבוני הממברנה ולאינטראקציות ביניהם [30]. לדוגמה, חומצה ארכידונית היא המבשר של איקוסנואידים, הפועלים כמולקולת איתות באמצעות קולטנים ספציפיים המובילים לתהליכים דלקתיים [31]. טריאצילגליצרידים משמשים כאחסון אנרגיה תאית וממלאים תפקיד חשוב בחילוף החומרים ובמחלות [32]. חלק מהמינים של שומנים בדם, כלומר ליזופוספאטידילכולינים (LPC), גליצרופוספטינולמינים (PE), פוספטידילכולינים (PC) וגליצרופוספואינוזיטולים (PI), נראים כפוטנציאלייםכִּליָהסמני מחלה [33]. כאן אנו מספקים סקירה כללית של הגישה הליפידומית בכִּליָהמַחֲלָה.

היתרון של cistanche: טיפול במחלות כליות

3.ליפידים וליפודיומים

3.1.הגדרה, סיווג ותפקוד ביולוגי של שומנים

ליפידים, המרכיבים הבסיסיים של ממברנות ביולוגיות, הם מחלקה מגוונת מבחינה מבנית ותפקודית של מולקולות. בהתאם לביו-סינתזה ולמבנה הכימי, שומנים מוגדרים הידרופוביים או אמפיפיליים. שומנים אמפיפיליים קיימים בשלפוחיות, ממברנות או ליפוזומים בסביבה מימית. שומנים ביולוגיים מקורם בשני סוגים נפרדים של תת-יחידות ביוכימיות: קבוצות איזופרן וקטואציל [34]. בהתבסס על הגדרה זו ניתן לחלק שומנים לשמונה קטגוריות: חומצות שומן, גליצרוליפידים, ספינגוליפידים, רופאי משפחה, סכרוליפידים, שומנים סטרולים, שומני פרנול ופוליקטידים (איור 1) [34]. לחומצות שומן ולגליצרוליפידים יש מבנים פשוטים יחסית. חומצות שומן הן אחד משיעורי השומנים החשובים והמרכיבים הבסיסיים של כל השומנים. לחומצות שומן יש שרשרות פחמן ישרות רוויות או בלתי רוויות באורך של 4-24 אטומי פחמן ו-0-6 קשרים כפולים. חומצות שומן הן מבשרות של שומנים ביו-אקטיביים שונים. האיקוסנואידים כוללים לויקוטריאנים, פרוסטגלנדינים וטרומבוקסנים הממלאים תפקידים חשובים בהתפתחות תהליכים דלקתיים [35]. גליצרוליפידים מורכבים מגליצרולים מונו-, דו-ו-תלת-חלפים, הנבדלים בתכולת חומצות השומן המאושרות לקבוצות ההידרוקסיל של עמוד השדרה של גליצרול [36]. מגוון מחקרים הראו ששינוי סינתזת טריגליצרידים וקטבוליזם ממלאים תפקידים חשובים בהתרחשות והתפתחות של מחלות רבות [37,38]. שומני סטרול, כולל כולסטרול ונגזרותיהם המורכבות ממבנה ליבה מרוכז של ארבע טבעות, הם מרכיבים חשובים של שומני הממברנה. ליפידים של סטרול יש תפקידים ביולוגיים שונים כמו הפונקציה הרגולטורית של איתות תאים ומודולציה של נוזל תאי [39].

GP, הידוע גם בשם פוספוליפידים, נמצאים בכל מקום בטבע הם מרכיבים חשובים של דו-שכבות שומנים, ומעורבים באיתות ובמטבוליזם של התא. בהתבסס על אופי קבוצת הראש הקוטבי במיקום sn-3 של עמוד השדרה של גליצרול באאוקריוטים ו-eubacteria או מיקום sn-1 במקרה של archaebacteria [40], ניתן לחלק את GP לחלק שיעורים הכוללים גליצרופוספוכולינים, חומצות גליצרופוספטידות, גליצרופוספוגליצרולים (PG), גליצרופוספוסרינים (PS), PE ו-PI. רקמת המוח מכילה G גבוה יחסית, ושינויים בהרכבם היו מעורבים בהפרעות נוירולוגיות [41]. חלק מרופאי המשפחה כגון LPC, PC, PE ו-PI זוהו כסמנים ביולוגיים פוטנציאליים של סרטן, כליות ומחלות לב וכלי דם [33,42,43]. ספינגוליפידים מורכבים ממשפחה מורכבת של תרכובות המורכבת מעמוד שדרה בסיסי של 1,3- דיהידרוקסיל, 2-אמינו אלקן או אלקן (בסיס ספינגואיד). ספינגומילין (SM) וספינגוזין הם שני ספינגוליפידים חשובים המורכבים מקבוצת ראש פוספורילכולין וחומצת שומן המקושרות לקבוצת 1-הידרוקסיל ו2-קבוצת אמינו של שרשרת הספינגואיד, בהתאמה. מחקרים קודמים הוכיחו שסרמידים, השייכים לנגזרות N-acyl של ספינגוזין, קשורים ל-CKD [44].

3.2.ליפידום

למרות שתת-שבר של המטבולום, מורכבות מיני השומנים שלו, התכונות הכימיות המובהקות שלהם ופעילות ביולוגית חשובה הפכו את הליפידום למוקד מחקר רב. מטבולומיקה מוגדרת כ"מדידה כמותית של התגובה המטבולית הרב-פרמטרית הדינמית של מערכות חיות לגירויים פתופיזיולוגיים או לשינוי גנטי" [45,46]. Metabolomics הוא ניתוח כמותי לא ממוקד של נוזלים ביולוגיים ורקמות עבור מטבוליטים אנדוגניים במסה מולקולרית נמוכה. ליפידומיקה, כענף של מטבולומיקה, הוצגה לראשונה על ידי האן וגרוס בשנת 2003 [47]. ליפידומיקה הוגדרה כ"אפיון מלא של מינים מולקולריים של שומנים ושל תפקידיהם הביולוגיים בביטוי של חלבונים המעורבים בחילוף החומרים ובתפקוד השומנים, כולל ויסות גנים" [48]. Lipidomics מייצג מעבר ממחקר שומנים בודד לבחינה של מטבוליטים שומנים גלובליים בהקשר משולב מערכות כדי להבין יותר את תפקידם בתהליכים פתופיזיולוגיים. בעשר השנים האחרונות, ליפידומיקה התגלתה כתחום חדש בביולוגיה מערכות והגבירה את העניין באבחון מחלות ובגילוי סמנים ביולוגיים (השמנת יתר, סוכרת, מחלות לב וכלי דם, מחלת אלצהיימר, סרטן הלבלב וכו'), גילוי ופיתוח תרופות, אנושיים מחקר מזון ותזונה [49-55]. גישה רבת עוצמה זו יכולה לחשוף מאפיינים מטבוליים ייחודיים של אירועים נורמליים, פתולוגיים או ספציפיים לטיפול. לאחרונה, מספר מוגבר של מחקרים וסקירות ליפידומיות פורסמו באמצעות ספקטרומטריית מסה (MS), תהודה מגנטית גרעינית (NMR) ושיטות ספקטרוסקופיות אחרות [56-61]. טכנולוגיות הפרדה, כרומטוגרפיית גז (GC), כרומטוגרפיה נוזלית (LC), כרומטוגרפיית נוזלים סופר-קריטית, ואלקטרופורזה נימית, הן קריטיות לבחינה שומנית של דגימות מורכבות [62]. כדי לקבל מידע על יונים מולקולריים מבניים, נעשה שימוש תחילה באנרגיית התנגשות נמוכה ב-MS ולאחר מכן בתנאי אנרגיית התנגשות גבוהה יותר של MS2 כדי להשיג יונים מקטעים. בדרך כלל היון המבשר נבחר ומנוטר על ידי ספקטרומטריית מסה טנדם (MS/MS). גישה זו מספקת מידע מבני רב יותר וזיהוי של מיני שומנים בודדים בדגימות ביולוגיות מורכבות. בנוסף, נעשה שימוש הולך וגובר ב-MS/MS לפיתוח שיטות כמותיות לליפידום ממוקד [63]. עם זאת, גישה זו דורשת מידע המבוסס על MS סריקה מלאה קודמת. בשנת 2005, Wrona et al.[64] הציג את טכניקת MSE שבה שתי פונקציות סריקה הן בו זמנית לאיסוף נתונים. MSE סיפקה סריקות מתחלפות מקבילות לרכישה באנרגיית התנגשות נמוכה עבור מידע יונים מבשר (MS) או אנרגיית התנגשות גבוהה עבור שברי מסה מדויקים בסריקה מלאה, יונים מקדימים ומידע אובדן ניטרלי (MSE). גישה זו סיפקה מידע דומה ל-MS2 קונבנציונלי (MS/MS) בהפעלה אנליטית אחת ומידע מבני הנדרש לזיהוי סמנים ביולוגיים לא ידועים בניתוחים לא ממוקדים [65-70]

יתרונות בריאותיים של cistanche

3.3.שיטות אנליטיות לליפידום

השיטות המסורתיות של ניתוח שומנים כוללות בדרך כלל מיצוי ממס של הדגימות הביולוגיות (דם, רקמה, תא ואורגניזם) ולאחר מכן הפרדת שומנים באמצעות כרומטוגרפיה של שכבה דקה, מיצוי פאזה מוצקה או LC-שלב רגיל והפרדה של מחלקות מסוימות. של שומנים למינים מולקולריים בודדים על ידי כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים (HPLC) - גלאי אולטרה סגול או גלאי פיזור אור באידוי. באמצעות שיטות מסורתיות אלה, ניתן לנתח מינים מולקולריים בודדים של מחלקות שומנים רבות [71]. למרות ש-GC שימש לקביעת תכולת חומצות השומן של הליפידים השונים בשיטת מתיל אסטרים, גישה זו נוטה להיות גוזלת זמן וכרוכה בהידרוליזה של דגימות ונגזרת. באופן כללי, ניתוח שומנים קונבנציונלי דורש בדרך כלל כמות דגימה גדולה מכיוון שמינים פעילים ביולוגית רבים נמצאים בכמויות קטנות מאוד. בשל המורכבות המובנית שלהם, הכנת הדגימה עשויה לכלול עקירות מרובות ובכך להפחית עוד יותר את הרגישות והרזולוציה. בנוסף, שיטות אלו הן עתירות עבודה ולעתים קרובות דורשות גזרה ובכך מגבילות את התפוקה.

לעומת זאת, ניתוח דגימה ישיר עשוי לשמש עבור טרשת נפוצה lipidomics [72,73]. לטכנולוגיות טרשת נפוצה עירוי ישיר יש יכולת שחזור טובה, דיוק ורגישות גבוהה והן גוזלות פחות זמן משיטות מסורתיות. בדרך כלל, יינון מרובע-פול-זמן טיסה באלקטרו-ספריי (ESI-QTOF) ויינון בלייזר בסיוע מטריקס (MALDI) הם מקורות היונים הנפוצים ביותר בניתוח טרשת נפוצה ישירה [74,75]. טרשת נפוצה עירוי ישיר היא פשוטה ומהירה. המגבלה העיקרית שלו היא דיכוי יונים, הפוגע ברגישות ובדיוק כמותי. למרבה הצער, שיטה זו אינה מסוגלת לזהות שומנים איזובריים ואיזומריים, שהמסות שלהם זהות ולעיתים קרובות מייצרות דפוסי פיצול דומים. למרות שהטרשת הנפוצה בעירוי ישיר מוגבלת יחסית בחיפוש אחר תרכובות חדשות ולא ידועות ממאגרי שומנים, ייתכן שיהיה שימושי לסנן מסלולים ביוכימיים במחלות שונות בעתיד. פורסמו סקירות מקיפות של עירוי ישיר ESI/MS, ESI-QTOF/MS ו-MALDI/MS והיישומים שלהם ב-lipidomics [74,75].

טרשת נפוצה משולבת בדרך כלל עם LC עבור lipidomics ומחקרים מבוססי LC-MS ב lipidomics נסקרו [76]. בדרך כלל, היתרונות של גישת LC-MS הם יכולת שחזור טובה, דיוק ורגישות גבוהה לזיהוי שומנים ידועים או חדשים. במהלך העשור האחרון, נעשה שימוש נרחב ב-HPLC-MS עבור ניתוחים ממוקדים ובלתי ממוקדים במטבולומיקה וליפידומיקה תוך שימוש במכשירים קוואדרופולים בודדים, היברידיים וברזולוציה גבוהה. עבור פרופיל גלובלי, שילובים של כרומטוגרפיה נוזלית אולטרה-ביצועית (UPLC) בשילוב עם QTOF/MS או TOF/MS ניידות יוני טנדם הם אפשרויות פופולריות [77-80]. אלה מספקים ניתוח מהיר עם MS ברזולוציה גבוהה. UPLC משתמש בחלקיקים בגודל תת -2 מיקרומטר ופועל בלחצים מוגברים (6000-15,000 psi) ובכך מספק רזולוציה כרומטוגרפית גבוהה לעומת HPLC קונבנציונלי עם חלקיקים של 5 מיקרון [81]. רזולוציה מוגברת נובעת משיפור יחס אות/רעש ורוחב שיא צר לעומת HPLC קונבנציונלי. גישה זו היא יתרון עבור פרופיל מטבולי מכיוון שניתן לזהות מספר עצום של מטבוליטים בריכוזים פיזיולוגיים. למרות שומנים ממקורות ביולוגיים שונים עשויים להיות מופרדים על ידי UPLC-MS [82], להשפעות המטריצה ​​יש השפעה חשובה על פרופילים גלובליים [83]. למרבה הצער, הרגישות בדרך כלל אינה גבוהה כמו ליפידום ממוקד. בנוסף, לא ניתן לייעל את תנאי הניסוי של כל תרכובת מופרדת. בדרך כלל, MS quadrupole משולש משמש לניתוחים ממוקדים על ידי UPLC-MS עם ניטור יונים סלקטיבי. שיטות ליפידים ממוקדות עשויות לכלול סטרולים ואיקוסנואידים כגון חומצות מרה וסטרואידים [84,85]. שיטות מבוססות GC מתאימות לרכיבים נדיפים ולא ניתן להשתמש בהן עבור רוב השומנים. מעניין לציין ש-GC–MS היא השיטה הנפוצה ביותר לניתוח של חומצות שומן חופשיות, חומצות שומן מאסטריות וסטרואידים. חומצות שומן חופשיות וסטרואידים דורשים derivatization או סיליציה, בעוד חומצות שומן אסטרי מנותחות לעתים קרובות כאסטרים מתיל [86]. כרומטוגרפיית נוזלים סופר-קריטית היא טכניקה נוספת ברזולוציה גבוהה שניתן להשתמש בה להפרדה של שומנים שונים. ניתן להשתמש בכרומטוגרפיית נוזלים סופר-קריטית MS עבור פרופיל שומנים מקיף של מספרי דגימות גדולים [87].

טרשת נפוצה של ניידות יונים (IM-MS) ומתודולוגיות רב-ממדיות נחשבות כמתודולוגיות חדשות ונעשה בהן שימוש בטיפול בליפידום [88,89]. ניתן להפריד איזומרים, קונפורמים ואננטיומרים במהירות על ידי IM-MS והוכחו כשימושיים בניתוח של דגימות ביולוגיות מורכבות [78]. להתפתחות של טרשת נפוצה הדמיית יש גם תפקיד חשוב בפיתוח של ספקטרומטריית ניידות יונים הדמיית עם טרשת נפוצה לניתוח שומנים. ספקטרומטריית ניידות יונים עם טרשת נפוצה בשילוב עם דינמיקה מולקולרית מודלים חישוביים יכולים להשתמש לאפיון עתידי של המבנה והיציבות של קומפלקסים המשולבים בשומנים. בנוסף, LC-MS רב מימדי מקיף היא גישה מתפתחת אטרקטיבית לאפיון ליפידומי מקיף של דגימות ביולוגיות מורכבות [90].

3.4.ניתוח נתוני lipidomics

Lipidomics מייצר נתונים עצומים ולניתוח שלהם תפקיד מפתח, במיוחד במחקרים לא ממוקדים. ככזה, ביואינפורמטיקה חזקה היא קריטית. לפני ניתוח סטטיסטי, נדרש עיבוד מקדים של נתונים כולל עיבוד אותות, נורמליזציה של נתונים והמרה, כך שהנתונים הגולמיים עוברים טרנספורמציה לפורמט התואם לניתוח נתונים סטטיסטי [91,92]. בהתחשב במידת השונות הגדולה של השומנים, הצעד הראשון של ניתוח סטטיסטי ללא פיקוח ומפוקח הוא הפחתת נתונים. ניתן להשיג זאת על ידי מספר שיטות, לרבות ניתוח אורתוגונלי חלקי של ריבועים קטנים-הבחנה, ניתוח רכיבים עיקריים (PCA) וניתוח ריבועים קטנים-חלקיים (PLS-DA). ניתן להשתמש בשיטות ללא פיקוח וגם בשיטות מפוקחות, בהתאם למטרה של הניתוח הספציפי. בניתוח נתונים לא מפוקח, מידע לא ידוע על קבוצות שונות משמש על ידי PCA וניתוח אשכולות היררכי. בגישה המפוקחת, כל דגימה או מטבוליט קשורים לתרכובות ידועות, ומידע קודם זה משמש לאחר מכן לניתוח באמצעות רגרסיה עיקרית ורשתות עצביות [91,92]. שיטות רגרסיה אחרות כולל Elastic Net ו-Least Absolute Shrinkage and Selection Operator זמינות גם לניתוח מערכי נתונים ליפידומיים כדי לברר את הקשר בין משתנים [93].

cistanche טסטוסטרון: שיפור תפקוד הכליות

4. יישומים של LIPIDOMICS במחלות כליה

פוספוליפידים מייצגים סוג של מרכיבים תאיים חשובים המשתתפים במספר רב של תהליכים ביולוגיים ומסלולים המשקפים מצב מטבולי בבריאות ובמחלות. Lipidomics הוא כלי מתאים לגילוי סמנים ביולוגיים של מחלות בביולוגיה של מערכות [94,95]. הבנה מקיפה של היישומים שלה היא חשובה ביותר עבור lipidomics. מחקרים רבים הוכיחו שהפרעות מטבוליות או חריגות של שומנים שונים מובילות למחלת כליות [96-99]. באמצעות אי ספיקת כליות כרונית (CRF), קרצינומה של תאי כליה (RCC), גלומרולונפריטיס כרונית, נפרופתיה IgA ו-DN, אנו דנים ב-lipidomics במחלת כליות בבני אדם ובבעלי חיים ובמחקרי מודל תאים.

4.1.ליפידומיה במחלת כליות קלינית

4.1.1השפעה של מחלת כליות כרונית וגלומרולונפריטיס

הפרעות בשומנים בדם שכיחות במחלת כליות [100,101] ותורמות לשכיחות גבוהה של הפרעות קרדיווסקולריות באוכלוסייה זו. פרופילי שומנים בפלזמה ואריתרוציטים נבדקו בחולי CRF בדיאליזה במשך 30 חודשים [102]. נצפתה עלייה בטריגליצרידים בפלזמה ובממברנות אריתרוציטים. עלייה בחומצות פלמיטיות בפלסמה ובחומצות שומן חד בלתי רוויות וירידה בחומצות שומן רב בלתי רוויות בפלזמה נצפו גם ב-CRF. הפרעות בשומנים התגלו לאחר 18 חודשים והפכו עמוקות יותר לאחר 30 חודשים. דפוסי השומנים של ממברנת הפלזמה והאריתרוציטים לא השתנו במהלך תקופת הדיאליזה. חולי CRF תחת המודיאליזה קבועה הראו הידרדרות הדרגתית בפרופילי הטריגליצרידים וחומצות השומן. במחקר אחר, HPLC-MS שימש לפרופיל פוספוליפידים בפלזמה בחולים עם גלומרולונפריטיס כרונית ו-CRF ללא טיפול חלופי כליות [103]. התוצאות הראו כי גלומרולונפריטיס כרונית ראשונית ו-CRF היו בעלי פרופילי פוספוליפידים מטבוליים לא תקינים. מספר פוספוליפידים (n ¼ 19) זוהו כסמנים ביולוגיים פוטנציאליים. מנגנון אפשרי שהוביל לחריגות זו כלל הידרוליזה של פוספטידילינוזיטול (PI) באמצעות הפעלה של פוספוליפאז C ספציפי ל-PI, שהובילה לייצור של שליחים בשתי שניות, אינוזיטול (1,4,5)- טריפוספט (IP3) ודיצילגליצרול [104] , המשתתפים בהעברת אותות באופן עצמאי. IP3 מגביר את Ca2 פלוס הציטופלזמי על ידי גירוי שחרור Ca2 פלוס מהרשת הסרקופלזמית [105]. חלבון קינאז C (PKC) מופעל על ידי phosphatidylserine, Ca2 plus ודיאקילגליצרול. הפעלה של מערכת העברת האותות התוך תאית PKC, בתורה, מעוררת סדרה של תגובות פיזיולוגיות ופיזיוכימיות.

בהתבסס על תכונות מורפולוגיות וגנטיות, RCC מסווג לתתי סוגים שונים. פרוגנוזה של RCC משתנה ו-RCC גרורתי או חוזר קשור לפרוגנוזה גרועה עם הישרדות ארוכת טווח נדירה. Desorption ESI/MS שימש במצב הדמיה כדי לחקור את פרופיל השומנים של קטעי רקמה דקים של RCC פפילרי אנושי לעומת רקמה נורמלית סמוכה (11 זוגות דגימות) ו-RCC צלולים לעומת רקמה נורמלית סמוכה (9 זוגות דגימות) [106]. נצפתה עלייה ב-GP וחומצות שומן חופשיות באזור הגידול. PLS-DA הבחין בין גידול ב-RCC papillary and clear cell ו-papillary from clear cell RCC. שינוי בהרכב רקמת הרופא מתרחש בסרטן [107] ונראה קשור באופן אינטגרלי לטרנספורמציה ממאירה [108]. מיקרו-LC-QTOF/MS שימש לבדיקת שומנים בשתן ב-RCC לעומת נבדקים בריאים. שלושים וחמישה מינים של שומנים זוהו באופן טנטטיבי כולל שינויים ליפידומיים באקסוזומים בשתן [109]. רקמות GP ותוצרי הלוואי האנזימטיים שלהן נראים קשורים לטרנספורמציה ממאירה [110,111] ונצפה PI מוגבר משמעותית בתאים שעברו טרנספורמציה [112].

4.1.2השפעת DN

DN היא בעיה רצינית ברחבי העולם. הפוספוליפידים והמטבוליטים שלהם קשורים קשר הדוק לפתוגנזה ולהתקדמות של DN. ליפידומיקה לא ממוקדת של פוספוליפידים בסרום באמצעות LC-TOF/MS שלב נורמלי ומלכודת יונים-MS/MS בוצעה בחולי DN [113]. השוואה עם נבדקים בריאים גילתה שמונה שומנים בשבעה מחלקות פוספוליפידים כסמנים ביולוגיים פוטנציאליים של DN. שני סמנים ביולוגיים חדשים, כולל PI (18:0/22:6) ו-SM (d18:0/20:2), הפלו למעשה מטופלי DN. כצפוי, לאותה מחלקת פוספוליפידים יש מגמת וריאציה דומה עם התקדמות DN. צוינו LPC, PE, PG, SM, PC אחד ו-PI אחד עם ויסות מטה, ו-PE, PS ושני PC. מספר מחקרים הראו הצטברות שומנים בכליות של חיות ניסוי סוכרתיות ובני אדם וכי שומנים השפיעו על פתוגנזה של DN [114,115]. דווח כי פוספטאז שומנים מקדם אפופטוזיס של פודוציטים המוביל ל-DN ופוספטאז שומני הוגבר לפני השינוי ההיסטולוגי [116]. עדויות נוספות הראו כי מטבוליזם לא תקין של שומנים והצטברות שומנים בכליה מילאו תפקיד חשוב בפתוגנזה של DN [117-119] ומינים של PC מחומצנים היו קשורים לתפקוד לקוי של הכליות [120]. מנגנונים אפשריים כוללים שקיעת שומנים עקב ריכוז מוגבר בסרום וכן סינון גלומרולרי של שומנים הקשורים לחלבון הקשורים לפרוטאינוריה. שומנים מצטברים הגבירו את הביטוי של גורמי גדילה אנדותל כלי דם וגורם גדילה שעבר טרנספורמציה, כמו גם קידום של פרוטאינוריה וגלומרולוסקלרוזיס סוכרתית [121]. מצד שני, נוכחותם של פוספוליפידים חריגים עשויה לקדם הפעלה של מסלול הסורביטול, עקה חמצונית והפעלה של PKC [122-124]. ב-DN, ירידה ב-PI הייתה קשורה להפעלה של מסלול הסורביטול המוביל לפירוק של אינוזיטול תוך-תאי, הפחתת מיוינוזיטול והפחתה של סינתזת PI.

4.1.3 השפעות של שיטות החלפת כליות

סיבוכים קליניים הקשורים לדיאליזה פריטונאלית הפכו ברורים יותר ויותר. LC-QTOF/MS דו מימדי מקוון פותח עבור פרופיל שומנים בפלזמה בחולי דיאליזה פריטונאלית [125]. מחקר מקיף זה כלל 10 כיתות שומנים ו-190 מיני שומנים. 30 סמנים ביולוגיים זוהו, כולל PE ו-PC כאינדיקטורים לתת תזונה, דלקת ותסמונת טרשת עורקים. מחקר זה בדק גם הבדלים בפרופילי שומנים בפלזמה מאנשים עם שליטה נמוכה בנוזלים וכאלה עם מצב נפח טוב. עלייה משמעותית ב-PC ו-PE (ותת-סיווגים פלסמולוגיים של PC ו-PE) נצפו באלה עם מצב נפח ירוד. מעניין לציין שמחקר דומה אחר הראה ששכיחות תת-תזונה קשורה לפוספוליפידים פלסמולוגיים [126]. ממצאים אלו תמכו בקשר בין נפח ומצב תזונתי בדיאליזה פריטונאלית [127]. נעשה שימוש ב-GC–MS לכימות F2-isoprostanes בחולי המודיאליזה עם מחלת כליות סופנית [128]. F2-isoprostanes עלו פי {- לאחר עקה חמצונית הנגרמת על ידי ברזל/אסקורבט ו-2- לפי 4- לאחר התקפים הנגרמות על ידי pentylenetetrazol בחולי המודיאליזה. מחקרים אנושיים וניסויים תומכים בקשר בין F2-isoprostanes לבין דלקת.

מינון cistanche

4.2.ליפידומיה במודלים של בעלי חיים או במודלים של תאים

4.2.1השפעה של נפרופתיה IgA

נפרופתיה IgA היא הצורה הנפוצה ביותר של גלומרולונפריטיס ויכולה להתקדם לאי ספיקת כליות סופנית. כדי לזהות סמני התקדמות, נעשה שימוש ב-HPLC-MS עם PCA ו-PLS-DA להערכת פרופילים מטבוליים של פוספוליפידים בפלזמה במודל ניסיוני של עכבר Balb/c [129]. זוהו מחלקות שומנים מסוג PC, LPC, PI, PS, PE ו-SM כולל 9 0 מיני שומנים. PS(18:0/18:0), PS(18:0/22:5), ו-PI(18:{{20}}/ 20:4) זוהו כסמנים ביולוגיים פוטנציאליים. נבדק גם הקשר בין פוספוליפידים לביטוי מולקולת הידבקות בין-תאית (ICAM-1 (ICAM-1). זה האחרון נמצא בקורלציה גבוהה לפרוטאינוריה. מחקר אחר זיהה ביטוי ICAM-1 כאינדיקטור להתקדמות המחלה והציע PS(18:0/18:0), PS(18:0/22:5) ו-PI(18:0 /20:4) כסמנים ביולוגיים אפשריים של נפרופתיה IgA [130].

הדמיה של lipidomics של טרשת נפוצה שימושית להמחשת לוקליזציה של שומנים שונים בכליות וברקמות אחרות [131,132]. לאחרונה נותחה ההתפלגות המולקולרית של שומנים ב-Hyper-IgA murineכליותבאמצעות MALDI-quadrupole ion מלכודת-TOF מבוסס הדמיה MS [133]. שני PC, PC(18:2/22:6) ו-PC(16:0/22:6) נמצאו בעיקר בקורטקס ושני טריאצילגליצרולים, TAG(18:1/18:2/18: 1) ו-TAG(16:0/18:2/18:1), נמצאו בהילום. עם זאת, מספר שומנים אחרים נצפו בכליות היפר-IgA, במיוחד באזור הצינורי. שני ליפידים ספציפיים ל-IgA היו O-PC כולל PC(O-18:1/22:6) ו-PC(O-16:0/22:6). דווח כי PC(O-18:1/22:6) ו-PC(O{{40}}:0/22:6) היו אנלוגים של פלזמולוגן וגורם מפעיל טסיות, בהתאמה [134,135]. מחקר זה גם הצביע על כך שכל השומנים הספציפיים ל-Hyper-IgA נגזרו משתן וכי סטגנציה עקב חסימה חד-צדדית של השופכה גרמה להתפלגות היפר-IgA-ספציפית של שומנים באבובות הכליה.

מנגנון אפשרי כלל הפעלה של מסלול ה-PKC המוביל להרחבת המטריצה ​​החוץ-תאית ועיבוי של קרום הבסיס הגלומרולרי [136]. למעשה, הוכח שהפעלת PKC מגבירה את החדירות של השכבה המונותלית לאלבומין [137]. תאי אפיתל וממברנת הבסיס ממחסום נימי הגלומרולרי. הוכח שהפעלת PKC פוגעת במחסום הנימים הגלומרולרי המוביל לפרוטאוריה [138,139].

4.2.2השפעת DN

הוכח כי Rapamycin מונע התפתחות DN בחולדות סוכרתיות הנגרמות על ידי סטרפטוזוטוצין. MALDI-TOF/MS של קליפת הכליה גילה שלוש מחלקות של ספינגוליפידים כולל סרמידים, SM ו-ceramide mono-hexoses [140]. מטבוליט אחד של סרמיד גדל באופן משמעותי ואילו שלושה נעלמו. הרכב הספינגוליפיד השתנה מאוד על ידי טיפול ברפמיצין. ceramide מוגבר(d18:0/16:0), ceramide mono hexoside(d18:1/15:0), SM(d16:1/18:0 ), ו-SM(d18:1/18:0) הופנו על ידי rapamycin. המחקר הקודם הראה שעלייה בסרמיד בכליה הסוכרתית וירידה לאחר טיפול ברפמיצין והקשר הממושך בין סרמיד לאפופטוזיס תומכים בסרמיד כמועמד סמן ביולוגי סביר [141]. סטרפטוזוטוצין הגביר באופן משמעותי את הסינתזה של ספינגוליפידים רבים שעוכבו על ידי rapamycin. מחקרים אחרים הראו שעיכוב סרמיד, באמצעות חסימת סרמיד סינתאז או סרין פלמיטוילטרנספראז, הפחית ביעילות מוות תאי הנגרם על ידי היפוקסיה-חמצן מחדש, היפוקסיה כימית ואמצעי ניגודיות רדיו בתאי אפיתל צינורי כליה [142-144].

4.2.3השפעה של אי ספיקת כליות חריפה

לדלקת תפקיד מפתח בפתוגנזה של אי ספיקת כליות חריפה [145,146]. LC-MS lipidomics שימש כדי לחקור את ההשפעה של חומצות שומן רב בלתי רוויות ω-3 או ω-6 תזונתיות קצרות טווח על פגיעה כלייתית איסכמית ומעגלים אוטאקואידים של שומנים בכליות [147]. איסכמיה כלייתית (30 דקות) הביאה להפחתה משמעותית בתפקוד הכלייתי ולעלייה משמעותית בקריאטינין בסרום בעכברים שניזונו מתזונה עם תוספת ω-6 אך נותרה תקינה בעכברים שניזונו בתזונה בתוספת ω-3. יתרה מכך, הרחבה של איסכמיה כלייתית (45 דקות) גרמה לתמותה של 100 אחוז בעכברים עם תוספת של ω-6 אך ללא מוות בקבוצה עם תוספת ω-3. ההשפעה המגנה של חומצות שומן רב בלתי רוויות ω-3 נגד פגיעה כלייתית איסכמית הייתה קשורה לירידה בגיוס לויקוציטים פולימורפו-גרעיניים, ייצור כימוקינים וציטוקינים, ביטול היווצרות של איקוסנואידים שמקורם ב-lipoxygenase ו-cyclooxygenase, וביטוי מוגבר של פרוטטין D1 [148] . טיפול מערכתי עם פרוטטין D1 הפחית את זרימת לויקוציטים פולימורפו-גרעיניים בכליות והגביר את הביטוי של heme oxygenase-1 חלבון ו-mRNA בפצועים ובלא פצועיםכליות. Protectin D1 נראה יעיל במניעת חריפותכִּליָהפגיעה וכן ההשפעה של חומצות שומן רב בלתי רוויות ω-3 ו-ω-6 תזונתיות על היווצרות אוטקואידים בכליה ועל התוצאה של פגיעה כלייתית איסכמית [149].

4.2.4 מחקר תאים

ESI/MS lipidomics שימש לזיהוי שינויים בפוספוליפידים בכליה העוברית האנושית (HEK293) ובאדםכִּליָהקרצינומות (Caki{{0}}) מוות תאי [150]. ירידה משמעותית ב-PC(14:0/16:0) וב-PC(16:0/16:0) נצפתה ב-HEK293 ו-Cake שטופלו בציספלטין{{ 12}} תאים. טיפול בברומופנול לקטון לפני חשיפה לציספלטין הוריד עוד יותר את PC(14:0/16:0), פלסמנילכולין(16:0/16:1), ופלסמנילכולין(16:{{ 41}}/18:1) ב-HEK293 ועיכבו עליות הנגרמות על ידי ציספלטין בפלסמנילכולין (16:1/22:6) ב-Caki-1. טיפול בברומופנול לקטון לפני חשיפה לציספלטין העלה גם מספר פוספוליפידים המכילים ארכידונים, כולל PC(16:0/20:4), PC(18:1/20:4), ו-PC(18) :0/20:4) לעומת טיפול בציספלטין בלבד. תוצאות אלו הוכיחו שעיכוב פוספוליפאז A2 הגן מפני מוות תאי המושרה בכימותרפיה במספר שורות תאי כליה אנושיות וכן זיהו פוספוליפידים שהשתנו באופן ספציפי במהלך מוות תאי. התוצאות הוכיחו עוד ששינויים בפוספוליפידים אלה מתואמים להגנה מפני מוות תאי בנוכחות מעכבי פוספוליפאז A2. Masood ועמיתיו השתמשו ב-LC-MS/MS/MS נורמלי ובשלבים הפוכים כדי לכמת מחלקות ספינגוליפידים מרובות בתאי HEK293 [151]. תוצאות אלו הראו שיותר מ-75 אחוז מהסרמידים, המונוהקסו סילקרמידים ו-SM קיימים כ-d18:1Δ4 c16:0, d18:1Δ4 c24:1 ו-d18:1-4 c24:0.

5. הערות סיכום ונקודות מבט

lipidomics חדש הוא מתודולוגיה מתפתחת שמבטיחה מחקר שיטתי ומקיף של שומנים ונגזרותיהם בבריאות ובמחלות. שׁוֹנִיםכִּליָהמחלות קשורות לשינויים משמעותיים בחילוף החומרים ובריכוז הפלזמה של שומנים וליפופרוטאינים, כמו גם למטבוליטים הקשורים לליפידים ומסלולים מטבוליים. שינויים אלה ממלאים תפקיד חשוב בפתוגנזה של דלקת מקומית ומערכתית, חילוף חומרים אנרגיה לקוי והתקדמות שלכִּליָהמַחֲלָה. השילוב של פרופיל שומנים וסטטיסטיקה רב-משתנית שימושי לגילוי של סמנים ביולוגיים פוטנציאליים ושיטות טיפוליות חדשות, כמו גם ניטור התגובה להתערבות טיפולית.

ההתקדמות האחרונה בטכנולוגיות מבוססות טרשת נפוצה ושיפורים מהירים בכרומטוגרפיה, במיוחד UPLC-MS בשילוב עם ביואינפורמטיקה, שיפרו את הבנתנו את התפקיד של מטבוליטים שמקורם בשומנים בדם בפתוגנזה והתקדמות שלכִּליָהמַחֲלָה. למרות שהכלים הזמינים כיום מאפשרים זיהוי של מבנה מטבוליטים שמקורו בשומנים ברזולוציה גבוהה, התקדמות נוספת בטכניקות אנליטיות וטיפול בנתונים נחוצות בבירור לעיבוד מוקדם יותר של נתונים, כריית נתונים, ניתוח סטטיסטי, זיהוי סמנים ביולוגיים ופרשנות של מסלולים ביוכימיים.

תמצית cistanche: תפקוד כליות טוב יותר

תודות

מחקר זה נתמך על ידי התוכנית לכשרונות מצוינים של המאה החדשה באוניברסיטה (NCET-13-0954) ו-Changjiang Scholars and Innovative Research Team in University (IRT1174) ממשרד החינוך של סין, הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (J1210063 , 81202909, 81274025, 81001622), הפרויקט "כתרופה חדשה מרכזית ליצירת מיוחד לאומי מרכזי במדע וטכנולוגיה" (2014ZX09304307- 002), קרן הפוסט-דוקטורט של סין (2012M521831, 2014T70984 תוכנית ההכשרה הלאומית לחדשנות), (201310697004), תוכנית מפתח לפרויקטים בינלאומיים לשיתוף פעולה S&T של מחוז שאאנשי (2013KW31-01), קרן מדעי הטבע של מחלקת החינוך המחוזית של שאאנשי (2013JK0811), והמינהל לרפואה סינית מסורתית של שאאנשי ({{17} }ZY006).

*מעבדת מפתח לביולוגיה וביוטכנולוגיה משאבים במערב סין, משרד החינוך, המכללה למדעי החיים, אוניברסיטת צפון מערב, שיאן, שאאנשי, יחסי ציבור בסין

†החטיבה לנפרולוגיה ויתר לחץ דם, בית הספר לרפואה, אוניברסיטת קליפורניה, אירווין, קליפורניה, ארה"ב

{בית הספר למטריה סינית מדיקה, אוניברסיטת בייג'ינג לרפואה סינית, בייג'ינג, יחסי ציבור בסין

הפניות

[1]א. Levin, NR Powe, J. Rosset, et al., Chronic kidney disease as a health public health problem: approaches and visits - הצהרת עמדה מאת Kidney Disease Improving Global Outcomes, Kidney Int. 72 (2007) 247–259.

[2]K. Makris, N. Kafkas, Neutrophil gelatinase-associated Lipocalin בפגיעה חריפה בכליות, עו"ד. קלינ. Chem. 58 (2012) 141–191.

[3]XB Ling, ED Mellins, KG Sylvester, HJ Cohen, Urine peptidomics לגילוי סמנים ביולוגיים קליניים, עו"ד. קלינ. Chem. 51 (2010) 181–213.

[4]TK Sigdel, RB Klassen, MM Sarwal, Interpreting the proteome and peptidome in transplantation, Adv. קלינ. Chem. 47 (2009) 139–169.

[5]ND Vaziri, Dyslipidemia של אי ספיקת כליות כרונית: הטבע, המנגנונים וההשלכות הפוטנציאליות, Am. J. Physiol. כליות פיזיול. 290 (2006) 262–272.

[6]ND Vaziri, J. Yuan, Z. Ni, SB Nicholas, KC Norris, מחסור בליפופרוטאין ליפאז במחלת כליות כרונית מלווה בוויסות מטה של ​​ביטוי האנדותל GPIHBP1, Clin. Exp. נפרול. 16 (2012) 238–243.

[7]ND Vaziri, Molecular mechanisms of lipid disorders in nephrotic syndrome, Kidney Int. 63 (2003) 1964–1976.

[8]ND Vaziri, Lipotoxicity and impaired HDL-mediated transport cholesterol/lipid reverse in chronic kidney disease, J. Ren. נוטר. 20 (2010) S35–S43.

[9]ND Vaziri, K. Norris, הפרעות ליפידים והרלוונטיות שלהן לתוצאות במחלת כליות כרונית, Blood Purif. 31 (2011) 189–196.

[10]ND Vaziri, Role of dyslipidemia בפגיעה במטבוליזם האנרגיה, מתח חמצוני, דלקת ומחלות לב וכלי דם במחלת כליות כרונית, Clin. Exp. נפרול. 18 (2014) 265–268.

[11]ג. Waldner, G. Heise, K. Schroer, P. Heering, COX-2 inhibition and prostaglandin receptors in experimental nephritis, Eur. ג'יי קלין. להשקיע. 33 (2003) 969–975.

[12]א. Hartner, A. Pahl, K. Brune, M. Goppelt-Strube, Upregulation of cyclooxygenase-1 and the PGE2 EP2 in rat and human mesangial proliferative glomerulonephritis, Inflamm. מילון 49 (2000) 345–354.

[13]ס. Tomasoni, M. Noris, S. Zappella, et al., Upregulation of renal and systemic cyclooxygenase-2 בחולים עם זאבת נפריטיס פעילה, J. Am. Soc. נפרול. 9 (1998) 1202–1212.

[14]ג. Zoja, A. Benigni, M. Noris, et al., Mycophenolate mofetil בשילוב עם מעכב cyclooxygenase-2 משפר דלקת זאבת עכברת, Kidney Int. 60 (2001) 653–663.

[15]ט. Takano, AV Cybulsky, WA Cupples, et al., Inhibition of cyclooxygenases מפחית פגיעה בתאי אפיתל גלומרולריים הנגרמת על ידי משלים ופרוטאינוריה ב- Heymann nephritis פסיבי, J. Pharmacol. Exp. ת'ר. 305 (2003) 240–249.

[16]ג. Heise, B. Grabensee, K. Schro€r, P. Heering, Different actions of the cyclooxygenase 2 inhibitor selective flusulide in חולדות עם Heymann nephritis פסיבי, Nephron 80 (1998) 220-226.

[17]ZG Xu, SL Li, L. Lanting, et al., Relationship between 12/15-lipoxygenase and COX-2 in mesangial cells: role potential in nephropathy diabetes, Kidney Int. 69 (2006) 512–519.

[18]א. Dey, RS Williams, DM Pollock, et al., Altered kidney CYP2C ורמות cyclooxygenase-2 קשורות לאלבומינוריה הקשורה להשמנה, Obes. מילון 12 (2004) 1278–1289.

[19]X. Zhao, JE Quigley, J. Yuan, et al., PPAR-alpha activator fenofibrate מגביר את סינתזת האיקוסנואידים הנגזרת של CYP בכליות ומשפר את תפקוד מרחיב האנדותל בחולדות צוקר שמנות, Am. J. Physiol. 290 (2006) H2187–H2195.

[20]י. Zhou, S. Lin, HH Chang, et al., הבדלים בין המינים של סינתזת איקוסנואידים שמקורם ב-CYP בכליות בחולדות שניזונו בדיאטה עתירת שומן, Am. J. Hypertens. 18 (2005) 530–537.