זיהוי של שבעה עשר רכיבים בציסטאנצ'ים הרבה המתורבת במדבר טארים על ידי HPLC-MS

NAN Ze-dong1 ,ＲEN Hua-zhong1 ,ZHAO Ming-bo2 ,JIANG Yong2 ,TU Peng-fei2*

( 1. המכללה המקצועית והטכנית של לשן, לשאן 614000, סין; 2. מעבדת המפתח של המדינה לתרופות טבעיות וביומימטיות, בית הספר למדעי התרופות, מרכז מדעי הבריאות של אוניברסיטת פקין, בייג'ינג 100191, סין)

[תַקצִיר]מטרה: לזהות את הרכיבים הכרומטוגרפיים של תמצית מתנול של 60 אחוז בCistanches deserticola Herbaתורבת במדבר טארים על ידי HPLC-MS.שיטה: ניתוח HPLC-MS בוצע על עמודת Agilent ZOＲBAX Eclipse Plus C18 (4. 6 מ"מ × 250 מ"מ, 5 מיקרומטר) . השלב הנייד היה אצטוניטריל-0. תמיסה מימית של חומצה בורית של 1 אחוז על ידי פליטת גרדיאנט בקצב זרימה של 1 מ"ל·דקה - 1, ואורך הגל לזיהוי היה 254 ננומטר. טמפרטורת העמודה נקבעה ל-25 מעלות, ונפח ההזרקה היה 10 μL. תוצאה: שש עשר פסגות כרומטוגרפיות / שבעה עשר רכיבים זוהו במדויק על ידי השוואת זמן ההחזקה, המשקלים המולקולריים ויונים המקטעים של התרכובות שבידדנו וזיהינו. רכיבים כרומטוגרפיים אלו נקבעו כקוניפרין, דמתיל סרינגין, סרינגין, אכינאקוסיד, ציסטנוסיד A, ורבאסקוסיד (טובולוסיד A), ציסטנוסיד B, איזוברבסקוסיד, 2'-אצטילציסטנוזיד A, ציסטנוסיד C, איזוציסטנוסיד C,2'-אצטילוורבסידינו, B, A,Cistanoside K ו-Cistanoside J.

סיכום: שיטת HPLC-MS מתאימה לזיהוי הרכיבים הכרומטוגרפיים של תמצית מתנול של 60 אחוז ב- Cistanches Herba. מחקר זה יספק את הראיות המדעיות לניתוח מקיף של המרכיבים הכימיים של עשב מרפא זה.

［מילות מפתח］ Cistanches deserticolaהרבה; Cistanche; HPLC-MS; תמצית מתנול

Cistanche deserticola YCMa

Cistanche deserticola, הידוע גם בשם "ג'ינסנג מדברי",היא תרופה סינית טוניק מפורסמת, המופץ במונגוליה הפנימית, Ningxia, Gansu ו-Xinjiang של סין [1].יש לו השפעה של חיטוב כליות-יאנג, מועיל לתמצית הדם, הלחמת מעיים ועשיית צרכים. הוא משמש בדרך כלל במרפאות לטיפול באימפוטנציה גברית, אי פוריות נשית, כאבי קור במותניים ובברך, עצירות בדם.וכו' [2-3].Cistanche deserticola maכלול בחלק הראשון של הפרמקופאה הסינית (מהדורת 2015) הוא הגבעול הבשרני המיובש של Cistanche deserticola ו-Cistanche tubulosa (4). צוות המחקר שלנו ביצע מחקר שיטתי ומעמיק על צמחי Cistanche במשך שנים רבות.המרכיבים הכימיים של צמחי ה-Cistanche הם בעיקר גליקוזידים פנילתנואידים, בנוסף לאירידואידים והגליקוזידים שלהם, ליגננים וגליקוזידים שלהם, גליקוזידים בנזיל אלכוהול וכו'.[5]. מחקרים פרמקולוגיים מודרניים מראים שלגליקוזידים של פניל ​​אתנול, המרכיבים העיקריים של הסוג, יש השפעות נוירו-פרוקטטיביות, נוגדות חמצון, הגנה על הכבד, אנטיבקטריאליות, אנטי-ויראליות, אנטי-גידוליות, אנטי-דלקתיות ועוד [6-11].

ג'ינסנג מדברי

בסין,Cistanche deserticolaמופץ במערב מונגוליה הפנימית, בצפון שינג'יאנג ובאגן קאידם בצ'ינגהאי, אך לא באגן טארים בדרום שינג'יאנג.. בסוף שנות ה-90, כדי להגן על שדה הנפט Tazhong ולשלוט במדבר, מפקדת שדה הנפט הכניסה מספר רב של דנדרוני תחמושת הלוקסילון סביב שדה הנפט Tazhong ומשני צידי הכביש המדברי וחיסנה את דנדרון התחמושת Haloxylon בציסטאנצ'ה, אשר עברה. יותר מ-10 שנים. בשל האקלים החם בדרום שינג'יאנג ותנאי ההשקיה הטובים בטפטוף בבסיס הנפט, התפוקה של cistanche deserticola גבוהה מאוד, והתפוקה של cistanche deserticola טריה ל-mu מגיעה ליותר מ-500 ק"ג [8]. רכיבים כימיים רבים ב- Cistanche deserticola יצרו מספר רב של איזומרים עקב מיקומי חיבור שונים של תחליפים. הדבר מביא לקשיים גדולים בזיהוי השיא הכרומטוגרפי של חומר רפואי זה. קשה לזהות במדויק את מרכיבי השיא הכרומטוגרפי אם רק מסתמכים על LC-MS ללא תרכובות מונומר כשליטה. לכן, יש מעט דיווחים ספרותיים על עבודה זו בשלב מוקדם. המחבר בודד תרכובות מונומר רבות [9-11] מ-Cistanche deserticola שטופחו במדבר Tazhong בשלב מוקדם. באמצעות תרכובות מונומר אלו שהתקבלו בשלב מוקדם, זוהו במדויק הפסגות הכרומטוגרפיות החלקיות של HPLC של תמצית המתנול של 60 אחוזים של Cistanche deserticola. זה לא רק ימנע זיהוי חוזר של כמה תרכובות ידועות במרכיבים הכימיים של Cistanche deserticola, אלא גם יספק התייחסות מסוימת למחקר נוסף על בקרת האיכות של החומר הרפואי. במאמר זה, 17 רכיבים של תמצית מתנול של 60 אחוזים של Cistanche deserticola זוהו על ידי HPLC-MS.

פרוסת Cistanche Deserticola

לחץ כאן לצפייה במוצרי Cistanche

【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

1.חוֹמֶר

Inova-500 מכשיר תהודה מגנטית גרעינית (Varian, ארה"ב); ספקטרומטר מסה 6320IonTrap LC-MS, עמודה EclipseXDB-C18 (4.6 מ"מ × 250 מ"מ, 5 מיקרומטר) (Agilent, ארה"ב); QUINTIX313-1איזה אלקטרונית מסוג CN 1/10000 (Sedaris Division); KQ-500מנקה אולטרסאונד DV (Jiangsu Kunshan Ultrasonic Instrument Co., Ltd.); KMUP - Ⅰ Trace Analytical Ultra Pure Water System ייצור מים (Chengdu Haochun Instrument Equipment Co., Ltd.).

39 חומרי הבקרה ששימשו בניסוי זה בודדו כולם מ-Cistanche deserticola המתורבת במדבר בטאז'ונג על ידי המחבר בשלב מוקדם, והמבנים שלהם נקבעו על ידי NMR וטכניקות ספקטרוסקופיה אחרות. המבנים של 39 דגימות ביקורת זוהו כ-Cistanche deserticoside J, Cistanche deserticoside K, Cistanche deserticoside L, Cistanche deserticoside M, Cistanche deserticoside N, epimeridinosideA, Isocistancheside C, angiocyanin B, Cistanche heterophyllin, Cistanche deserticoside, Cistanche deserticoside, Cistanche deserticoside, Cistanche cymosin, 2 '- אצטיל Cistanche deserticoside A, 2' - אצטיל Cistanche deserticoside A, Cistanche deserticola B, Cistanche deserticola A, Echinoside A, Cistanche deserticola glycoside E, Salidroside, 6 '- אצטיל סלידרו, סירינגין, סירינגין , יוניפרין, (2E, 6E) - 3, 7-dimethyl-8-hydroxyctadien-1-O- - D-glucoside, ( plus ) - syringin, ( plus ) - syringin-4 '- O- - D-glucopyranoside, ( plus ) - isoeucomminA, eucomminA, ( plus ) - רוזין מונומתיל אתר- - D-glucoside, קוטל זחלים-4 ' - O- - D-glucoside, קוטל זחלים-4-O- - D-glucoside- - D glucopyranoside, hesperidin A, אזור בצד A, 6-deoxycatapol. הטוהר של כל חומרי הייחוס לעיל הוא יותר מ-98.0 אחוזים. Acetonitrile הוא טהור מבחינה כרומטוגרפית (DikmaPure, ארה"ב), מים הם מים טהורים במיוחד, וריאגנטים אחרים המשמשים בתהליך הבדיקה הם ריאגנטים טהורים אנליטיים, המיוצרים על ידי המפעל הכימי של בייג'ינג.

החומר הרפואי בו נעשה שימוש בניסוי זה, Cistanche deserticola, נאסף מאזור המדבר של Tazhong, Xinjiang, בנובמבר 2010. הוא זוהה על ידי פרופסור Tu Pengfei מבית הספר לרוקחות של אוניברסיטת פקינג כגבעול הבשרני המיובש של צמח Leobaceae Cistanche deserticola. הדגימה אוחסנה במרכז המחקר המודרני לרפואה סינית מסורתית של אוניברסיטת פקין (מספר דגימה: CD201011).

פרוסת Cistanche Deserticola

2.שיטות ותוצאות

2.1 הכנת פתרון התייחסות

קח כ-1 מ"ג מכל אחת מ-39 דגימות הביקורת שהתקבלו מ-Cistanche deserticola בשלב מוקדם, שקלו אותן במדויק, הכניסו אותן לבקבוק נפח של 5 מ"ל בהתאמה, המיס אותן עם מתנול, ותצרף אותן עד לסולם, ולאחר מכן קבל את הבקרה הבודדת. פִּתָרוֹן.

2.2 הכנת תמיסת בדיקה

בהתייחס לפרמקופיה הסינית, מהדורה 2015, קח בערך 1 גרם מאבקת המוצר (דרך המסננת הרביעית), שקלו אותה במדויק, הכניסו אותה לבקבוק חום של 100 מ"ל, הוסיפו במדויק 50 מ"ל של 60 אחוז מתנול, טמפ' זה, לנער אותו היטב, לשקול את המסה, להשרות אותה למשך 30 דקות, טיפול אולטראסוני למשך 40 דקות, לקרר אותו, לשקול שוב את המסה, להוסיף 50 אחוז מתנול כדי להרכיב את המסה המופחתת, לנער אותה היטב, לעמוד על זה, לקחת את הסופרנטנט, והשתמש בסינון ממברנה מיקרו-פורוסית של 0.45 מיקרומטר, קח את התסנין הרציף כדי לקבל את תמיסת הבדיקה.

2.3 תנאים כרומטוגרפיים

עמודה כרומטוגרפית AgilentEclipse XDB-C18 (4.6 מ"מ × 250 מ"מ, 5 מיקרומטר), אורך גל זיהוי 254 ננומטר, טמפרטורת עמודה 25 מעלות; שימוש באצטוניטריל (A) - 0.1 אחוז תמיסה מימית חומצה בורית (B) כשלב הנייד, פליטת שיפוע (0 - 20דקה, 5 אחוז - 15 אחוז A; 20 - 50 דקה, 15 אחוז - 30 אחוז A; 50 - 60דקה, 30 אחוז - 50 אחוז A; 60 - 70דקה, 50 אחוז - 95 אחוז A); קצב זרימה: 1.0 מ"ל · דקות-1, נפח הזרקה: 10 מיקרומטר.

2.4 תנאי ספקטרום מסה

טמפרטורה נימית 350 מעלות; מתח נימי 3500V; קצב זרימת הגז (חנקן) 12.0L · דקות-1; לחץ גז עזר (חנקן) 206.8kPa; טווח הסריקה המלא של ספקטרומטריית מסה הוא m/z 50~1000; גז התנגשות הליום, אנרגיית התנגשות נבחרה אוטומטית במהלך הבדיקה; אסוף מחט אחת עבור כל מצב יון חיובי ושלילי.

2.5 בדיקה של חומר ייחוס

39 תמיסות ההתייחסות שהוכנו לפי 2.1 נבדקו ב-2.3 תנאים כרומטוגרפיים ו-2.4 תנאים ספקטרומטריים מסה, וזמן השמירה והמשקל המולקולרי היחסי שלהם נרשמו (טבלה 1).

2.6 קביעת תמיסת הבדיקה

קח את החומר הרפואי Cistanche deserticola שנאסף מאזור המדבר של Tazhong, Xinjiang, והכין את תמיסת הבדיקה לפי השיטה המתוארת ב-2.2. לאחר מכן, בצע את הקביעה על פי התנאים הכרומטוגרפיים המתוארים ב-2.3 ותנאי ספקטרומטריית המסה המתוארים ב-2.4, וקבע את כרומטוגרמת HPLC וספקטרומטריית המסה שלו במצב יון חיובי ושלילי (איורים 1-3).

תאנה. כרומטוגרמה HPLC אחת של תמצית מתנול של 60 אחוז של Cistanches Herba

תאנה. 2 כרומטוגרמת TIC MS חיובית של תמצית מתנול של 60 אחוז של Cistanches Herba

תאנה. 3 כרומטוגרמת TIC MS שלילית של תמצית מתנול של 60 אחוז של Cistanches Herba

2.7 זיהוי כרומטוגרמת HPLC של חומרים רפואיים

באותם תנאים (2.3 תנאים כרומטוגרפיים ו-2.4 תנאי ספקטרומטריית מסה), הרכיבים זוהו על ידי השוואת זמן השמירה והמשקל המולקולרי היחסי של דגימת הבדיקה ודגימת הביקורת. תהליך הזיהוי הספציפי של שיא הכרומטוגרמה של דגימת הבדיקה (איור 1) הוא כדלקמן.

2.7.1 זיהוי שיא כרומטוגרפי 1

זמן השמירה של שיא כרומטוגרפי 1 הוא 16.67 דקות. במצב יון חיובי, שיא יוני האקסימר m/z365 ניתן כ-[M ועוד Na] פלוס , בעוד שבמצב יון שלילי, שיא יוני האקסימר m/z387 [M ועוד COOH] - ניתן. המשקל המולקולרי היחסי של שיא 1 נקבע כ-342. ניתן גם יון המקטע m/z179, שמקורו באיבוד של מולקולה 1 של גלוקוז 163 Da עקב ביקוע הקשר הגליקוזיד. על פי זמן השמירה והמשקל המולקולרי היחסי של חומר הייחוס, שיא כרומטוגרפי 1 זוהה כחוניפרין.

2.7.2 זיהוי שיא כרומטוגרפי 2

זמן השמירה של שיא כרומטוגרפי 2 הוא 17.36 דקות. במצב יון שלילי, ניתנות פסגות יוני האקסימר m/z357 [M – H] -, 393 [M ועוד Cl], והמשקל המולקולרי היחסי של שיא 2 נקבע כ-358. במקביל, מקטע יון m/z195 נגזר מאובדן של מולקולה אחת של גלוקוז 163 Da עקב שבירת הקשר הגליקוזיד. השיא הכרומטוגרפי 2 זוהה כ-demethylsyringin בהתאם לזמן השמירה והמשקל המולקולרי היחסי של חומר הייחוס.

2.7.3 זיהוי שיא כרומטוגרפי 3

זמן השמירה של שיא כרומטוגרפי 3 הוא 19.04 דקות, שיא יוני האקסימר m/z395 [M ועוד Na] פלוס ניתן במצב יון חיובי, ושיא יוני האקסימר m/z417 [M ועוד HCOO] - ניתן ב- מצב יון שלילי, והמשקל המולקולרי היחסי של שיא 3 נקבע להיות 372. במקביל, יון המקטע m/z209 נגזר מאובדן של מולקולה אחת של גלוקוז 163 Da עקב שבירת הקשר הגליקוזיד. השיא הכרומטוגרפי 3 זוהה כסירינגין בהתאם לזמן השמירה והמשקל המולקולרי היחסי של חומר הייחוס.

2.7.4 זיהוי שיא כרומטוגרפי 4

זמן השמירה של שיא כרומטוגרפי 4 הוא 27.66 דקות. שיא יוני האקסימר m/z804 [M ועוד NH4] פלוס ניתן במצב יון חיובי, ושיא יון האקסימר m/z785 [M – H] - ניתן במצב יון שלילי. המשקל המולקולרי היחסי של שיא 4 נקבע ל-786. במקביל, יון המקטע m/z623 נגזר מאובדן שבירת קשרי אסטר של מולקולה אחת של קפאין 163 Da. בשילוב עם זמן השמירה והמשקל המולקולרי היחסי של חומר הייחוס, שיא כרומטוגרפי 4 זוהה כאכינצאה.

2.7.5 זיהוי שיא כרומטוגרפי 5

זמן ההחזקה של שיא כרומטוגרפי 5 הוא 31.48 דקות, שיא יוני האקסימר m/z818 [M פלוס NH4] פלוס ניתן במצב יון חיובי, ושיא יוני האקסימר m/z799 [M – H] - ניתן ב- מצב יון שלילי, והמשקל המולקולרי היחסי של שיא 5 נקבע כ-800. במקביל, יון המקטע m/z637 נגזר מאובדן שבירת קשרי אסטר של מולקולה אחת של קפאין 163Da. בשילוב זמן השמירה והמשקל המולקולרי היחסי של חומר הייחוס, אושר כי שיא כרומטוגרפי 5 היה cistanche glycoside A.

טבלה 1 משקל מולקולרי וזמן שמירה( tＲ ) של 39 תרכובות סטנדרטיות

2.7.6 זיהוי שיא כרומטוגרפי 6

זמן השמירה של שיא כרומטוגרפי 6 הוא 34.17 דקות. שני פסגות של יוני אקסימר m/z846642 [M ועוד NH4] פלוס ניתנות במצב יון חיובי, ושתי פסגות של יוני אקסימר m/z827623 [M – H] - ניתנות גם במצב יון שלילי. משערים כי פסגה 6 עשויה להכיל שתי תרכובות עם משקל מולקולרי יחסי של 828624. במקביל, יון המקטע m/z665461 נגזר מאובדן שבירה של קשר אסטר של מולקולה אחת של קפאין 163 Da, ויון המקטע m /z622 נגזר משבירת הקשר האצטיל אסטר. שתי התרכובות הללו בודדו ושולבו עם זמן השמירה והמשקל המולקולרי היחסי של חומר הייחוס, השיא הכרומטוגרפי 6 היה תערובת של Cimicifugarin ואנתוציאנין A.

2.7.7 זיהוי שיא כרומטוגרפי 7

זמן השמירה של שיא כרומטוגרפי 7 הוא 35.34 דקות. שיא יוני האקסימר m/z832 [M ועוד NH4] פלוס , 837 [M פלוס Na] פלוס ניתן במצב יון חיובי, ושיא יוני האקסימר m/z813 [M – H] - ניתן במצב יון שלילי , והמשקל המולקולרי היחסי של שיא 7 הוא 814. במקביל, יון המקטע m/z637 נגזר מאובדן שבירת קשרי אסטר של מולקולה 1 של חומצה ferulic 177Da. בשילוב עם זמן השמירה והמשקל המולקולרי היחסי של חומר הייחוס, שיא כרומטוגרפי 7 זוהה כ-cistanche glycoside B.

2.7.8 זיהוי שיא כרומטוגרפי 8

זמן השמירה של שיא כרומטוגרפי 8 הוא 36.17 דקות, שיא יוני האקסימר m/z647 [M ועוד Na] פלוס ניתן במצב יון חיובי, ושיא יוני האקסימר m/z623 [M – H] - ניתן ב- מצב יון שלילי, והמשקל המולקולרי היחסי של שיא 8 נקבע כ-624. במקביל, ניתן ה-fragment ion m/z461, שמקורו בשבירת קשר האסטר ואיבוד של מולקולה 1 של קבוצת קפאין 163 Da. בשילוב עם זמן השמירה והמשקל המולקולרי היחסי של חומר הייחוס, שיא כרומטוגרפי 8 זוהה כהטרוקואנוזיד.

2.7.9 זיהוי שיא כרומטוגרפי 9

זמן השמירה של שיא כרומטוגרפי 9 הוא 38.20 דקות. פסגות יוני האקסימר m/z860 [M ועוד NH4] פלוס , 865 [M ועוד Na] פלוס ניתנות במצב יון חיובי, ופסגות יוני האקסימר m/z841 [M – H ] -, 877 [M ועוד Cl] - ניתנים במצב יון שלילי. המשקל המולקולרי היחסי של שיא 9 נקבע להיות 842. במקביל, יון המקטע m/z679636 נגזר מאובדן שבירת קשרי אסטר של מולקולה אחת של קפאין 163 Da ומולקולה אחת של אצטיל 43 Da. זמן השמירה והמשקל המולקולרי היחסי של חומר הייחוס עקביים, ושיא הזיהוי 9 הוא 2 '- אצטיל ציסטאנצ'ה גליקוזיד A.

2.7.10 זיהוי כרומהטוגרפיה עמ'eak 10

זמן השמירה של שיא כרומטוגרפי 10 הוא 39.04 דקות. שיא יוני האקסימר m/z656 [M ועוד NH4] פלוס , 661 [M פלוס Na] פלוס ניתן במצב יון חיובי, ושיא יוני האקסימר m/z637 [M – H] -, 673 [M ועוד Cl] - ניתן במצב יון שלילי. המשקל המולקולרי היחסי של שיא 10 נקבע להיות 638. במקביל, יון המקטע m/z475 נגזר מאובדן שבירה של קשר אסטר של מולקולה אחת של קפאין 163 Da. זמן השמירה והמשקל המולקולרי היחסי של חומר הייחוס עקביים, ושיא הזיהוי 10 הוא Cistanche C.

2.7.11 זיהוי שיא כרומטוגרפי 11

זמן השמירה של שיא כרומטוגרפי 11 הוא 40.82 דקות. שיא יוני האקסימר m/z661 [M ועוד Na] פלוס , 677 [M ועוד K] פלוס ניתן במצב יון חיובי, ושיא יוני האקסימר m/z637 [M – H] -, 673 [M ועוד Cl] - ניתן במצב יון שלילי. ניתן לקבוע שהמשקל המולקולרי היחסי של שיא 11 הוא 638. במקביל, יון המקטע m/z475 נגזר מאובדן שבירת קשרי אסטר של מולקולה 1 של קפאין 163 Da. בשילוב זמן ההחזקה והמשקל המולקולרי היחסי של חומר הייחוס, שיא כרומטוגרפי 11 זוהה כ- isosistanche glycoside C.

2.7.12 זיהוי שיא כרומטוגרפי 12

זמן השמירה של שיא כרומטוגרפי 12 הוא 41.48 דקות. שיא יוני האקסימר m/z684 [M ועוד NH4] פלוס , 689 [M ועוד Na] פלוס ניתן במצב יון חיובי, ושיא יון האקסימר m/z665 [M – H] - ניתן במצב יון שלילי . ניתן לקבוע כי המשקל המולקולרי היחסי של שיא 12 הוא 666. יחד עם זאת, הוכח כי יון המקטע m/z503460 מגיע מאובדן שבירה של קשר אסטר של מולקולה אחת של קפאין 163 Da ו-1 מולקולה של אצטיל 43 דה. על פי זמן השמירה והמשקל המולקולרי היחסי של חומר הייחוס, שיא כרומטוגרפי 12 זוהה כ-2'- אצטיל קואליאוזיד.

ניסוי Cistanche deserticola

2.7.13 זיהוי שיא כרומטוגרפי 13

זמן השמירה של שיא כרומטוגרפי 13 הוא 44.29 דקות, שיא יוני האקסימר m/z689 [M ועוד Na] פלוס ניתן במצב יון חיובי, ושיא יוני האקסימר m/z665 [M – H] - ניתן ב- מצב יון שלילי, והמשקל המולקולרי היחסי של שיא 13 הוא 666. יחד עם זאת, הוכח שהיון המקטע m/z503460 מגיע מאובדן שבירה של קשר אסטר של מולקולה אחת של קפאין 163 Da ומולקולה אחת של אצטיל 43 דה. בשילוב עם זמן השמירה והמשקל המולקולרי היחסי של חומר הייחוס, שיא כרומטוגרפי 13 זוהה כאנתוציאנין B.

2.7.14 זיהוי שיא כרומטוגרפי 14

זמן השמירה של שיא כרומטוגרפי 14 הוא 46.67 דקות. שיא יון האקסימר m/z675 [M ועוד Na] פלוס ניתן במצב יון חיובי, ושיא יון האקסימר m/z651 [M – H] - ניתן במצב יון שלילי. המשקל המולקולרי היחסי של שיא 14 הוא 652. במקביל, יון המקטע m/z475 נגזר מאובדן שבירת קשרי אסטר של מולקולה 1 של קבוצת חומצה פרולית 177Da. בשילוב עם זמן השמירה והמשקל המולקולרי היחסי של חומר הייחוס, שיא כרומטוגרפי 14 זוהה כ- epimeridinosideA.

2.7.15 זיהוי שיא כרומטוגרפי 15

זמן השמירה של שיא כרומטוגרפי 15 הוא 49.90 דקות. שיא יוני האקסימר m/z698 [M ועוד NH4] פלוס , 703 [M ועוד Na] פלוס ניתן במצב יונים חיוביים, ושיא יוני האקסימר m/z679 [M – H] -, 715 [M ועוד Cl] - ניתן במצב יון שלילי. המשקל המולקולרי היחסי של שיא 15 הוא 680. במקביל, יון המקטע m/z517474 נגזר מאובדן שבירת קשרי אסטר של מולקולה אחת של קפאין 163 Da ומולקולה אחת של אצטיל 43 Da. השיא הכרומטוגרפי 15 זוהה כ-cistanche glycoside K בהתבסס על זמן השמירה והמשקל המולקולרי היחסי של חומר הייחוס.

2.7.16 זיהוי שיא כרומטוגרפי 16

זמן השמירה של שיא כרומטוגרפי 16 הוא 55.36 דקות. במצב יון חיובי, ניתנת שיא יוני האקסימר m/z717 [M פלוס Na] פלוס, בעוד שבמצב יון שלילי, יון האקצימר מגיע ל-m/z693 [M – H] -, 729 [M ועוד Cl] - ניתנים, וכתוצאה מכך משקל מולקולרי יחסי של 694 עבור שיא 16. יחד עם זאת, הוכח שהיון המקטע m/z517474 מגיע מאובדן שבירה של קשר אסטר של מולקולה 1 של קבוצת חומצה פרולית 177 Da ו-1 מולקולה של קבוצת אצטיל 43 דא. בשילוב עם זמן השמירה והמשקל המולקולרי היחסי של חומר הייחוס, שיא כרומטוגרפי 16 זוהה כ-cistanche glycoside J. הפסגות הכרומטוגרפיות של תמצית 60 אחוז המתנול של Cistanche deserticola זוהו על ידי HPLC-MS בשילוב עם המשקל המולקולרי היחסי, שמירה זמן, ויון שבר של חומר הייחוס המופרד. התוצאות הראו כי 17 מרכיבים של 16 הפסגות הכרומטוגרפיות זוהו במדויק (טבלה 2).

טבלה 2 זוהו שיאים כרומטוגרפיים של Cistanches Herba ותרכובות סטנדרטיות התייחסות

3 .דִיוּן

3.1 בחירת שיטת הכנת מאמר לבדיקה

המטרה העיקרית של מחקר זה היא לזהות את פסגות HPLC של Cistanche deserticola. לכן, בחירת ממס המיצוי ושיטת המיצוי מבוססת על היכולת להשיג יותר שיאי HPLC. צוות המחקר ביצע מחקר ארוך טווח על Cistanche deserticola ועשה עבודה רבה בניתוח איכות. במאמר זה, ממס המיצוי ושיטת המיצוי של Cistanche deserticola נבחרו גם על סמך עבודת הניתוח הקודמת של קבוצת המחקר והפרמקופיה הסינית (מהדורת 2015). לבסוף, 60 אחוז ממס מתנול מיצוי קולי עבור 40 דקות נבחרה כשיטת המיצוי.

3.2 בחירת מצב HPLC-MS

בחירת העמודה הכרומטוגרפית במאמר זה מבוססת על ניתוח האיכות של Cistanche deserticola בשלב המוקדם של קבוצת המחקר, והחקירה של AgilentZORBAXEclipsePlusC18 (4.6 מ"מ × 250 מ"מ, 5 מיקרומטר), DionexC18 (4.6 מ"מ × 250 מ"מ,5 מיקרומטר), ThermoC18(4.6 מ"מ × 250 מ"מ, 5 מיקרומטר) עמודה כרומטוגרפית, בחר לבסוף עמודה כרומטוגרפית AgilentZORBAXEclipsePlusC18 (4.6 מ"מ × 250 מ"מ, 5 מיקרומטר) יש לה אפקט הפרדה טוב על Cistanche deserticola; 39 חומרי הייחוס כוללים phenylethanoid, lignans ו- phenylpropanoid, כך שאורך הגל לזיהוי הוא 254nm; במקביל, ההשפעות של פאזה ניידת כגון מים-מתנול, מים-אצטוניטריל, מתנול-0.1 אחוז מים חומצה זרחתית, אצטוניטריל-0.1 אחוז מים חומצת פורמית על הפרדה כרומטוגרפית ומסה גילוי ספקטרומטריה נחקר, ואצטוניטריל-0.1 אחוז מי חומצה פורמית נבחר לבסוף כשלב הנייד.

3.3 סיכום

השיטה שהוקמה במחקר זה זיהתה במדויק 17 רכיבים מ-16 פסגות כרומטוגרפיות של 60 אחוז מתנוללחלץשֶׁלCistanche deserticola. 

אבקת תמצית Cistanche

לתוצאות המחקר יש לא רק ערך התייחסות מסוים להמשך ניתוח האיכות של החומר הרפואי, אלא גם יכולות להימנע מעבודה חוזרת על זיהוי המבנה של התרכובות הידועות של החומר הרפואי. עם זאת, באופן כללי, יש מעט יחסית שיאים כרומטוגרפיים מזוהים, ופסגות כרומטוגרפיות רבות לא זוהו מכיוון שלא הוקצו לחומר הייחוס. הרכיבים המזוהים ביותר הם גליקוזידים פנילתנואידים, בעוד שליגננים הם נדירים. יתכן שהסיבה לכך היא ששיטת המיצוי המכונה במהדורת 2015 של הפרמקופאה הסינית מכוונת בעיקר לגליקוזידים פנילתנואידים, או משום שתכולת האכינאקוסיד ותרכובות דמויות קוליפורמיות בתמצית של חומר רפואי זה גבוהה מדי, מה שמקשה על כך. כדי לזהות תרכובות אחרות עם תוכן קטן. יש להבהיר יותר את הסיבות הספציפיות.

[הפניות]

[1] ועדת העורכים של פלורה של סין. צמחיית סין [M]. Beijing:Science Press, 1990: 86

[2] יאנג ג'ונשאן. ג'ינסנג מדברי -- Cistanche deserticola [J]. כתב העת הסיני לרוקחות, 2011,46(12): 881．

[3] Tu Pengfei, Jiang Yong, Guo Yuhai, et al. מחקר על Cistanche deserticola והפיתוח התעשייתי שלה[J]. Chinese Journal of Pharmacy, 2011, 46 (12): 882-887

[4]הוועדה הלאומית לפרמקופיה. פרמקופיה של הרפובליקה העממית של סין. חלק I [M]Beijing: China Pharmaceutical Science and Technology Press, 2015: 135

[5] JIANG Y,TU PF. ניתוח של מרכיבים כימיים במינים של Cistanche ［J］． J Chromatogr A,2009,1216 (11): 1970-1979．

[6] PAN J,YUAN CS,LIN CJ, et al. פעילויות פרמקולוגיות ומנגנונים של גליקוזידים טבעיים של פניל ​​פרופנואידים (J.). Pharmazie,2003,58(11): 767-775．

[7] FU GM, PANG HH, Wong Y. גליקוזידים פנילתנואידים המופיעים באופן טבעי: מובילים פוטנציאליים לטיפולים חדשים. J］. Curr Med Chem,2008,15 (25): 2592-2613．

[8] Rhode Mei, Long Mei, Du Wenjing, et al. מנגנון ההשפעה האנטי-אוסטיאופורוזיס של תמצית Cistanche deserticola על עכברי M KOOPG ［ J ］. ניסוי סיני Journal of Prescriptions, 2016, 22 (10): 138-142

[9] Ma Hui, Yin Ruoxi, Guo Min, et al. ההשפעה של פוליסכריד Cistanche deserticola על ההזדקנות המושרה על ידי D-גלקטוז השפעת ביטוי CREB בעכברים ותיקים ［ J ］. Chinese Experimental Prescriptions Journal, 2014, 20 (20): 137-141

[10] Tao Yicun, Li Jianying, Xu Yonghua, et al. השפעות של phenylethanoside של Cistanche deserticola על חולדות מניעה וטיפול בבצקת ריאות בגובה רב ［ J ］. Journal Chinese Journal of Experimental Prescriptions,2014,20(15): 134-138．

[11] Zhou Haitao, Cao Jianmin, Lin Qiang. Cistanche deserticola על יכולת השחייה המותשת של חולדות ויכולת נוגדת חמצון המיטוכונדריאלית של שריר הלב ［ J ］. נוסחת ניסוי סינית Journal of Science, 2012, 18 (6): 229-233

[12] NAN ZD,ZHAO MB,ZENG KW, et al. אירידואידים אנטי דלקתיים מגבעולים של Cistanche deserticola מתורבתים במדבר טארים ［J］． Chin J Nat Med,2016,14(1) : 61-65．

[13] NAN ZD,ZENG KW,SHI SP, et al. פנילתנואידים גליקוזידים בעלי פעילות אנטי דלקתית מגבעולים של Cistanche deserticola מתורבתים במדבר טארים ［J］． Fitoterapia,2013,89: 167-174．

[14] Nan Zedong, Zhao Mingbo, Jiang Yong, et al. כימיה של cistanche המדבר שטופחה במחקר הרכב Tazhong ［ J ］. כתב העת הסיני לרפואה סינית מסורתית, 2013, 38 (16):2665-2670．

[15] Nan Zedong, Zhao Mingbo, Jiang Yong, et alLignans [J]. כתב העת הסיני לרפואה סינית מסורתית, 2015, 40 (3):463-468．