מחסור ב-Mitochondrial Targeted Mitochondrial A גורם לדלדול מיטוכונדריאלי מתקדם הקשור למחלה ציסטית חמורה

איש קשר:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Ken Ishii, Hanako Kobayashi, Kensei Taguchi & et al.

מבוא

תפקוד לקוי של מיטוכונדריאלי (mt) הוא תכונה פתולוגית מוכרת היטב של מחלות כליה נפוצות ויכולה לעורר פגיעה תאית, דלקת ופיברוזיס. בכליה, תאי אפיתל צינוריים תלויים מאוד באדנוזין טריפוספט (ATP) הנוצר מזרחון חמצוני (OXPHOS) מכיוון שהם מבצעים מספר רב של פונקציות הובלה אפיתל צורכות אנרגיה. לכן, קיום ייצור יעיל של mt ATP חיוני לתפקוד תקין של כליות ולהומאוסטזיס אלקטרוליטי מערכתי. בנוסף, עדויות עדכניות מצביעות על כך שלמיטוכונדריה יש תפקיד מרכזי בוויסות גנים, איתות סלולרי ובהתמיינות תאים באמצעות יצירת מטבוליטים ביניים ומיני חמצן תגובתיים (ROS).2 למרות התקדמות אלו, תפקידו של איתות mt בפתוגנזה של מחלות כליות נפוצות אינן מובנות היטב.

כדי לחקור את תפקוד mt בהומאוסטזיס כליות ופתוגנזה, אנוגורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A(TFAM). TFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)הוא גורם מקודד גרעיני חיוני לתפקוד mt, שמירה על מספר העתק mt ויציבות מבנית של mt DNA מכיוון שהוא מווסת את השכפול והשעתוק של הגנום mt על ידי כיפוף ה-DNA המקדם.3 DNA mt יונק מכיל 37 גנים, מתוכם 13 מקודדים תת-יחידות חלבון של קומפלקס שרשרת הנשימה, 22 מקודדות RNAs העברה ו-2 RNA ריבוזומים. לכן,TFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)מעורב ישירות בוויסות הובלת אלקטרונים של mt וסינתזת ATP באמצעות שעתוק גנים כגון ציטוכרום b(MT-CYB) המקודד במיטוכונדריה, תת-יחידת ציטוכרום c אוקסידאז 1(MT-CO1) המקודדת במיטוכונדריה, ותת-יחידת הממברנה של ATP סינתזה המקודדת במיטוכונדריה. 6 (MT-ATP6).3ללאTFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)תאים מאבדים את יכולתם לייצר ATP באמצעות OXPHOS, אינם יכולים ליצור כמויות משמעותיות של mt ROS, ומתרוקנים בהדרגה מהמיטוכונדריה.-מחקרים גנטיים הראו כיTFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)חיוני לעובר תקין מכיוון שהוא הומוזיגוטי גלובליTFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)אי-אקטיבציה הובילה לקטלניות תוך רחמית עד ליום העובר 10.5, בעוד שחסר הטרוזיגוטי, למרות שהפחית את מספר ההעתקים של mt ב--40 אחוזים והוביל למחסור בשרשרת הנשימה, לא הוביל לתמותה עוברית. לפיכך, מיקוד גנטי שלTFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A) היא אסטרטגיה ניסיונית שימושית לבחינת התפקיד של חוסר תפקוד מתקדם של mt בהתמיינות תאית והומאוסטזיס של רקמות. אינאקטיבציה מותנית ספציפית לסוג תא שלTFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)הציע שיצירת OXPHOS ו/או mt ROS היא קריטית עבור התמיינות תאית, תפקוד ופיזיולוגיה תקינה.-1o

הפרעות mt ראשוניות כתוצאה ממוטציות גנטיות גרעיניות או mt עשויות להופיע עם מחלת כליות המתבטאת לרוב כפגיעה tubulointerstitial או חוסר תפקוד צינורי מבודד.(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)לא דווח על גרימת מחלת כליות. לאחרונה, מופחתTFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)ביטוי נקשר למחלת כליות כרונית. אובדן שלמות mt עקבTFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)אינאקטיבציה גרמה למחלת tubulointerstitial ואי ספיקת כליות בעכברים, אשר נבעה בחלקה מהפעלה של תגובות דלקתיות תלויות ב-Mt DNA של GMP-AMP synthase(cGAS) מחזוריות (STING).

כאן אנו מדווחים על עכברים עם תנאיTFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A) אי-אקטיבציה בתאי אבות נפרון הקשורים לסינוס אוקוליס, המבטאים בהומיאובוקס 2(SIX2) מפתחים מחלה ציסטית חמורה ומתים בטרם עת מאי ספיקת כליות כעכברים צעירים.TFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)עכברים -/- אופיינו על ידי פגמים בהבשלת נפרון, אשר היה קשור לדלדול mt, הפחתה ב-OXPHOS ושינוי מטבולי לכיוון גליקוליזה בTFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)-7-אפיתל כלייתי. בהתחשב בחומרת המחלה הסיסטיקה בTFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)-7-עכברים, ניתחנו שני מודלים של עכברים של מחלת כליות פוליציסטית (PKD), הנובעות ממוטציות בפוליציסטין-1 (Pkd1) או בציסטין-1 (Cys1), כמו גם בבני אדם רקמות מחולים עם מחלת כליות פוליציסטית אוטוזומלית דומיננטית (ADPKD). אנחנו קובעים את זהTFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)אינו מווסת בציסטות מרקמות PKD של עכברים והן אנושיים. יחד, המחקרים שלנו מצביעים על כך ש-TFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)חוסר ויסות ודלדול של mt הם מאפיינים אופייניים של מחלות ציסטיות בכליות ועשויים להיות להם תפקיד תורם בפתוגנזה שלהן.

cistanche עבור כליות

תוצאות

TFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)השבתה בתאי שושלת SIX2 גורמת למחלה ציסטית חמורה הגורמת לאי ספיקת כליות

על מנת לחקור את תפקוד mt באפיתל הכלייתי, השבתנוTFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)בשישה2-תאי אבות המבטאים את כל מקטעי הנפרון, מלבד צינור האיסוף (CD).15 לשם כך, חצינו אתTFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)אלל פלוקס עם עכברים מהונדסים כרומוזומים מלאכותיים חיידקיים המבטאים חלבון פלואורסצנטי ירוק משופר/חלבון היתוך Cre recombinase (eGFP/Cre) תחת בקרת תעתיק של מקדם Six2 (איור לה)."עכברים הומוזיגוטים עבורTFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)אלל פלוקס והטרוזיגוטי עבור הגן הטרנס-גן eGFP/Cre(Six2-eGFP/Cre plus ; T fam) מכונים מכאן ואילך כשש2-Tfam-/- מוטציות. שישה2-עכברי Tfam-/- נולדו ביחסים מנדלים צפויים ולא ניתן היה להבדיל מבקרות Cre-littermate על ידי בדיקה ויזואלית בלידה. עם זאת, הבדלים במשקל הגוף בין שישה2-TFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A){{0}}מוטנטים ובקרות Cre-littermate התבררו ביום שלאחר הלידה (P)14(5.7±0.3g עבור מוטנטים לעומת 7.5± 0.3g עבור לבקרות,n{{11} } כל אחד, P=0.004; טבלה משלימה S1). שישה2-TFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A) עכברים מוטנטים אופיינו בכליות מוגדלות בהשוואה לבקרות (יחס משקל כליות/גוף של 1.45 אחוז ± 0.19 אחוז למוטנטים לעומת 0.60 אחוז ±0.02 אחוז לבקרה , n=4 כל אחד, P<0.001; figure="" lb,="" supplementary="" table="" s1)and="" died="" between="" age="" p20="" and="" p30(figure="" lb).="" juvenile="" lethality="" in="" the="" mutant="" cohort="" was="" associated="" with="" renal="" failure="" from="" severe="" cystic="" disease="" with="" blood="" urea="" nitrogen="" levels="" of="" 68.40±5.32="" mg/dl="" for="" mutant="" mice="" versus="" 16.8±2.0mg="" dl="" for="" controls(n="6" and="" 7,="" respectively;=""><0.0001; figure="" lb="" and="" c).="" furthermore,="">TFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)-7- מוטנטים פיתחו אלבומינוריה משמעותית (יחס אלבומין/קריאטינין בשתן=362.4 ± 75.18 מ"ג/ג' בשישה2-TFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)--מוטנטים לעומת 43.58±3.39 מ"ג/ג בבקרות ב-P14, n=6 ו-10 בהתאמה;P<0.0001). this="" is="" consistent="" with="" the="" expression="" pattern="" of="" cre="" recombinase="" in="" six2="" nephron="" progenitor="" cells,="" which="" give="" rise="" to="" cap="" mesenchyme-derived="" renal="" tubules="" and="" podocytes.="" in="" contrast="" to="">TFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)-'מוטנטים, עכברים עם הטרוזיגוטייםTFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)מחסור בתאי אבות SIX2 שפותחו בדרך כלל היו פוריים ולא פיתחו מחלת כליות גלויה (איור משלים S1).

איור 1|השבתת Tfam בתאי שושלת SIX2 גורמת למחלה ציסטית חמורה ואי ספיקת כליות.(א) סכימה הממחישה את הגישה הניסויית ואת המיקום של רצפים ממוקדים בתוך האלל הפלוקס של Tfam. אנליזה של תגובת שרשרת פולימראז של DNA גנומי של כליות מבודד מבקרת בן חולים (Cre ) ושישה{{0}}Tfammice בגיל שלאחר הלידה (P) 7; האלל הלא-משלב Tfam floxed מסומן ב-2-lox (2); האלל המשולב מחדש על ידי 1-lox, האלל מסוג פראי על ידי wt; þ או - מציינים את נוכחותו או היעדרו של הטרנסגן Six2-eGFP/Cre. (ב) לוחות שמאל, תצלומים של כליות מ-Cre control ושישה2-עכברי Tfam בגיל P20. משקל הכליות (KWs) מבוטא כאחוז ממשקל הגוף (BW) (n ¼ 4-14). לוחות ימין, רמות חנקן אוריאה בדם (BUN) ב-Cre littermate control (co) ושישה2-עכברי Tfam בגיל P7 (n ¼ 7 ו-6, בהתאמה) ועקומות הישרדות של קפלן-מאייר לבקרת Cre ו-Six{ {16}}עכברי Tfam בהשוואה למבחן ה-log-rank (n ¼ 10-13). (ג) תמונות מייצגות של קטעי כליה מקובעים בפורמלין משובצים בפרפין מעכברי Cre control ו-Six2-Tfam בגיל P7 ו-P29 שנצבעו בהמטוקסילין ואאוזין (H&E) ונותחו על ידי אימונוהיסטוכימיה לאקטין שריר חלק. (ACTA2) ואנטיגן צבירי (CD) 31. סימני מספר מתארים מבנים ציסטיים וכוכביות מתארות גלומרולי. פסים ¼ 1 מ"מ לחתכי כליה שלמים, 100 מ"מ לתמונות H&E בעוצמה גבוהה ו-50 מ"מ לתמונות IHC. הנתונים מבוטאים כ-SEM ממוצע ונותחו על ידי 2-מבחן ה-t-tailed Student's. ***P < 0.001.="" כדי="" לייעל="" את="" הצפייה="" בתמונה="" זו,="" אנא="" עיין="" בגרסה="" המקוונת="" של="" מאמר="" זה="">www.kidney-international.org.

יתרונות גברים cistanche

הניתוח של שישה2-TFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)-/-עכברים, אשר ביטאו גם את האלל ROSA26-ACTB-tdTomato,-eGFP Cre reporter, המכונה כאן Six2-mT/mG;TFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)-7 עכברים, המצביעים על כך שהרוב המכריע של מבנים ציסטיים בTFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)-/-כליות (איור משלים S3). ממצאים אלה עולים בקנה אחד עם רמות מוגברות של קינאז (p-ERK) ו-catenin עם מווסת אותות חוץ-תאי מזרחן בשישה2-TFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)-/- רקמת כליה (איור משלים S3). ביחד, הנתונים שלנו מצביעים על שישה2-TFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)-/ כליות מציגות תכונות מולקולריות הקשורות לעיתים קרובות למחלות ציסטיות בכליות.

הבשלת נפרון לקויה בשישה2-TFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)-/עכברים כי זה יכול לקחת עד כמה שבועות לפני עכברים עם רקמה ספציפיתTFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)פתולוגיה לפתח אינאקטיבציה, בשלב הבא בדקנו את מהלך הזמן של התפתחות מחלת כליות בשישה2-TFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A){{0}}עכברים. אספנו כליות מעכברי ביקורת ומוטנטים בגילאים P0, P7 ו-P14 והשתמשנו בשיטות היסטולוגיות, צביעה אימונופלואורסנטית (IF) וניתוח ביטוי גנים בתמציות של כליות להערכה. צביעת IF עבור SIX2 ו-E-cadherin בגיל P0 הוכיחה שכליות משליטה ו-Sic2-TFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)-/-היו דומים מבחינה היסטולוגית. היווצרותם של מבני אזור נפרוגני בקליפת המוח, כגון SIX2 plus cap mesenchyme, קצות השופכן המבטאים E-cadherin, ומבני נפרון בהתהוות כגון שלפוחית ​​כליה וגופים בצורת פסיק וצורת S, לא נחסמה בשישה{{7} }TFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)-7- כליות (איור 2א). ממצאים היסטולוגיים אלו תאמו את רמות הביטוי של גנים המקודדים לסמנים נפרוגנים. רמות Six2, קופסא 2 מזווגת (Pax2), LIM homeobox protein 1 (Lhx1) ורמות mRNA של גורם שעתוק דמוי ספאלט 1(Sall) לא היו שונות באופן משמעותי בין ביקורת לשישה2-TFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)-/עכברים בסך הכליות הומוגניות מכליות P0 (איור 2ב). זה הציע את זהTFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)אינאקטיבציה ב-SIX2 nephron pro-genitors לא השפיעה באופן משמעותי על היווצרות מבנים נפרוגנים.

איור 2|התבגרות של נפרון לקויה בשישה2-Tfam-7עכברים.(א) תמונות מייצגות של קטעים מקובעים בפורמלין, מוטבעים בפרפין מ-Cre~ control ו-Six2-Tfam-/kidneys בגיל שלאחר הלידה (P) 0. קטעי כליה נצבעו בכחול טולואידין ונותחו על ידי אימונופלואורסצנציה לביטוי הומיאובוקס 2(SIX2) ו-E-cadherin (ECAD) הקשור לסינוס אוקוליס. עצים שופכנים מסומנים בקווים לבנים מקווקוים. כובע מזנכיים (CM), גוף בצורת פסיק (CSB), גוף בצורת S (SSB) וקצה השופכן (UT) מסומנים. (ב) לוח שמאל, רמות ביטוי יחסי של mRNA של סמנים התפתחותיים על ידי תגובת שרשרת כמותית של פולימראז בכליות הומוגניות מ-62-Tfam-/מוטנטים בגיל PO בהשוואה לבקרות של Cre littermate (n =6 כל אחד ). חלונית ימנית, ביטוי גנים ספציפי לגלומרולרי (גלום) ולמקטע נפרון בכליות הומוגניות של שישה2-Tfam7מוטנטים בגיל P7 בהשוואה לבקרות Cre-littermate (n =4 כל אחד). PT, צינורית פרוקסימלית; mTAL, איבר עולה עבה של Henle; DT, צינור דיסטלי; CD, צינור איסוף. (ג) קטעי כליה מוכתמים בכחול Alcian/periodic acid-Schiff (AB-PAS) בגיל P0, P7 ו-P14. חיצים מציינים צינוריות חיוביות ל-PAS עם גבול מברשת, כוכביות מתארות גלומרולי, וסימני מספר מתארים צינוריות ציסטיות, פסים=100 אום עבור תמונות AB-PAS ו-50 אום עבור תמונות מוכתמות בכחול טולואידין ותמונות IF. הנתונים מבוטאים כממוצע ± SEM;2-מבחן t-student's tailed;*P<><><0.001.agp1,aquaporin 1;agp2,aquaporin="" 2;lhx1,lim="" homeobox1;napi2a,="" sodium-phosphate="" cotransporter="" 2a;="" ncc,="" thiazide-sensitive="" sodium-chloride="" cotransporter;="" nkcc2,="" sodium-potassium-chloride="" cotransporter="" 2;pax2,="" paired="" box="" 2;="" sall1,="" spalt="" like="" transcription="" factor="" 1;="" scnn1a,="" epithelial="" sodium="" channel="" 1="" alpha="" subunit;="" trpv5,="" transient="" receptor="" potential="" cation="" channel="" subfamily="" v="" member="" 5;="" umod,="" uromodulin.="" to="" optimize="" viewing="" of="" this="" image,="" please="" see="" the="" online="" version="" of="" this="" article="" at="">www.kidney-international.org.

ביקורות cistanche

למרות שהיווצרות מבנה נפרון בהתהוות לא נבלמה, צביעה עם אלסיאן כחול/חומצה מחזורית-שיף ולקטין לוטוס טטראגונולובוס הצביעו על הבשלה לקויה של נפרונים סופניים בשישה2-TFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A){{0}}עכברים בגיל P0. Alcian blue/periodic acid-Schiff, אשר צובע קרומי בסיס צינוריים וגבול מברשת, ולקטין לוטוס טטראגונולובוס, המזהה אוליגוסכרידים ספציפיים בגבול המברשת של תאי צינורית פרוקסימליים, ירדו שניהם בכליות מוטנטיות. איור 2c מציג צביעה כחולה אלסיאנית/מחזורית-שיף בנקודות הזמן P0, P7 ו-P14. היסטוכימיה של לוטוס טטראגונולובוס לקטין וצביעת IF עבור חלבון Wilms tumor 1 בנקודות הזמן P0, P7 ו-P14 מוצגות באיור משלים S4. בגיל PO, האזור היחסי שנצבע בצורה חיובית עם לוטוס טטראגונולובוס לקטין היה 2.10 אחוז ±0.51 אחוז ו-0.39 אחוז ± 0.1 אחוז בשעה גיל P7 לעומת 6.25 אחוז ± 0.28 אחוז ו-6.2 אחוז ±1.1 אחוז לבקרות, בהתאמה (n=3-4, P=0.0004 ו-0.0007, בהתאמה; איור משלים S4). בהתאם לממצאים ההיסטולוגיים הללו היא הירידה המשמעותית בביטוי של גנים המקודדים לסמנים ספציפיים לגלומרולריים ולנפרון פודוקין, נפרין, אקוופורין 1 (Agp1), קוטרנספורטר נתרן-פוספט 2a (NaPi2a), אורומודולין, קוטרנספורטר נתרן-אשלגן-כלוריד. (Nkcc2), ונתרן כלוריד קוטרנספורטר רגיש לתיאזיד (Ncc) בשישה2-TFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)-/ עכברים (איור 2ב). יחד, נתונים אלה מצביעים על שישה2-TFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)-/- כליות מפגינות הפחתה מתקדמת במספר מקטעי הנפרון הפרוקסימלי הבוגרים והגלומרולי.

מכיוון ששש2-פעילות eGFP/Cre מובילהTFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)-מקטעי נפרון שמקורם ב-cap mesenchyme, חזינו שההבשלה של תאי אפיתל CD, שמקורם בניצני השופכן, לא תושפע בשישה2-TFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)-/ כליות. תואם את הרעיון הזה הוא שצביעה עם Dolichos biflorus agglutinin, המגיב עם N-acetyl-D-galactose בצינור הדיסטלי וב-CD, הצביע על ייצוג יתר יחסי של מבנים חיוביים ל-Dolichos biflorus agglutinin בשישה2-TFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)-/- כליות. בגיל P7, אזורים מוכתמים חיוביים עבור Dolichos biflorus agglutinin היוו 13.91 אחוז ±0.9 אחוז מהשטח הכולל של מוטנטים לעומת 1.93 אחוז ± 0.1 אחוז עבור הביקורת (n {{11} }, P=0.0002; איור משלים S4). ביטוי mRNA של תת-יחידת אפיתל 1 אלפא של תעלת נתרן (Scnnla) או אקוופורין 2(Agp2), אשר שניהם מתבטאים בתאי אפיתל CD, לא ירד משמעותית בהשוואה ל הפקד (איור 2ב). בניגוד לשש2-TFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)-/-כליות,TFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)אינאקטיבציה בתאי אבות Homeobox B7(HOXB7), אשר יוצרים תאי אפיתל CD, וכתוצאה מכך אובדן ביטוי סמן CD נפרון והתרחבות צינורית קלה אך לא ציסטוגנזה (איור משלים S5). יחד, הנתונים שלנו מצביעים על אובדן שלTFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)תפקוד בתאי אבות SIX2 אינו חוסם התפתחות של מבני נפרון בהתהוות, אלא מעכב את הבשלת נפרון סופנית.

TFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)-/-ציסטות חסרות בסמנים מקטעי נפרון נפוצים

כדי לאפיין את המקור ההיסטוגנטי שלTFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)-7ציסטות כליות, ביצענו ניתוחי IF שלהןTFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)-/kidneys at age P14 and examined the expression of nephron segment markers megalin (proximal tubule), uromodulin (medullary thick ascending limb of Henle), thiazide-sensitive sodium chloride cotransporter(distal tubule), and aquaporin 2(CD). The majority of cysts with a maximal diameter of>50 um did not express these segment-specific markers, indicating a lack of cellular differentiation(Figure 3a, Supplementary Figure S6). Furthermore, approximately 50% of cysts with a maximal diameter of >50 אום אופיינו במשקעים תוך-לומינליים של uromodulin, אשר הצביעו על מוצא מקטעי נפרון מרוחק מהצינורית הפרוקסימלית והלולאה היורדת של Henle (איור 3b).

איור 3ITfam-/ציסטות אינן מבטאות סמנים ספציפיים למקטעי נפרון נפוצים.(a)Representative images of formalin-fixed, paraffin-embedded kidney sections from Six2-mT/mG; Tfam-mice at age postnatal day (P) 14 stained for enhanced green fluorescent protein (eGFP), megalin, uromodulin, thiazide-sensitive sodium chloride cotransporter (NCC), and aquaporin 2(AQP2)by immunofluorescence (IF). 4'6-diamidino-2-phenylindole was used for nuclear staining (blue fluorescence). Arrows depict tubular structures expressing respective nephron segment-specific markers. Nephron segment marker expression was assessed in cysts with a maximal diameter of >50 אממ. (ב) תמונות מייצגות של קטעי כליה מקובעים בפורמלין, מוטבעים בפרפין משישה2-mT/mG; עכברי Tfam-7 בגיל P14 נצבעו עבור eGFP ו-uromodulin על ידי IF. כוכביות מתארות ציסטות עם uromodulin intraluminal. נוכחות אורומודולין תוך-לומינלי נבדקה בציסטות בקוטר מרבי של 50-100 אום או בציסטות גדולות מ-100 אום בקוטר מקסימלי. תיבות =(א,ב)100 אום. כדי לייעל את הצפייה בתמונה זו, אנא עיין בגרסה המקוונת של מאמר זה בכתובת www kidney-international.org.

חריגות פרוגרסיביות בתפקוד mt ומורפולוגיה בTFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)-7-תאי אפיתל

לאפיין את מהלך הזמן של ההשלכות המטבוליות שלTFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)מחיקה, בדקנו לראשונה את רמות ה-mRNA שלTFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)וTFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)- מווסת mt-Col,mt-Cyb, ו-mt-Atp6 inTFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)-/-כליות בגיל PO, P7 ו-P14. כצפוי,TFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)רמות ה-mRNA של mt-Col, mt-Cyb ו-nt-Atp6 הופחתו משמעותית (איור 4א). תאי אפיתל T fam-7- מתויגים עם eGFP(Six2-mT/mG; Tfam-7עכברים) הראו הפחתה משמעותית בביטוי חלבון MT-CO1 (איור משלים S7). מספר העתקת ה-Mt DNA הופחת ב-63 אחוז, מה שעולה בקנה אחד עם דלדול ה-MT, סימן היכר שלTFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)חוסר (איור 4א). לעומת זאת, הביטוי של גנים גרעיניים המקודדים לניקוטינאמיד אדנין דינוקלאוטיד: תת-יחידת ליבה של יוביקינון אוקסדורדוקטאז 3(Ndufs3) ו-Succinate dehydrogenase קומפלקס flavoprotein subunit A (Sdha) לא הושפע בגיל P0 אך הופחת בגיל P7 ו-P14 (איור 4א). ממצאים אלה מניתוח הגן mt וחלבון תואמים את האובדן המתקדם של מספר העתק mt באפיתל Tfam-/-.

לאחר מכן חקרנו את ההשפעות המטבוליות שלTFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)אי-אקטיבציה בתאי אפיתל אפיתל פרוקסימליים ראשוניים (PTECs) מבודדים בגיל P7.TFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)-7 PTECs הראו הפחתה משמעותית בשיעורי צריכת החמצן הבסיסית (40.77 ± 4.10 למוטנטים לעומת 61.75± 5.18 pmol/min/10 תאים לבקרות, n=3 כל אחד, P= 0.034 ), נשימה מקושרת ATP (33.11 ± 3.91 למוטנטים לעומת 46.92 ± 4.91 pmol/min/10* תאים לבקרות, n=3 כל אחד, P=0.093), נשימה מקסימלית (116.8 ± 14.19 עבור מוטנטים לעומת 225.5 ± 13.55 pmol/min/10* תאים לבקרות, n= 3 כל אחד,P=0.005), ויכולת נשימה פנויה (76.05 ± 10.18 עבור מוטנטים לעומת 163.7 ± 8.61 pmol/min/10* תאים לבקרות, n=3 כל אחד,P= 0.003; איור 4ב).

cistanche reddit

כדי לאפיין עוד את מידת הדלדול והנזק של הר, בדקנוTFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)-/- כליות על ידי מיקרוסקופ אלקטרונים שידור ו3-מיקרוסקופיה מובנית של תאורה ממדית (3D SIM). בגיל P7, המיטוכונדריה הפגינו צורות לא סדירות ובלונים, התואמים את הממצאים הקודמים בTFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)עכברי נוקאאוט. ניתוח מיקרוסקופי של אלקטרוני העברה הראה שחריגות מבניות של המיטוכונדריה, כגון גודל מוגבר וקריסטות חריגות, התקדמו לאחר הלידה מכיוון שההבדלים המורפולוגיים בין המוטנטים והבקרה היו פחות ניכרים בגיל P0 והפכו חמורים יותר עם הגיל (איור 4ג). ). 3D SIM שימש לבחינת נפח mt וגודל רשת בשישה2-mT/mG;TFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)-/ מוטנטים בהשוואה לשישה2-עכברי ביקורת mT/mG בגיל P7; נפח mt נמדד בחתכים של 5 עד 8 צינוריות לכל חתך, תוך בחינת 25 עד 40 תאי אפיתל קורטיקליים חיוביים ל-eGFP שנצבעו עבור ערוץ 1 סלקטיבי-תלוי במתח על ידי צביעה IF. מצאנו שהנפח הכולל של mt לתא חיובי ל-eGFP ירד באופן משמעותי (62.66 ± 16.46 אום/תא למוטנטים לעומת 177.4±30.17 מיקרומטר'/תא לבקרות, n=3 כל אחד , P= 0.0289) והיה קשור לשינוי ביחס בין נפח ה-mt הכולל לכל נפח תא מ-0.230 ±0.01 בבקרות ל-0.089 ± 0.016 בשישה 2-TFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)-7 מוטנטים (n= 3 כל אחד, P=0.0017; איור 4ג). גודל רשת mt המקסימלי, שמודד את רשת ה-MT הגדולה ביותר שנתקלה בכל התאים החיוביים ל-eGFP שנבדקו, ירד בשישה2-TFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)-/ כליות (143.2 ± 23.2 מיקרומטר למוטנטים לעומת 318.3 ± 49.45 אום² לבקרות, n= 3 כל אחד, P= 0.0327). ביחד, הממצאים האולטרא-סטרוקטורליים וה-SIM והממצאים מניתוח הגנים והחלבון של mt עולים בקנה אחד עם אובדן מתקדם של מספר העתק של mt בTFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)-7-אפיתל.

איור 4| אפיתל Tfam-/כליות מאופיין בדלדול מתקדם של המיטוכונדריה.(א) ביטוי גן מיטוכונדריאלי (mt) על ידי תגובת שרשרת כמותית של פולימראז בגיל שלאחר הלידה (P){{0}},P7 ו-P14 (שינוי פי שליטה, n =6 כל אחד) ו תוכן DNA של mt (P7) בסך הכליות הומוגניות מ-Cre~ litermate control (co) ושישה2-Tfam-/עכברים. (ב) קצב צריכת חמצן (OCR) בתאי אפיתל צינוריים פרוקסימליים ראשוניים (PTECs) שבודדו מבקרת Cre littermate ו-Six2-7fam- kidneys בגיל P7 על פלטפורמת Seahorse XFe24. מדידות OCR מייצגות בבקרה ו-Tfam-7PTEC שטופלו עם אוליגומיצין A (אוליגו A, עיכוב סינתאז של אדנוזין טריפוספט [ATP]), קרבוניל ציאניד-p-trifluoro methoxyphenyl הידרזון (FCCP, uncoupler), ומעכבי חמצון רוטנפוסון ואנטומיצין A(AA). מוצגים גם נשימה בסיסית ומקסימלית מחושבת, נשימה מקושרת ATP ויכולת נשימה פנויה (n =3 כל אחד). (ג) ניתוח אולטרה-סטרוקטורלי של מיטוכונדריה על ידי מיקרוסקופ אלקטרונים שידור. תמונות מיקרוסקופיות מייצגות של שידור אלקטרוני של קטעי כליות מעכברי Cre-control ושישה2-Tfam-7 בגיל P0 ו-P7, חיצים אדומים מתארים מיטוכונדריה. סרגל=500 ננומטר. (ד) תמונות מיקרוסקופיה מובנית של תאורה תלת מימדית של קטעי כליות מ-62-mT/mG (co) ושישה2-mT/mG; עכברי Tfam-/- בגיל P7. חלבון פלואורסצנטי ירוק משופר (eGFP), תת-יחידה ציטוכרום c אוקסידאז 4(COXⅣ) ותעלה 1 (VDAC תלוית-אניון-סלקטיבית זוהו על ידי אימונופלואורסצנטי.4',6-diamidino-2-פנילינדול (DAP) ) שימש לצביעה גרעינית (קרינה כחולה). קווים מקווקוים לבנים מתארים את צינורית הכליה בבקרה ואת לומן הציסטה בכליה המוטנטית, וסימני מספר מתארים לומן צינורי בבקרה או לומן ציסטה בכליה המוטנטית. אזור ה-MT כמת עם Imaris תוכנה (Oxford Instruments, Abingdon, בריטניה; n =3 כל אחד). נפח כולל (tot) mt (vol) לתא חיובי ל-eGFP (25-40 תאים/דגימה מנותח), היחס בין נפח mt הכולל לכל נפח תא כולל, והגודל המקסימלי (מקסימלי) של רשת mt לתא. גודל רשת mt נקבע בחתך צינורי עם 5 תאים לכל חתך. פסים =4 אממ. הנתונים מיוצגים כממוצע ± SEM ונותחו ע"י מבחן t של הסטודנט. *P<><><0.001, mt-atp6,="" mitochondrially="" encoded="" atp="" synthase="" membrane="" subunit="" 6;="" mt-co1,="" mitochondrially="" encoded="" cytochrome="" c="" oxidase="" 1;="" mt-cytb,="" mitochondrially="" encoded="" cytochrome="" b;="" ndufs3,="" nadh:="" ubiquinone="" oxidoreductase="" core="" subunit="" s3;="" sdha,="" succinate="" dehydrogenase="" complex="" flavoprotein="" subunit="" a;="" tfam,="" mitochondrial="" transcription="" factor="" a.="" to="" optimize="" viewing="" of="" this="" image,="" please="" see="" the="" online="" version="" of="" this="" article="" at="">

TFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)מחסור מעביר את חילוף החומרים של אפיתל הכליה לכיוון גליקוליזה

PTECs בכליות משתמשים בחומצת שומן וב-OXPHOS ליצירת ATP והם גלוקונאוגנטיים.' תואר כדי לקבל תובנות נוספות לגבי שינויים מטבוליים הקשורים להשבתת Tam, ביצענו ניתוח רצף RNA של כליות משש2-TFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)-/- ו-Cre~ עכברים שולטים במלט בגיל P7. מצאנו שגנים רגולטוריים מרכזיים המעורבים בגליקוליזה, כגון הקסוקינאז 2(Hk2) ו-enolase 2(Eno2), היו מווסתים. לעומת זאת, הביטוי של רוב הגנים המעורבים במחזור החומצה הטרי-קרבוקסילית ירד (למשל, isocitrate dehydrogenase 1[Idh1), וכך גם הביטוי של גנים המעורבים בחמצון חומצות שומן, כגון אצטיל קואנזים A acyltransferase 1B(Acaalb), אציל-קואנזים A דהידרוגנאז (Acadm) בעל שרשרת בינונית (איור 5a ו-b, איור משלים S8). עולה בקנה אחד עם ירידה בביטוי של גנים המעורבים בבקרת מחזור החומצה הטרי-קרבוקסילית וכליות מוטנטיות בגיל P7 באמצעות פלטפורמת Seahorse XFe24 (Agilent, Santa Clara, CA). PTECs מוטנטים אופיינו בעלייה משמעותית בגליקוליזה הבסיסית (קצב פליטת פרוטונים=117.4 ± 12.07 pmol/min למוטנטים ו-73.34 ± 6.33 pmol/min לבקרה, n{{25 }}, P=0.{{30}}032) וירידה ביחס של קצב צריכת החמצן של mt על קצב זרימת פרוטונים גליקוליטי מ-0.73 ± 0.08 בבקרה עד 0.34 ± 0.02 ב-PTECs מוטנטי (n=3,P=0.0074). יחד, הנתונים הללו מצביעים על כךTFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)-/- תאי אפיתל עברו שינוי מטבולי מ-OXPHOS וחומצת שומן לכיוון גליקוליזה (איור 5ד).

איור 5]מחסור בגורם שעתוק A (TFAM) של אפיתל אפיתל כלייתי קשור לגליקוליזה מוגברת ולמטבוליזם לא תקין של חומצות שומן.(א) ניתוח של ביטוי גנים מטבולי על ידי רצף RNA של קליפת כליה שלמה שבודדו משישה 2-Tfam-/- ועכברי Cre-littermate control (co) בגיל שלאחר הלידה יום (P) 7 (n {{6 }} כל אחד). מוצגים גנים מטבוליים מווסתים באופן דיפרנציאלי המעורבים בגליקוליזה ובמחזור החומצה הטרי-קרבוקסילית. גנים עם עלייה מובהקת סטטיסטית בביטוי mRNA מוצגים באדום, וגנים עם ירידה בביטוי מוצגים בירוק. (ב) רמות ביטוי mRNA של גנים נבחרים בוויסות דיפרנציאלי על ידי תגובת שרשרת פולימראז כמותית (n=4-6). (ג) שינוי בחילוף החומרים של חומצות שומן בשישה2-7Tfam-7עכברים מוטנטים. תמונות מייצגות של קטעי כליה מוכתמים בצבע אדום שמן מ-Six2-Tfam-7ועכברי בקרת Cre-littermate בגיל P14. חיצים מצביעים על תאים בעלי O-חיובי שמן אדום ומספר סיאן מתאר את העלות. סרגל=10 אום.(ד) ניתוח שטף גליקוליטי של תאי אפיתל צינוריים פרוקסימליים ראשוניים (PTECs) שבודדו מבקרה של Cre littermate ו-62-Tfam-/כליות בגיל P7 (n=4 כל אחד ) על פלטפורמת Seahorse XFe24. מוצגות מדידות מייצגות של קצב פליטת פרוטונים גליקוליטי (גליקו PER) בבקרה ו-Tfam-7PTEC שטופלו ב-2-deoxyglucose (2-DG) ובמעכבי זרחן חמצוני רוטנון ואנטימיצין A(AA) . כמו כן מוצגים הגליקו PER הממוצע בקו הבסיס והיחס בין שיעור צריכת החמצן המיטוכונדריאלי (MT) (OCR) על פני הגליקו PER. הנתונים מיוצגים כממוצע ± SEM ונותחו באמצעות מבחן t של הסטודנט. (נמשך)

מוּפחָתTFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)ביטוי ברקמות PKD של עכברים ואנושיים קשור לדלדול של mt

כי שישה2-TFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)-/ הכליות דומות חזק לכליות PKD, בשלב הבא הערכנו אםTFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)היה חוסר ויסות ברקמות PKD. קודם כל בדקנוTFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)וביטוי גנים מוסדר TFAM בשני דגמי עכברי PKD גנטיים מבוססים.TFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)רמות ה-mRNA הופחתו באופן משמעותי בהומוגניות של כליה שלמות מעכברי Pkd1-/- ו-Cyspk/pk, הנושאים מוטציות ב-Pkd1 או Cys1. זה היה קשור לירידה בביטוי של גנים מקודדים במיטוכונדריה ומקודדים גרעיניים כמו גם ביטוי גנים גליקוליטי לא מווסת. דומה לשש2-TFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)-/kidneys, Pkd1-7 ו-CysPkpk כליות אופיינו ברמות גבוהות של Eno2 ו-Hk2 וירידה משמעותית ברמות ה-phosphoglycerate kinase (Pkg)1, pyruvate dehydrogenase kinase(Pdk)1 ו-Pdk4 (איור 6a).TFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)ביטוי חלבון, כפי שהוערך על ידי צביעת IF, הופחת בתאי אפיתל רירית ציסטה בהשוואה לתאי אפיתל מצינוריות לא ציסטיות סמוכות (איור 6b). זה היה קשור לביטוי מופחת של mt-Co1 ו-mt-Atp6 על ידי הקרנת RNA באתר הכלאה (איור 6b, איור משלים S9); נפח mt, כפי שנקבע על ידי 3D SIM, הופחת ב-55 אחוז בהשוואה לתאי אפיתל מצינוריות סמוכות, לא ציסטיות, או PTECs מכליות ביקורת רגילות. לא נמצאו הבדלים בנפח mt בין PTECs נורמליים ל-PTECs מצינוריות לא ציסטיות (איור 6c).

איור 6| ביטוי של גורם שעתוק מיטוכונדריאלי A (TFAM) מופחת בציסטות הכליות Pkd1-7-ו-CysPkepk.(א) רמות ביטוי יחסי של mRNA (שינוי פיפול על פני שליטה של ​​Cre littermate) של גנים מיטוכונדריים וגליקוליטים מקודדים במיטוכונדריה ובגרעין ב-Pkd1-7וב-Cyskidneys (n=3-5).(ב) תמונות מייצגות של כליה קטעים מ-Pkd1-7ועכברים לבקרת בני חול נותחו בגיל שלאחר הלידה (P)22. מוצגים צביעת אימונופלואורסצנטי (IF) עבור TFAM ו-RNA פלואורסצנטי הכלאה באתרו (RNA-FISH) עבור תעתיקי ציטוכרום c אוקסידאז 1(mt-Co1) המקודדים במיטוכונדריה ותעתילים של תת-יחידה 6 (mt-Atp6) של ממברנת ATP סינתזה. חיצים לבנים מזהים תאי אפיתל ציסטה עם ביטוי מופחת מאוד של TFAM, mt-Co1 או mt-Atp6. Glomeruli מסומנים על ידי gl. מבנים צינוריים המבטאים TFAM מזוהים על ידי פלואורסצנטי אדום. כוכביות מתארות תאי אפיתל צינוריים עם תעתיקי mt-Co1 ו-mt-Atp6 שניתן לזהות.4',6-diamidino-2-phenyindole (DAPI) שימש לצביעה גרעינית (קרינה כחולה). פסים=25 אום עבור תמונות IF ו-10 מיקרומטר עבור תמונות RNA-FISH. （c） מיקרוסקופ תאורה מובנית תלת מימדית. מוצגות תמונות של קטעי כליה מכליות Pkd1-7- שנותחו על ידי היסטוכימיה עם לוטוס טטראגונולובוס לקטין (LTL) ו-IF עבור תת-יחידה 4 של ציטוכרום c אוקסידאז (COXIV) וביטוי של ערוץ 1 (VDAC) סלקטיבי אניון תלוי-מתח. נפח מיטוכונדריאלי (mt) כמת עם תוכנת Imaris המבוססת על צביעת COXIV. חיצים מתארים תאי אפיתל ציסטה, סימני מספר מתארים לומינה של ציסטה, וכוכביות מתארות צינוריות לא ציסטיות. תאי אפיתל רירית ציסטה מסומנים בקווים מקווקוים. פסים=10 מיקרומטר עבור הלוח השמאלי ו-3 מיקרומטרים עבור הלוח הימני. הנתונים מיוצגים כממוצע ± SEM ונותחו באמצעות מבחן t של הסטודנט *P<><0.01, and=""><0.001.eno2, enolase="" 2;="" hk2,="" hexokinase="" 2;="" mt-cytb,="" mitochondrially="" encoded="" cytochrome="" b:="" ndufs3.="" nadhubiguinone="" oxidoreductase="" core="" subunit="" s3;="" pdk1,="" pyruvate="" dehydrogenase="" kinase="" 1;="" pdk4.pyruvate="" dehydrogenase="" kinase="" 4;="" ppargc1a,="" peroxisome="" proliferator-activated="" receptor="" gamma="" coactivator="" 1-alpha:="" pgk1,="" phosphoglycerate="" kinase="" 1:="" ptec,="" proximal="" tubule="" epithelial="" cell;="" sudha,="" succinate="" dehydrogenase="" complex="" flavoprotein="" subunit="" a.="" to="" optimize="" viewing="" of="" this="" image,="" please="" see="" the="" online="" version="" of="" this="" article="" at="">

לבחון האם אובדן שלTFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)ביטוי הוא תכונה מולקולרית נפוצה של PKD אנושי, ניתחנו דגימות כריתת כליה מ-5 חולי ADPKD על ידי אימונוהיסטוכימיה, צביעת IF, הכלאה של RNA ב-site ו-SIM תלת מימד. מוּפחָתTFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)ביטוי נצפה ב-75.2 אחוז ± 7.5 אחוזים מהציסטות הכליות שנותחו על ידי אימונוהיסטוכימיה. זה היה קשור לירידה בביטוי של MT-CO1 ו-MT-ATP6 על ידי הקרנת RNA באתר הכלאה (איור 7a, איור משלים S10); נפח mt בתאי אפיתל ציסטה ירד בכ-70 אחוז כפי שהוערך על ידי 3D SIM (איור 7b). יחד, הניתוח של 2 מודלים של עכבר PKD ורקמות ADPKD אנושיות הציע זאתTFAM(גורם שעתוק מיטוכונדריאלי ממוקד A)מחסור ודלדול mt הם ממצאים נפוצים ברקמות PKD ועשויים להשפיע על הפתוגנזה של מחלת הציסטיקה הכלייתית.

איור 7| ביטוי של גורם שעתוק מיטוכונדריאלי A (TFAM) בציסטות כליות מחולים עם מחלת כליות פוליציסטית מופחת.(א) תמונות מייצגות של קטעים משובצים בפרפין מקובעים בפורמלין מכליות אנושיות נורמליות ומכליות מחולי מחלת כליות פוליציסטיות (PKD) נותחו על ידי אימונוהיסטוכימיה לביטוי TFAM, על ידי אימונופלואורסצנציה (IF) עבור ערוץ 1 (VDAC תלוי-אניון-סלקטיבי) ) ביטוי, ובאמצעות הכלאה של RNA פלואורסצנטי באתרו עבור ציטוכרום c oxidase 1(MT-CO1) המקודד במיטוכונדריה ותת-יחידה 6(MT-ATP6) mRNA מקודדת ATP synthase subunit 6(MT-ATP6) mRNA, החצים מזהים תאי אפיתל ציסטה, סימני מספר מתארים lumina , וכוכביות מתארות גלומרולי. בר=100 מיקרומטר עבור תמונות בהגדלה נמוכה ו-10 אום עבור תמונות בהגדלה גבוהה (ב) תמונות מיקרוסקופיות של תאורה מובנית ממדית מייצגת 3- של קטעי כליות PKD אנושיים שנותחו עם IF עבור ביטוי VDAC.4',{ {17}}דיאמידינו-2-פנילינדול (DAPl) שימש לצביעה גרעינית (קרינה כחולה). קווים מקווקוים מסמנים צינורות, וסימני מספר מתארים לומינה צינורית או ציסטה. נפח מיטוכונדריאלי (mt) הוכמת באמצעות תוכנת Imaris (n=5). סרגל =4 מיקרומטר. הנתונים מיוצגים כממוצע ± SEM ונותחו באמצעות מבחן t של התלמיד.*P<0.05. to="" optimize="" viewing="" of="" this="" image,="" please="" see="" the="" online="" version="" of="" this="" article="" at="">

לחץ כאן לחלק Ⅱ