ביטוי גנים הקשורים למערכת החיסון בכליות וטחולים של גוסלינגים הנגועים באסטרו-וירוס נפריטי אווז

איש קשרtina.xiang@wecistanche.comלקבלת מידע נוסף.

מופשטאסטרווירוס נפריטי אווז (GNAstV) בודד לראשונה בשנת 2018, וגרם להפסדים כלכליים גדולים לתעשיית האווזים. עם זאת, מעט ידוע על המארחתגובה חיסוניתלזיהום GNAstV. במחקר זה, ארבעים גוסלינגים בני יומיים חולקו באופן אקראי לשתי קבוצות: זיהום וקבוצות ביקורת שליליות. כל גוסלינג בקבוצת ההדבקה אותגר עם 0.5 מ"ל GNAstV-JSHA תוך שרירית, בעוד שהגוסלינג בקבוצת הביקורת השלילית חוסן באותה כמות של PBS. שינויים היסטופתולוגיים ומיקום הנגיף בטחולוכליהנבדקו, והביטוי של גנים הקשורים למערכת החיסון נקבע על ידי qPCR ב-7 ו-14 ד' לאחר ההדבקה. התוצאות שלנו הראו כי זיהום GNAstV גרם לניוון ונמק של לימפוציטים טחוליים ותאי אפיתל כלייתיים, ותאים אלה היו חיוביים לנגיף. בנוסף, זיהום GNAstV גרם להפעלה של קולטני זיהוי תבניות (RIG-I, MDA-5 ו-TLR3) ומולקולות מתאם מפתח

(MyD88, MAVS ו-IRF7) בטחול ובכליות, והגביר את ביטוי הגנים של אינטרפרון-α בחלבונים הטחול והאנטי-ויראליים (MX1, OASL ו-IFITM3) בטחול ובכליות. יתר על כן, נמצאו רמות ביטוי גבוהות של אינטרלוקין(IL)-1β ו- IL-8 בטחול וב- iNOS בטחול ובכליות. תוצאות אלה הצביעו על כך שזיהום GNAstV הפעיל את התגובה החיסונית המולדת של המארח. יתר על כן, זיהום GNAstV העלה את רמות הביטוי של CD8t, MHCI ו- MHCII, מה שמעיד על כך שהופעלה תגובה חיסונית נרכשת. חוץ מזה, TGF-β התבטא מאוד בטחול ובכליות, מה שעשוי להיות אסטרטגיית התחמקות חיסונית של GNAstV כדי לגרום לזיהום. באופן מעניין, גם רמות IL-1β וגם IL-6 mRNA ירדו בכליה, מה שעשוי לסייע בהפחתת נגעים בכליות. זהו המחקר הראשון שמדווח על שינויים בביטוי גנים הקשורים למערכת החיסון בתגובה לזיהום GNAstV, והתוצאות שלנו מספקות תובנות לגבי פתוגנזה נגיפית.

מילות מפתחאסטרווירוס נפריטי אווז, תגובה חיסונית, טחול, כליה, גוסלינג

לחץ כדי ללמוד יתרונות גזע ציסטנצ'ה ובעל ניסיון בציסטנצ'ה

מבוא

מאז 2017, כמה להקות אווזים חוו התפרצות קשה של שיגדון ברכילות בנות 4 עד 16 יום במזרח סין, מה שהוביל להפסדים כלכליים גדולים בתעשיית האווזים. הגוסלינגים הנגועים הציגו משקל גוף מופחת, וכליות נפוחות וחיוורות, עם יבבות לבנות בשופכנים ונטיית רחם על פני השטח של האיברים הקרביים והחלל המפרקי. בשנת 2018 בודד אסטרו-וירוס אווז חדש מהגוסלינגים הנגועים, וניסויים ברבייה של בעלי חיים הוכיחו כי הוא הגורם הסיבתי העיקרי למחלת שיגדון הגוסלינג. נגיף זה היה נבדל גנטית מהאסטרו-וירוס והאסטרו-וירוס הידועים של מאם. הוא יצר קלייד מובחן בהתאם לרצף חומצות האמינו של חלבון ORF2 באורך מלא (חלבון קפסיד), שהוא האזור המשתנה ביותר בגנום. לפיכך, יש להקדיש תשומת לב רבה יותר לנזק שנגרם על ידי הנגיף לגוסלינגים. במחקר הנוכחי, אסטרווירוס האווז החדש מכונה אסטרווירוס נפריטי אווז (GNAstV).

מכיוון ש-GNAstV הוא נגיף חדש שהתפתח, רוב המחקרים התמקדו בבידוד, ניתוח גנטי והקמת שיטות אבחון (Yuan et al, 2018; Wan et al., 2019; Yin et al., 2020). עם זאת, מעט ידוע על התגובה החיסונית של המארח לזיהום GNAstV. אסטרו-וירוס נפריטי אווז גורם בעיקר נזק לכליות, לכבד ולטחול בגוסלינגים, ועומס נגיפי גבוה יותר זוהה בכליה ובטחול בהשוואה לזה שבאיברים אחרים (Jin et al, 2018; שו ואחרים, 2019). נגעים Splenic ועומס ויראלי גבוה מצביעים על כך שהנגיף עלול לגרום נזק לתגובה החיסונית. מערכת החיסון המולדת ממלאת תפקיד חשוב במהלך הידבקות בנגיף בכך שהיא משמשת כקו ההגנה הראשון מפני פלישה ויראלית (Chow J et al., 2015). קולטני זיהוי תבניות (PRR) מזהים חומצות גרעין נגיפיות ומעוררים תגובה מולדת, כולל ייצור ציטוקינים, כגון I-1β, TNF-x ו-IFN, וחלבונים אנטי-ויראליים כגון OASL, IFITM3 ו-MX1. הקולטן דמוי הממברנה 3(TLR3) והקולטנים דמויי ה-RIG-I הציטוזוליים המכילים בעיקר RIG-1 ו-MDA-5 הם ה-PRR החשובים ביותר שמזהים RNA נגיפי. התגובה החיסונית המולדת גורמת לאיתות לעורר את התגובה החיסונית הנרכשת, השולטת בזיהום הנגיפי בשלב הבא של הזיהום. מערכת החיסון הנרכשת כוללת את תגובת ה-I בתיווך נוגדנים/תאי B ואת התגובה המתווכת בתאים, הדורשות מעורבות של מולקולות מסוג CD3+, CD4+, CD8+, ו-MHC מסוג I ו-II. נכון לעכשיו, המנגנונים שבאמצעותם GNAstV משפיע על התגובה החיסונית המולדת והנרכשת של המארח אינם ברורים. סין היא ביתה של אוכלוסיית האווזים הגבוהה ביותר בעולם; לכן, חקירת התגובה החיסונית של האווז לזיהום GNAstV חשובה להבהרת מנגנון הפתוגניות והחסינות של GNAstVand השולט בהתפשטותו. במחקר זה, גוסלינגים בני יומיים נדבקו ב- GNAstV. לאחר מכן נבדקו השינויים ההיסטופתולוגיים ומיקום הנגיף, כמו גם ביטוי גנים הקשורים למערכת החיסון בטחול ובכליות.

חומרים ושיטות

הצהרת האתיקה

כל הניסויים בבעלי חיים נערכו בהתאם להנחיות לבעלי חיים ניסיוניים של משרד המדע והטכנולוגיה (בייג'ינג, סין) ואושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים של האוניברסיטה החקלאית נאנג'ינג.

נגיף

GNAstV-JSHA לבודד (הצטרפות GenBank לא. MK125058) בודד מגוסלינגים חולים עם שיגדון (מחוז ג'יאנגסו, סין) ונשמר במעבדה שלנו. הטיטר של GAstV-JSHA היה 1 × 104.25 50% מינון זיהום תרבית רקמה (TCID50)/mL כפי שנקבע על ידי טיטרציה על תאי אפיתל הכליה של אווז בהתאם לשיטה של Reed &Muench.

ניסוי בבעלי חיים

דגימות הטחול והכליות נאספו מניסוי הקודם שלנו בבעלי חיים שתואר ב-Xuet'sstudy (Xuet al., 2019). בקצרה, ארבעים גוסלינגים בני יומיים ללא זיהום GNAstV הופרדו באופן אקראי לשתי קבוצות: זיהום וקבוצות ביקורת שליליות. כל גוסלינג בקבוצת ההדבקה אותגר עם 0.5 מ"ל GNAstV-JSHA על ידי חיסון תוך שרירי, בעוד שהגוסלינג בקבוצת הביקורת השלילית חוסן באותה כמות של PBS.

כל הגוסלינגים היו במעקב יומיומי אחר הסימנים הקליניים. ב-7 ד' לאחר ההדבקה (dpi), הומתו 10 גוסלינגים מכל קבוצה, והשינויים הגסים נבדקו, ולאחר מכן נאספו הכליות והטחול. חלק מהבעיות הללו תוקנו בפורמלדהיד של 10% לצורך בדיקה היסטופתולוגית, והשאר אוחסנו בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס לניסויים נוספים. בשעה 14 dpi, הגוסלינגים ששרדו הומתו ורקמות נאספו ואוחסנו כאמור לעיל.

בדיקה היסטופתולוגית

הדגימות הקבועות התייבשו על ידי סדרה של אלכוהולים, הובהרו בקסילן והוטמעו בפרפין. לאחר מכן נפרסו הדגימות באופן סדרתי למקטעים של 4 מיקרומטר והוכתמו בהמטוקסילין ובאוסין בשיטות שגרתיות. חלקים מוכתמים נבדקו במיקרוסקופ אור.

זיהוי מיקום וירוסים על ידי הכלאה באתרה

שיטת ההכלאה באתרה (FISH) בוצעה על פי הוראות ערכת ISH המסחרית (בוסטר, סין), עם כמה שינויים. לפני ביצוע ISH, הרגישות והספציפיות של הדגימה נבדקו והותאמו באמצעות סדרה של טיפולים מקדימים. בקצרה, מקטעי רקמות מפורקים טופלו מראש ב-HCl (0.2 M,15 דקות) וב-Proteinase K (40 מיקרוגרם/מ"ל,20 דקות,37 מעלות צלזיוס). פרוטאז K עוכב על ידי קיבוע ב-4% פרפורמלדהיד במשך 5 דקות. לאחר מכן בוצעו שלבי ההכלאה וההכלאה שלאחר ההכלאה. בדיקות נוספו למאגר ההכלאה בריכוז של 0.5-2 מיקרוגרם/מ"ל; החיץ שהכיל את הגשושיות פורק בטמפרטורה של 98 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות ומיד התקרר על קרח. כ-20 מיקרול' מתערובת ההכלאה הוזרמו למקטעי רקמות, כוסו בכיסויים שטופלו בדתילפירוקרבונט, והודגרו במשך 16 עד 20 שעות בטמפרטורה של 42 מעלות צלזיוס. בדיקות שעברו הכלאה עם RNA נגיפי זוהו על ידי שימוש בנוגדן אנטי-DIG המצומד ל-3,3-N-diaminobenzidine tetrahydrochloride. המגלשות הוכתמו בירוק מתיל ואטמו במסטיק נייטרלי. כדי לשפר את הרגישות, פרוטאינאז K שימש להגברת חדירות הרקמות כדי להקל על כניסתן של בדיקות לרקמות.

ניתוח גנים חיסוניים על ידי PCR כמותי בזמן אמת

סה"כ RNA חולץ באמצעות Trizol (Invitrogen, CA), ותעתיק הפוך של הרנ"א נערך באמצעות ערכת HiScript Q RT SuperMix (Vazyme, סין). תרמוציקלר (AB7300; לייף טכנולוגיות)שימשה ל-PCR כמותי. תוכנת Primer 5.0 שימשה לייעוד הגנים הקשורים למערכת החיסון, כפי שמוצג בטבלה 1. ביטוי חומצה ריבונוקלאית מנורמל על ידי כימות של GAPDH כגן משק בית. רמות תעתיק יחסיות נותחו בשיטה באמצעות 2-AACT

ניתוח סטטיסטיקה

ההבדלים בין קבוצת הביקורת לקבוצת הניסוי נותחו על ידי מבחן t-student. התוצאות מבוטאות כממוצע ± סטיית התקן. P<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistical="" significance="" compared="" with="" the="" control="" group,="" and="">< 0.01="" was="" considered="" to="" indicate="" a="" high="" degree="" of="" significance="" compared="" with="" the="" control="">

תוצאות

שינויים קליניים

לא נצפו מוות או סימנים קליניים ברורים בבקרה הלא-גרעינית. עם זאת, 5 מתוך 20 הגוסלינגים הנגועים מתו במהלך הניסוי, וירידה במשקל הגוף נצפתה בגוסלינגים הנגועים ב-GNAstV. בנתיחה שלאחר המוות, האיברים בקבוצת הביקורת השלילית נראו תקינים, אך נטייתם של אוראטים על פני השטח של האיברים (כבד, לב וכליה), שקי מרה, והחלל המפרקי זוהו בגוסלינגים מתים. יתר על כן, כליות נפוחות וחיוורות עם urate לבן בשופכנים נצפו בכל goslings נגועים. השינויים הפתולוגיים הוצגו במחקר הקודם שלנו (Xu et al.. 2019). תוצאות אלה הצביעו על כך שהקמנו בהצלחה מודל חייתי של זיהום GNAstV בגוסלינגים.

שינויים היסטופתולוגיים בכליה ובטחול

בבדיקה היסטופתולוגית, הכליות והטחולים של גוסלינגי הבקרה השלילית נראו תקינים מבחינה היסטולוגית (איורים 1A ו-1B). עם זאת, ניוון ונמק של תאי אפיתל כלייתיים ודלקתיותחדירת תאים נצפתה בכליות של גוסלינגים נגועים (איור 1C). יתר על כן, נמק של splenicלימפוציטיםוהסתננות לתאים דלקתיים נמצאה גם בטחולים (איור 1D).

מיקום הנגיף בכליה ובטחול

מיקום אסטרו-וירוס נפריטי אווז בכליות ובטחול נבדק באמצעות ISH. כפי שניתן לראות באיור 2, כמה חלקיקים חומים התגלו בציטופלסמה של תאי אפיתל צינוריים כלייתיים, אך לא נצפו חלקיקים חומים בגלומרולי של הכליה. חלקיקים חומים מעטים זוהו בלימפוציטים הטחולניים ובתאי המקרופאגים של הטחול. תוצאות אלה מצביעות על כך ש-GNAstV יכול להדביק תאי אפיתל צינוריים כלייתיים ולימפוציטים ספלניים.

ביטוי של מולקולות PRR ומתאם בטחול ובכליות של גוסלינגים נגועים ב-GNAstV הביטוי של PRR (RIG-1, MDA-5 ו-TLR3) ומולקולות מתאם מפתח (MAVS, MyD88 ו-IRF7)בטחולים ובכליות נקבעו על ידי qPCR כפי שמוצג באיור 3. רמת ה-mRNA של 3 ה-PRR בטחולים עלתה משמעותית בקבוצה הנגועה ב-7 ו-14 dpi בהשוואה לקבוצת הביקורת השלילית (P<0.05). the="" rig-1="" and="" tlr3="" mrna="" levels="" in="" the="" kidneys="" were="" also="" increased="" in="" the="" infected="" group="" at="" 7="" and="" 14="" dpi="" compared="" with="" that="" in="" the="" negative="" control="">< 0.01).="" the="" mda-5="" mrna="" level="" was="" higher="" in="" the="" infected="" group="" at="" 14="" dpi,="" but="" no="" difference="" in="" mda-5="" mrna="" expression="" was="" observed="" between="" the="" infected="" and="" negative="" control="" groups="" at="" 7="" dpi(p="">0.05). בהתאם לכך, הביטוי של מולקולות המתאם בקבוצה הנגועה ב-7 ו-14 dpi היה גבוה משמעותית מזה שבקבוצת הביקורת (P<0.05). these="" results="" indicate="" that="" gnastv="" infection="" activates="" the="" host's="" innate="" immune="">

ביטוי ציטוקינים בטחול ובכליות של גוסלינגים נגועים ב-GNAstV

הביטויים של הציטוקינים, IL-1β, I-6, IL-8, II.-10, TGF-B ו-iNOS נקבעו על ידי qPCR כפי שמוצג באיור 4. בטחול, רמות ה-mRNA של IL-1B ו-TGF-B בקבוצת ההדבקה ב-7 ו-14dpi היו כמובן גבוהים יותר מאלו בקבוצת הביקורת השלילית (P<0.01). furthermore,="" the="" i-8="" and="" inos="" mrna="" levels="" in="" the="" infection="" group="" at="" 14="" dpi="" were="" higher="">< 0.05).="" but="" no="" differences="" in="" the="" levels="" were="" observed="" between="" the="" infection="" and="" negative="" control="" groups="" at="" 7="" dpi(p="">0.05). יתר על כן, לא נצפה הבדל בביטוי I-6 mRNA ב-7 ו-14 dpi בין ההדבקה לקבוצות הביקורת(P> 0.05). בכליות, רמות ה-mRNA של I-1β ב-7 ו-14 dpi ו-I-6 ב-7 dpi היו נמוכות יותר בקבוצת ההדבקה מאשר אלה בקבוצת הביקורת השלילית (P< 0.05),="" whereas="" the="" tgf-b="" and="" inos="" mrna="" levels="" at="" 7="" and="" 14="" dpi="" and="" the="" i-8="" mrna="" level="" at="" 14="" dpi="" were="" higher="" in="" the="" infection="" group="" than="" those="" in="" the="" negative="" control="" group=""><0.05). no="" difference="" in="" i-10="" expression="" was="" detected="" between="" the="" infection="" and="" control="" groups(p="">0.05).

ביטוי של חלבונים אנטי-ויראליים בטחול ובכליות של גוסלינגים נגועים ב-GNAstV

רמת ה-mRNA של IFN-d. בטחול ובביטוי של חלבונים אנטי-ויראליים (OASL, IFITM3.ו-MIX1) בכליה ובטחול נקבעו כפי שמוצג באיור 5. בטחול, רמות ה-mRNA שלIFN-2. OASL, IFITM3 ו-MX1 ב-7 ו-14 dpi היו גבוהים משמעותית בקבוצת הנגועים בהשוואה לאלה בקבוצת הביקורת השלילית(P)< 0.05).="" in="" the="" kidney,="" the="" mrna="" levels="" of="" oasl,="" ifitm3,="" and="" mx1="" at="" 14="" dpi="" were="" obviously="" higher="" in="" the="" infected="" group="" than="" in="" the="" negative="" control="" group=""><0.05); however,="" no="" significant="" differences="" in="" levels="" were="" observed="" between="" the="" infection="" and="" negative="" control="" group="" at="" 7="" dpi(p="">0.05).

ביטוי של מולקולות CD4t, CD8+, ו-MHC Class ו-I בטחול של גוסלינגים נגועים ב-GNAstV

הביטוי של גנים הקשורים להצגת אנטיגנים (מולקולות CD4', CD8', MHC Class I ו-II) בטחול נקבע על ידי qPCR כפי שמוצג באיור 6. רמות הביטוי של MHC I ב-7 וב-14dpi היו גבוהים משמעותית בקבוצת הנגועים מאשר בקבוצת הביקורת השלילית (P< 0.05).="" the="" expression="" levels="" of="" mhc="" ii="" at="" 14="" dpi="" were="" obviously="" higher="" in="" the="" infected="" group="" than="" those="" in="" the="" negative="" control="" group=""><0.05); however,="" no="" difference="" in="" levels="" was="" observed="" between="" the="" 2="" groups="" at="" 7="" dpi(p="">0.05). רמות ה-MRNA של CD8+ ב-7 ו-14 dpi היו גבוהות משמעותית בקבוצת הנגועים מאשר אלה בקבוצת הביקורת השלילית (P)< 0.05).="" but="" no="" changes="" in="" cd4+mrna="" levels="" at="" 7="" and="" 14="" dpi="" were="" found="" between="" the="" 2="" groups="" (p="">0.05).

דיון

אסטרווירוס נפריטי אווז הוא וירוס מבודד חדש שיכול לגרום לשיגדון הקרביים ולמוות של גוסלינגים, מה שמוביל לנזק רב לפוקים של אווזים. נכון להיום, אין חיסונים וסוכנים טיפוליים לטיפול בו. לפיכך, יש צורך לחקור את התגובה החיסונית המארחת לנגיף כדי להבין את הפתוגנזה שלו ולפתח חיסונים וטיפולים. במחקר זה, הקמנו בהצלחה מודל חייתי בגוסלינגים על ידי חיסון תוך שרירי עם GNAst V-JSHA. מיקומו של הנגיף בלימפוציטים ומקרופאגים טחולניים ונמק של לימפוציטים ספלניים מצביעים על כך ש- GNAstV יכול להדביק את הטחול ולגרום נזק למערכת החיסון המארחת. עם זאת, עד כה, לא היו דיווחים על התגובה החיסונית של גוסלינגים נגועים ב- GNAstV. בנוסף, נצפתה תקרה נגיפית גבוהה בתאי האפיתל הכלייתיים. וזה עלול לתרום לפגיעה בכליות ולהפרעת הפרשת חומצת שתן.

מערכת החיסון המולדת היא קו ההגנה הראשון מפני פתוגן פולש. במחקר שלנו, זיהום GNAstV גרם לעלייה ב- TLR3. ביטוי RIG-1, ו-MIDA-5 mRNA בטחול ובכליות, מה שמצביע על כך שמערכת החיסון המולדת הופעלה, מה שעשוי לתרום לעיכוב הפלישה הנגיפית, הוויסות של מולקולות מתאמות מפתח (MyD88 ו-IRF7) אישר עוד יותר את התוצאות הללו. IFN מיוצר לאחר הפעלת PRR, הממלאים תפקיד קריטי בדיכוי הנגיף באמצעות אינדוקציה של מספר גנים מגורה IFN שלמוצריהם יש פעילות אנטי-ויראלית ישירה. במחקר שלנו, הביטוי של IFN-z בטחול וביטוי של חלבונים אנטי-ויראליים (OASL, MX1 ו-IFITM3) בטחול ובכליות הוגברו לאחר זיהום GNAstrV. ייצור מוגבר של חלבונים אנטי-ויראליים עשוי להיות שימושי לעיכוב הפלישה הנגיפית. בהתאם לכך, התוצאות שלנו הראו כי TLR3. RIG-1. MDA-5 ו-IRF7 הופעלו במהלך זיהום GNAstV. מחקר קודם הראה גם כי סוג המערכת מגביל את שכפול האסטרו-וירוס האנושי במבחנה וב-in vivo ומספק הגנה מפני חדירות מחסום המושרה על ידי אסטרו-וירוס (Marvin et al.). 2015). עם זאת, הממצאים עבור TLR3 ו- OASL היו שונים מאלו של חלבוני PRR ואנטי-ויראליים אחרים בטחול, שכן הביטוי הן של TLR3 והן של OASL ירד ב-14 dpi בהשוואה ל-7 dpi. זה עשוי להיות קשור לוויסות משוב שלילי או להפחתת עומס הנגיף. בהתאם לכך, lL-1B ב-14 dpi עשוי להיות תוצאה של מנגנוני ויסות של הגוף נגד עודף ייצור ציטוקינים פרו-דלקתיים. באופן מעניין, רמת ה-mRNA של I-1β בכליה ירדה בקבוצה הנגועה. רמה נמוכה יותר של ציטוקין פרו-אינפלמטורי זה עשויה לסייע בהקלת הפגיעה בכליות. מחקרים קודמים דיווחו כי זיהומים מסוג אסטרו-וירוס אנושי ואסטרו-וירוס הודו מסוג 2 (TASt V-2) לא היו קשורים לדלקת וגרמו לנגעים מעטים בווילי במעיים (Koci et al.). 2003; Sebire et al.2004), המציע כי זה עשוי להיות מאפיין של זיהום אסטרו-וירוס בתאי אפיתל. I-6 הוא גם ציטוקין דלקתי המעורר השפעות אנטי-ויראליות באמצעות תגובה חיסונית יעילה, אך מעורב גם בתהליכים שמובילים לפגיעה בכלי הדם,דלקתשל דופן כלי הדם, ופקקת. במחקר שלנו, לא נמצא שינוי משמעותי ב-IL-6 בטחול לאחר זיהום GNAstV; זה עשוי להיות קשור להבדלים גדולים בין גוסלינגים בודדים. עם זאת, ביטוי I-6 היה מופחת בכליה, בדומה לתצפית עבור -1B; זה עשוי גם לעזור להקל על נזק לכליות. I-8 הוא מתווך האחראי על גיוס נויטרופילים המשתתפים בהסתננות הדלקתית המקומית. במחקר זה, I-8 היה מווסת בטחול ובכליות, וייתכן שהוא תרם לדלקת. IL-10 הוא ציטוקין אנטי דלקתי שיכול לעכב ייצור ציטוקינים פרו-דלקתיים. במחקר זה, GNAstV גרם לירידה ברורה ברמות IL-10 בטחול; זה עשוי להיות אינדיקציה לדלקת קשה בטחול ואחד הגורמים לנזק לטחול. זיהום בזיהומים אחרים של vi-ruses, כגון נגיף דלקת המוח היפנית ונגיף זיקה, הוכח גם כגורם לירידה בביטוי I-10 (Swarup et al.2007; Abreu 2019), אבל המנגנון המדויק העומד בבסיס GNAstr Vinfection זקוק למחקר נוסף. TGF-β הוא ציטוקין מדכא חיסון. לפיכך, העלייה ברמות TGF-B בטחול ובכליות מצביעה על כך שזיהום GNAstV עלול לגרום לדיכוי חיסוני. יתר על כן, דווח כי זיהום T AStV-2 העלה את רמת ה-TGF-β בסרום בתרנגולי הודו (Koci et al.2003). הודגם כי ייצור מוגבר של β TGF מדכא את התגובה החיסונית ומגביר את שכפול הנגיפים (Letterio and Roberts,1998). לפיכך, ייצור מוגבר של TGF-β עשוי לתרום לשכפול GNAstV על ידי עיכוב התגובה החיסונית של המארח.iNOS הוא מרכיב חשוב בתגובה החיסונית המולדת וממלא תפקיד מפתח בשליטה על זיהומים נגיפיים. במחקר שלנו, הממצאים הצביעו על זיהום GNAstV

ללא ספק ביטוי INOS מווסת. ייצור iNOS גבוה עשוי לאפשר לפונדקאי להתנגד לזיהום נגיפי. התוצאות שלנו היו בהתאם לאלה של מחקרים קודמים, שהראו כי זיהום TAStV-2 גורם לייצור iNOS, מה שמגביל את שכפול האסטרו-וירוס (Qureshi et al.,200l; קוצ'י ואח', 2004; מאירהוף ואח', 2012).

מערכת החיסון הנרכשת ממלאת תפקיד מפתח בשליטה על זיהומים נגיפיים. במחקר שלנו, GNAstVinfection העלה את רמת ה-mRNA של MHC Ia, MHC Iix ו-CD8+, וזה מצביע על כך שהופעלו תגובות חיסוניות הומורליות ותאיות. בעבר דווח כי זיהום אסטרו-וירוס אנושי מעורר ייצור נוגדנים, אשר יכול לנטרל את הנגיף (Kurtzand Lee,1978). However.no שינויים משמעותיים נמצאו בביטוי CD4+ mRNA במחקר. בהתחשב בכך שתאי CD4"T חיוניים להבשלת תאי B וספציפיות נוגדנים, ייתכן כי GNAst V לא יכול היה לגרום לתגובה חיסונית הומורלית חזקה. זה עשוי להסביר מדוע לא נצפתה עלייה ברורה ב- MHC II.aexpression ב- 7 dpi. בנוסף, רמות ה-mRNA של CD8 ו-MHCIa ב-14 dpi ירדו בהשוואה ל-7 dpi. זה עשוי להיות קשור להפחתת עומס הנגיף, כאמור לעיל. במחקר זה, הנוגדן GNAst V לא זוהה מכיוון שאין ערכה מסחרית זמינה. לפיכך, יש לחקור עוד יותר את תפקידם של אנטי-גופים ב-GNAstVinfection.

לסיכום, הנתונים שלנו חשפו את דפוסי התגובה החיסונית בטחול ובכליות של גוסלינגים נגועים ב-GNAst V. בזיהום GNAst V הופעלו גנים הקשורים לחסינות מולדת ומסתגלת. עם זאת, ייצור ציטוקינים וחלבונים אנטי-ויראליים לא הגן על הגוסלינגים מפני המחלה. זהו המחקר הראשון שמדווח על השינויים בביטויי גנים הקשורים למערכת החיסון בתגובה ל-GNAst Vinfection, שעשויים לסייע עוד יותר בהבהרת המנגנונים המולקולריים של אינטראקציות GNAstV של המארח.