מדוע ניתן להשתמש ב-Herba Cistanches לטיפול בתסמונת מחסור בכליות?

פרופיל מטבולי חושף השפעות טיפוליות של Herba Cistanches במודל חיה של 'תסמונת מחסור בכליות' המושרה על ידי הידרוקורטיזון

איש קשר: emily.li@wecistanche.com

Yunping Qiu, Minjun Chen, Mingming Su, Guoxiang Xie, Xin Li, Mingmei Zhou, Aihua Zhao, Jian Jiang & Wei Jia

תַקצִיר

רקע כללי

הרבה ציסטנצ'ס(Roucongrong) יעיל בטיפול ב-Shenxu Zheng ('תסמונת מחסור בכליות'). עם זאת, המנגנונים והתגובות המטבוליות המערכתיות להתערבות הצמחים אינם ברורים.

שיטות

באמצעות פרופיל מטבולי מבוסס GC-MS, חקרנו את התגובות המטבוליותהרבה ציסטנצ'סהתערבות במודל חולדה של הידרוקורטיזון המושרהתסמונת מחסור בכליות'.

תוצאות

הפרופילים המטבוליים של החולדות לאחר הזרקת הידרוקורטיזון חרגו מהמצב המטבולי שלפני המנה בנקודות זמן שונות, החל מיום 1 עד יום 10, בעוד שהפרופילים המטבוליים של החולדות שטופלו הן בהידרוקורטיזון והן בתמצית מים שלהרבה ציסטנצ'סחזר למצב שלפני המנה ביום ה-10.

סיכום

ההתערבות שלהרבה ציסטנצ'סגרם להתאוששות מערכתית מההפרעה המטבולית הנגרמת על ידי הידרוקורטיזון בחולדות. מחקר זה גם מדגים שפרופיל מטבולי שימושי בחקר מנגנונים טיפוליים של תרופות צמחיות.

רקע כללי

באמצעות אפנון של תגובות ביוכימיות, מנגנוני בקרה ופעילויות אנזימים, תרופות או כימיקלים רבים גורמים לתנודות של מטבוליטים הנמצאים בתאים בודדים, ברקמות או בנוזלי גוף [1]. פרופיל מטבולי, כלומר בדיקה של מטבוליטים בעלי משקל מולקולרי נמוך (MW < 1000="" da)="" באמצעות="" מכשיר="" אנליטי="" מתקדם="" יחד="" עם="" סטטיסטיקה="" רב-משתנית,="" יכול="" להראות="" תגובות="" מערכתיות="" של="" מערכות="" חיות="" לקסנוביוטיקה.="" זה="" גם="" אפשרי="" מבחינה="" טכנית="" לקטלג="" את="" כל="" הפרופילים="" המטבוליים="" הרב-פקטוריאליים="" התורשתיים="" והמושפעים="" סביבתית="" של="" אורגניזם,="" כולל="" ההשלכות="" הפיזיופתולוגיות="" של="" רעלנים="" ו/או="" הפרעות="" או="" חוסר="" שיווי="" משקל="" הנגרמות="" על="" ידי="" מחלות="" ברשת="" הרגולטורית="" המטבולית="" ברמה="" מערכתית.="" עד="" כה,="" פרופיל="" מטבולי="" הוקם="" בסריקה,="" אבחון,="" פרוגנוזה="" של="" מחלות="" [2-4],="" והערכת="" בטיחות="" של="" תרופות="" וכימיקלים="" מסוימים="">

תהודה מגנטית גרעינית (NMR) [12] וספקטרומטריית מסה (MS) [13], מיושמות לבד או בשילוב, שימשו בפרופיל ואפיון השלכות מטבוליות של הפרעות הנגרמות על רעלנים ו/או מחלות. NMR, שאינו דורש עיבוד מקדים של דגימות, היא שיטה מהירה ופשוטה להשגת מידע מהותי מדגימות ביולוגיות מורכבות ושלמות. מצד שני, היישום הרחב של טרשת נפוצה עם מקף בפרופיל מטבולי נובע מהרגישות והזמינות הגבוהות שלה [14, 15]. יש לציין כי נעשה שימוש בפרופיל מטבולי מבוסס GC-MS בגילוי מנגנונים של תרופות וקוטלי עשבים in vivo, סמנים ביולוגיים של מחלות [16] והשפעות של שינוי ביטוי גנים על חילוף החומרים, וניטור ביצועים של אורגניזמים ביישומים ביוטכנולוגיים [17-20] .

הרבה ציסטנצ'ס(Roucongrong), עשב סיני נפוץ הגדל במדבר, מפגין פעילויות בולטות לשיפור זיכרון [21] ו/או עוצמה מינית [22], ניקוי רדיקלים חופשיים, אנטי אייג'ינג [23-26] והגנה על עצבים [27] , 28]. במשך מאות שנים,הרבה ציסטנצ'סשימש ביעילות בטיפול ב-Shenxu Zheng ('תסמונת מחסור בכליות') [29]. לאחרונההרבה ציסטנצ'סהוכח שיש לו שיפור בהפרעות הכליות הנגרמות על ידי הידרוקורטיזון [30]; עם זאת, ההשלכות המטבוליות שלו אינן ברורות. המחקר הקודם שלנו [31] מצא שפרופילים מטבוליים של חולדות שנחשפו להידרוקורטיזון במינון גבוה (כלומר מודל של בעלי חיים עבור 'תסמונת מחסור בכליות') [32], הראה דפוס ביוכימי ייחודי של מטבוליטים אנדוגניים בשתן. תוצאות אלו העניקו לנו השראה לחקור את המנגנונים של שינויים ביוכימיים עקביים בעקבות שינוי הידרוקורטיזון, תוך שימוש בפרופיל מטבולי מבוסס GC-MS כדי לחקור האם Herba Cistanches יכול להפוך או לנטרל השפעות מטבוליות חריגות של הידרוקורטיזון.

Cistanche יכול לשפר את תפקוד הכליות

שיטות

חומרים וכלי נגינה

הרבה ציסטנצ'סנרכש מ-Shanghai Leiyunshang Pharmaceutical Co Ltd (סין) וזוהה כ-Cistanche deserticola YC Ma על ידי ד"ר Mengyue Wang (המעבדה לפרמקוגנוסטיקה, בית הספר לרוקחות, אוניברסיטת Shanghai Jiao Tong) לפי פרוטוקול סטנדרטי [33]. תמיסת הידרוקורטיזון להזרקה (0.5 אחוזים) נרכשה מחברת Shanghai Xinyi Pharmaceutical Co (סין). הריאגנטים הנגזרים היו N-methyl-N-trimethylsilyl tri fluoroacetamide (MSTFA) (Sigma-Aldrich Inc, ארה"ב) ו-Trimethyliodosilane (TMSI) (Sigma-Aldrich Inc, ארה"ב) מעורבבים ביחס של 1000:1. כל הריאגנטים ששימשו בניסוי היו בדרגה אנליטית. מים טהורים במיוחד הוכנו עם מערכת טיהור Millipore (18.2 MΩ, ארה"ב). כלובים מטבוליים נרכשו מ-Suzhou Fengshi Laboratory Animal Experiment Co Ltd (סין).

הכנת תמצית Herba Cistanches

חמש מאות גרם של חומר צמחי מפורק גס הוזרמו עם 2 ליטר מים טהורים במיוחד למשך שעתיים. לאחר הסינון, התמצית התאדה לכעשירית מהנפח המקורי במאייד סיבובי בוצ'י ודוללה ל-250 מ"ל בבקבוקון נפח עם מים טהורים במיוחד. הריכוז הסופי של גולמיהרבה ציסטנצ'סהתמצית הייתה 2 גרם/מ"ל.

מינון ודגימה

הטיפול בכל בעלי החיים במחקר זה תאם את ההנחיות הלאומיות ובוצע במרכז לחיות מעבדה, אוניברסיטת שנגחאי לרפואה סינית מסורתית, שנגחאי, סין. סך של 19 חולדות Wistar זכר בני תשעה שבועות נרכשו מ- Shanghai Laboratory Animal Co Ltd (סין). כל בעלי החיים הוחזקו במערכת מחסום עם טמפרטורה מווסתת (20-22 מעלות) ולחות (60 ± 10 אחוזים), ובמחזור של 12 שעות חושך/אור עם אורות דולקים בשעה 8:00 בבוקר. החולדות קיבלו מזון ומים באופן חופשי. לאחר התאקלמות של שבועיים, החיות הועברו לכלובים מטבוליים בודדים וחולקו אקראית לשלוש קבוצות: (1) קבוצת טיפול (n=7) שבה הוזרק הידרוקורטיזון (5 אחוזים) ip במינון 1.5 מ"ג/100 גרם של משקל הגוף ואחריו מתן פומי שלהרבה ציסטנצ'סלחלץ למשך 0 ימים; (2) קבוצת מודל (n=7) שבה הידרוקורטיזון (5 אחוזים) הוזרק ip במינון 1.5 מ"ג/100 גרם פעם ביום למשך 10 ימים; ו-(3) קבוצת ביקורת (n=5) שבה הרכב הוזרק ip ב-0.6 מ"ל לערך למשך 10 ימים [31].הרבה ציסטנצ'סניתנה לקבוצת הטיפול במינון של 20 גרם/ק"ג בהתאם להמלצת Shen et al. [30]. דגימות שתן של 24 שעות נאספו במרווחי זמן ספציפיים: מינון לפני (-24 – 0 שעות), יום 1 (0 – 24 שעות), יום 3, יום 7 ויום 10. כל השתן דגימות עברו צנטריפוגה (6383 × g, LG 16-W, Beijing Jingli Centrifuge Co Ltd, סין) למשך 10 דקות כדי להסיר פסולת מרחפת, ואוחסנו מיד ב--80 מעלות לניתוח GC-MS לאחר מכן.

הכנת דגימות ו-GC-MS

GC-MS בוצע על פי המחקר הקודם שלנו עם שינויים קלים [31]. בקצרה, כל מנה של 0.5 μL של אנליט שנגזר מ-trimethylsilyl (TMS) הוזרק לתוך עמודת נימי סיליקה מאוחדת (17 מ' × 22 0 מיקרומטר קוטר פנימי, עובי סרט של 0.11 מיקרומטר; HP Ultra{ {9}}, Agilent J&W Scientific, ארה"ב). GC-MS נערך על כרומטוגרפיית גז PerkinElmer עם מקף וספקטרומטר מסה של מערכת TurboMass-Auto XL (PerkinElmer Inc, ארה"ב).

עיבוד נתונים וניתוח רב משתנים

נתוני GC-MS הומרו לפורמט NetCDF באמצעות DataBridge (PerkinElmer Inc, ארה"ב). סקריפטים מותאמים אישית הופעלו ב-MATLAB 7.0 (The MathWorks Inc, ארה"ב) כדי לבצע תיקון קו בסיס, פירוק ויישור שיא, אי הכללת תקן פנימי ונורמליזציה לסכום הכולל של הכרומטוגרמה. המטריצה ​​הממדית 3- שהתקבלה המקיפה אינדקס שיא שרירותי (זמן שמירה מזווגת-m/z), דגימות (תצפיות) ואזורי שיא מנורמלים (משתנים) יובאו לתוכנת SIMCA-P 11.0 חבילה (Umetrics, שוודיה) לניתוח רב משתנים.

מרכז ממוצע בוצע לפי עמודה כדי להסיר את הקיזוזים. כל המטבוליטים הנמדדים טופלו ברמה שווה עם קנה מידה אוטומטי (בקנה מידה לשונות יחידה) לפני ניתוח רב משתני. ניתוח רכיבים עיקריים (PCA) בוצע באמצעות תוכנת SIMCA-P 11.0 כדי לחשוף את האשכולות הכללית, הקיבוץ והמגמות בין הנבדקים ללא ידע מוקדם. הרכיב הראשי הראשון (PC1) מייצג את השונות הגדולה ביותר בנתונים. הרכיב העיקרי השני (PC2) הוא אורתוגונלי ל-PC1 ומייצג את כמות השונות המקסימלית שלא מוסברת על ידי PC1. שאר הרכיבים העיקריים נבנו באותו אופן. בינתיים, מסלולים ממוצעים של ציוני PCA שימשו כדי לספק אינדיקציה דינמית להתפרצות, התקדמות ו/או התאוששות של התסמונת לאורך זמן. מקדמי מתאם מהריבועים הקטנים החלקיים - אנליזה מבחנה (PLS-DA) שימשו כדי לדרג את החשיבות של כל משתנה כדי ללכוד עוד יותר את המטבוליטים המבוטאים בצורה דיפרנציאלית האחראים על ההפרדה בין הקבוצות. PLS-DA נגזר משיטת הריבועים הקטנים החלקיים (PLS) שהיא שיטת רגרסיה מרובה כללית העוסקת במספר מנבאים קולינאריים ומשתני תגובה [34]. ה-PLS-DA נערך באמצעות תוכנת SIMCA-P 11.0 [35]. בוצע 7-אימות צולב טיפוסי. שביעית מהדגימות הוצאו מהמודל בכל סיבוב כדי לאמת את המודל. הליך זה חזר על עצמו בצורה איטרטיבית לצורך אימות צולב עד שכל מדגם לא נכלל פעם אחת.

ניתן להשתמש ב-Herba Cistanches לטיפול בתסמונת המחסור בכליות

ניתוח חד משתנים

המטבוליטים המבוטאים בצורה דיפרנציאלית שזוהו מהניתוח הרב-משתני אומתו גם בתוכנת MATLAB 7.0 (The MathWorks Inc, ארה"ב) על ידי מבחן Kruskal-Wallis לא פרמטרי עם רמת מובהקות ב-P < 0.05 .

תוצאות ודיון

פרשנות של ספקטרום GC-MS

כרומטוגרפיות טיפוסיות של זרם יונים כולל של GC-MS (TIC) של שתן חולדות ביום 10 מקבוצת הטיפול, קבוצת המודל וקבוצת הביקורת מוצגות באיור 1. שימוש בפרוטוקול ניתוח GC-MS המותאם שלנו בשילוב עם שיא מבוסס תוכנה הליך deconvolution, סך של 117 מטבוליטים בודדים זוהו באופן עקבי בלפחות 90 אחוזים מדגימות השתן. זיהוי תרכובות של שיאי עניין בוצע על ידי השוואת קטע הספקטרלי ההמוני מול ספריות ההתייחסות של NIST (המכון הלאומי לתקנים וטכנולוגיה), ספריות ווילי ותקני ייחוס. הצלחנו לאמת 23 מתוך 117 מטבוליטים (20 אחוזים), שרובם היו חומצות אמינו, פוליאמינים, חומצות שומן, פורינים והורמוני יותרת הכליה המעורבים בעיקר במטבוליזם האנרגיה, חילוף החומרים של שומנים ומטבוליזם של חומצות אמינו.

איור 1. כרומטוגרמות GC-MS אופייניות של זרם יונים כולל (TIC) של שתן ביום 10 מקבוצת הטיפול (A), קבוצת המודל (B) וקבוצת הביקורת (C).

שינויים תלויי זמן בדגימות שתן

המסלולים הממוצעים של ציוני ה-PCA שנגזרו מקבוצת המודל ומקבוצת הטיפול הוצגו באיור 2. השינוי החולף בעלילת המסלול חשף את ההתקדמות הדינמית של 'תסמונת מחסור בכליות' המושרה על ידי הידרוקורטיזון לבד או בשילוב עםהרבה ציסטנצ'סיַחַס. בקבוצת המודלים, דפוסי חילוף החומרים ביום 1 וביום 3 היו שונים מאלו ביום 7 וביום 10, מה שמצביע על כך שהרשת הרגולטורית המטבולית ביום 1 ויום 3 הייתה עשויה לעבור תקופה חולפת עם תנודות גבוהות ושהרשת הפרועה. יכול להיות ששוחזר ביום 7 וביום 10, מה שהוביל בסופו של דבר לדפוס יציב קרוב למצב שלפני המנה. באופן אנלוגי, העובדה שהדפוס המטבולי של יום 1 ויום 3 חרג ללא ספק מזה של מתן טרום-מינון בקבוצת הטיפול הצביע על הדומיננטיתסמונת מחסור בכליות' מדינה. בתקופה זו, ההשפעות של הידרוקורטיזון היו כנראה דומיננטיות על אלו של ה-הרבה ציסטנצ'סלחלץ. ממצאים אלו תאמו את התצפית הכללית שחולדות משתי הקבוצות הראו פחות פעילות ביום 1 וביום 3. מעניין שהדפוסים המטבוליים ביום 7 וביום 10 התקרבו בהדרגה ובאופן מובהק למצב שלפני המנה, מה שמצביע על כך שהרבה ציסטנצ'סהיו לו השפעות מנוגדות או טיפוליות על החולדות שנחשפו להידרוקורטיזון. תוצאות אלו תומכות בממצאים הקליניים שהרבה ציסטנצ'סיעיל בטיפול ב'תסמונת מחסור בכליות'. באופן כללי, שני המסלולים מספקים תמונה ויזואלית, כוללת ודינמית של תחילתה, התקדמות והתאוששות שלתסמונת מחסור בכליות'.

איור 2 מסלול ממוצע של ציוני PC1 לעומת PC2 עבור דגימות שתן מקבוצת המודל (-●-) ומקבוצת הטיפול (--●--). כל נקודה מציינת ציון ממוצע בנקודות זמן שונות, כלומר לפני מנה, ימים 1, 3, 7 ו-10. סרגל השגיאה מייצג את סטיית התקן עבור כל נקודת זמן שהושגה על ידי המרכיב העיקרי הראשון.

ניתוח מטבולי השוואתי של דגימות שתן

כדי להבין טוב יותר את ההשפעות המטבוליות של הידרוקורטיזון, השווינו את הפרופילים המטבוליים שהתקבלו מקבוצות הבקרה, המודל והטיפול. ניתן להבחין בקלות בקבצים כלליים של שלוש הקבוצות בנקודות זמן שונות, כלומר לפני מנה, יום 3 ויום 10 (איור 3). בעוד שאין נטייה להיפרדות בפרופילי שתן לפני מנה, הפרופילים המטבוליים חרגו מאלה של קבוצת הביקורת ביום 3 לאחר חשיפה להידרוקורטיזון. ההפרעה המטבולית על ידי הידרוקורטיזון הופיעה הן בקבוצת המודל והן בקבוצות הטיפול. עם זאת, לאחר טיפול 7-יום רצוף עםהרבה ציסטנצ'ס, הפרופילים המטבוליים של קבוצת הטיפול הפכו שוב להיות דומים לאלו של קבוצת הביקורת, מה שמעיד על כךהרבה ציסטנצ'סאכן שיחזר ביעילות את חילוף החומרים המופרע.

איור 3 השוואה של פרופילים מטבוליים מקבוצת הביקורת (יהלום שחור), קבוצת המודל (יהלום אדום) וקבוצת הטיפול (יהלום כחול) בנקודות זמן שונות: לפני מנה (A), יום 3 (ב) ויום 10 (ג). כל נקודה בתרשים ציוני PCA מייצגת את הנתונים שהתקבלו מעכברוש.

זיהוי דיפרנציאלי של פרופילים מטבוליים

נעשה שימוש במודל PLS-DA שעבר אימות צולב כדי לזהות את המטבוליטים העיקריים בפרופילים מטבוליים שונים להבדלה קלה יותר בין החולדות של קבוצת הביקורת לחולדות קבוצת המודל (כלומר הנגרמות על ידי הידרוקורטיזון) עם או בלי.הרבה ציסטנצ'סטיפול ביום 3 (טבלה 1). נקבעו שינויים מתקפלים בריכוז היחסי של כל מטבוליט מפתח בין קבוצות והופקה ההדמיה התואמת של השינויים בין הקבוצות במינון טרום, יום 3 ויום 10 (איור 4). כפי שמוצג באיור 4 ובטבלה 1, בעוד שרוב המטבוליטים האנדוגניים עלו או ירדו באופן משמעותי בקבוצת המודל, אלו בקבוצת הטיפול עברו תקופה חולפת כפי שנצפתה ביום 1 וביום 3 והתקרבו בהדרגה לרמת הביקורת (הרגילה). . לדוגמה, בהשוואה לשונות הקלה (פי 1.1-1.5) של המטבוליטים בקבוצת הטיפול ביום 10, נצפו הרמות המוגברות מאוד (פי 1.7-3.0) של טירוזין, טיראמין, דופמין ונוראדרנלין בשתן. קבוצת מודל לאורך כל הניסוי. המחקר הקודם שלנו הראה שהמטבוליזם המוגבר של קטכולמין המושרה על ידי גלוקוקורטיקואידים הביא לצריכת יתר של תפקודים חיסוניים, ובכך הוביל ל"תסמונת מחסור בכליות' [31]. הרבה ציסטנצ'ס, צמח מרפא המשפר את המערכת החיסונית [36], עשוי לנטרל כמה השפעות של הידרוקורטיזון.הרבה ציסטנצ'סעשוי גם להיות מסוגל לשחזר רשת רגולטורית מטבולית תקינה. נדרשים ניסויים נוספים עם גישות שונות כגון ביולוגיה מולקולרית, ביולוגיה של תאים וכימיה של צמחים כדי לשרטט את הפעולות שלהרבה ציסטנצ'ס(ומרכיביו) ב'תסמונת מחסור בכליות'.

טבלה 1 רשימה של מטבוליטים הכלולים בפרופיל המטבולי של המחקר הנוכחי

מתוך: פרופיל מטבולי חושף השפעות טיפוליות שלהרבה ציסטנצ'סבמודל חיה של הידרוקורטיזון המושרהתסמונת מחסור בכליות'

הערה: מקדמי המתאם (מקדמי קורל) של כל התרכובות חושבו ממודל PLS-DA מאומת (Q2Ycum=0.899, מודל מספק באמצעות שני מרכיבים) ביום 3 בין קבוצת הביקורת לקבוצת המודל עם או בליהרבה ציסטנצ'סיַחַס. בנוסף, השינויים בקפלים נבדקו על ידי מבחן Kruskal-Wallis הלא פרמטרי. Kw (P) מציין את ערכי ה-P של הבדיקה. H=קבוצת ביקורת, M=קבוצת מודל, D=קבוצת טיפול. לדוגמה, H/M/0 מייצג את השינויים בקפלים היחסיים (מודל לשליטה) במצב שלפני המינון.

איור 4 קיפול שינויים של מטבוליטים המפתח. צבע אדום מציין ריכוזים גבוהים יחסית (שינויי קיפול > 1.5), ואילו צבע ירוק מציין ריכוזים מופחתים יחסית (שינויי קיפול < -1.5).="" שינויים="" בקפלים="" הנעים="" בין="" -1.5="" ל-1.5="" נחשבים="" לווריאציות="" פיזיולוגיות.="" שינוי="" קיפול="" (m/h,="" d/h)="" הוא="" יחס="" הריכוז="" של="" קבוצת="" המודל="" או="" קבוצת="" הטיפול="" לקבוצת="">

סיכום

מחקר הפרופיל המטבולי הנוכחי באמצעות GC-MS הראה זאתהרבה ציסטנצ'סגרם להתאוששות מערכתית מההפרעה המטבולית הנגרמת על ידי הידרוקורטיזון בחולדות, מודל של בעלי חיים עבורתסמונת מחסור בכליות'. מחקר זה גם מדגים שפרופיל מטבולי הוא שיטה שימושית לחקר ההשפעות הטיפוליות של תרופות צמחיות.

קיצורי מילים

MS: ספקטרומטריית מסה

GC-MS: כרומטוגרפיית גז-ספקטרומטריית מסה

NMR: תהודה מגנטית גרעינית

PCA: ניתוח רכיבים עיקריים

PLS-DA: ריבועים קטנים חלקיים - ניתוח מבחין

הפניות

1. Nicholson JK, Lindon JC, Holmes E: 'Metabonomics': הבנת התגובות המטבוליות של מערכות חיות לגירויים פתופיזיולוגיים באמצעות ניתוח סטטיסטי רב-משתני של נתוני NMR ספקטרוסקופיים ביולוגיים. קסנוביוטיקה. 1999, 29 (11): 1181-1189. 10.1080/004982599238047.

2. Brindle JT, Antti H, Holmes E, Tranter G, Nicholson JK, Bethell HWL, Clarke S, Schofield PM, McKilligin E, Mosedale DE, Grainger DJ: אבחון מהיר ולא פולשני של נוכחות וחומרת מחלת לב כלילית באמצעות 1H -מטאבונומיה מבוססת NMR. נאט מד. 2002, 8 (12): 1439-1444. 10.1038/nm802.

3. Constantinou MA, Papakonstantinou E, Benaki D, Spraul M, Shulpis K, Koupparis MA, Mikros E: יישום של ספקטרוסקופיה של תהודה מגנטית גרעינית בשילוב עם ניתוח רכיבים עיקריים באיתור שגיאות מולדות של מטבוליזם באמצעות כתמי דם: גישה מטאבונומית. Anal Chim Acta. 2004, 511 (2): 303-312. 10.1016/j.aca.2004.02.012.

4. Beckonert O, Monnerjahn J, Bonk U, Leibfritz D: הדמיית שינויים מטבוליים ברקמת סרטן השד באמצעות ספקטרוסקופיה של 1H-NMR ומפות ארגון עצמי. NMR Biomed. 2003, 16 (1): 1-11. 10.1002/nbm.797.

5. Mortishire-Smith RJ, Skiles GL, Lawrence JW, Spence S, Nicholls AW, Johnson BA, Nicholson JK: שימוש במטאבונומיה לזיהוי מטבוליזם לקוי של חומצות שומן כמנגנון של רעילות הנגרמת על ידי תרופות. Chem Res Toxicol. 2004, 17 (2): 165-173. 10.1021/tx034123j.

6. Waters NJ, Holmes E, Williams A, Waterfield CJ, Duncan Farrant R, Nicholson JK: מחקרי NMR וזיהוי דפוסים על ההשפעות המטבוליות הקשורות בזמן של -naphthylisothiocyanate על כבד, שתן ופלזמה בחולדה: מטאבונומי אינטגרטיבי גִישָׁה. Chem Res Toxicol. 2001, 14 (10): 1401-1412. 10.1021/tx010067f.

7. Coen M, Lenz EM, Nicholson JK, Wilson ID, Pognan F, Lindon JC: חקירה מטאבונומית משולבת של רעילות פרצטמול בעכבר באמצעות ספקטרוסקופיה של NMR. Chem Res Toxicol. 2003, 16 (3): 295-303. 10.1021/tx0256127.

8. Small-Howard A, Turner H: חשיפה לחומרים שמקורם בטבק גורמת לייצור יתר של פרוטאינזים המופרשים בתאי פיטום. Toxicol Appl Pharmacol. 2005, 204 (2): 152-163. 10.1016/j.taap.2004.09.003.

9. Waters NJ, Waterfield CJ, Farrant RD, Holmes E, Nicholson JK: Deconvolution Metabonomic of Embedded toxicity: Application to thioacetamide hepato- and nephrotoxicity. Chem Res Toxicol. 2005, 18 (4): 639-654. 10.1021/tx049869b.

10. Robertson DG: Metabonomics in toxicology: סקירה. Toxicol Sci. 2005, 85 (2): 809-822. 10.1093/toxic/kfi102.

11. רוברטסון DG, Bulera SJ: רעילות תפוקה גבוהה: שיקולים מעשיים. Curr Opin Drug Discovery Dev. 2000, 3 (1): 42-47.

12. Nicholson JK, Connelly J, Lindon JC, Holmes E: Metabonomics: פלטפורמה לחקר רעילות תרופות ותפקוד גנים. Nat Rev Drug Discov. 2002, 1 (2): 153-161. 10.1038/nrd728.

13. טיילור J, King RD, Altmann T, Fiehn O: יישום של מטבולומיקה לאבחון גנוטיפ צמחי באמצעות סטטיסטיקה ולמידת מכונה. ביואינפורמטיקה. 2002, 18 (SUPPL 2): S241-S248.

14. Wilson ID, Nicholson JK, Castro-Perez J, Granger JH, Johnson KA, Smith BW, Plumb RS: כרומטוגרפיית נוזלים ברזולוציה גבוהה "אולטרה-ביצועים" בשילוב עם ספקטרומטריית מסה oa-TOF ככלי לפרופיל מסלול מטבולי דיפרנציאלי ב מחקרים גנומיים פונקציונליים. J Proteome Res. 2005, 4 (2): 591-598. 10.1021/pr049769r.

15. Jonsson P, Gullberg J, Nordstrom A, Kusano M, Kowalczyk M, Sjostrom M, Moritz T: אסטרטגיה לזיהוי הבדלים בסדרות גדולות של דגימות מטבולומיות שנותחו על ידי GC/MS. Anal Chem. 2004, 76 (6): 1738-1745. 10.1021/ac0352427.

16. Ohdoi C, Nyhan WL, Kuhara T: אבחנה כימית של תסמונת Lesch-Nyhan באמצעות זיהוי כרומטוגרפיית גז-ספקטרומטריית מסה. J Chromatogr, B: Anal Technol Biomed Life Sci. 2003, 792 (1): 123-130. 10.1016/S1570-0232(03)00277-0.

17. Fiehn O, Kopka J, Dormann P, Altmann T, Trethewey RN, Willmitzer L: Metabolite profiling for plant functional genmics. Nat Biotechnol. 2000, 18 (11): 1157-1161. 10.1038/81137.

18. Lafaye A, Junot C, Pereira Y, Daniel G, Tabet JC, Ezan E, Labarre J: ניתוחים משולבים של פרוטאום ופרופיל מטבוליטים חושפים תובנות מפתיעות לגבי חילוף החומרים של גופרית שמרים. J Biol Chem. 2005, 280 (26): 24723-24730. 10.1074/jbc.M502285200.

19. Schauer N, Steinhauser D, Strelkov S, Schomburg D, Allison G, Moritz T, Lundgren K, Roessner-Tunali U, Forbes MG, Willmitzer L, Fernie AR, Kopka J: GC-MS libraries for the identification rapid of metabolites בדגימות ביולוגיות מורכבות. FEBS Lett. 2005, 579 (6): 1332-1337. 10.1016/j.febslet.2005.01.029.

20. Willse A, Belcher AM, Preti G, Wahl JH, Thresher M, Yang P, Yamazaki K, Beauchamp GK. Anal Chem. 2005, 77 (8): 2348-2361. 10.1021/ac048711ט.

21. Wang XW, Wang XF, Wu LY: שיפור הזיכרון של עכברים של phenylethanoid גליקוזידים של Cistanche deserticola. נציג צ'ין פארם. 2002, 19: 41-42.

22. Xie JH, Wu CF: השפעת תמצית אתנולית של Cistanche deserticola על התוכן של נוירוטרנסמיטורים מונואמין במוח חולדה. Zhongcaoyao. 1993, 24: 417-419.

23. Li LL, Wang XW, Wang XF: חמצון נוגד שומנים ופעולה נגד קרינה של גליקוזידים בherba Cistanches.Chin J Chin Mater Med. 1997, 22 (6): 364-367.

24. Shahat AA, Nazif NM, Abousetta LM, Ibrahim NA, Cos P, Van Miert S, Pieters L, Vlietinck AJ: Phytochemical research and antioxidant activity of Duranta repens. Phytother Res. 2005, 19 (12): 1071-1073. 10.1002/ptr.1766.

25. Gao J, Igarashi K, Nukina M: שלושה phenylethanoid גליקוזידים חדשים מ-Caryopteris incana ופעילותם נוגדת החמצון. Chem Pharm Bull. 2000, 48 (7): 1075-1078.

26. Kyriakopoulou I, Magiatis P, Skaltsounis AL, Aligiannis N, Harvala C: Samioside, phenylethanoid glycoside חדש עם ניקוי רדיקלים חופשיים ופעילויות אנטי-מיקרוביאליות מ-Plomis samia. J Nat Prod. 2001, 64 (8): 1095-1097. 10.1021/np010128 פלוס .

27. Deng M, Zhao JY, Ju XD, Tu PF, Jiang Y, Li ZB: אפקט מגן של tubuloside B על אפופטוזיס המושרה על ידי TNF אלפא בתאי עצב. Acta Pharmacol Sin. 2004, 25: 1276-1284.

28. Geng XC, Song LW, Pu XP, Tu PF: השפעות נוירולוגיות של גליקוזידים פנילתנואידים מסלסה Cistanches נגד 1-מתיל-4-פניל-1, 2, 3, 6- tetrahydropyridine (MPTP) גרמה לרעילות דופמינרגית בעכברי C57. ביול פארם בול. 2004, 27: 797-801. 10.1248/bpb.27.797.

29. He W, Shu X, Zong G, Shi M, Xiong Y, Chen M: חיזוק כליות ויאנג תומכים בפעולה של cistanche deserticola YC Ma לפני ואחרי ההכנה. Zhongguo Zhong Yao Zazhi. 1996, 21 (9): 534-537. 575

30. Shen LZ, Zhong XY, Wang SX: השפעת Cistanche deserticola על חולדות שן-יאנג רגילות וחסרות. Zhongyao Yaoli Yu Linchuang. 2001, 17 (1): 17-18.

31. Chen M, Zhao L, Jia W: מחקר מטאבונומי על הפרופילים הביוכימיים של מודל בעלי חיים המושרה על ידי הידרוקורטיזון. J Proteome Res. 2005, 4 (6): 2391-2396. 10.1021/pr050158o.

32. Chen Q, Yi NY: דגמי החיות והתרופות למחסור ב-Yin ו-Yang-Deficiency. מתודולוגיה ניסויית של מחקר תרופתי ברפואה סינית מסורתית. עריכה: Chen Q. 1993, Beijing: People's Health Publishing House, 982-984.

33. הוועדה הלאומית לפרמקופיה: פרמקופיה של הרפובליקה העממית של סין. 2005, Beijing: Press of Chemical Industry, 1: 90-

34. ניתוח נתונים רב ומגה משתנים חלק א': עקרונות בסיסיים ויישומים, מהדורה שנייה מתוקנת ומוגדלת. [http://www.umetrics.com/default.asp/pagename/training_literature/c/5]

35. מדריך למשתמש של SIMCA-P ו- SIMCA-P plus 11. [http://www.umetrics.com/default.asp/pagename/downloads_userguide/c/3]

36. Chin HL, Su YC: מחקר על ההשפעות הפרמקולוגיות של Cistanche deserticola Ma. Zhongguo Zhong Yao Zazhi. 1993, 19: 143-146.

מתוך: רפואה סינית כרך 3, מספר מאמר: 3 (2008)