שיפור ביו-סינתזה של פנילתנואידים גליקוזידים בתרבויות תאים של Cistanche Deserticola על ידי מתח אוסמוטי

איש קשר:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

צ'ון-ג'או ליו. שי-יו צ'נג

תַקצִירההשפעה של סטרס אוסמוטי על צמיחת תאים וביוסינתזה של פנילתנואידים גליקוזידים (PeGs) נחקרה בתרביות תרחיף תאים שלCistanche deserticolaYC Ma, צמח מרפא מדברי הגדל באזור המערבי של סין. ריכוזי סוכרוז ראשוניים שונים השפיעו באופן משמעותי על צמיחת תאים וביוסינתזה של PeGs בתרביות ההשעיה, והמשקל היבש הגבוה ביותר והצטברות PeGs הגיעו ל-15.9 gli–1-DW ו-20.7 mg g–1-DW בהתאמה באוסמוטי הראשוני. מתח של 300 mOsm kg-1 כאשר ריכוז הסוכרוז היה 175.3 mM. ניתוח סטוכיומטרי עם שילובים שונים של סוכרוז וסוכר לא מטבולי (מניטול) או חומרים אוסמוטיים שאינם סוכרים (PEG ו-NaCl) גילו שלחץ אוסמוטי עצמו היה גורם חשוב לשיפור הביוסינתזה של PeGs בתרביות תרחיף תאים שלCistanche deserticola. תכולת ה-PEG המקסימלית של 26.9 ו-23.8 מ"ג g-1-DW התקבלה לאחר 21 ימים בשילובים של 87.6 מ"מ סוכרוז עם 164.7 מ"מ מניטול (303 מ"מ ק"ג-1) או 20 מ"מ PEG בהתאמה, שהיה גבוה מ- זו של תרביות תאי C. deserticola שגדלו תחת ריכוז סוכרוז ראשוני של 175.3 mM לאחר 30 יום. הצטברות ה-PEGs המגורה בתרביות ההשעיה התא הייתה בקורלציה לעלייה בפעילות פנילאלנין אמוניום ליאז (PAL) הנגרמת על ידי מתח אוסמוטי.

מילות מפתח Cistanche deserticola, צמח מרפא מדברי, גליקוזידים פנילתנואידים, לחץ אוסמוטי, פנילאלנין אמוניה-ליאז

Cistanchetubulosaיש השפעות רבות, לחץ כאן כדי לדעת יותר

מבוא

Cistanche deserticolaYC Ma, עשב סיני יקר, מטפיל את שורשי האממודנדרון הלוקסילון וגדל באזורים מדבריים במערב סין. Phenylethanoid glycosides (PeGs), הרכיבים הביו-אקטיביים העיקריים המבודדים מ-C. deserticola, הם בעלי פעילות ניכרת בניקוי רדיקלים חופשיים, שיפור חסינות, שיפור התפקוד המיני וכו' (Zong et al. 1996; Lu 1998; Wang et al. 2001). עקב ניצול וניצול בלתי מבוקר שלCistanche deserticola, המשאב הטבעי שלCistanche Deserticoלה היה על סף תשישות. לאור בעיות אלו, ייצור PeGs על ידי תרביות תרחיף תאים של C. deserticola נחשבה כחלופה מבטיחה לפתרון המחסור בCistanche deserticolaחומרים צמחיים (Lu and Mei 2003; Ouyang et al. 2003; Cheng et al. 2005a).

סטרס אוסמוטי הוא גורם חשוב המשפיע על צמיחת צמחים, התפתחות, מורפוגנזה ויצירת מטבוליטים משניים. ייצור משופר של מטבוליטים משניים מתרביות רקמות חוץ גופיות תחת לחץ אוסמוטי מיטבי דווח בכמה מיני צמחי מרפא (Kim et al. 2001; Wang et al. 1999; Wu et al. 2005). סוכרוז הוא חומר סטרס אוסמוטי רגיל המשמש במקרים אלה, ומשמש גם כמקור פחמן ואנרגיה חיוני. לכן, קשה מאוד להפריד בין השפעת הלחץ האוסמוטי לבין התפקיד התזונתי של הסוכרים כמקורות פחמן. עלייה במתח אוסמוטי ראשוני עם מניטול, סורביטול ו-PEG לא מטבוליים שיפרה גם את הצטברות הפקליטקסל בתרביות תאים Taxus Chinensis, הצטברות ספונין ופוליסכרידים בתרביות תאים Panax notoginseng, והצטברות eleutherosides ב-Eleutherococcus sessili et alflorus embryogenic cultures (1995 embryogenic Kim; et al. 2001; Shohael et al. 2006). התוצאות שלהם הצביעו על כך שההשפעות של ריכוז פחמימות ולחץ אוסמוטי היו שונות לפי מיני צמחים ומטבוליטים משניים.

מטרת המחקר הנוכחי מתמקדת בהשפעות האוסמוטיות של סוכרוז, מניטול, PEG ו-NaCl על צמיחת תאים וביוסינתזה של PeGs בCistanche deserticolaתרביות תרחיף תאים. פעילות PAL בתרביות ההשעיה נחקרה בשילובים שונים של חומרים אוסמוטיים ראשוניים, ונדון המנגנון האפשרי על שיפור הצטברות PeGs על ידי הגברת הלחץ האוסמוטי.

חומרים ושיטות

חומרים צמחיים ואינדוקציה של יבלת

זרעים שלCistanche deserticolaYC Ma נאספו מאזורי מדבר במחוז שינג'יאנג בסין ואוחסנו ב-4C לפני השימוש. זהות בוטנית אושרה בהשוואה לתקני ייחוס במכון לבוטניקה, האקדמיה הסינית למדעים, יחסי ציבור בסין. זרעים עברו עיקור משטח על ידי טבילה ב-70 אחוז אתנול למשך 30 שניות, ולאחר מכן טבלו בתמיסה מימית של 20 אחוזים של 5.4 אחוז נתרן היפוכלוריט במים למשך 20 דקות, ולאחר מכן שלוש שטיפות עם מים מזוקקים סטריליים. Calli הושרה מהזרעים המעוקרים על פני השטח שלCistanche deserticolaבמדיום MS (Murashige and Skoog 1962) בתוספת של 1.0 מ"ג l-1 חומצה נפטלין (NAA), 2.0 מ"ג l-1 6-בנזיל אדנין ({{7} }BA), 0.25 מ"ג l–1 2, 4-חומצה דיכלורופנוקסיאצטית (2, 4-D), 6 gl-1 אגר (PhytoTechnology LaboratoriesTM, מזהה מוצר: A181) ו-30 gl-1 סוכרוז למשך 60 ימים בארון גידול בחושך ב-25C. תרביות הקאלוס שהושרה מיציאת הזרעים הועברו לאחר מכן תת-תרבות למדיום המוצק לעיל במרווח של 30 יום (Cheng et al. 2005a).

הקמה ותחזוקה של תרביות תרחיף תאים

תרביות היבלת ההשעיה (3.0 גרם משקל טרי) שסוננו דרך מסך רשת של 1,000 lm ונשמרו על מסך רשת של 200 lm, טופלו משנה ל-500-ml Erlenmeyer בקבוק המכיל 100 מ"ל מהמדיום הנוזלי הנ"ל על שייקר סיבובי ב-110 סל"ד ב-25C בחושך במרווח תת-תרבות של 18 ימים. ה-pH הבינוני הותאם ל-5.8 עם 1 M NaOH או 1 M HCl לפני החיטוי. תרביות הקאלוס ההשעיה שהותפחו לאחר עשר פעמים שימשו כחיסון לתרבית הבקבוק הניסיוני הבא. כל הניסויים בבקבוקים בוצעו בצלוחיות של 250 מ"ל של ארלנמייר המכילות 50 מ"ל מדיום נוזלי עם 30 gl-1 סוכרוז וחוסנו עם 1.5 גרם משקל טרי של 18-תרביות תרחיף תאים בנות יום. צלוחיות Erlenmeyer אלה הודגרו על שייקר סיבובי (110 סל"ד) ב-25C בחושך.

ניסוי מתח אוסמוטי

כדי לחקור את ההשפעה של ריכוז סוכרוז ראשוני עלצמיחת תאים והצטברות PeGs,Cistanche deserticolaתרביות ההשעיה טופחו במדיום MS עם 87.6,175.3 ו-262.9 מ"מ סוכרוז. במצבי לחץ אוסמוטיים,Cistanche deserticolaתרביות ההשעיה הודגרו בטרשת נפוצהמדיום המכיל 87.6 מ"מ סוכרוז בשילוב עם164.7 מ"מ מניטול. חומרים אוסמוטיים אחרים (PEG 4,000 וNaCl) נוספו בשווה לאוסמולריות של87.6 מ"מ סוכרוז. הריכוזים השווים האוסמוטייםשל חומרים אוסמוטיים נקבעו בניסוי כ-PEG4,000 של 20 מ"מ ו-NaCl של 50 מ"מ, בהתאמה. בכל הניסויים ובכל הערכים נעשה שימוש בבקבוקים משולשיםהיו האמצעים של צלוחיות משולשות ± SD.

אָנָלִיזָה

Cistanche deserticolaתאים מתורבתים תחת לחץ אוסמוטי שונים נצפו על ידי מיקרוסקופ אור Nikon AFX-DX (Nikon, יפן) בהגדלות של 400·. האוסמולריות של מצע התרבות נמדדה עם אוסמומטר לחץ אדים (Fiske One-Ten Osmometer, MA, ארה"ב). לקביעת משקל טרי (FW), ה-Cistanche deserticolaתאים נלחצו בעדינות על נייר סינון כדי להסיר עודפי מים ונשקלו. לאחר מכן, התאים יובשו בתנור ב-60 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות והמשקל היבש (DW) נרשם. ריכוז הסוכר השיורי נקבע באמצעות פנול וחומצה גופרתית מרוכזת, תוך שימוש בגלוקוז כסטנדרט (Dubois et al. 1956).

PeGs חולצו מהתאים המיובשים עם מתנול למשך 15 דקות ב-60C באמבט מים אולטראסוני (KQ2200, Shanghai Cany Precision Instrument Co., Ltd, China) בתדר של 40 קילו-הרץ והספק של 100 ואט. התסנין היה מרוכז והשאריות מומסות במים מזוקקים ואז עברו דרך עמודת שרף מאקרו רשתית (AB-8, תוצר כימי של אוניברסיטת ננקאי, טיאנג'ין, סין). eluate המתנול נאסף ותכולת PeGs הכוללת נבדקה ב-333 ננומטר על ידי שימוש ב- echinacoside כסטנדרט (Du and Liu 1993a; Du et al. 1993b).

כדאיות התא הוערכה על ידי הפחתה של 2, 3, 5-טריפניל טטרזוליום כלוריד (TTC) (Steponkus and Lanphear 1967). מדד הכדאיות מוגדר כספיגה הנמדדת לגרם של רקמה טרייה. קביעת פעילות PAL התבססה על השיטה של ​​Koukol and Conn (1961). יחידה אחת של פעילות PAL (U) מוגדרת ככמות וריאציה של ספיגה של 0.01.

תוצאות ודיון

השפעת ריכוז סוכרוז ראשוני על צמיחת תאים וביוסינתזה של PeGs בתרביות תרחיף תאים שלCistanche deserticola.התגובה שלCistanche deserticolaנבדקו תרביות תרחיף תאים לריכוז סוכרוז ראשוני בין 87.6 ל-262.9 מ"מ. כפי שמוצג באיור 1, התאים גדלו וצברו PeGs במהירות בריכוז סוכרוז התחלתי נמוך של 87.6 מ"מ, וצמיחת התאים והצטברות PeGs דוכאו כמובן בריכוז סוכרוז התחלתי גבוה של 262.9 מ"מ. היחס בין משקל טרי למשקל יבש ירד כאשר ריכוז הסוכרוז הראשוני עלה מ-87.6 מ-262.9 מ"מ (לא מוצגים נתונים). המשקל היבש המקסימלי של 15.9 gl-1 ותכולת PeGs של 20.7 מ"ג g-1-DW התקבלו ביום 30 בריכוז סוכרוז ראשוני של 175.3 mM שמתוכו האוסמולריות הייתה כ-300 mOsm kg-1. בתצפית מיקרוסקופית, קירות התא הופרדו מהציטופלזמה שלהם בלחץ האוסמוטי הגבוה ביותר של 388 mOsm kg-1 שבו ריכוז סוכרוז התחלתי היה 262.9 mM (איור 2), והלחץ האוסמוטי הגבוה ביותר עלול להפריע לחילוף החומרים של התאים ולגרום ל דיכוי גדילה חמור וירידה בביוסינתזה של PeGs. תופעה דומה נצפתה גם בתרביות תרחיף של תרביות תאי תרחיף T. Chinensis, וריכוז הסוכרוז האופטימלי לייצור paclitaxel היה 175.3 mM (Kim et al. 2001). עם זאת, ריכוז סוכרוז ראשוני של 204.5 mM היה מועיל לצמיחת תרביות תאי E. sessiliflorus. ריכוז סוכרוז גבוה יותר של 262.9 mM שיפר את הביוסינתזה של eleutherosides, פנול ו-flavonoids בתרביות Eleutherococcus (Shohael et al. 2006). ברור שריכוז הסוכרוז הראשוני חשוב לצמיחה והצטברות מטבוליטים משניים של תרביות תאים צמחיים והשפעתו קשורה לשורת תאים ספציפית.

השפעת חומרים אוסמוטיים שונים על צמיחת תאים וביוסינתזה של PeGs בתרביות תרחיף תאים של C. deserticola

כדי להבין את התפקיד האוסמוטי של סוכרוז מטבולי ומצעים כימיים אחרים שאינם מטבוליים בביוסינתזה של PeGs בתרביות השעיית תאים שלCistanche deserticola, בוצעה סדרה של ניסויים תוך שימוש בסוכרוז בשילוב עם הסוכנים האוסמוטיים הלא-מטבוליים (מניטול, PEG ו-NaCl). בניסויים אלו, נוספו 164.7 מ"מ מניטול, 20 מ"מ PEG ו-50 מ"מ NaCl למדיום המכיל 87.6 מ"מ סוכרוז והפכו את האוסמולריות הראשונית סביב 300 מ"מ ק"ג-1, שהיה מצב אוסמוטי שווה ערך לתווך עם 175.3 מ"מ. סוכרוז.

כפי שמוצג באיור 3a, b, תוספת של מניטול (חומר אוסמוטי לא מטבולי של סוכר) ו-PEG (חומר אוסמוטי לא חדיר) עיכבה מעט את קצב צמיחת התאים אך הגברה משמעותית את הביוסינתזה של PeGs בCistanche deserticolaתרביות תרחיף תאים. תכולת PeGs המקסימלית של 26.9 ו-23.8 מ"ג g-1-DW התקבלה, בהתאמה, ביום 21 כאשר התאים גודלו בשילובים של 87.6 מ"מ סוכרוז עם 164.7 מ"מ מניטול (303 מ"מ ק"ג-1) או 20 mM PEG (299 mOsm kg–1). סכומי ה-PEG היו גבוהים מזה שלCistanche deserticolaתרביות תאים שגודלו במדיום נוזלי MS עם ריכוז סוכרוז ראשוני של 175.3 מ"מ ביום 30. סוכר נצרך בהדרגה במהלך הזמן שלCistanche deserticolaתרבית תאים, ולאחר מכן הלחץ האוסמוטי המושרה על ידי סוכר ירד בהתאם (איור 3ג, ד). הלחץ האוסמוטי של המדיום הנוזלי עם ריכוז סוכרוז ראשוני של 175.3 mM ירד מ-280 ל-110 mOsm kg-1 כאשר PeGs בתרביות התאים החלו להצטבר ביום 9 והגיעו למקסימום ביום 30 (נתונים לא מוצגים). חומרים אוסמוטיים שאינם מטבוליים (מניטול ו-PEG) לא נצרכו במהלך תרבית התא, מה שמאפשר לשמור על מתח אוסמוטי של תווך נוזלי בין 200 ל-280 mOsm kg-1, לחץ אוסמוטי נוח לביו-סינתזה של PeGs. תוצאות אלו הראו שלחץ אוסמוטי עצמו שיחק תפקיד חשוב בשיפור הביוסינתזה של PeGs בCistanche deserticolaתרביות תאים.

דווח כי תוספת של NaCl משפרת את הביוסינתזה של אינדול אלקלואידים וסאפונין בהתאמה בתרביות תאים של Catharanthus roseus ו- Panax ginseng (Smith et al. 1987; Wu et al. 2005), אך הטיפול ב-NaCl דיכא את צמיחת התאים של T. Chinensis תוך חוסר הבדל בביוסינתזה של palitaxel (Kim et al. 2001). לכן יש צורך בחקירה מפורטת לכל מקרה. תוספת של מקבילה אוסמטית של 50 mM NaCl דיכאה את צמיחת התאים ואת הביוסינתזה של PeGs. תוצאה זו עשויה לנבוע מהטבע החדיר של NaCl שאינו מועיל לתרביות התאים של זן הצמח המדברי הזה שיכול לסבול לחץ בצורת היטב.

איור 3 השפעת השילובים של סוכרוז וחומרים אוסמוטיים אחרים שאינם מטבוליים על צמיחת תאים (א), הצטברות PeGs (ב), צריכת סוכר (ג), ושינוי מתח אוסמוטי (ד) במהלך תא C. deserticola תַרְבּוּת. ערכים הם אמצעים של צלוחיות משולשות ± SD

השפעת חומרים אוסמוטיים שונים על כדאיות התא ופעילות PAL בתרביות תרחיף תאים של Cistanche deserticola

במחקרים הקודמים שלנו (Cheng et al. 2005b, 2006), תוספת מעורר גירוי באופן דרמטי את הביוסינתזה של PeGs בCistanche deserticolaתרביות תאים, והגירוי היה בקורלציה עם פעילות מוגברת של PAL, האנזים המפתח הראשון בביוסינתזה של PeGs (Hahlbrock and Grisebach 1979). כפי שמוצג באיור 4, הוספה של מניטול 164.7 מ"מ לא מטבולי או 20 מ"מ PEG לתוך מדיום נוזלי MS המכיל 87.6 מ"מ סוכרוז הפחיתה מעט את הכדאיות של התא, אך שיפרה משמעותית את פעילות PAL שהייתה גבוהה מזו שנגרמה על ידי ריכוז סוכרוז ראשוני של 175.3 מ"מ. הצטברות ה-PEGs המשופרת פנימהCistanche deserticolaתרביות ההשעיה של תאים היו קשורות לעלייה בפעילות PAL המגורה על ידי הלחץ האוסמוטי עצמו. ריכוז סוכרוז ראשוני של 175.3 mM במדיום נוזלי MS גרם לירידה בכדאיות התא תוך 15 ימים ועיכבה את פעילות PAL תוך 21 ימים. לאחר תקופה של צריכת סוכר על ידי הגידולCistanche deserticolaתרביות תאים, הן יכולת התאים והן פעילות PAL של התאים התרבותיים עלו והגיעו למקסימום ביום 24 וביום 30, בהתאמה. פעילות PAL מוגברת על ידי מתח אוסמוטי נצפתה גם כמשפרת את הביוסינתזה של ספונין בתרביות תאי P. ג'ינסנג והצטברות אלקלואידים בתאים מתורבתים של C. roseus (Godoy-Hernandez et al. 2000; Wu et al. 2005). עם זאת, הוספה של NaCl חדיר למדיום נוזלי MS המכיל 87.6 מ"מ סוכרוז הפחיתה את כדאיות התא ועיכבה את פעילות PAL במהלך כל תקופת התרבית. כתוצאה מכך, הן צמיחת התא והן הביוסינתזה של PeGs דוכאו כמובן.

איור 4 וריאציה של כדאיות התא (א) ופעילות PAL (ב) בתרביות תאים C. deserticola תחת לחץ אוסמוטי שונה במהלך שלCistanche deserticolaתרבית תאים. ערכים הם אמצעים של צלוחיות משולשות ± SD

Cistanche deserticolaהוא זן מדברי וחקירה של זן מדברי תרביות תאים במבחנה הציגו אתגרים והזדמנויות חדשות להבנת הפיזיולוגיה של הצמח והתאמות אקולוגיות. במחקר זה, פיתחנו מערכת עם פוטנציאל לחקור מסלול ביוסינתזה של העברת אותות מתווכת מתח אוסמוטי, והמערכת סיפקה את הבסיס לייצור בקנה מידה גדול של PeGs באמצעותCistanche deserticolaתרביות תאים באמצעות אסטרטגיה חדשה מווסתת מתח אוסמוטי.

תודות

המחברים מכירים בתמיכה הכספית מתוכנית המחקר החדשנות של האקדמיה הסינית למדעים.

מתוך: 'שיפור ביוסינתזה של גליקוזידים של פנילתנואידים בתרביות תאים של Cistanche deserticola על ידי לחץ אוסמוטי' מאת Chun-Zhao Liu. שי-יו צ'נג

---Plant Cell Rep (2008) 27:357–362 DOI 10.1007/s00299-007-0443-3

הפניות

Cheng XY, Wei T, Guo B, Ni W, Liu CZ (2005a)Cistanche deserticolaתרביות תרחיף תאים: ביו-סינתזה של גליקוזידים של פנילתנואידים ופעילות נוגדת חמצון. Process Biochem 40:3119–3124
Cheng XY, Guo B, Zhou HY, Ni W, Liu CZ.Cistanche deserticola. Biochem Eng J 24:203–207
Cheng XY, Zhou HY, Cui X, Ni W, Liu CZ (2006) שיפור ביוסינתזה של phenylethanoid glycosides בתרביות ההשעיה של תאי Cistanche deserticola על ידי elicitor chitosan. J Biotech 121:253–260
Du NS, Liu JL (1993a) קביעת גליקוזידים פנילתנואידים בCistanche deserticolaעל ידי ספקטרופוטומטריית שרף רשתית מאקרו. Nat Prod Res Dev 5:30–33
Du NS, Wang H, Yi YH (1993b) בידוד וזיהוי של phenylethanoid גליקוזידים מCistanche deserticola. Nat Prod Res Dev 5:5–8
Dubois M, Gilles KA, Hamilton JK (1956) שיטות קולורימטריות לקביעת סוכר וחומרים קשורים. Anal Chem 28:350–357

Godoy-Hernandez GC, Vazquez-Flota FA, Loyola-Vargas VM (2000) החשיפה לחומצה טרנס-קינמית של תאי Catharanthus roseus בלחץ אוסמוטי שהתרביתו בביוריאקטור 14-l מגבירה הצטברות אלקלואידים. Biotechnol Lett 22:921–925
Hahlbrock K, Grisebach H (1979) בקרות אנזימיות בביוסינתזה של ליגין ופלבנואידים. Ann Rev Plant Physiol 30:105–130
Kim SI, Choi HK, Kim JH (2001) השפעת לחץ אוסמוטי על ייצור paclitaxel בתרביות תאי השעיה של Taxus Chinensis. Enzyme Microb Tech 28:202–209
Koukol J, Conn EE (1961) חילוף החומרים של ארומטיים ומאפיינים של phenylalanine deaminase של Hordeum vulgare. J Biol Chem 236:2692–2698
Lu MC (1998) מחקרים על השפעת הרגעה שלCistanche deserticola.J Ethnopharmacol 59:161–165

Lu CT, Mei XG (2003) שיפור של ייצור גליקוזידים פנילאתנואידים על ידי גורם פטרייתי בתרבית תרחיף תאים שלCistanche deserticola. Biotechnol Lett 25:1437–1439
Murashige T, Skoog F (1962) מדיום מתוקן לצמיחה מהירה ולבדיקות ביולוגיות עם תרביות רקמת טבק. Plant Physiol 15:473–497
Ouyang J, Wang XD, Zhao B, Yuan XF, Wang YC (2003) השפעת יסודות אדמה נדירים על הצמיחה שלCistanche deserticolaתאים וייצור של גליקוזידים פנילתנואידים. J Biotechnol 102:129-134
Shohael AM, Hakrabarty D, Ali MB, Yu KW, Hahn EJ, Lee HL, Paek KY (2006). Process Biochem 41:512–518
Smith JL, Smart NJ, Kurd WGW, Misawa M (1987) השימוש בתרכובות אורגניות ואי-אורגניות להגברת הצטברות של אלקלואידים אינדולים בתרביות תאי תאי Catharanthus Roseus (L.) Don. J Exp Bot 38:1507–1511
Steponkus PL, Lanphear FO (1967) חידוד של שיטת הטריפניל טטרזוליום כלוריד לקביעת פגיעת קור. Plant Physiol 42:1423-1426Wang HQ, Wu JT, Zhong JJ (1999) שיפור משמעותי של ייצור טקסאן בתרביות ההשעיה של Taxus Chinensis על ידי אסטרטגיית האכלה של סוכרוז. Process Biochem 35:479–483
Wang XW, Jiang XY, Wu LY, Wang XF (2001) אפקט ניקוי של גליקוזידים שלCistanche deserticolaעל רדיקלים חופשיים והגנתם מפני נזקי DNA הנגרמים על ידי OH במבחנה. Chin Pharm J 36:29–31
Wu JY, Wong K, Ho KP, Zhou LG (2005) שיפור של ייצור ספונין בתרבית תאי ג'ינסנג של Panax על ידי מתח אוסמוטי והזנה של חומרים מזינים. Enzyme Microb Technol 36:133-138
Zhang YH, Zhong JJ, Yu JT (1995) השפעת לחץ אוסמוטי על צמיחת תאים וייצור של ג'ינסנג ספונין ופוליסכריד בתרביות השעיה של Panax Notoginseng. Biotechnol Lett 17:1347–1350
Zong GZ, He W, Wu GL, Chen LH (1996) השוואות ביןCistanche deserticolaYC Ma ו- Cistanche tubulosa (Scheak) Wight כמה פעילויות פרמקולוגיות. Tradit Chin Med J 21:436–438