קביעת HPLC של אכינאקוסיד בציסטאנש ציסטנצ'ה ציסטנצ'ה

קביעת HPLC של אכינאקוסיד בציסטנצ'ה ציסטנצ'ה

לעוד information:ali.ma@wecistanche.com

המטרה:HPLC קבעה את כמותאכינאקוסידבציסטנצ'הקרקע במצב חנקן נוזלי וכן במצב יבש באופן טבעי באוויר, והשוואתה בציסטנצ'ה פראיתוציסטנצ'ה מעובדת באופן מלאכותי.

שיטות:נעשה שימוש במערכת lc-20a HPLC (שימאדזו, יפן). העמוד היה YMC inertsil ods-sp (4.6 מ"מ × 150 מ"מ,5μm;YMC Co Ltd, יפן); שלב נייד: אצטוניטריל-מתנול-1% חומצה פורמית (10:15:75); אורך גל גילוי 334 ננומטר; קצב זרימה 0.7 מ"ג · ml-1. טמפרטורת עמודה 30 מעלות צלזיוס.

תוצאות:למצבי טיפול שונים הייתה השפעה ברורה מאוד על תכולת האכינאקוסיד, כאשר בדרך כלל רמות גבוהות יותר של אכינאקוסיד בקרקע ציסטנצ'ה תחת חנקן נוזלי מאשר בקרקע בתנאים טבעיים של ייבוש אוויר; תכולת המרכיב הפעיל של הברציסטנצ'ההיה גבוה בהרבה מזה של התרבות המלאכותית.

לחץ למוצרי אבקת תמצית ציסטנצ'ה

ציסטנצ'ה הוא מין בסכנת הכחדה, צמח טפילי המאכלס את שורשי קלוסטרידיום, סליקס רוברום. בסין, צ'יסטנצ'ה מופץ בעיקר במונגוליה הפנימית, נינגשיה, גאנסו ושינג'יאנג, עם מוניטין מצוין של " ג'ינסנג מדברי ", שהוא בעל ערך רפואי רב. המרכיבים הרפואיים העיקריים שלה הם גליקוזידים פנילאתנוליים, אשר ניתן לחלק לאכינאקוסיד, קוהוזיד עלה, ציסטנצ'ה ואחרים בהתאם למחליפיהם. ביניהם, אכינאקוסיד יש שיפור בתפקוד המיני, נוגד חמצון, והשפעות נבלות רדיקלים חופשיים, אבל יש גם כמה השפעות אנטי אפופטוטיות. מאז שנות ה-80 של המאה ה-20, טכנולוגיית HPLC, המספקת שיטה פשוטה ומהירה להפרדת גליקוזידים פנילאתנוליים, נמצאת בשימוש נרחב בהפרדה בין מוצרים טבעיים. שיטת HPLC נבחרה כדי לנתח את התוכן של Cistanche, המרכיב הפעיל העיקרי של Cistanche פראי ומעובד באופן מלאכותי, בתקופות צמיחה שונות, מתן בסיס מדעי לפיתוח רציונלי וניצול של Cistanche ולהערכה יעילה של איכותו.

מכשירים וריאגנטים

שימאדזו, יפן lc-20a מכשיר HPLC, משאבת בוכנה כפולה lc-20at טנדם, תנור עמודים cto-20a, spda-20a UV Vis גל גל כפול גל; Kunshan kq-100 מנקה קולי; אצטוניטריל (טהור כרומטוגרפית, מכון המחקר הכימי טיאנג'ין גואנגפו); מתנול (טהור כרומטוגרפית, מכון המחקר הכימי טיאנג'ין גואנגפו); חומצה פורמית (טהורה כרומטוגרפית, מכון המחקר הכימי טיאנג'ין גואנגפו); מים מזוקקים

שליטה: echineoside, תוכן ≥ 98.43% (שנגחאי Yuanye ביו טכנולוגיה ושות', בע"מ).

חמש דגימות של ציסטנצ'ה: נשתלו באופן מלאכותי במשך שנה אחת עם הציטאנצ'ה הבאה, נשתלו באופן מלאכותי עבור ציסטנצ'ה, יובשו באופן מלאכותי ציסטנצ'ה, ציסטאנש בר, ונשתלו באופן מלאכותי במשך יותר משלוש שנים עם ציסטנצ'ה.

2 שיטות ותוצאות

2.1 קביעת תנאים כרומטוגרפיים

על מנת להפריד את שיא האכינאוסיד הנמדד בכרומטוגרמה LC מחומרים אחרים, כמו גם לשלוט בלחץ המשאבה ובלוח הזמנים להיות בטווח מתאים, בוצע השינוי הניסויי של התנאים הכרומטוגרפיים, ולאחר ניסויי אופטימיזציה עם פאזה ניידת, הוסק כי ככל שהטמפרטורה גבוהה יותר, ככל שזמן השמירה קצר יותר וככל שהריכוז נמוך יותר, כך לחץ המשאבה קצר יותר וזמן השמירה נמוך יותר, אך גובה השיא נעשה נמוך יותר, מה שלא היה טוב למדידה. השלב הנייד נקבע לבסוף כאצטוניטריל-מתנול-1% חומצה פורמית (10:15:75), אורך הגל של הגילוי 334 ננומטר, קצב הזרימה 0.7 מ"ל לדקה, וטמפרטורת העמודה 30 מעלות צלזיוס, על פי התנאים האובייקטיביים של טמפרטורת החדר ולחץ הנשיאה המרבי של המשאבה, שהביאו למידע רב עם צורות שיא חדות והפרדה טובה של המרכיבים。

2.2 קביעת עמודות

YMC-Inertsil ODS-SP (4.6 מ"מ × 150 מ"מ,5 μ m;YMC Co Ltd,יפן).

2.3 הכנת תמיסות ניסיוניות

2.3.1 הכנת פתרונות סטנדרטיים

כמות מתאימה של תקן אכיניאוזיד נשקלה במדויק והוצבה עם אצטוניטריל-מתנול-1% חומצה פורמית פאזה ניידת (10:15:75) כדי לייצר 0.06 מ"ג · ML - 1, 0.05 מ"ג · ML - 1, 0.04 מ"ג · ML - 1, 0.03 מ"ג · ML - 1, 0.02 מ"ג · ML - 1, 0.01 מ"ג · ML - 1, ו- 0.005 מ"ג · ML - 1 פתרונות של תקן אכינאקוסיד.

2.3.2 הכנת פתרון בדיקה

כמויות מתאימות של ציסטנצ'ה טרייה שנשתלה באופן מלאכותי (פחות משנה אחת), ציסטנצ'ה טרייה באופן מלאכותי וציטאנצ'ה טרייה פראית נטחנו לאבקה באמצעות טיט תחת חנקן נוזלי; כמו כן, כמות מתאימה של 3 Cistanche לעיל נחתכה לבלוקים, האוויר התייבש באופן טבעי באוורור צל, ולאחר הייבוש, הוא היה מפולפל ונטחן לאבקה. ציסטנצ'ה יבשה מלאכותית ופראית במשך שלוש שנים יבשה ציסטנצ'ה נטחנו ישירות לתוך האבקה. 0.5 גרם של אבקת ציסטנצ'ה שהוכנה לעיל נלקחה והוכנסה לתוך צינור צנטריפוגה, 25 מ"ל של פאזה ניידת נוספה, נשקלה והושרה במשך 30 דקות, הוטבעה והוטבעה במשך 40 דקות, מקוררה ולאחר מכן נשקלה שוב כדי להרכיב את המשקל החסר עם פאזה ניידת, טלטלה וצנטריפוגה, והסופרנאטנט נלקח לסינון קרום מסנן מיקרו-נקבובי של 0.45 μ M.

2.4 חלקות של עקומות רגרסיה עבור המדגם הסטנדרטי של אכינאקוסיד

הדגימות הסטנדרטיות המוכנות של אכיניאוזיד הוזרקו למנגנון LC בנפרד, וריכוז הבקרה (mg · L-1) שימש כ-abscissa, ואזורי השיא המתאימים הוסמכו להתוות את העקומה הסטנדרטית, וכתוצאה מכך נוצרה משוואת הרגרסיה: y = 66 867 100x-46 360.83, R2 = 0.98637, שהראתה את האכינאוסיד ב-0.1 ~ 1.2 מיקרוגרם בתוך קשר ליניארי טוב.

3 דיונים

Echinacoside הוא אחד המרכיבים הפעילים העיקריים של Cistanche, אשר יכול לייצג היטב את הבסיס הכימי של ההשפעה הפרמקולוגית של Cistanche, מה שהופך את הערכת האיכות של החומר הרפואי ואת ההשפעה הפרמקולוגית שלה להתאים, ולשפר את הרלוונטיות של הערכת איכות Cistanche.

למצבי הטיפול השונים הייתה השפעה ברורה על תכולת האכינאקוסידים, כאשר בדרך כלל רמות גבוהות יותר של אכינאקוסיד בקרקע ציסטנצ'ה תחת חנקן נוזלי מאשר בקרקע בתנאים טבעיים של ייבוש אוויר. ייבוש אוויר נפוץ הפחית את כמות האכינאו-סייד, שייתכן שנצרכה במהלך ייבוש אוויר או המרה. על מנת למנוע את הירידה של תוכן החומר הפעיל ולהבטיח את היעילות של Cistanche, יש לבחור טיפול מתאים.

באופן עקבי, רובם האמינו שסביבת הטיפוח המלאכותית של ציסטנצ'ה, כמו גם הרגלי הצמיחה, אינם ניתנים להבחנה מהטבע ללא הבדל באיכות, נטו לשים דגש רק על יבול, ולא ניתחו את האיכות. המחקר הנוכחי הראה כי כמות האכינאקוסיד של ציסטנצ'ה שטופחה באופן מלאכותי הייתה נמוכה מזו של ציסטנצ'ה אכינאקוסיד פראי. הגבוה ביותר היה 0.3360% של ציסטנצ'ה בר והנמוך ביותר היה 0.007 0% של ציסטנצ'ה המלאכותית. לכן, זה עדיין צריך להיות נחקר בטכנולוגיית טיפוח כדי לשפר את התוכן של חומרים פעילים.

האיכות של Cistanche תלוי בכמות של החומר הפעיל שלה, echinacoside, אשר בתורו יש קשר חזק עם העונה, הזמן, ואת השיטה של הקציר, ולכן קציר של Cistanche צריך לקחת בחשבון את מצב ההצטברות של החומר הפעיל ואת שלב הצמיחה וההתפתחות. שקול גם איכות וגם תשואה.

השיטה המוזכרת במאמר זה היא פשוטה, מדויקת, ניתנת לשחזור ומדויקת לקביעת אכיניאוזיד. שימושי לקביעת ציסטנצ'ה.