גליקוזידים של סיסטאנצ'ה משפרים את הלמידה והזיכרון במודל החולדות של דמנציה וסקולרית

למידע נוסף:ali.ma@wecistanche.com

J. CHEN1,2, S.-N. ZHOU1, Y.-M. ZHANG2, Y.-L. FENG2, S. WANG2

1 המחלקה לנוירולוגיה, בית החולים קילו של אוניברסיטת שאנדונג, ג'ינאן, סין. & המכון לחקר מדעי המוח, אוניברסיטת שאנדונג, שאנדונג, יחסי ציבור בסין

2המחלקה לנוירולוגיה, בית החולים העממי של האזור האוטונומי של מונגוליה הפנימית, יחסי ציבור בסין

ג'ין צ'ן ויאן-מי ג'אנג תרמו באותה מידה למחקר זה

תַקצִיר.- מטרה:גליקוזידים של cistanche(GC) מופקים משין ג'יאנגCistanche, שנמצא בשימוש נרחב כצמח סיני. מחקר זה נועד להעריך את ההשפעות של GC על דמנציה וסקולרית (VD).

חומרים ושיטות: מודל ה-VD הוקם על ידי קשירה של עורק הצוואר המשותף הדו-צדדי בחולדות Wistar בוגרות, שקיבלו מתן ip יומי של מי מלח, GC (10 מ"ג/ק"ג משקל גוף/ד, ip) או oxiracetam (450 מ"ג/ק"ג משקל גוף/ד, ip) למשך 14 ימים. מבחן מבוך המים של מוריס העריך את הביצועים הקוגניטיביים של החולדות. ההיפוקמפוס נותח ונתון לפרוטאומיקה וניתוח אימונוהיסטוכימי. תוצאות: קבוצת GC הראתה חביון בריחה נמוך משמעותית בהשוואה לקבוצת VD בארבעה וחמישה ימים לאחר הניתוח. הם לא הראו הבדל משמעותי בהשוואה לקבוצת הניתוחים המזויפים וקבוצת הביקורת של אוקסיראצטם. בהיפוקמפוס, 21 כתמי החלבון בקבוצת GC הראו רמות ביטוי שונות בהשוואה לקבוצת VD. זה כלל את ארבעת החלבונים שהראו הבדל משמעותי: שלושה חלבונים בעלי ויסות מוגברת של חלבון דמוי thioredoxin 1, חלבון קינאז 1 המופעל על ידי מיטוגן עם סגוליות כפולה, וחלבון הקשור ל-dihydropyridine-nase 2 (CRMP-2), ואחד חלבון גלוטתיון סינתטאז מווסת למטה. ניתוח אימונוהיסטוכימיה הראה שרמת החלבון P-tau הייתה גבוהה יותר באופן מובהק בקבוצת מודל VD מאשר בקבוצה המטופלת בדמה (p <0.05). לאחר="" טיפול="" ב-gc,="" רמת="" חלבון="" p-tau="" בחולדות="" מודל="" vd="" הראתה="" ירידה="" משמעותית="" בהשוואה="" לקבוצת="" vd="" שטופלה="" במי="" מלח="" (p=""><0.05). מסקנות:="" ה-gc="" ממלא="" תפקיד="" קריטי="" בהגנה="" על="" נוירוני="" ההיפוקמפוס="" ב-vd,="" על="" ידי="" הפחתת="" זרחון="" p-tau="" והעלאת="" רמת="" הביטוי="" crmp-2.="" מניפולציה="" פרמקולוגית="" של="" gc="" מציעה="" הזדמנות="" חדשה="" לטיפול="">

מילות מפתח:

דמנציה וסקולרית, Glycosides of Cistanche, Proteomics, P-tau, חלבון הקשור ל-Dihydropyrimidinase 2.

לחץ ל- Cistanche ו- cistanche deserticola ma לשיפור הזיכרון

מבוא

דמנציה וסקולרית (VD) היא הדמנציה הסנילית השנייה המובילה והיא נגרמת בעיקר על ידי מחלה מוחית איסכמית. VD מוביל לפגיעה קוגניטיבית הטרוגנית, ויש צורך בתרופות טיפוליות יעילות חדשות המטפלות או מונעות את התקדמות VD1. עם זאת, עדיין אין צמח סיני יעיל לשיפור ליקוי קוגניטיבי שנגרם על ידי איסכמיה מוחית.

Glycosides of cistanche (GC) נמצא בשימוש נרחב כצמח עם השפעות נוירו-פרוטקטיביות. תמצית Herba Cistanches משפרת אתלמידה וזיכרוןשל עכברים על ידי קידום התמיינות תאי עצב, צמיחת עצבים ויצירת סינפסות2. גליקוזידים של cistanche יכולים למנוע אפופטוזיס בנוירונים של גרגירי המוח הקטן ולהפעיל אפקט אנטי-אפופטוזיס על ידי עיכוב ההפעלה של קספאז-3 וקספאז-83. Echinacoside, מרכיב פעיל עיקרי של Herba Cistanches, מספיק כדי להגן על תאי עצב מפגיעת רוטנון על ידי הפעלת איתות Trk4. עם זאת, המנגנונים שבאמצעותם GC משפר ליקוי קוגניטיבי ב-VD עדיין לא ידועים במידה רבה.

חלבון טאו הוא חלבון הקשור למיקרו-צינוריות עצביים, המייצב את המיקרו-צינוריות העצביות. זרחון של חלבון טאו (P-tau) משפיע על יכולתו ליצור אינטראקציה עם מיקרוטובולים ומשפיע על העברה סינפטית. הצטברות של סבכים נוירו-פיברילריים (NFTs) מורכבת מחלבון P-tau והוא אחד המאפיינים העיקריים של מחלת אלצהיימר (AD)5. ידוע היטב ש-VD ו-AD הן שתי מחלות הדמנציה הנפוצות ביותר. יש להם מתאם משותף עם גורמי סיכון וסקולריים, כגון יתר לחץ דם, סוכרת והיפרכולסטרולמיה. לכן, P-tau עשוי להיות מעורב גם ב-VD.

הערכנו את ההשפעות של GCs עלפונקציית זיכרון-למידהבמודל חולדות של VD וביצע פרוטאומיקה וניתוח אימונוהיסטוכימי על ההיפוקמפוס של חולדות VD כדי לספק תובנה לגבי ההשפעות הנוירו-פרוקטטיביות של GC. התוצאות שלנו הראו ש- GCשיפור הלמידה והזיכרוןבחולדות VD, ושינו את רמות החלבונים כגון P-tau בחולדות VD.

חומרים ושיטות

חיות

חולדות Wistar זכרים בני שישה חודשים (משקל 230- 270 גרם) סופקו על ידי מרכז חיות הניסוי של מחוז הוביי, סין. כל ההליכים הניסויים בבעלי חיים נערכו בהתאם להנחיות לטיפול בבעלי חיים ולתקנות האתיות המקומיות של בית החולים ווהאן מס' 1, סין. מספר אישור האתיקה הוא 00014834. בעלי חיים אוחסנו בנפרד בקבוצות של 4 לכלוב ב-25 מעלות עם מחזור של 12-שעה אור/12-שעה חשיכה וגישה חופשית למזון ומים. בעלי חיים (n=45) חולקו אקראית לארבע קבוצות: קבוצת מודל (n=12), קבוצה מופעלת דמה (n=11), קבוצה שטופלה ב-GC (n{{14} }), וקבוצת ביקורת שטופלה ב-oxiracetam (n=10).

קשירת עורק הצוואר המשותף הדו-צדדי (2-VO)

בהרדמה עמוקה עם 10 אחוז כלור הידרט (טיאנג'ין Damao Chemical Reagent Factory reagent, Tianjin, סין) (350 מ"ג/ק"ג משקל גוף,

ip), עורקי הצוואר המשותפים הדו-צדדיים (CCA) הופרדו בקפידה מהרקמות שמסביב, ולאחר מכן נקשרו בחוזקה עם התפר. העור שוחזר לאחר מכן וחולדות נשמרו בטמפרטורת החדר והוחזרו לכלוב הביתי עד להחייאה. חולדות בקרה המופעלות בדמה עברו את אותו הליך כירורגי ללא קשירת CCA. חולדות VD טופלו ב-GC (10 מ"ג/ק"ג משקל גוף/יום, ip) או oxiracetam (450 מ"ג/ק"ג משקל גוף/ד, ip) מיד לאחר הניתוח במשך 14 ימים רצופים. לקבוצת המודלים הוזרק אותו נפח של תמיסת מלח רגילה.

מבחן מבוך המים של מוריס

בדיקת MWM בוצעה על פי שיטה שתוארה קודם לכן7. אזור הבדיקה כלל בריכה עגולה מלאה במים (25 ± 1 מעלות), שנעשתה אטומה בחלב כך שהחולדות לא היו מסוגלות לראות את הפלטפורמה התת-ימית 1 ס"מ מתחת לפני המים. הבריכה חולקה לארבעה רביעיות (שסומנו אזורים I, II, III ו-IV) ופלטפורמה שקעה באזור II. רמזים חזותיים הונחו על קיר חדר הבדיקה. החיות הונחו למים באחת מארבע נקודות הרבעון ההתחלתיות, ששונו באופן אקראי במהלך הניסויים. החולדות קיבלו 2 דקות למצוא את הפלטפורמה ולשבת עליה במשך 15 שניות. חולדות שלא הצליחו למצוא את המיקום בזמן נתון, הובלו בעדינות אל הרציף והורשו להישאר עליה במשך 15 שניות. נעשה שימוש במערכת מעקב אוטומטית כדי לתעד את מסלול השחייה, השהיה, מרחק השחייה והזמן בכל אזור. כל החולדות הוקרבו שבועיים לאחר בדיקת MWM לצורך הניתוח הבא.

מיצוי חלבון

תחת הרדמה עמוקה עם 10 אחוז כלור הידרט, כל החולדות שבוצעו בבדיקת MWM נערפו. רקמות ההיפוקמפוס נקצרו במהירות על קרח, ולאחר מכן הוקפאו מיד בחנקן נוזלי. כל הרקמות הומוגגו תחת חנקן נוזלי באמצעות מכתש ועלי ונאספו במאגר תמוגה (7 M urea, 2 M thiourea, 2% CHAPS, 20 mM Tris). חלקיקים בלתי מסיסים הוסרו בצנטריפוגה ב-12,000 סל"ד למשך 20 דקות ב-4 מעלות. חומצות גרעין מזוהמות בדגימות הופסקו על ידי תנודה קולית לסירוגין למשך 5 דקות. הסופרנטנטים נאספו לאחר צנטריפוגה באותו מצב כפי שתואר לעיל. ריכוז החלבון בסופרנטנטים נמדד על ידי בדיקת ברדפורד, והסופרנטנטים אוחסנו ב-80 מעלות.

אלקטרופורזה ג'ל דו מימדית

מנות החלבון (120 מיקרוגרם) הותאמו עם חיץ רהידציה (7 M urea, 2 M thiourea, 4% CHAPS, 1% wt/vol DTT, 0.5% buffer IPG, and זכר של ברומופנול כחול) בנפח של 350 µL. מיקוד איזואלקטרי (IEF) בוצע ברצועות IPG ​​(pH 4-7, גודל 22 ס"מ) ב-300 V למשך 12 דקות, 700 V למשך 18 דקות, 1500 V למשך 1.5 שעות, 9900 V עבור 3 שעות, 9990 וולט למשך 6.5 שעות, ולאחר מכן 600 וולט למשך 20 שעות במערכת Ettan IPGphor II (GE ETTAN IPGPHOR3). לאחר תוכנית IEF, הרצועות עברו איזון במאגר IPG שיווי משקל I (6 M אוריאה, 2 אחוז SDS, 30 אחוז גליצרול, 0.375M Tris, pH 8.8, 20 מ"ג/מ"ל DTT וזכר של ברומופנול כחול), ו לאחר מכן אלקיל (25 מ"ג/מ"ל יודואצטמיד במקום DTT במאגר שיווי משקל) למשך 15 דקות. 2-DE בוצע על 12.5 אחוזים SDS polyacrylamide ג'לים (24 ​​ס"מ×19.5 ס"מ×1.0 מ"מ) עם 0.5 אחוזים דבק איטום agarose, באמצעות מערכת אלקטרופורזה Ettan DALT Six (GE ETTAN DALTsix, PA, ארה"ב). אלקטרופורזה בוצעה ב-2 W למשך 45 דקות, ואחריה הפרדה ב-17 W למשך ארבע שעות עד שהברומופנול הכחול כמעט הגיע לתחתית הג'לים. כתמי החלבון הוצגו באמצעות צביעת כסף (Tianjin Damao Chemical Reagent Factory) בג'לים אנליטיים. 2-מכונת כביסה DE נוצרה בשלושה עותקים ומשלוש מיצויות חלבון עצמאיות עבור כל קבוצה.

אלקטרופורזה ג'ל הכנה

דגימות חלבון (600 מיקרוגרם) מארבע קבוצות של חולדות הועברו ל-2-DE לפי השיטה שתוארה לעיל. כתמי החלבון הוצגו באמצעות צביעה כחולה מבריקה Coomassie (Tianjin Damao Chemical Reagent Factory) בג'לים הכנה.

רכישה וניתוח תמונה

תמונות הג'ל נלכדו במערכת {{0}}DE Image Scanning (UMAX Powerlook1100, VT, ארה"ב) ונותחו על ידי תוכנת Image Master 2D Platinum 5.0 (GE, PA, ארה"ב). כתמי החלבון זוהו באופן אוטומטי ולאחר מכן נערכו באופן ידני כדי להסיר פסים, כתמים וחפצים.

מטריצה ​​בסיוע לייזר ספירת יינון-זמן טיסה ספקטרומטריית מסה (MALDI-TOF-MS)

לצורך טביעת אצבע של מסה פפטיד וניתוח לאחר מכן, ג'לים נחתכו, וכתמים מוכתמים ב-Coomassie הוכתמו ונשטפו עם 100 mM אמוניום ביקרבונט ואצטוניטריל, מופחתים עם DTT ב-60 מעלות למשך 40 דקות, ולאחר מכן אלקילו על ידי IAA למשך 30 דקות בחושך. הג'ל נכלל ב-50 μL של תמיסת טריפסין שונה בנפח 12 ng/μl ב-50 mM אמוניום ביקרבונט (pH 8.6) ב-37 מעלות למשך הלילה. פפטידים חולצו מפקק הג'ל עם 1 אחוז חומצה פורמית/2 אחוז אצטוטריל ורוכזו באמצעות C-18 Zip-Tips. התערוכות זוהו (ארבעה שכפולים) על יעד MALDI תוך שימוש בחומצה א-ציאנו 4-הידרוקסי קינמי (2 מ"ג/מ"ל ב-50 אחוז אצטוטריל, 0.1 אחוז TFA המכיל 10 מ"מ אמוניום פוספט) כמטריצה. ספקטרו נרכשו בספקטרומטר מסה 4700 MALDI TOF/TOF (Applied Biosystems, ניו יורק, ארה"ב), ונותחו על ידי תוכנת GPS Explorer TM (Applied Biosystems).

אימונוהיסטוכימיה

קטעי ההיפוקמפוס העטרה היו קבועים ב-4 אחוז פרפורמלדהיד לפני שהוטבעו בפרפין ולאחר מכן חתכו לקטעים בעובי 4- מיקרומטר. קטעי ההיפוקמפוס העטרה שהסתיימו לעזיבה עברו עיבוד כדי לכבות פעילות פרוקסידאז אנדוגנית תוך שימוש ב-3% H2O2 בתמיסת מלח מוגברת בפוספט. תגובות חיסוניות לא ספציפיות נחסמו בטמפרטורת החדר למשך 15 דקות. מקטעים הודגרו עם נוגדן P-tau ונוגדן משני בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות והוצגו להדמיה בעקבות תגובת 3,3'-diaminobenzidine tetrahydrochloride (Dako, Tokyo, יפן). התמונות נלכדו באמצעות מיקרוסקופ אור (אולימפוס, טוקיו, יפן) ועובדו באמצעות תוכנת פוטושופ (גרסה 7.0, Adobe, סן חוזה, קליפורניה, ארה"ב).

ניתוח סטטיסטי

נתונים כמותיים הובאו כממוצע ± SD. ניתוח דו-כיווני של שונות (ANOVA) בוצע באמצעות תוכנת ניתוח SPSS 10.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, ארה"ב). p < 0.05="" נחשב="">

תוצאות

GC מקדם למידה וזיכרון בחולדות VD

כדי להעריך את ההשפעות של GC על התפקוד הקוגניטיבי של מודל החולדות VD, ביצענו את מבחן MWM. בבדיקת MWM, קבוצת ה-GC הראתה חביון בריחה נמוך משמעותית בהשוואה לקבוצת ה-VD ב-4 ו-5 ימים לאחר הניתוח, אך לא הראתה הבדל מובהק בהשוואה לקבוצת המטופלים ב-Sham וקבוצת הביקורת oxiracetam (טבלה I). נתונים אלה מצביעים על כך ש- GC מקדם למידה וזיכרון בחולדות VD. GC משנה פרופילים פרוטאומיים של ההיפוקמפוס של חולדות VD.

על ידי ניתוח פרוטאומי של ההיפוקמפוס של חולדה, מצאנו ש-21 כתמי חלבון בקבוצת GC הראו רמות ביטוי שונות בהשוואה לקבוצת VD. ביניהם, ארבעה חלבונים הראו הבדל משמעותי בהיפוקמפוס של חולדות ה-GC (טבלה II): כולל שלושה חלבונים בעלי ויסות מוגברת של חלבון דמוי thioredoxin 1 (TXNL 1), חלבון קינאז 1 (MAPKK 1) המופעל על ידי מיטוגן. חלבון 2 הקשור ל-dihydropyrimidinase (DPYSL2); וחלבון גלוטתיון סינתטאז (GCL) עם ויסות מטה אחד. פרופילי הג'ל האלקטרופורזה הדו-ממדיים האופייניים (2-DE) של DPYSL2 הוצגו באיור 1.

GC מווסת את רמת P-tau בהיפוקמפוס של חולדות VD

על ידי ניתוח אימונוהיסטוכימיה, מצאנו שרמת החלבון P-tau הייתה גבוהה משמעותית בקבוצת מודל ה-VD מאשר בקבוצה המופעלת מדמה (p < 0.05).="" לאחר="" הטיפול="" ב-gc,="" רמת="" החלבון="" p-tau="" בחולדות="" מודל="" vd="" הראתה="" ירידה="" משמעותית="" בהשוואה="" לקבוצת="" ה-vd="" שטופלה="" במי="" מלח="" (p=""><0.05), אך="" לא="" הראתה="" הבדל="" משמעותי="" בהשוואה="" לקבוצת="" הביקורת="" של="" oxiracetam="" (איור="">

דִיוּן

VD נובע מפגיעה בזיכרון ובתפקוד הקוגניטיבי הנגרמת בעיקר על ידי מחלות כלי דם במוח8,9,10,11. מודל חסימת שני כלי הדם (2VO) הוא פשוט ויציב ומוכר כמודל הסטנדרטי של איסכמיה מוחית. במחקר זה, השתמשנו במודל 2VO כדי לבסס את מודל החיות VD. על ידי מבחן MWM, מצאנו שקבוצת ה-VD הראתה ירידה ביכולת הקוגניטיבית בהשוואה לקבוצה המופעלת מדמה, מה שמאשר שהקמנו את מודל ה-VD בהצלחה. בהתבסס על מודל זה, מצאנו שטיפול GC שיפר את היכולת הקוגניטיבית המרחבית של חולדות VD במידה דומה עם oxiracetam, ביקורת חיובית. נתונים אלה מצביעים על כך ש-GC יכול לקדם למידה מרחבית ופגיעה בזיכרון ב-VD.

כדי לחקור את המנגנון שבאמצעותו GC מפעיל השפעות נוירו-הגנה על VD, השתמשנו בגישה פרוטאומית לבדיקת חלבונים בעלי ביטוי דיפרנציאלי בהיפוקמפוס של חולדות VD. מצאנו שמספר חלבונים הקשורים לחילוף חומרים אנרגטי, קיפול חלבונים, מסלול איתות ושלד ציטוניים הראו ביטויים שונים בהיפוקמפוס של חולדות VD שטופלו ב-GC בהשוואה לאלו שטופלו במי מלח כביקורת.

אחד מהחלבונים המובעים בצורה דיפרנציאלית הוא DPYSL2, הידוע גם כ-Collapsin Response Mediator Protein-2 (CRMP-2), המועשר בחלק המרוחק של האקסונים הגדלים בנוירונים ראשוניים של ההיפוקמפוס והוא חיוני להתמיינות האקסונים. וצמיחה נוירונית12,13. יתר על כן, CRMP-2 מקדם הרכבה של מיקרו-צינוריות ומתווך איתות Ras כדי לשפר את היווצרות האקסונים המרובים ואת הקוטביות העצבית14,15. במחקר זה, רמת ביטוי החלבון של CRMP-2 עלתה פי 2.28 בקבוצת GC בהשוואה לקבוצת VD, מה שמצביע על תפקיד חשוב ל-CRMP-2 במנגנוני תיקון פוטנציאליים של היווצרות רשתות עצביות שמירה על קוטביות עצבית ב-VD.

יתר על כן, במחקר הנוכחי מצאנו P-tau גבוה יותר בקבוצת מודל ה-VD, אך ביטוי P-tau נמוך יותר לאחר טיפול GC. חלבון טאו ממלא תפקיד מפתח במורפוגנזה של נוירונים. במצבים פתולוגיים מסוימים, חלבון P-tau עשוי ליצור אגרגטים חריגים שהם רעילים לנוירונים, על ידי השפעה על תפקוד המיטוכונדריה15. מחקרים קודמים מצביעים על כך ש-GC יכול לשפר את חילוף החומרים של אנרגיה במיטוכונדריה עם פונקציה נוגדת חמצון16,17,18. באופן מעניין, זרחון CRMP-2 אופיינה גם כמרכיב של סבכים נוירו-פיברילריים ב-AD.

מסקנות

CRMP2 מזורחן בדרך כלל על ידי ציקלין-תלוי חלבון קינאז-5 (Cdk5) וגליקוגן סינתאז קינאז-3 (GSK3 ) במוח של חולי AD, אותן קינאזות שמזרחות חלבון טאו ליצירת NFTs19,20. יש צורך במחקרים נוספים כדי לבחון האם GC מווסת את רמת הביטוי P-tau ו-CRMP2 ב-VD על ידי ויסות פעילות Cdk5 ו-GSK321,22,23. לסיכום, הנתונים שלנו מצביעים על כך ש-GC ממלא תפקיד קריטי בהגנה על נוירונים בהיפוקמפוס של VD, על ידי הפחתת זרחון P-tau והעלאת רמת הביטוי CRMP-2. מניפולציה פרמקולוגית של GC מציעה הזדמנות חדשה לפיתוח טיפול נגד VD.

תודות

מחקר זה נתמך על ידי הקרן המיוחדת לחוקרי Taishan והקרן הלאומית למדעי הטבע (30960520).

ניגוד עניינים

המחברים מצהירים כי אין ניגודי עניינים.

הפניות

1)GORELICK PB, PANTONI L. התקדמות בפגיעה קוגניטיבית כלי דם. שבץ 2013; 44: 307-308.

2)CHOI JG, MOON M, JEONG HU, KIM MC, KIM SY, OH MS. Cistanches Herba משפר את הלמידה והזיכרון על ידי גרימת גורמי גדילה עצביים. Behav Brain Res 2011; 216: 652-658.

3)TIAN XF, PU XP. פנילתנואידים גליקוזידים מסלסה Cistanches מעכבים אפופטוזיס המושרה על ידי 1- מתיל-4-יון פנילפירידיניום בנוירונים. J Ethnopharmacol 2005; 97: 59-63.

4) ZHU M, LU C, LI W. חשיפה חולפת לאכינאקוסיד מספיקה כדי להפעיל איתות Trk ולהגן על תאים עצביים מפני רוטנון. J Neurochem 2013; 124: 571-580.

5) MEDINA M, AVILA J. נקודות מבט חדשות על תפקידו של טאו במחלת אלצהיימר. השלכות על הטיפול. Biochem Pharmacol 2014; 88: 540-547.

6) NING M, ZHANG Z, CHEN Z, ZHAO T, ZHANG D, ZHOU D, LI W, LIU Y, YANG Y, LI S, HE L. עדויות גנטיות לכך שדימנציה וסקולרית קשורה למחלת אלצהיימר: קשר גנטי הוא- בין פולימורפיזם טאו ודמנציה וסקולרית באוכלוסייה הסינית. Age Aging 2011; 40: 125-128.

7) CAIN DP, BOON F. ניתוח התנהגותי מפורט חושף הן אסטרטגיות משימות והן ליקויים בזיכרון מרחבי בחולדות שקיבלו שבץ עורק מוחי אמצעי דו-צדדי. Brain Res 2003; 972: 64-74.

8) ZHONG G, WANG Y, ZHANG Y, GUO JJ, ZHAO Y. עישון קשור לסיכון מוגבר לדמנציה: מטה-אנליזה של מחקרי עוקבה פרוספקטיביים עם חקירה של משתני אפקט פוטנציאליים. PLoS One 2015; 10: e0118333.

9)NETO E, ALLEN EA, AURLIEN H, NORDBY H, EICHELE T. מאפיינים ספקטרליים של EEG מבחינים בין אלצהיימר ודמנציה וסקולרית. Front Neurol 2015; 6:25.

10)CALABRÒ RS, DE LUCA R, LEO A, BALLETTA T, MARRA A, BRAMANTI P. Lokomat אימון בדמנציה וסקולרית: שיפור מוטורי ומעבר לכך! Aging Clin Exp Res 2015 12 במרץ.

11)UTKAN T, YAZIR Y, KARSON A, BAYRAMGÜRLER D. Etanercept משפר את הביצועים הקוגניטיביים ומגביר את ביטוי eNOS ו-BDNF במהלך דמנציה וסקולרית ניסיוני בסוכרת הנגרמת על ידי סטרפטוזוטוצין. Curr Neurovasc Res 2015 11 במרץ.

12) ZHOU LS, ZHAO GL, LIU Q, JIANG SC, WANG Y, ZHANG DM. החלבון המתווך של תגובה התמוטטות משתקת-2 מתכנת מחדש את הפנוטיפ של מקרופאגים ומשפר ריפוי אוטם במודל ניסיוני של אוטם שריר הלב. J Inflamm (לונדון) 2015; 12:11.

13)WILSON SM, KI YEON S, YANG XF, PARK KD, KHANNA R. ויסות דיפרנציאלי של זרחון פרוטאין 2 (CRMP2) של תגובת קולפסין על ידי GSK3ß ו-CDK5 בעקבות פגיעה מוחית טראומטית. Front Cell Neurosci 2014; 8: 135.

14)LIM NK, HUNG LW, PANG TY, MCLEAN CA, LIDDELL JR, HILTON JB, LI QX, WHITE AR, HANNAN AJ, CROUCH PJ. שינויים מקומיים בגליקוגן סינתאז קינאז-3 וחלבון מתווך תגובה של התמוטטות-2 במוח המושפע ממחלת הנטינגטון. הום ​​מול ג'נט 2014; 23: 4051-4063.

15)BRUSTOVETSKY T, PELLMAN JJ, YANG XF, KHANNA R, BRUSTOVETSKY N. Colapsin response mediator protein 2 (CRMP2) יוצר אינטראקציה עם הקולטן N-methyl-D- aspartate (NMDA) ו-Na plus /Ca2 plus מחליף החלפה שלהם ומווסת את שלהם פעילות פונקציונלית. J Biol Chem 2014; 289: 7470-7482.

16)DONG B, YUAN X, ZHAO Q, FENG Q, LIU B, GUO Y, ZHAO B. מיצוי מימי דו-פאזי בסיוע אולטרסאונד של פנילתנואידים גליקוזידים מגזעי Cistanche deserticola YC Ma. J Sep Sci 2015 ינואר 21. [Epub לפני הדפסה].

17) HU GS, JIA JM, KIM DH. השפעות האכלה של טירוזין ופנילאלנין על הצטברות של גליקוזידים פנילתנואידים לתרבית תליית תאי Cistanche deserticola. Chin J Nat Med 2014; 12: 367-372.

18)DONG S, GAO R, YANG Y, GUO M, NI J, ZHAO L. קביעה בו-זמנית של phenylethanoid glycosides ו-aglycones על ידי אלקטרופורזה אזור נימי עם הפעלת חיץ משנה. Anal Biochem 2014; 449: 158-163.

19)XIONG WT, GU L, WANG C, SUN HX, LIU X. השפעות אנטי-היפרגליקמיות והיפוליפידמיות של Cistanche tubulosa בעכברי db/db סוכרתיים מסוג 2. J Ethnopharmacol 2013; 150: 935-945.

20) LIU B, OUYANG J, YUAN X, WANG L, ZHAO B. תכונות ספיחה והפרדה הכנה של phenylethanoid glycosides מ-Cistanche deserticola על ידי שימוש בשרפים מאקרו-פוריים. J Chro- motor B Analyt Technol Biomed Life Sci 2013; 937: 84-90.

21)CALDERÓN-RIVERA A, SANDOVAL A, GONZÁLEZ-RAMÍREZ R, GONZÁLEZ-BILLAULT C, FELIX R. ויסות של ערוצי cav3.1 עצביים על ידי קינאז 5 תלוי ציקלין (cdk5). PLoS One 2015; 10: e0119134.

22)CASTRO-ALVAREZ JF, URIBE-ARIAS A, CARDONA-GÓMEZ GP. מיקוד לפי קינאז 5 תלוי ציקלין מונע הצטברות b-עמילואיד המערבת גליקוגן סינתאז קינאז 3b ופוספטאזות. J Neurosci Res 2015 פברואר 24. [Epub לפני הדפסה].

23) ROUGET R, SHARMA G, LEBLANC AC. זרחון קינאז 5 תלוי בציקלין של מוטנטים משפחתיים של חלבון פריון מחמיר את ההמרה למבנה עמילואיד. J Biol Chem 2015; 290: 5759- 5771.