תקליטור ספציפי לחיסון לילדות תוך גידולי4+ תאי T-Call Coordinates Antitumor CD8+ תאי T ואאוזינופילים
Oct 17, 2023
תַקצִיר
רקע כללי
מנגנוני אנטי-גידולים של תאי T4+ של CD נותרים מוגדרים באופן גס, וחסרים אמצעים לרתום ביעילות את העזרה של תאי T של CD4+ לטיפול אימונותרפי בסרטן. תאי T קיימים בתקליטור זיכרון4+ מחזיקים בפוטנציאל למינוף למטרה זו. יתרה מכך, תפקידה של חסינות קיימת בווירותרפיה, במיוחד אימונותרפיה רקומביננטית של נגיף פוליו, שבו חסינות ספציפית לחיסון נגד פוליו בילדות נמצאת בכל מקום, נותר לא ברור. כאן בדקנו את ההשערה שתאי זיכרון T הספציפיים לחיסון ילדות מתווכים אימונותרפיה אנטי-גידולית ותורמים ליעילות האנטי-גידולית של וירוטרפיה פוליו.
היתרונות של cistanche tubulosa-Antitumor
שיטות
ההשפעה של חיסון נגד פוליו על וירוטרפיה של פוליו וההשפעות האנטי-גידוליות של שיקום פוליו וטטנוס נבדקו במודלים של מלנומה עכברת סינגניית וסרטן שד. נוק-אאוט של תאי T ו-B8+ של תקליטור, דלדול תאי T4+ בתקליטור, העברה מאמצת של תאי T4+ בתקליטור, חסימת CD40L, הערכות של חסינות נגד תאי T, ו דלדול אאוזינופיל הגדיר מנגנונים אנטי גידולים של אנטיגנים להיזכר. ערכות נתונים של תעתיקי סרטן וקורלציות של ניסויים קליניים של פוליו וירותרפיה שימשו להערכת הרלוונטיות של ממצאים אלה בבני אדם.
תוצאות
חיסון קודם נגד נגיף הפוליו חיזק באופן משמעותי את היעילות האנטי-גידולית של וירוטרפיה של פוליו בעכברים, והחזרה תוך-גידולית של נגיף הפוליו או חסינות נגד טטנוס עיכבה את צמיחת הגידול. אנטיגנים לזכרון תוך גידולים הגבירו את תפקוד תאי ה-T האנטי-גידוליים, גרם לחדירת גידול ניכרת של תאי לימפה מולדים ואאוזינופילים מסוג 2, ולירידה בפרופורציות של תאי T מווסתים (Tregs). השפעות אנטי-גידוליות של אנטיגנים להיזכרות היו מתווך על ידי תאי CD4+ T, מוגבלים על ידי תאי B, בלתי תלויים ב-CD40L ותלויים באאוזינופילים ובתאי CD8+ T. קשר הפוך בין חתימות אאוזינופיל ו-Treg נצפה על פני סוגי הסרטן The Cancer Genome Atlas (TCGA), ודלדול אאוזינופילים מנע הפחתת Treg לאחר היזכרות בפוליו. טיטר נוגדנים מנטרל פוליו לפני טיפול היו גבוהים יותר בחולים שחיו זמן רב יותר, ורמות האאוזינופילים עלו ברוב החולים, לאחר טיפול וירוטרפיה של פוליו
סיכום
חסינות קיימת נגד פוליו תורמת ליעילות האנטי-גידולית של וירוטרפיה של פוליו. עבודה זו מגדירה את פוטנציאל האימונותרפיה לסרטן של חיסונים בילדות, חושפת את התועלת שלהם להפעיל עזרה של תאי CD4+ לתאי T נגד גידולים CD8+, ומעריכה אאוזינופילים כמשפיעים אנטי-גידולים של CD4+ תאי T.
מבוא
למרות שתאי CD4+ T הם מתווכים מרכזיים של פונקציונליות חיסונית אדפטיבית וזיכרון, חסרים 1-3 מסלולים לרתום את הפוטנציאל שלהם לטיפול אימונותרפי בסרטן. זיכרון חיסוני מסתגל מאפשר תגובות חיסוניות חזקות לפתוגנים שנתקלו בעבר. בהתאם לכך, זכור תגובות, כלומר, הפעלה של תאי זיכרון אדפטיביים על ידי אנטיגן מוכר, תזמר דלקת מולדת וסתגלנית מקומית.4 5 בהתבסס על עבודה עדכנית המדגימה את התועלת האימונותרפית בסרטן של תגובות אנטי-ויראלי של CD8+ תאי T תוך-גידולי. , 6 7 שיערנו ש-CD4+ תאי T הממוקמים בגידול, הקשור לחיסון ילדות עשוי לעסוק בפונקציות אנטי-גידוליות של תאי T CD{10}}. PVSRIPO (הידוע כיום בשם 'Lerapolturev'), חיסון פוליו-וירוס מסוג 1 (Sabin) המוחלש חי, שונה עם אתר הכניסה הריבוזומלי הפנימי של רינו-וירוס אנושי מסוג 2,8, הראה עדות מוקדמת ליעילות בגליובלסטומה חוזרת (rGBM)9 וחוזרת , מלנומה בלתי ניתנת לכריתה10 11 לאחר מתן תוך גידולי (זה). חיסון נגד פוליו וירוס (פוליו) הוא חלק מלוח הזמנים הסטנדרטי של חיסוני ילדים ברחבי העולם, בין אם עם החיסונים החיים המוחלשים (Sabin), או החיסונים המומתים (IPOL). רצף הקידוד של PVSRIPO זהה לחיסון Sabin מסוג 1. תגובתיות קיימת של נוגדנים נגד PVSRIPO/פוליו בנסיוב אושרה בכל החולים שקיבלו טיפול ב-PVSRIPO.9 10 12 יתרה מכך, שימוש קליני ב-PVSRIPO כרוך בחיזוק קודם עם IPOL תלת-ערכי לפחות שבוע לפני מתן זה, מה שגרם לנטרול PVSRIPO בנסיוב נוגדנים גדלים בכל החולים.9 10 ההשפעות האנטי-גידוליות של וירותרפיה פוליו כוללות נזק לתאים ניאופלסטיים וזיהום ויראלי תת-קטלני של תאים מיאלואידים המניעים איתות מתמשך של אינטרפרון מסוג I (IFN).12–15 זיכרון חיסוני אנטי פוליו מונע ככל הנראה שכפול PVSRIPO בתוך הגידול אך עשוי לספק מנגנון פעולה אנטי-גידול חלופי באמצעות החזרה של תאי T ספציפיים לחיסון פוליו. באמצעות מודלים של גידולי עכברים של מלנומה וסרטן השד, אנו מדגימים שחסינות קיימת לפוליו מעצימה את היעילות האנטי-גידולית של פוליו וירותרפיה על ידי הפעלת פונקציות אנטי-גידוליות של תאי T4+ של CD. היזכרות בפוליו או טטנוס הפעילו תא T מסומן CD4+, תא לימפואיד מולד מסוג 2 (ILC2) וזרימת אאוזינופילים; מתווך יעילות אנטי-גידולית באמצעות תאי CD8+ T ואאוזינופילים באופן עצמאי של CD40L. בקבוצות של חולים עם rGBM שטופלו ב-Lerapolturev (PVSRIPO), רמות גבוהות יותר של נוגדנים מנטרלי פוליו לפני טיפול היו קשורים להישרדות ארוכה יותר, ואינדוקציה היקפית של אאוזינופילים נצפתה בחולים עם מלנומה לאחר טיפול ב-Lerapolturev. לפיכך, וירותרפיה לפוליו ואנטיגנים הקשורים לחיסוני ילדות מתאמים חסינות נגד גידולים מסוג I ו-II באמצעות זכירת תאי T CD4+.
תוסף תוסף cistanche-הגברת חסינות
חומרים ושיטות
חומרים ושיטות מורחבים מוצגים במידע משלים מקוון.
עכברים, שורות תאים, וירוסים, פולי(I:C) ונוגדנים בדרגת in vivo
(טוקיו, יפן). Wildtype (wt) (#000664), CD8 נוקאאוט (k/o) (#002665), B-cell k/o (#002288), OT-I (#003831) ועכברי CD45.1 C57BL/6 (# 002014) היו ממעבדת ג'קסון. עכברי OT-I ו-CD45.1 C57BL/6 הוצלבו ליצירת CD45.1+עכברי OT-I. B16.F10 (אוסף תרבות אמריקאית), E0771 (G. Palmer, אוניברסיטת דיוק, ארה"ב), E0771hCD155, B16.F10hCD155 ו-B16. F10.9hCD155-תאי OVA גודלו ב-Dulbecco's Modified Eagle Medium עתיר גלוקוז (DMEM, Gibco) המכיל 10% סרום בקר עוברי (FBS) (Sigma-Aldrich). B16. תאי F10.9hCD155-OVA, B16-F10hCD155 ו-E0771hCD155 נגזרו בעבר.12 13 כל שורות התאים אושרו כשליליות ל-mycoplasma. PVSRIPO בדרגת מעבדה, PVSRIPO מותאם לעכבר (mRIPO) ו-PVSRIPO מנוגד ל-UV (UVP) נוצרו בתאי HeLa ואחריו טיהור של אי הכללת גודל של הסופרנטנט שנוצר כפי שתואר קודם לכן.12 13 PVSRIPO שימש לחיסון; נעשה שימוש ב-UVP כדי לבודד השפעות של קפסיד פוליו (המכיל אפיטופים ספציפיים לחיסון פוליו); mRIPO היא גרסה מותאמת לעכבר של PVSRIPO ששימשה לבדיקת ההשפעה המלאה של וירוטרפיה פוליו בעכברים. VacciGrade משקל מולקולרי גבוה (I:C) (InvivoGen) שוחזר לפי הוראות היצרן. נוגדנים מסוג In vivo לאינטרלוקין (IL)-5 (TRFK5) או לבקרה (HRPN), CD4 (GK1.5) או לבקרה (LTF-2), CD40L (MR-1) או שליטה (#BP0091), ו-CD40 (FGK4.5) או שליטה (2A3) היו מ-Bio X Cell.
חיסונים, חיסונים, וטיטרים ויראליים
אלא אם צוין אחרת, חיסונים המשתמשים ב-PVSRIPO (1×107 יחידות יוצרות פלאק (pfu)/עכבר), טטנוס טוקסואיד (Tet) (MilliporeSigma; 0.5 מיקרוגרם/עכבר), או חור-המוציאנין (KLH, Sigma) -Aldrich; 100 מיקרוגרם/עכבר) הודללו בתמיסת מלח עם פוספט (PBS) עם Alhydrogel (1:1; InvivoGen); 50µL של חיסון ניתנו באופן דו-צדדי בשרירי הארבע ראשי. חיסונים משולבים של IPOL ו-Tenivac (Sanofi Pasteur) ניתנו באופן חד צדדי עבור כל חיסון. הגברת החיסון התרחשה 14 ימים לאחר מכן. לשם כך, גידולים נקצרו, נשקלו והומוגגו באופן מכני ב-1 מ"ל של PBS. הומוגנט נבדק על ידי בדיקת פלאק.16
ניסויים במודל של גידול מורני
היתרונות של cistanche tubulosa-Antitumor
עבור השתלות B16, 2×105 תאים הושתלו תת עורית בצלע של עכברים זכרים ונקבות; עבור השתלות E0771 5×105 תאים הושתלו בכרית שומן החלב הרביעית של נקבות עכברים. עכברי hCD155-tg C57BL/6 שימשו עם mRIPO כדי לשחזר פוליו וירותרפיה (שכפול ויראלי פעיל ± חסינות קיימת); ואילו עכברי wt C57BL/6, שאינם מתירים לפוליו, שימשו עם UVP כדי לבודד את ההשפעות של היזכרות בפוליו. גידולים טופלו ב-DMEM או PBS (רכב), mRIPO (1×107pfu), UVP (1×108 pfu מושבת מראש), Tet (0.5 מיקרוגרם) ו/או פולי(I: C) (30 מיקרוגרם) כמצוין באגדות דמויות. קבוצות הטיפול חולקו באקראי לפי נפח הגידול (מדידות קליפר, באמצעות המשוואה L × W × W/2) ביום הראשון לטיפול. עכברים הורדמו כאשר נפח הגידול עלה על 1000 מ"מ, אלא אם כן קדם לו כיב (שהיה נדיר ולא קשור לשום טיפול מסוים), ובמקרה זה עכברים לא נכללו במחקר. גודלי הקבוצות התבססו על הערכות כוח מניסויי פיילוט או ניסיון קודם.12 מדידות גידול בוצעו כשהן עיוורות לקבוצת הטיפול ב-it החל לאחר המנה האחרונה של הטיפול/אנטיגן שלה. עכברים עם נפח גידול התחלתי חריג בזמן האקראי (1 SD מהממוצע) לא נכללו.
ניתוח ציטומטריית זרימה של גידולים
גידולים נקצרו בנקודות זמן המצוינות באגדות איור ונפרדו במדיה RPMI-1640 (Thermo Fisher) המכילה 100 µg/mL Liberase-TM (Sigma-Aldrich) ו-10µg/mL DNAse I (Roche) למשך 30 דקות ב-37 מעלות , ולאחר מכן מעבר דרך מסננת תאים 70µM (Olympus Plastics), צנטריפוגה ושטיפה ב-PBS. עבור ניסויים באמצעות Zombie Aqua (BioLegend), תאים נצבעו עם Zombie Aqua ב-PBS (1:500) בהתאם להוראות היצרן. השעיות תאים הודגרו עם 1:50 עכבר TruStain FcX (BioLegend) ואחריו צביעה ספציפית לפאנל ב-PBS המכילה 2% FBS. צביעה של גורמי שעתוק תוך-תאיים, ציטוקינים וגרנזים B הושגה באמצעות Foxp3/Transcription Factor Staining Buffer Set (Thermo Fisher) בהתאם להוראות היצרן. ראה מידע משלים מקוון למידע על לוחות ונוגדנים בשימוש. נתונים נאספו על פורטה X20 במתקן הליבה של ציטומטריית זרימת ה-Duke Cancer Institute; קובצי FCS נותחו באמצעות FlowJo V.10 (BD Biosciences). אסטרטגיות שער מוצגות במידע משלים מקוון; בקרות איזוטיפ, בקרות פלואורסצנטי מינוס אחד והשוואה לאוכלוסיות תאים שליליות מבוססות שימשו להגדרת חיוביות.
ניתוחים הקשורים לניסויים קליניים
מבחני טיטר נטרול PVSRIPO בוצעו לפי פרוטוקול הניסוי הקליני,9, וערכים עבור שני הניסויים הקליניים של rGBM שימשו מבחני רישום לניסויים קליניים. טיטר פוליו של שלב I rGBM (NCT01491893) דווחו בעבר וההישרדות עודכנה החל מ-29 באפריל, 2020; הישרדות שלב II (NCT02986178) עודכנה החל מ-27 באפריל 2021. מלנומה (NCT03712358)10 11 אחוזי המשתתפים בניסוי הקליני של תאי דם לבנים נרכשו מבדיקות ספירת דם מלאה (CBC).
ניתוח סטטיסטי וקבוצות ניסויים קליניים
בדיקות סטטיסטיות ספציפיות למבחן מסומנות באגדות האיור המתאימות. GraphPad Prism V.8 שימש לביצוע ניתוחים סטטיסטיים. נעשה שימוש בניתוח דו-כיווני של שונות (ANOVA) כדי להעריך את ההבדל בצמיחת הגידול לאורך זמן בין הקבוצות, ובדיקת ANOVA post-hoc שימשה כדי להסביר השוואות מרובות, אלא אם צוין אחרת באיור ו/או באיור. הסתברות סטטיסטית של (עמ'<0.05) was used unless otherwise noted; all p values are two-tailed. All data points reflect individual mice or patients.
תוצאות
חיסון נגד פוליו מגביר וירוטרפיה של פוליו
בדקנו לראשונה ייצור נוגדנים נגד פוליו (כלומר, המרת סרוק) בעכברים טרנסגניים לקולטן הפוליו-וירוס האנושי CD155 (hCD155-tg) בחיסון עם IPOL או PVSRIPO (לחיקוי סוג 1 Sabin) עם ובלי אדג'ובנט אלום ( Alhydrogel; ALH), חלק מתכשירי חיסון מורשים (לדוגמה, Pentacel, Pediarix, Kinrix).17 45 ימים בין החיסון הראשוני להשתלת הגידול אפשרו ביסוס זיכרון אימונולוגי.18 IPOL השיגה המרה סרוקית מוגבלת וחיסון PVSRIPO עורר חיזוק חזק יותר תגובת נוגדנים; ALH חיזק תגובות נוגדנים לשניהם (איור משלים מקוון S1A, B). כדי לשחזר רמות גבוהות של נוגדנים נגד פוליו בחולים עם סרטן,9 בחרנו בחיסון PVSRIPO+ALH (להלן 'פוליו') כדי לקבוע את תפקידה של חסינות פוליו הקיימת מראש באימונותרפיה PVSRIPO. מודלים של גידול עכברים ועכברים המבטאים hCD155 פותחו בעבר כדי לאפשר כניסה ושכפול של PVSRIPO, ו-PVSRIPO הותאם לתאי עכברים כדי לשחזר את השכפול הוויראלי בתאי סרטן עכברים (mRIPO).13 19 במחקרים קודמים בתאי חיסון פוליו, מודלים סינגניים של גידול עכברים, הזרקת mRIPO יחידה דרשה חסימה מתוכנת של חלבון מוות תאי-1 (PD1)/ליגנד מוות מתוכנת-1 או ביטוי גידול של החלבון האימונוגני אולבומין (OVA) כדי לתווך השפעות אנטי-גידולים מתמשכות .12 13 עם זאת, זה תיווך mRIPO יעילות אנטי-גידולית עמידה בעכברים מחוסנים בפוליו במודלים של סרטן מלנומה (B16) ושד (E0771), ביחס לעמיתים מחוסנים בשליטה (KLH) (איור 1A, B, איור משלים מקוון S1C) . לפיכך, חיסון נגד פוליו קודם מחזק את היעילות האנטי-גידולית של פוליו וירותרפיה. פוליו וירותרפיה קשורה לדלקת של תאי T בתוך הגידול.12 13 שכפול mRIPO בתוך גידולים הופחת באופן משמעותי בעכברים שחוסנו פוליו יומיים ו-5 ימים לאחר הטיפול (איור 1C, D), בהתאם לנוגדן מנטרל גבוה titers (איור משלים מקוון S1B). עם זאת, ראינו צפיפות כוללת של תאי חיסון מוגברת (CD45.2+) בעכברים מחוסנים בפוליו לאחר טיפול ב-mRIPO, המוסברת בעיקר על ידי זרימה של תאי CD4+ T קונבנציונליים ותאי מיאלואיד (CD11b+, Ly6GNeg, F4/80+ ) (איור 1E, דמויות משלימות מקוונות S2A, S3). ניתוח שלאחר מכן גילה כי התאים המיאלואידים המוגברים CD11b+ בעכברים מחוסנים בפוליו שטופלו ב-mRIPO היו אאוזינופילים (איור 1F); רמות של תאים דנדריטים (DCs) לא השתנו באופן משמעותי. מוגבר של גורם נמק גידול (TNF), גורם מגרה מושבה גרנולוציטים-מקרופאגים (GM-CSF), IL-1 ו-IL-17A ברמות הומוגניות של הגידול ורמות גבוהות יותר של IL-4 ו-IL{ {51}} בתרביות בלוטות לימפה מנקזות גידול (TDLN) מעכברים מחוסנים נגד פוליו שטופלו ב-mRIPO הצביעו על תגובות דלקתיות ברורות לאחר טיפול ב-mRIPO (איור משלים מקוון S2B). GM-CSF ו-IL-5 הם מעוררים ידועים של ייצור וגיוס אאוזינופילים,20 אולי מסבירים את זרימת האאוזינופילים בגידולים (איור 1F). תאי CD4+ קונבנציונליים וחדירת אאוזינופיל בתגובה לטיפול ב-mRIPO של עכברים מחוסנים בפוליו נצפו גם במודל נפרד, E0771 (איור משלים מקוון S2C, D). לפיכך, חסינות קיימת לפוליו מדגישה תגובות דלקתיות ל-mRIPO הקשורות ליעילות משופרת נגד גידולים.
Figure 1 Polio immunization potentiates antitumor and inflammatory efficacy of polio virotherapy. (A) Polio or KLH-immunized hCD155-tg mice bearing hCD155-tg B16 or E0771 tumors were treated with DMEM (control) or mRIPO. (B) Survival cut-off was tumor volume >1000 מ"מ3; ראה איור משלים מקוון S1C; נציג משני ניסויים. (ג) סכימה לניסויים ב-D–H. (ד) טיטרים ויראליים הומוגניים של גידולים לאחר mRIPO; ND, לא זוהה. (ה) ניתוח ציטומטריית זרימה של גידולים ביום 7 (n=13/מדומה לקבוצה; n=14/קבוצה mRIPO). (ו) ניתוח ציטומטריית זרימה עבור תאים מיאלואידים ותאים דנדריטים (DCs: Ly6CNeg, F480Neg, CD11c+, IA/IE+) ביום 11. (G) סמני הפעלה ב-TIs בימים 7 ו-12; אספו משני ניסויים; מוצגים ערכי KLH-DMEM ממוצעים מתקפלים. (ח) ביטוי גורם שעתוק TIL ביום 12; אותן דגימות כמו יום 12 של (A); מוצגים נתונים מייצגים של שלוש חזרות. ראה נתונים משלימים מקוונים S1–S4 לנתונים מורחבים. (E–H) מבחן פוסט-הוק של טוקי עמ'< 0.05 versus mock controls (*) or all other groups (#). Data bars and brackets indicate mean+SEM. mRIPO, mouse adapted PVSRIPO; DMEM, Dulbecco's Modified Eagle Medium; IFN, interferon; i.t., intratumor; KLH, hemocyanin keyhole limpet; OVA, ovalbumin; TIL, tumor-infiltrating lymphocyte; TNF, tumor necrosis factor.
פנוטיפים פונקציונליים מוגברים של תאי T בעכברים מחוסנים בפוליו שטופלו ב-mRIPO
CD8+ ו-CD4+ לימפוציטים חודרים לגידולים (TILs) בעכברים שחוסנו פוליו הביעו רמות גבוהות יותר של טיפול IFN-, TNF ו-granzyme B תוך תאי לאחר mRIPO, מה שמרמז על מצב תפקודי משופר (איור 1G , איור משלים מקוון S4). TILs מעכברים מחוסנים לפוליו שטופלו ב-mRIPO הפגינו גם ביטוי מוגבר של גורמי השעתוק T-bet, GATA3 ו-ROR t; כמו גם אינדוקציה של IRF4, מקדם של הפעלה ותפקוד של תאי T (איור 1H).21 ביטוי של סמני התשישות של תאי T PD1 ואימונוגלובולין של תאי T וחלבון המכיל תחום mucin 3 (TIM3) ב-CD{{20 }} תאי T בגידול ו-TDLN של עכברים מחוסני פוליו שטופלו ב-mRIPO הופחתו (איור משלים מקוון S2E). שינויים בסמני הפעלה/התמיינות של תאי T היו עקביים במודל E0771 של סרטן שד אורתוטופי (נתונים משלימים מקוונים S2F, G). לפיכך, תגובות זכירות לפוליו מגדילות את הפנוטיפים התפקודיים ב-TIs לאחר טיפול וירוותרפיה של פוליו תוך גידולי.
אנטיגנים זכירת פוליו וטטנוס מתווכים יעילות נוגדת גידולים
תקליטור זיכרון ספציפי ל-Reovirus8+ הורגים ישירות תאים סרטניים נגועים ב-reovirus במהלך טיפול ב-reovirus oncolytic,22 ותאי זיכרון ספציפי לטטנוס4+ תאי T הורגים תאים סרטניים הנגועים ב-Listeria המבטאים Tet.23 לחלופין, תגובות דלקתיות הנגרמות על ידי היזכרות של תאי T בזיכרון במיקרו-סביבה של הגידול (TME) עשויות גם לחזק את המעקב החיסוני.6 7 שיערנו שדלקת הנגרמת על ידי היזכרות מסבירה את היעילות המודגשת נגד גידולים של פוליו וירותרפיה בעכברים שחוסנו פוליו מאז שכפול ויראלי - הנדרש לייצור אנטיגן ויראלי בתאי גידול, אונקוליזה ודלקת אנטי-ויראלית12 - הופחת בחדות בעכברים מחוסנים נגד פוליו (איור 1D). כדי לחקור את ההשפעות האנטי-גידוליות של ריקול פוליו ב-TME השתמשנו במודל נטול hCD155 (עכברים וגידולים; עכברים wt C57BL/6) וטיפלנו בגידולים עם PVSRIPO (UV-inactivated) (UVP) כדי למנוע זיהום/שכפול ויראלי. כללנו השוואות עם אנטיגן ריקול אחר הקשור לחיסון, Tet, שהוכח כמתווך השפעות אנטי-גידוליות במחקרים אחרים.23 24 טיפול זה עם UVP הפעיל יעילות אנטי-גידולית אך ורק בעכברים מחוסנים נגד פוליו; טיפול ב-Tet תיווך השפעות אנטי-גידול חולפות בעכברים מחוסנים ב-Tet (איור 2A-C, קובץ משלים מקוון 1). תגובות היזכרות טבעיות מתרחשות בנוכחות תגובה חיסונית מולדת מקומית לשכפול הפתוגן. כדי לחקות זאת, עכברים מחוסנים בפוליו טופלו בפולי(I:C) לבד או בשילוב עם UVP או Tet. גם UVP וגם Tet תיווכו השפעות אנטי-גידול מובהקות בהקשר זה (איור 2D). נתונים אלה חושפים שהוא זוכר תאי T זיכרון ב-TME - ללא תלות בהצגת תסביך ההיסטו-תאימות העיקרי (MHC) של האנטיגן המשותף שלהם על ידי תאים ממאירים - מתווך יעילות אנטי-גידולית.
תאי CD4+ T מתווכים את היעילות האנטי-גידולית של אנטיגנים להיזכר
כדי לקבוע אילו תאים אדפטיביים מסבירים את היעילות האנטי-גידולית של תגובות היזכרות לפוליו (ללא תלות בשכפול ויראלי), השווינו את הטיפול עם UVP בעכברי CD8+ T-cell ו-B-cell k/o ביחס ל-wt עכברים (איור 3A). עכברי CD4 k/o לא נבדקו עקב תפקידם של תאי CD4+ T לאפשר תגובות של תאי T ו-B גם בתאי CD8+ לחיסון. כצפוי, חיסון נגד פוליו בעכברי WT ו-CD8 k/o, אך לא עכברי B-cell k/o, הוביל לייצור נוגדנים נגד PVSRIPO (איור 3B). גידול גידול B16 היה דומה בכל הקשר גנטי לאחר טיפול מדומה. יחסית לעכברי wt, היעילות האנטי-גידולית של UVP בעכברים מחוסנים לפוליו הייתה מוגבלת בעכברי CD8 k/o בנקודות זמן מאוחרות יותר, אך גדלה בעכברי B-cell k/o (איור 3C; p=0.007wt לעומת עקומות מטופלות ב-B-cell k/o UVP, ANOVA דו-כיוונית). יתרה מכך, B-cell k/o לא מנע זרימה של אאוזינופילים או CD4+ TILs (איור משלים מקוון S6A) הקשורים להיזכרות בפוליו (איור 1). לפיכך, היעילות האנטי-גידולית של ריקול פוליו תלויה חלקית בתאי CD8+ T ומוגבלת על ידי תאי B. תצפיות אלו, יחד עם עלייה ב-CD4+ TILs לאחר טיפול ב-mRIPO בעכברים מחוסנים לפוליו (איור 1E), מרמזים שתאי CD4+ T מכתיבים את היעילות האנטי-גידולית של תגובות היזכרות לפוליו. לפיכך, בשלב הבא בדקנו את ההשפעה האנטי-גידולית של החזרת פוליו עם ובלי דלדול תאי T חולף של CD4+ (איור תלת-ממדי, החל מטיפול מקדים ביום 1-). למרות דלדול חזק של תאי CD4+ T ב-TDLN, דלדול תאי CD4+ בתוך הגידול לא היה שלם והפחית באופן מועדף את אוכלוסיות תאי T רגולטוריות (Treg), מה שעשוי להסביר השפעות אנטי-גידול מתונות והגברת CD 8+ צפיפות תאי T לאחר דלדול תאי תקליטור4+ (איור 3D, איור משלים מקוון S6B). אף על פי כן, דלדול תאי T של CD4+ כמעט ביטלה את היעילות האנטי-גידולית של UVP בעכברים מחוסנים בפוליו ומנעה את הגיוס של אאוזינופילים בתגובה ל-UVP (איור 3D); דלדול תאי ה-CD4+ גם מנע את השראת גרנזים B בתאי CD8+ T לאחר טיפול UVP (נתון משלים מקוון S6B). ביחד ממצאים אלו מצביעים על כך שההשפעות האנטי-גידוליות והדלקתיות של החזרת פוליו תלויות בתאי T4+ ב-CD. אישור שתאי T CD4+ ספציפיים לפוליו מספיקים כדי להעצים את היעילות האנטי-גידולית של וירוטרפיה פוליו (עם שכפול ויראלי פעיל), העברה מאמצת של תאי CD4+ T מטחול של עכברים מחוסנים בפוליו, אך לא זה של Tet, חיזק את היעילות האנטי-גידולית של mRIPO (איור 3E, איור משלים מקוון S6C).
זה מזכיר את הטיפול באנטיגנים משפר את תפקוד תאי ה-T antitumor CD8+
הוכח כי תאי T-CD4+ ספציפיים לגידול הורגים באופן ישיר תאי גידול,25-27 מעורבים בתאי חיסון מולדים ציטוטוקסיים,28 29 ומספקים עזרה לתאי T-CD8+.1-{ {7}} בהתאם לאחרונים, השפעות אנטי-גידוליות של אנטיגנים להיזכר נצפו לאחר מסירה ל-TME (איורים 2 ו-3), היו תלויות חלקית בתאי CD8+ T (איור 3C) וב-CD{{12 }} ל-TIs היו פנוטיפים רב-פונקציונליים משופרים לאחר טיפול ב-mRIPO בעכברים מחוסנים נגד פוליו (איור 1G).
איור 2 אנטיגנים שיזכרו פוליו וטטנוס מתווכים יעילות נוגדת גידולים. עכברים נושאי גידול B16 (A) או E0771 (B) שחוסנו עם פוליו או Tet טופלו תוך גידול עם Tet או PVSRIPO (UV-inactivated) (UVP). (ג) עכברים נאיבים תואמי גיל או Tenivac ו-IPOL מחוסנים טופלו עם PBS, Tet או UVP. (ד) עכברים שחוסנו כמו ב-(A, B) טופלו תוך גידולים עם מדומה, פולי (I: C) (30 מיקרוגרם), פולי(I: C) + Tet, או פולי(I: C) + UVP כפי שמוצג. (א-ד) ממוצע+SEM מניסוי מייצג של לפחות שתי חזרות מוצג; כוכביות מצביעות על הבדיקה של דאנט עמ'< 0.05 versus all other groups; online supplemental figure S5 presents extended data. IPOL, inactivated polio vaccine; i.t., intratumor; PBS, phosphate buffered saline; UVP, UV-inactivated PVSRIPO; Tet, tetanus toxoid.
לפיכך, בשלב הבא ביקשנו לקבוע אם פוליו (UVP) ו-Tet recall משפרים את התפקוד של תאי T אנטי-גידולי CD8+. לשם כך, העברנו באופן אימוץ תאי CD45.1+OT-I CD8+ (ספציפיים ל-OVA) לעכברים מחוסנים נגד פוליו או Tet וקבענו את ההשפעה של החזרת UVP ו-Tet על B{ {7}}פנוטיפים של OVA OT-I TIL (איור 4A). אינדוקציה של תגובות היזכרות בגידול לאחר UVP או Tet הייתה קשורה לעיכוב בצמיחת הגידול ולחדירת גידול מוגברת של תאי CD45.2+ אנדוגניים, אאוזינופילים ותאי CD4+ קונבנציונליים; במיוחד, רמות תאי OT-I T נגד גידולים עלו באופן לא מובהק (איור 4B). עם זאת, ניתוח של תאי T מסוג OT-I CD8+ חודרים לגידול גילה שיפור בגרנזים B, TNF ו-IFN-; וביטוי מופחת של סמן התשישות הסופי TIM3 לאחר ריקול פוליו או Tet (איור 4C). נצפה ביטוי מגוון של גורם שעתוק הקשור ל-T בתאי OT-I וגם בתאי T אנדוגניים, כולל זה של GATA3, ROR t ו-BCL6 (איור 4C). ניתוח טראנסקריפטומי של OT-I TILs לאחר היזכרות בפוליו גילה ביטוי מוגבר של גרנזימים; גנים המקושרים עם הפעלה, תפקוד או הומאוסטזיס של תאי T (Taok3, CD86, CCR5, Egr2, Adgre1, Vdr, IRF4 ו-BCL6); גנים הקשורים לחסינות Th1 (Ptger4, Fgl2); כמו גם גנים הקשורים לחסינות Th2 (Alox15, Ccl8 ו-GATA3) (איור 4D, איור משלים מקוון 8C). אישרנו את התצפיות הללו על ידי בדיקת ההשפעה של ריקול פוליו על TRP2-ספציפי (אנטיגן B16 אנדוגני) CD8+ TILs בגידולי B16 ללא ביטוי OVA. TRP2--CD8+ ספציפיים הפגינו גראנזים B מוגבר וביטוי TIM3 מופחת לאחר היזכרות בפוליו באופן תלוי תאי T-CD (איור משלים מקוון S9). יחד, נתונים אלה מצביעים על שיפור בפנוטיפים ציטוליטיים ותפקודיים של תאי T אנטי-גידוליים לאחר היזכרות בפוליו. הדגמה פונקציונלית של חסינות מוגברת של תאי T נגד גידולים לאחר היזכרותם, תאי T שבודדו מטחול של עכברים שטופלו בו נזכרים באנטיגן (UVP בחיסון פוליו, או Tet בחיסון Tenivac) עיכבו את צמיחת הגידול לאחר העברה למקבלים תמימים (איור 4E). תאי T4+ של CD עוזרים לקדם את תפקוד תאי T נגד גידולים8+ בין השאר באמצעות איתות CD40L ל-CD40 על תאים המציגים אנטיגן,1 אך יכולים גם לעזור לתאי T אנטי-גידולי CD8+ ללא תלות של חסימת CD40L.31 CD40L לא מנע אאוזינופיל המושרה על ידי UVP, תאי CD4+ קונבנציונליים, או זרימת T antitumor OT-I; זה גם לא פגע בהשפעות אנטי-גידוליות (איור משלים מקוון S10). בנוסף, קשירת CD40 לא שיחזרה את זרימת האאוזינופילים שנצפה לאחר טיפול באנטיגן נזכר (איור משלים מקוון S10). לפיכך, זכירת תאי T מסוג CD4+ מעצימה את הפונקציה האנטי-גידולית של תאי T נגד גידולים CD8+ באופן בלתי תלוי ב-CD40L.
איור 3 CD4+ תאי T מתווכים יעילות אנטי-גידולית של החזרת פוליו. (א) עיצוב לניסויים ב (B, C). (ב) ELISA לנוגדנים נגד פוליו בכל רקע גנטי ביום 0 (n=4/קבוצה). (ג) נפח גידול ממוצע + SEM לאחר טיפול מדומה (משמאל) או טיפול מדומה לעומת UVP (לוחות ימין) עבור כל הקשר גנוטיפ; ערכי p הם מניתוח דו-כיווני של שונות (ANOVA) השוואה של UVP לקבוצת הביקורת. (ד) עכברים שחוסנו עם פוליו טופלו בדומה או ב-UVP כמו ב-(A), עם זריקות תוך צפקית (ip) של נוגדן IgG (בקרה) או CD4+ תאי T מדלדל (250 מיקרוגרם נמסר כל 3 ימים החל מהיום −1); נפח גידול ממוצע+SEMand ניתוח ציטומטריית זרימה של תאי CD4 T ואאוזינופילים חודרים לגידול מוצגים; n=9 לקבוצה; ערך p הוא מ-ANOVA דו-כיווני המשווה UVP IgG לעומת UVP CD4; (*) מציין את הפוסט הוק של Tukey p<0.05. (E) CD4+ T cells from spleens of mice immunized with Tet (control) or polio were adoptively transferred to naïve B16 tumor-bearing recipients 1day-prior to intratumor treatment with DMEM or mRIPO. Mean tumor volume+SEM for mock or mRIPO treated mice for each CD4+ T-cell transfer condition; p values are from two-way ANOVA comparison of the two curves shown in each panel. See online supplemental figure S6 for extended data. DMEM, Dulbecco's Modified Eagle Medium; i.t., intratumor; UVP, UVinactivated PVSRIPO; Tet, tetanus toxoid; mRIPO, mouse adapted PVSRIPO; Tconv, conventional CD4+ T cells.
איור 4 טיפול באנטיגן להיזכר תוך גידול מחזק את תפקוד תאי ה-T antitumor CD8+. (א) עכברים מחוסנים פוליו או Tet (Tenivac) הושתלו בגידולי B16-OVA, ולאחר מכן העברה מאמצת של תאי OT-I (CD45.1+) מופעלים, וטיפול ב-Tet או UVP . (ב) ניתוחי נפח גידול וציטומטריית זרימה של תאי חיסון (B) ותת-קבוצות TIL (C); איור משלים מקוון S7 מציג שער של OT-I TILs. (ד) נותחו תעתיקים של OT-I TILs שבודדו מעכברים מחוסנים בפוליו 12 ימים לאחר הטיפול (DMEM או UVP). ספירות ממוצעות מנורמלות במרכז ובקנה מידה מוצגות עבור תמלילים שהיו שונים באופן משמעותי לאחר התאמת שיעור גילוי כוזב p-value בשני ניסויים נפרדים (חלונית עליון, n=4/group ו-n=3/ group, בהתאמה ) או עבור תכונות רלוונטיות ל-(C) שהתקרבו למשמעות בשני מערכי הנתונים, כולל גרנזימים, IRF4, BCL6 ו-GATA3 (פאנל תחתון); n=4 עותקים/קבוצה מוצגים במפת חום. איור משלים מקוון S8B ו-C מציג ספירות מנורמלות עבור דגימות בודדות ונתונים מורחבים. (ה) התקדמות הגידול בעכברים נאיביים שהועברו באופן אימוץ עם תאי T מהטחול של עכברים ב-A-C. נפח גידול ממוצע + SEM מוצג; ערך ה-p הוא מניתוח דו-כיווני של שונות. כל סרגלי הנתונים מייצגים ממוצע+SEM; מפות חום ב-(C) נורמלו לפי ממוצע פיפול של בקרת האנטיגן הלא תואמת; מבחן הפוסט הוק של Tukey p<0.05 relative to all other groups (#) or respective DMEM control (*). (A–C) pooled results from two experiments; data in (E) were repeated twice. DMEM, Dulbecco's Modified Eagle Medium; TIM3, T cell immunoglobulin and mucin domain-containing protein 3; IFN, interferon; i.t., intratumor; OVA, ovalbumin; PD1, programmed cell death protein-1; UVP, UV inactivated PVSRIPO; Tet, tetanus toxoid; TIL, tumor-infiltrating lymphocytes; TNF, tumor necrosis factor.
אאוזינופילים חודרים לגידול מתחברים באופן הפוך עם Tregs בגידולים אנושיים
מעורבות של גורמים חיסוניים אנטי-גידוליים אחרים באמצעות הפרשת ציטוקינים היא מנגנון מפתח בלתי תלוי CD40L של תאי T CD4+.31 32 זה פוליו קפסיד (UVP) ו-Virotherapy (mRIPO) גרמו באופן עקבי לחדירה חזקה של אאוזינופילים ( דמויות 1, 3 ו-4), באופן תלוי תאי T4+ בתקליטור (איור 3D). זרימת אאוזינופילים של גידול קשורה לתגובה אימונותרפיה, 33-35 ועבודות אחרונות הוכיחו שתאי CD4+ T מגייסים פונקציות אנטי-גידוליות של אאוזינופילים לאחר חסימת PD1 באמצעות IL-5.36 ראשית, שאלנו אם צפיפות האאוזינופילים מתאמת עם זה של תאי T4+ CD או מאפיינים אחרים ב-TME של גידולים אנושיים על ידי שאילתה של סט נתונים של סרטן מ-The Cancer Genome Atlas (TCGA).37 באמצעות חיזוי CIBERSORT38 של חדירות תאים, 37 דגימות מכל סוג סרטן היו מרובדים על ידי נוכחות או היעדר של חתימות ביטוי גנים אאוזינופילים שזוהו (איור 5A, איור משלים מקוון S11,12); גידולי תאי נבט באשכים (TGCT) ו-Uveal Melanoma (UVM) לא נכללו עקב מקרים מוגבלים עם העשרה אאוזינופילים (n<3). While limited association of eosinophil presence was observed with CD8+ or CD4+ T-cell enrichment, eosinophil presence was associated with significantly lower Treg signatures across all cancer types (figure 5A, online supplemental figure S11B, C). Eosinophil presence was associated with longer survival in Low-Grade Glioma (LGG), where eosinophil density was also the highest (online supplemental figure S11A), but not in other tumor types (figure 5B, online supplemental figure S11D). Importantly, significant differences in Treg density on stratification by eosinophil enrichment were observed within several cancer types, with heterogenous relationships between CD4+ and CD8+ T-cell density (online supplemental figure S12). Notably, eosinophil influx was associated with reduced Treg proportions after polio recall in our studies (figures 1E and 4B, online supplemental figure S2). Together, these data may reflect a role for eosinophils in countering tumor-infiltrating Tregs.
cistanche tubulosa- לשפר את המערכת החיסונית
לחץ כאן לצפייה במוצרי Cistanche Enhance Immunity
【בקש עוד】 דוא"ל:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
חסינות נגד גידולים מסוג II לאחר טיפול mRIPO בעכברים מחוסנים בפוליו
לאחר מכן ביקשנו לקבוע את המשמעות של חדירת אאוזינופילים לאחר החזרת פוליו בעכברים. אאוזינופילים הם מתווכים של תגובות חיסוניות מסוג II, הממלאות תפקידים בחסינות נגד הלמינת ודלקת אלרגית.39 גיוס אאוזינופילים יכול להיות מתווך על ידי מתווכי חיסון אחרים מסוג II, כולל ILC2s, שמתאמים תגובות Th2 באמצעות אינטראקציות ישירות עם CD{{4} } תאי T,40 מבטאים את גורם השעתוק GATA3 ואאוזינופיל מקדם ציטוקין IL-5, אך חסרים ביטוי של קולטן תאי T. ואכן, תאי GATA3+ CD3Neg גדלו בגידולים של עכברים לאחר היזכרותם (איור 5C), אולי משקף זרימת ILC2. בשלב הבא בדקנו כיצד אאוזינופילים משפיעים על וירוטרפיה של פוליו (mRIPO) בעכברים מחוסנים בפוליו, ומדדנו ILC2s ישירות. דלדול אאוזינופילים (באמצעות IL-5 נטרול41) הפחית את ההשפעות האנטי-גידוליות של mRIPO בעכברים עם B16-OVAhCD155 שחוסנו פוליו (איור 5D, E); לא הפחית את זרימת תאי ה-CD4+; אבל חסמו הפחתות בפרופורציה של Treg (איור 5F). יתר על כן, זה פוליו וירותרפיה (mRIPO) הובילה לזרימה של ILC2 (איור 5F) ושינתה פנוטיפים של ILC2 בעכברים מחוסנים בפוליו, עם IL-5 מופחת והשראת ביטוי PD1 ו-granzyme B (איור 5G). מלבד תפקידו בשליטה ברמות האאוזינופילים, IL-5 הוא קריטי גם להתמיינות של תאי B.42 עם זאת, מאחר שההשפעות האנטי-גידוליות של החזרת פוליו אינן תלויות בתאי B, ואולי אף מנוגדות בהן (איור 3C), ובגלל חדירת אאוזינופילים חזקה בעקביות בהחזרת פוליו, אנו מסיקים שניטרול IL-5 מפחית את ההשפעות האנטי-גידוליות של החזרת פוליו באמצעות דלדול אאוזינופילים. יחד, נתונים אלה מדגימים תפקידים אנטי-גידוליים עבור אאוזינופילים וגיוס של ILC2s עם פנוטיפים שהשתנו לאחר היזכרות בפוליו ומרמזים שאאוזינופילים מווסתים את צפיפות ה-Treg.
נוגדנים קיימים נגד פוליו קשורים להישרדות ארוכה יותר לאחר טיפול ב-Lerapolturev (PVSRIPO); אאוזינופילים היקפיים גדלים לאחר Lerapolturev
In trials of Lerapolturev in rGBM9 and melanoma,10 all patients were confirmed seropositive for anti-PVSRIPO neutralizing antibodies (from polio vaccine crossreacting antibodies) at the time of enrollment, a feature anticipated to correlate with pre-existing PVSRIPO specific CD4+ T-cell immunity. We queried both phase I (n=61)9 and II (n=72 at the time of data cut-off) clinical rGBM cohorts for the relationship between pretreatment Lerapolturev neutralizing antibodies and survival. In both cohorts, patients living >18 חודשים לאחר Lerapolturev (חציון הישרדות טיפוסי ב-rGBM הוא ~9 חודשים)9 43 היו גבוהים יותר משמעותית של נוגדנים מנטרלים לפני טיפול (איור 6A, B). כדי להתייחס לשאלה האם תגובות חיסוניות מסוג II עשויות להיות מעורבות בחולים שטופלו בפוליו וירו-תרפיה, ניתחנו CBCs אורכיים הזמינים מניסוי הסלמה במינון קטן של Lerapolturev במלנומה חוזרת, בלתי ניתנת לניתוח (שלב I, n=12) .10 11 נתונים אלו חשפו עלייה ברמות האאוזינופילים בדם לאחר Lerapolturev ב-8/12 חולים (איור 6C), במקביל לירידה במספר הנויטרופילים (10/12 חולים). ממצאים אלו עשויים להצביע על כך שחסינות קיימת תורמת ליעילות האנטי-גידולית של פוליו וירותרפיה ושהטיפול בפוליו גורם לתגובות חיסוניות מסוג II בחולים עם סרטן.
איור 5 אאוזינופילים מקשרים באופן הפוך עם Tregs בגידולים אנושיים; mRIPO משרה חסינות נגד גידולים מסוג II בעכברים מחוסנים בפוליו. (א) תת-קבוצות של תאי T מפותלים ב-CIBERSORT בסוגי הסרטן של גנום הסרטן אטלס (n=29) מרובדים לפי מצב אאוזינופילים, ערכי p מבדיקת t מזווגת. (ב) HRs (הישרדות) ± 95% CIs עבור מצב אאוזינופיל לפי סוג סרטן; סוגי סרטן עם פחות מ-20 מקרי מוות לא נכללו; ערכי p הם ממבחן ה-log-rank של Mantel-Cox. (ג) אחוז תאי GATA3+ CD3Neg מנתונים באיור 4C, ערכי p הם ממבחן t לא מזווג. (ד) עיצוב עבור (E–H): עכברים מהונדסים נגד פוליו, B16-OHCD155 נושאי גידולים מסוג hCD155- טופלו במדומה או ב-PVSRIPO ± דלדול אאוזינופיל (אנטי-IL-5 או שליטה ב-IgG, 1 מ"ג לשבוע). נפח גידול ממוצע+SEM (E), צפיפות אאוזינופיל ו-ILC2 בגידולים (F), ופנוטיפ של ILC2s חודרים לגידול (lineageNegCD90+ CD127+ CD25+ לעומת CD שלילי שושלת 90+ תאים להשוואה מוצגים (G). (ה) (*)ניתוח דו-כיווני של שונות עמ'<0.05; (F–G) (*)Tukey's post hoc test p< 0.05 versus mock+IgG control. Online supplemental figure S11–S13 presents extended data. IL, interleukin; ILC2, type 2 innate lymphoid cell; i.p., intraperitoneal; i.t., intratumor; OVA, ovalbumin; PD1, programmed cell death protein-1; UVP, UV-inactivated PVSRIPO; Tet, tetanus toxoid; Tregs, regulatory T cells; mRIPO, mouse-adapted PVSRIPO.
עשב סיני cistanche plant-Antitumor
דִיוּן
עבודה זו חושפת את פוטנציאל הטיפול האימונותרפי בסרטן של החזרת תאי T מסוג CD4+ הממוקמים בגידול. עזרת תאי T4+ היא המפתח ליצירת תקליטור אנטי-גידול תפקודי מלא8+ חסינות תאי T1 44 וזיכרון לטווח ארוך.2 45 תקליטור אנטי-גידול8+ תאי T הפגינו פנוטיפים רב-פונקציונליים גדולים יותר לאחר היזכרות, העברה מאמצת של תאי T מעכברים שטופלו באנטיגן ריקול עיכבה את צמיחת הגידול במקבלים תמימים, והשפעות נוגדות גידולים של UVP הוקהו בעכברים מחוסנים לפוליו ללא תאי T 8+ CD. זה מצביע על אספקת תאי T4+ של CD עוזרת לתאי T נגד CD8+. ואכן, העזרה של תאי T CD4+ מקושרת עם ויסות מטה של סמן תשישות, ביטוי מוגבר של TNF/IFN-/granzyme B ואינדוקציה של Tbet/IRF4 בתאי T 'עזרו',3 שכולם התרחשו עם פוליו וירותרפיה בעכברים מחוסנים. עזרה כזו של תאי T היא ככל הנראה רבת פנים, כולל 'רישוי' DCs; CD4+ הפרשת תאי T של ציטוקינים (למשל, IL-21, IFN- ); תכנות מחדש של TME; או באמצעות השפעות חיוביות של אאוזינופילים שגויסו על מעקב חיסוני של תאי T CD8+.36 46 אולי בשל פעילותם של נוגדנים מנטרלי פוליו המגבילים את הפעלת תאי ה-CD4+ על ידי הפחתת זמינות אנטיגן היזכרות או התמדה, תאי B היו נגד השפעות אנטי-גידוליות של היזכרות בפוליו. מחלת הפוליו תיווכה באופן עקבי תגובות אנטי-גידול ודלקתיות חזקות יותר מזו של Tet במחקרים שלנו. אפשרות אחת היא שזה נובע מהבדלים בעוצמה ו/או באיכות של חסינות קיימת שנגרמה לאחר חיסון פוליו לעומת חיסון טט במערכות המודל שלנו. לתמיכה באפשרות זו, ההשפעות האנטי-גידוליות של Tet ו-UVP היו דומות כאשר עכברים חוסנו עם חיסון IPOL בדרגה קלינית (איור 2C), אשר גרם לחסינות אנטי-פוליו חלשה יותר מאסטרטגיית החיסון לפוליו (PVSRIPO+ALH) המשמשת לניסויים אחרים ב המחקר שלנו (איור משלים מקוון S1B). עם זאת, זה גם מבוסס היטב שטבעו של האנטיגן (למשל, צפיפות האפיטופים, שסביר להניח שהיא גבוהה יותר בקפסיד הפוליו) יכול להשפיע על תגובות חיסוניות אדפטיביות. 47 48 היעילות האנטי-גידולית של החזרת פוליו הייתה תלויה רק באופן חלקי בתאי CD8+ T. טיפול באנטיגנים בזיכרון גרם לזרימת אאוזינופיל ו-ILC2, ודלדול אאוזינופיל הפחית את ההשפעות האנטי-גידוליות בעכברים מחוסנים לפוליו שטופלו ב-mRIPO. תוך הדגשת חשיבות ההקשר, גם אאוזינופילים ו-ILC2s הוכחו כמתווכים השפעות פרוטומוריגניות.49 50 באסתמה, תאי CD4+ T מגייסים eosinophils51 דרך ILC2s.52 ILC2s מבטאים MHC Class II ומפיצים תגובות Th2 ב זיהומים של helminth.40 בסרטן, חדירת אאוזינופילים של הגידול קשורה לתגובת אימונותרפיה,33 34 אאוזינופילים הוכחו כתומכים במעקב חיסוני של תאי T של CD8+,46 ו-ILC2s תורמים ליעילות אנטי-PD1 נגד גידולים. 35 53 העבודה שלנו מצביעה על כך שתפקודים אנטי-גידוליים של אאוזינופילים, ואולי גם של ILC2s, יכולים להיות מעורבים על ידי תאי CD4+ T. עדיין לא ברור עד הסוף כיצד ריקול תאי T-CD4+ מגייס אאוזינופילים לגידול, עם זאת, עבודה אחרונה מספקת הסבר אפשרי בכך שהיא הראתה שבמהלך חסימת PD1 הפרשת IL-5 על ידי CD4+ תאי T מעוררים התרחבות של אאוזינופילים וגיוס זה.36 יתר על כן, ניתוח ציטוקינים של הומוגנטים של גידולים ויציאות TDLN לאחר פוליו וירותרפיה גילה גם GM-CSF ו-IL מעודדי אאוזינופיל-5 מוגברים בעכברים מחוסנים לפוליו (נתון משלים מקוון S2B ).
איור 6 נוגדנים קיימים נגד פוליו קשורים להישרדות ארוכה יותר לאחר טיפול ב-Lerapolturev (PVSRIPO); אאוזינופילים היקפיים גדלים לאחר Lerapolturev. (A, B) טיטר נטרול סרום של Lerapolturev לפני טיפול נמדדו בניסויים חוזרים של גליובלסטומה (rGBM) בשלב I (A, Ph1, NCT01491893) ושלב II (B, Ph2, NCT02986178). הישרדות לאחר הפרדה על ידי טיטר ניטרול חציוני (1:2000), לצד טיטר ממוצע+SEM עבור חולים ששרדו
גילינו גם קשר הפוך בין זרימת אאוזינופילים של גידול וצפיפות Treg בגידולים אנושיים, וטיפול באנטיגנים בהיזכרות הוביל לירידה בפרופורציות של Tregs שהשתתפו בזרימת אאוזינופילים, מה שמרמז על תפקיד הדדי של אאוזינופילים בשליטה על תאי T4+ CD ביולוגיה. קביעה מדויקת של האופן שבו אאוזינופילים מתווכים השפעות אנטי-גידוליות לאחר היזכרות של תאי T של CD4+, והאם ILC2s תורמים לתהליך זה דורשת מחקר נוסף. נראה כי הבדלים בצפיפות האאוזינופילים בלבד אינם פרוגנוסטיים ברוב סוגי הסרטן, למעט פוטנציאל ה-LGG, שבו רמות האאוזינופילים היו גם הגבוהות ביותר מבין כל סוגי הגידול האחרים. מעניין שדווח על מתאם שלילי בין אאוזינופילים היקפיים לדרגת גליומה54; ואלרגיות ואטופיה בדרכי הנשימה קשורות לשכיחות נמוכה יותר של גליומה.55 השתמשנו באסטרטגיות חיסון מקטבות Th2, התואמות את השימוש הקליני בחיסוני פוליו וטטנוס, כדי לפענח את הפוטנציאל האנטי-גידולי של החזרת תאי T4+ ל-CD. בעוד שבאופן קנוני- קיטוב Th1/Tc1, Th2/Tc2 ו-Th17/Tc17 סותרים זה את זה, זכור טיפול אנטיגן בהקשר זה שנוצר Th1 (CD8+ מעורבות תאי T, ביטוי Tbet/IFN- ב-CD{{ 20}} תאי T); Th2 (גיוס אאוזינופיל/ILC2, ביטוי GATA3 בתאי T CD4+); ובמידה פחותה, Th17 (ביטוי ROR t בתאי CD4+ /CD8+ T) מקטבים. נתונים אלה מוסיפים לראיות מצטברות לכך שקיטובים מגוונים של תאי CD4+, מעבר לזה של Th1, יכולים ליצור תגובות חיסוניות תואמות ופרודוקטיביות.56–58 העבודה שלנו מראה שבעוד שחסינות קיימת מגבילה את השכפול הוויראלי בתוך הגידול, הוא משפר את היעילות האנטי-גידולית של פוליו וירותרפיה. מגבלה של עבודה זו היא שהיא בוצעה במערכות עכברת שאינן לוכדות את ההטרוגניות של תגובות פוליו/תקליטור זיכרון Tet4+ או של TME בבני אדם. יתרה מכך, בשל הצמיחה המהירה של מודלים של גידולים שהופעלו, הגידולים היו קטנים יחסית בזמן התחלת הטיפול. עם זאת, מה שמצביע על הישימות של התצפיות שלנו על בני אדם, כימי נוגדנים מנטרלי פוליו לפני טיפול היו גבוהים יותר בחולים עם rGBM שחיו זמן רב יותר לאחר טיפול בפוליו, ורמות האאוזינופיל בדם עלו ברוב החולים עם מלנומה (8/12) לאחר טיפול עם פוליו וירותרפיה (Lerapolturev). כסייג, רמות גבוהות יותר של נוגדני פוליו מנטרלים עשויים לשקף מצב תפקודי חיסוני מעולה. למרות שאיננו יכולים לשלול אפשרות זו, נתונים אלה לכל הפחות מגלים שחסינות קיימת אינה מונעת טיפול מוצלח של פוליו וירוטרפיה בחולים. התצפיות שלנו מרמזות גם שמינונים מרובים של Lerapolturev עשויים להיות מוצדקים כדי להדגיש את ההשפעות האנטי-גידוליות של החזרת פוליו. ואכן, תגובות בחולים עם מלנומה שטופלו ב-Lerapolturev התקבצו בקבוצה עם המספר הגבוה ביותר של טיפולים.10 לאור החשיבות הבולטת של תאי CD4+ T באימונותרפיה בסרטן,1 32 מאמצים הולכים וגדלים שואפים למנף CD4+ תאי T עוזרים בתוך גידולים, למשל, עם נוגדנים אגוניסטיים CD40,59 או עם חיסוני פפטידים, כולל אפיטופים מסוג MHC Class II44 שמובילים CD4+ ו-CD8+ T ספציפיים לנאו-אנטיגן. cells.60 העבודה שלנו חושפת את הפוטנציאל של רתימת תאי זיכרון CD4+ ספציפיים לחיסון ילדות כדי להפעיל מנגנונים אנטי-גידוליים רבים של תאי T CD4+.
הפניות
1 Borst J, Ahrends T, Bąbała N, et al. תאי Cd4+ T מסייעים באימונולוגיה של סרטן ובאימונותרפיה. Nat Rev Immunol 2018;18:635–47.
2 Ahrends T, Busselaar J, Severson TM, et al. תאי Cd4+ T עוזרים ליצור תאי CD8+ בזיכרון עם יכולות זכירה מולדות ובלתי תלויות בעזרה. Nat Commun 2019;10:5531.
3 Ahrends T, Spanjaard A, Pilzecker B, et al. תאי CD4+ t מסייעים להקנות תוכנית משפיעה של תאי T ציטוטוקסיים, כולל הורדת ויסות קולטן קונטי-מעכב ופולשנות מוגברת של רקמות. חסינות 2017;47:848–61.
4 Schenkel JM, Fraser KA, Beura LK, et al. זיכרון תאי T. תאי זיכרון CD8 T מעוררים תגובות חיסוניות הגנה מולדות ואדפטיביות. מדע 2014;346:98–101.
5 Ariotti S, Hogenbirk MA, Dijkgraaf FE, et al. זיכרון תאי T. תאי זיכרון CD8+ת תושבי העור מעוררים מצב של התראה על פתוגן בכל רקמות. מדע 2014;346:101–5.
6 Rosato PC, Wijeyesinghe S, Stolley JM, et al. תאי זיכרון T-ספציפיים לווירוס מאכלסים גידולים וניתן להשתמש בהם מחדש לטיפול אימונותרפי בגידול. Nat Commun 2019;10:567.
7 Çuburu N, Bialkowski L, Pontejo SM, et al. ניצול חסינות נגד ציטומגלווירוס עבור אימונותרפיה מקומית נגד גידולים מוצקים. Proc Natl Acad Sci USA 2022;119:e2116738119.
8 Gromeier M, Lachmann S, Rosenfeld MR, et al. רקומביננטים בין-גנריים לנגיף פוליו לטיפול בגליומה ממאירה. Proc Natl Acad Sci USA 2000;97:6803–8.
9 Desjardins A, Gromeier M, Herndon JE 2nd, et al. גליובלסטומה חוזרת מטופלת בנגיף פוליו רקומביננטי. N Engl J Med 2018;379:150–61.
10 Beasley GM, Nair SK, Farrow NE, et al. ניסוי שלב I של PVSRIPO תוך גידולי בחולים עם מלנומה בלתי ניתנת לניתוח, עמידה לטיפול. J Immunother Cancer 2021;9:e002203.
11 Bisley GM, Brown MC, Farrow NE, et al. ניתוח מולטי-מודאליות מקנה יתרון פרוגנוסטי של מיקרו-סביבה של גידול שחדר תאי T ומצב חיסוני היקפי בחולים עם מלנומה. J Immunother Cancer 2022;10:e005052.
12 בראון MC, Mosaheb MM, Mohme M, et al. זיהום ויראלי של תאים בתוך המיקרו-סביבה של הגידול מתווך אימונותרפיה נגד גידולים באמצעות איתות tbk1-irf3 סלקטיבי. Nat Commun 2021;12:1858.
13 בראון MC, Holl EK, Boczkowski D, et al. טיפול אימונותרפי בסרטן עם נגיף פוליו רקומביננטי משרה הפעלה דומיננטית של IFN של תאים דנדריטים ו-CTLs ספציפיים לאנטיגנים לגידול. Sci Transl Med 2017;9:eaan4220.
14 Holl EK, Brown MC, Boczkowski D, et al. לנגיף פוליו אונקוליטי רקומביננטי, PVSRIPO, יש השפעות ציטוטוקסיות ודלקתיות חזקות, המתווך טיפול במודלים של קסנושתלים של סרטן השד והערמונית. Oncotarget 2016;7:79828–41.
15 Yang Y, Brown MC, Zhang G, et al. פוליו וירותרפיה מכוונת לחדירת המיאלואידית הגליומה הממאירה עם הפעלת מיקרוגליה מפוזרת הבולעת את מערכת העצבים המרכזית. Neuro Oncol 2023:noad052.
16 Brown MC, Bryant JD, Dobrikova EY, et al. אינדוקציה של תרגום נגיפי, 7-מתיל-גואנוזין כובע בלתי תלוי ואונקוליזה על ידי השפעות מתווכות קינאז-פרוטאין מופעל על ידי מיטוגן על חלבון קינאז עשיר בסרין/ארגינין. J Virol 2014;88:13135–48.
17 Hawken J, Troy SB. תוספים וחיסון פוליו מומת: סקירה שיטתית. חיסון 2012;30:6971–9.
18 Swain SL. יצירה והתמדה in vivo של תאי זיכרון מקוטבים th1 ו-th2. חסינות 1994;1:543–52.
19 משהב מ.מ.כ. וקטורי פוליו-וירוס יציבים מבחינה גנטית מפעילים תאים דנדריטים ומשפרים חסינות של תאי CD8 T נגד גידולים. Nat Commun 2020;11:524.
20 Blanchard C, Rothenberg ME. ביולוגיה של האאוזינופיל. עו"ד אימונול 2009;101:81–121.
21 Mittrücker HW, Matsuyama T, Grossman A, et al. דרישה לגורם השעתוק lsirf/irf4 לתפקוד לימפוציטים מסוג b ו-t בוגר. מדע 1997;275:540–3.
22 Groeneveldt C, Kinderman P, van Stigt Thans JJC, et al. חסינות מוקדמת של תאי T ספציפיים ל-reovirus משפרת את היעילות האנטי-סרטנית של טיפול ב-reovirus. J Immunother Cancer 2022;10:e004464.
23 Selvanesan BC et al. ליסטריה מספקת חלבון טוקסואיד טטנוס לגידולים בלבלב וגורמת למוות של תאי סרטן בעכברים. Sci Transl Med 2022;14:eabc1600.
24 Tähtinen S, Feola S, Capasso C, et al. ניצול חסינות קיימת כדי לשפר את האימונותרפיה של סרטן אונקוליטי. Cancer Res 2020;80:2575–85.
25 Cachot A, Bilous M, Liu YC, et al. תאי cd4 t ציטוליטיים ספציפיים לגידול מתווכים חסינות נגד סרטן אנושי. Sci Adv 2021;7:eabe3348.
26 Oh DY, Kwek SS, Raju SS, et al. תאי cd4+ t תוך-גידוליים מתווכים ציטוטוקסיות אנטי-גידולית בסרטן שלפוחית השתן האנושי. תא 2020;181:1612–25. 27 Quezada SA, Simpson TR, Peggs KS, et al. תאי CD4 (+) T בעלי תגובתיות לגידול מפתחים פעילות ציטוטוקסית ומחסלים מלנומה גדולה לאחר העברה למארחים לימפוניים. J Exp Med 2010;207:637–50.
28 Perez-Diez A, Joncker NT, Choi K, et al. תאי Cd4 יכולים להיות יעילים יותר בדחיית הגידול מאשר תאי CD8. Blood 2007;109:5346–54.
29 Corthay A, Skovseth DK, Lundin KU, et al. תגובה חיסונית אנטי-גידולית ראשונית המתווכת על ידי תאי CD4+ T. חסינות 2005;22:371–83.
30 Church SE, Jensen SM, Antony PA, et al. תאי T מסוג CD4+ ספציפיים לגידול שומרים על תאי T מסוג CD8+ ספציפיים לגידול וזיכרון. Eur J Immunol 2014;44:69–79.
31 Lu Z, Yuan L, Zhou X, et al. Cd40-מסלולים בלתי תלויים של תאי T עוזרים להתחלות של לימפוציטים T ציטוטוקסיים מסוג CD8 (+). J Exp Med 2000;191:541–50.
32 Hung K, Hayashi R, Lafond-Walker A, et al. התפקיד המרכזי של תאי CD4 (+) T בתגובה החיסונית האנטי-גידולית. J Exp Med 1998;188:2357–68.
33 Simon SCS, Hu X, Panten J, et al. הצטברות אאוזינופילים מנבאת תגובה לטיפול במלנומה עם מעכבי נקודת ביקורת חיסונית. Oncoimmunology 2020;9:1727116.
34 Mackensen A, Meidenbauer N, Vogl S, et al. מחקר שלב I של טיפול מאמץ בתאי T באמצעות תאי CD8+ ספציפיים לאנטיגן לטיפול בחולים עם מלנומה גרורתית. J Clin Oncol 2006;24:5060–9.
35 Jacquelot N, Seillet C, Wang M, et al. חסימה של המולקולה המעכבת השיתוף PD-1 משחררת חסינות אנטי-גידולית תלוית ILC2- במלנומה. Nat Immunol 2021;22:851–64.
36 Blomberg OS, Spagnuolo L, Garner H, et al. תאי IL-5-מייצרים cd4+ t ואאוזינופילים משתפים פעולה כדי לשפר את התגובה לחסימת מחסום חיסונית בסרטן השד. תא סרטן 2023;41:106–23.
37 Thorsson V, Gibbs DL, Brown SD, et al. הנוף החיסוני של הסרטן. חסינות 2018;48:812–30.
38 Newman AM, Steen CB, Liu CL, et al. קביעת שפע וביטוי של סוג תאים מרקמות בתפזורת עם ציטומטריה דיגיטלית. Nat Biotechnol 2019;37:773–82.
39 Lloyd CM, Snelgrove RJ. חסינות סוג 2: הרחבת ההשקפה שלנו. Sci Immunol 2018;3:eaat1604.
40 Oliphant CJ, Hwang YY, Walker JA, et al. דיאלוג בתיווך MHCII בין תאי לימפה מולדים מקבוצה 2 ותאי cd4(+) t מגביר חסינות מסוג 2 ומקדם גירוש הלמינת טפילי. חסינות 2014;41:283–95.
41 Moynihan KD, Opel CF, Szeto GL, et al. מיגור גידולים גדולים מבוססים בעכברים על ידי אימונותרפיה משולבת המערבת תגובות חיסוניות מולדות ומסתגלות. Nat Med 2016;22:1402–10.
42 Kouro T, Takatsu K. IL-5- ודלקת בתיווך אאוזינופיל: מגילוי לטיפול. Int Immunol 2009;21:1303–9.
43 Barthel FP, Johnson KC, Varn FS, et al. מסלולים מולקולריים אורכיים של גליומה מפוזרת במבוגרים. טבע 2019;576:112–20.
44 Alspach E, Lussier DM, Miceli AP, et al. ניאו אנטיגנים של MHC-II מעצבים את חסינות הגידול ואת התגובה לאימונותרפיה. טבע 2019;574:696–701.
45 Laidlaw BJ, Craft JE, Kaech SM. התפקיד הרב-גוני של תאי CD4 (+) T בזיכרון תאי T CD8 (+). Nat Rev Immunol 2016;16:102–11.
46 Arnold IC, Artola-Boran M, Gurtner A, et al. ציר האיתות GM-CSF-IRF5 באאוזינופילים מקדם חסינות נגד גידולים באמצעות הפעלה של תגובות תאי T מסוג 1. J Exp Med 2020;217:e20190706.
47 Bachmann MF, Rohrer UH, Kündig TM, et al. השפעת ארגון האנטיגן על היענות תאי B. מדע 1993;262:1448–51.
48 קישור א', זבל פ', שנצלר י, ואח'. חסינות מולדת מתווכת הובלה זקיקית של אנטיגנים חלבוניים חלקיקים אך לא מסיסים. J Immunol 2012;188:3724–33.
49 Trabanelli S, Chevalier MF, Derré L, et al. התפקיד הפרו-ואנטי-גידולי של ilc2s. Semin Immunol 2019;41:101276.
50 Simon SCS, Utikal J, Umansky V. תפקידים מנוגדים של אאוזינופילים בסרטן. Cancer Immunol Immunother 2019;68:823–33.
51 Lloyd CM, Hessel EM. פונקציות של תאי T באסתמה: יותר מסתם תאי T (H) 2. Nat Rev Immunol 2010;10:838–48.
52 Smith SG, Chen R, Kjarsgaard M, et al. מספר מוגבר של תאי לימפה מולדים מופעלים מקבוצה 2 בדרכי הנשימה של חולים עם אסטמה קשה ואאוזינופיליה מתמשכת בדרכי הנשימה. J Allergy Clin Immunol 2016;137:75–86.
53 Moral JA, Leung J, Rojas LA, et al. Ilc2S מגביר את חסימת PD-1 על ידי הפעלת חסינות סרטנית ספציפית לרקמות. טבע 2020;579:130–5.
54 Huang Z, Wu L, Hou Z, et al. אאוזינופילים וסמנים ביולוגיים של דם היקפי אחרים בדירוג גליומה: מחקר ראשוני. BMC Neurol 2019;19:313.
55 Ostrom QT, Lu D, Lu R, et al. שכיחות של אוטואימוניות ואטופיה במבוגרים בארה"ב עם גליובלסטומה ומנינגיומה. Neuro Oncol 2022;24:1807–9.
56 Tuzlak S, Dejean AS, Iannacone M, et al. מיקום מחדש של קיטוב התא מציטוקינים בודדים למורכבים עוזר. Nat Immunol 2021;22:1210–7.
57 Nishimura T, Iwakabe K, Sekimoto M, et al. תפקיד מובהק של תאי T עוזר מסוג 1 (Th1) ו-Th2 ספציפי לאנטיגן במיגור גידולים in vivo. J Exp Med 1999;190:617–27.
58 Lorvik KB, Hammarström C, Fauskanger M, et al. העברה מאמצת של תאי Th2 ספציפיים לגידול מחסלת גידולים על ידי הפעלת תגובה חיסונית דלקתית במקום. Cancer Res 2016;76:6864–76.
59 Vonderheide RH. נוגדנים אגוניסטים Cd40 באימונותרפיה של סרטן. Annu Rev Med 2020;71:47–58. 60 Ott PA, Hu Z, Keskin DB, et al. חיסון ניאו-אנטיגן אישי אימונוגני לחולי מלנומה. טבע 2017;547:217–21.
