בידוד וזיהוי של פנילטנול גליקוזידים מ- Cistanche Deserticola

איש קשר: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 דוא"ל:audrey.hu@wecistanche.com

הקדמה

Cistanche deserticolaשנאסף בפרמקופיה הסינית הוא הגבעול הבשרני היבש שלCistanche deserticola, צמח Orobanchaceae, שהוא תרופה נפוצה לחיזוק הכליה ברפואה הסינית המסורתית. ישנם סוגים רבים של Cistanche deserticola, וישנם דוחות מחקר רבים על Cistanche Salsa וCistanche tubulosaבספרות, אך יש מעט מחקרים על הזנים שנאספו בפרמקופיה. Luo Shangfeng ואחרים השיגו מניטול, 8-חומצה אפיגסטרית וחומצת אמינו מ-Cistanche deserticola. כדי להמשיך ולפתח ולחקור את Cistanche, המחלקה לרוקחות, המכללה הרפואית של שינג'יאנג חילצה והפרידה את הרכיבים המסיסים במים שלה - פניל ​​אתנול גליקוזידים. התוצאות הראו שארבעה מרכיבים הופרדו וזוהו, הם כןechinacoside, קסטנוזיד A,אקטאוזיד, ו-2'-אצטילקטאוזיד. לרכיבים הנ"ל יש השפעות תרופתיות כגון קידום תפקודי כליות ונוגד הזדקנות.

חלק ניסיוני

החומרים הרפואיים הניסויים נרכשו מחברת חומרי המרפא Urumqi ויוצרו במחוז Jinghe. הזנים זוהו על ידי Li Jiazheng, חוקר עמית של מכון שינג'יאנג לרפואה אתנית. המודל של שרף מאקרו-פורוס היה AB-B, שהוא מוצר כימי של אוניברסיטת ננקאי. סיליקה ג'ל ששימש בשכבת העמודים היה תוצר של המפעל הכימי הימי של צ'ינגדאו, Stephan-dex LH-20 היה תוצר של מפעל התרופות שנגחאי Changzheng. הדגם של ספקטרופוטומטר UV היה Shimadzu UV-360. ספקטרופוטומטר אינפרא אדום היה Shimadzu IR-440. הדגמים של מכשירי H-NMR ו-C-NMR היו Bruker MSL-300 (300 מגה-מחזורים)

1. מיצוי והפרדה

מופק Cistanche deserticola10 ק"ג שלוש פעמים על ידי ריפלוקס אתנול, לשלב את התמצית ולרכז אותה להדביק בלחץ מופחת, להוסיף כמות קטנה של מים לתרחיף, להסיר שומנים עם אתיל אצטט, לחלץ אותו עם n-בוטנול, לשלב את התמצית, ריכז אותה לייבוש בלחץ מופחת, הוסיפו כמות קטנה של מים להמסה, אספו ורכזו ברציפות את חלק המתנול דרך עמודת שרף מאקרו-פורוסית ועמודת פוליאמיד (לשטוף במים תחילה ולאחר מכן במתנול). סך הגליקוזידים של פניל ​​אתנול מתקבלים על ידי שכבת עמודת סיליקה ג'ל. עם שחרור גרדיאנט של CHCl3-MeOH (10:3 עד 10:5), נאספו סך של 78 זרמים (כ-300 מ"ל לזרם), מתוכם 16-23 תרכובות גולמיות IV (2.1 גרם), 28-42 היו תרכובות גולמיות III (5.4 גרם), 48-61 היו תרכובות גולמיות II (3.2 גרם), 65-78 היו תרכובות גולמיות I (5.1 גרם). הרכיבים שלעיל טוהרו על ידי כרומטוגרפיה של עמודת סיליקה ג'ל (תנאי הגלישה היו זהים לעיל) ולאחר מכן טוהרו על ידי עמודת הדקסטרן ג'ל LH-20. חלוט עם CH3OH: H20 (l:1) ואסוף את חלק המתנול לקבלת תרכובות מונומר IV (1.3 גרם), III (3.5 גרם), II (1.8 גרם) ו-I (3.5 גרם)

2. זיהוי

תרכובת I: אבקה אמורפית צהובה בהירה, תגובה FeCl3 ו - מבחן Naphthol חיובי, כרומטוגרפיה דקה של סיליקה ג'ל ערך Rf של 0.3 (CHCl3:MeOH:H2O=6:4:1 התרחבות, 20 אחוז זיהוי ריסוס H2SO4), UV λ (MeOH/nm):244, 292, 333. IR (KBr/MAX): ס"מ-1: 3360, 1690, 1625, 1598, 1518. H-NMR (מתנול- d1) δ: 1.08 (3H, D, J=6Hz, CH3), 2.79 (2H, t, J=7Hz, Ar-CH2-CH2-) , 4.29, 4.39 (1H, D, J=8Hz, שני פרוטונים סופיים של גלוקוז), 5.18 (1H, D, J=1Hz, פרוטונים טרמינליים של rhamnosyl), 6.28 (1H, J{{50 }}Hz, Ar-CH=CH-), 6.5-7.1 (6H, aryl H), 7.59 (1H, D, J=16Hz, Ar-CH{ {63}}נתוני CH-) C-NMR מוצגים בטבלה 1. התגובה הכימית והנתונים הספקטרליים לעיל תואמים את הדוח שלechinacosideבספרות. לכן, תרכובת I מזוהה כאכינאקוסיד.

תרכובת II: אבקה אמורפית צהובה בהירה, תגובה FeCl3, ו- בדיקת Naphthol הייתה חיובית, וכרומטוגרפיה סיליקה ג'ל בשכבה דקה Rf 0.35 (תנאי הפיתוח והזיהוי היו זהים לעיל). ספקטרום ה-UV וה-IR שלו היו דומים מאוד לאלו שלechinacoside, אבל H-NMR הופיע אות δ 3.84 (3H, s), C-NMR מופיע אות δ 56.5, מה שמצביע על כך שהמבנה מכיל 1 מתוקסי. UV λ (MeOH/nm):246, 290, 333. IR (KBr/MAX)cm-1: 3350, 1655, 1620, 1596, 1508. H-NMR(מתנול-d1) δ: 1.08 (3H, d, J=6Hz, קבוצת מתיל ברמנוז), 2.86 (2H, t, J=7Hz, Ar-CH2- CH2-), 3.84 (3H, s, OCH3), 4.28, 4.39 (1H, d, J=8Hz, שני פרוטונים של קבוצת קצה גלוקוז), 5.18 (1H, s, פרוטונים של קבוצת קצה של rhamnose), 6.27 (1H, d, J=16Hz, Ar-CH=CH-), 6.65-7.1 (6H, aryl H), 7.60 (1H, d , J=16Hz, Ar-CH=CH-). ראה טבלה 1 לנתוני C-NMR, הנתונים הספקטרליים לעיל תואמים את הערך הספרותי של קסטנוזיד A. לכן, תרכובת II זוהתה כקסטנוזיד ACompound III: אבקה אמורפית צהובה בהירה, כרומטוגרפיה דקה סיליקה ג'ל ערך Rf הוא 0.40 (פיתוח ותנאי הגילוי זהים לעיל). ספקטרום ה-UV וה-IR שלו דומים גם לאלה של echinacoside. יש פרוטון מסוף גלוקוז אחד פחות ב-H-NMR ואות גלוקוז אחד פחות ב-C-NMR, מה שמצביע על כך שמדובר בדיסכריד. UV λ (MeOH/nm):247, 292, 334. IR (KBr/MAX):3350, 1690, 1625, 1600, 1515. H-NMR(מתנול-d1) δ: 1.10 (3H, d, J{{ 83}}Hz, rhamnose methyl), 2.79 (2H, t, J=7Hz, Ar-CH2-CH2-), 4.38 (1H, d, J{{94} }Hz, פרוטון טרמינלי של גלוקוז), 5.19 (1H, d, J=1Hz, פרוטון טרמינלי rhamnose), 6.28 (1H, d, J=16Hz, Ar-CH=CH -), 6.5-7.1 (6H, aryl H), 7.59 (1H, d, J=16Hz, Ar-CH=CH-). נתוני C-NMR מוצגים בטבלה 1. הנתונים הספקטרליים לעיל תואמים את ערכי הספרות שלאקטאוזיד, כך שמתחם LII נקבע להיותאקטאוזיד.

תרכובת IV: אבקה אמורפית צהובה בהירה. ערך Rf של כרומטוגרפיית שכבה דקה של סיליקה ג'ל הוא 0.42 (תנאי הפיתוח והזיהוי זהים לעיל). הנתונים הספקטרליים שלו דומים מאוד לאקטאוזיד. יש עוד שיא ספיגה אחד של 1735 ס"מ-1 בספקטרום האינפרא אדום, ו-H-NMR הראה אותות ממטריצת האצטיל של δ1.98(3H.S), ו-C-NMR הראה אותות מקבוצות פחמן ומתיל של δ171.5 ו-20.9. על פי חוק עקירת הגלוקוזילציה, האצטילציה ממוקמת על קבוצת ההידרוקסיל 2 'סוכר. λ (MeOH/nm):247, 292, 333. IR (KBr/MAX):3430, 1725, 1700, 1630, 1605. 1525. H-NMR(מתנול-d1) δ: 1.08 (3H, d, J{ {27}}Hz, rhamnose methyl), 1.98 (3H, s. OAc), 2.70 (2H, t, J=7Hz, Ar-CH2-CH2-), 4.50 (1H, d=8Hz, פרוטון טרמינלי גלוקוז), 5.19 (1H, d, פרוטון טרמינלי rhamnose), 6.28 (1H, d, J=16Hz, Ar-CH=CH -), 6.5-7.1 (6H, aryl H), 7.60 (1H, d, J=16Hz, Ar-CH=CH-). נתוני ה-C-NMR מוצגים בטבלה 1. הנתונים הספקטרליים לעיל תואמים לערך הספרותי של 2 '- Acetylacteoside, כך שתרכובת IV מאושרת כ-2' - Acetylacteoside.