ABSTＲACT

המטרה: להבהיר אם כלליציסטנוזידים(GCs) משפרחוסר תפקוד קוגניטיביעכברים מזדקנים במהירות (SAMP8) על ידי תיווך קולטנים אנדרוגנים ספציפיים (AＲ) בויסות ביטוי של חלבון סינפטי． 

שיטות: סך של 76 7-עכברי SAMP8 זכר בני חודש חולקו באופן אקראי לקבוצת המודל, קבוצת GCs, קבוצת GCs + פלוטמיד (F), קבוצת GCs + fulvestrant (ICI), קבוצת F וקבוצת ICI. תפקודי הלמידה והזיכרון של עכברים בכל קבוצה נבדקו עם מבוך המים של מוריס. נעשה שימוש ב-Western blotting ו-RT-PCR כדי לבדוק אתרמת הביטוי של סינפטופיזין(SYN), צפיפות פוסט-סינפטית - 95 (PSD - 95), והגורם הנוירוטרופי שמקורו במוח (BDNF) של עכברים בכל קבוצה.

תוצאות: GCs שיפרו משמעותית את הלמידה והתפקוד הקוגניטיבי של עכברי SAMP8.

בהשוואה לקבוצת GCs, תפקוד הלמידה והזיכרון של עכברים בקבוצת GCs + F וקבוצת GCs + ICI ירד משמעותית. תוצאות Western blotting ו-RT-PCR הראו שרמת הביטוי של BDNF, SYN ו-PSD–95 עלתה משמעותית ברמת החלבון וברמת הגנים בקבוצת GCs בהשוואה לקבוצת המודל (P ＜ 0． {{ 11}}5) . רמת הביטוי SYN עלתה בקבוצת GCs + F ו- GCs + ICI, ורמות הביטוי של BDNF ו-PSD - 95 ירדו באופן משמעותי בקבוצת GCs + F ו- GCs + ICI בהשוואה לקבוצת GCs (P ＜ 0． 05) ．

מסקנה: GCs עשויים לתווך ספציפית AＲ כדי לשפר את הפלסטיות הסינפטית בעכברי SAMP8, אשר בתורו משפרת את הלמידה והתפקוד הקוגניטיבי.

מילות מפתח:ציסטנוזידים כלליים; קולטן אנדרוגן; פלסטיות סינפטית; עכברי SAMP8

תוסף Cistanche שיפור תפקוד קוגניטיבי תוסף תזונה PhGs75% Ech 30% Act 12%

מחלת אלצהיימר(AD) הוא נפוץמחלה ניוונית נוירולוגית, מאופיין קלינית בירידה מתקדמת בתפקוד קוגניטיבי ושינויים במצב נפשי ופסיכולוגי [1]. מחקרים מצאו כי רמות הטסטוסטרון בחולי AD נמוכות משמעותית מאשר בגברים רגילים.

התפקוד קוגניטיבי של מטופליםשופר בדרגות שונות לאחר מכןטיפול חלופי קטון[2], מה שמצביע על כך שירידות הקשורות לגיל ברמות האנדרוגן עשויות להיות גורם סיכון ל-AD בגברים מבוגרים.

Cistanche deserticola כלל גליקוזידים (ציסטנוזידים כלליים, GCs) הם אחת התמציות העיקריות של Cistanche deserticola, שיכולות לשפר למידה הקשורה ל-ADחוסר תפקוד קוגניטיבי[3]. בנוסף, מתן GCs על ידי מתן נתון העלה משמעותית את רמות הטסטוסטרון בבעלי חיים [4]. ל-GCs יש גם את הפונקציה של קידום היאנג והם יכולים להתאמץ

השפעות פרמקודינמיות דמויות אנדרוגן. מחקרים קודמים דיווחו כי טסטוסטרון יכול לשפר את הלמידה והתפקודים הקוגניטיביים של חיות מודל AD, ותהליך זה מסתמך על קולטן אנדרוגן ספציפי (קולטן אנדרוגן, AR) המתווך [5].

ידוע היטב שחוסר תפקוד קוגניטיבי בחולי AD קשור קשר הדוק לפלסטיות הסינפטית. עם זאת, המנגנון הספציפי שבאמצעותו GCs מווסתים את הפלסטיות הסינפטית ובכך משפרים למידה ותפקודים קוגניטיביים עדיין לא ברור. מחקר זה נועד לחקור האם GCs מתווך AR ספציפי כדי להשפיע על הפלסטיות הסינפטית ובכך לשפר למידה ותפקודים קוגניטיביים בAD.

1 חומרים ושיטות

1. 1 חיות ניסוי וציוד

עכברי SAMP8 זכרים 3-בני חודש נרכשו מבית הספר לרפואה של אוניברסיטת פקינג (SCXK [בייג'ינג] 2016-0010) וגודלו עד גיל 7 חודשים. בעלי חיים הוחזקו בסביבה נקייה ב (24 ± 1) מעלות ו

לבעלי החיים ניתנה תאורה טבעית, וגישה חופשית למזון ומים, וניתן טיפול הומניטרי בהתאם לעקרונות 3R לשימוש בחיות ניסוי. מחקר ניסיוני זה אושר על ידי ועדת האתיקה של בעלי חיים ניסויים של המכללה הרפואית באוטו (Baotou Medical College מס' 20201102).

הריאגנטים העיקריים בניסוי הם:כלל גליקוזידים של Cistanche deserticola(GCs, Xi'an Ciyuan Biological Co., Ltd.); אנטגוניסט לקולטן אנדרוגן-פלוטמיד (Sigma Company, ארה"ב); Antagonist-fulvestrant לקולטן אסטרוגן (ICI 182780, USA) Med Chem Express); נוגדן BDNF אנטי עכבר לארנב,

נוגדן PSD-95, נוגדן SYN, נוגדן -אקטין (Proteintech Company של ארצות הברית); תמיסת אלקטרופורזה של חלבון, תמיסת העברת חלבון, TEMED, חיץ אקרילאמיד, אמוניום פרסולפט, Tris (Beijing Solebao Technology Co., Ltd.); ערכת סינתזה של cDNA, זיהוי כמותי של פלואורסצנטי כישרון

ערכת ריאגנטים (Tiangen Biochemical Technology Co., Ltd.), וכו'. הציוד הניסיוני העיקרי כולל מיכל אלקטרופורזה לצלחת אנכית, מנגנון אלקטרופורזה, מיכל העברה, שייקר להפחתת צבע (Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd.), מערכת ניתוח הדמיה בג'ל חלבון (Shanghai Tanon Technology Co., Ltd.), מכשיר PCR כמותי הקרינה בזמן אמת (ארה"ב Roche) וכו'.

1. 2 קיבוץ ואדמיניסטרציה

שני עכברים מתו באופן טבעי במהלך תהליך ההאכלה, ו-78 העכברים הנותרים חולקו באופן אקראי לקבוצת מודל, קבוצת GCs, קבוצת GCs + פלוטמיד (F), קבוצת GCs + fulvestrant (ICI), קבוצת F, ICI

קבוצות של 13 חיות כל אחת. מלבד קבוצת המודל, קבוצת F וקבוצת ICI, לקבוצות האחרות ניתנו GCs ברציפות במינון של 50 מ"ג/(ק"ג·ד) למשך 30 ימים.

מהיום ה-24 לאחר מתן GCs, קבוצת GCs + פלוטמיד (F) וקבוצת GCs + fulvestrant (ICI) קיבלו הזרקה תוך צפקית של F (5 מ"ג/ק"ג/ד) 3 0 דקות לאחר מתן GCs. על ידי זנות. ), ICI (1 מ"ג/ק"ג/ד), הזרקה רציפה למשך 7 ימים. התאם את ריכוז המינון כדי להבטיח שנפח הקיבה המרבי של העכברים הוא 0. 5 מ"ל, פעם אחת ליום.

1. 3 מבחן מבוך המים של מוריס

העכברים הסתגלו לסביבת המים יום אחד מראש. מבוך המים של מוריס נמשך 6 ימים. 5 הימים הראשונים היו מבחן המיקום והניווט. העכברים אומנו פעם ביום בכל אחד מארבעת הרביעים במשך דקה אחת בכל פעם. כל מרווח אימונים היה 15 דקות, ושיאים נרשמו באותו זמן. חביון בריחה של בדיקת המיקום והניווט של בעלי החיים; ביום השישי, הסר את הפלטפורמה מהמים וערוך בדיקת חקר החלל. רשום את מספר מעברי הפלטפורמה ואת אחוז הזמן המושקע ברביע היעד של העכבר. ברביע המטרה) ומסלול שחיית חקר מרחבי (מסלול שחייה של מבחן בדיקה מרחבית) ואינדיקטורים אחרים.

1. 4 זיהוי כתם מערבי

ביטוי של חלבונים הקשורים לסינפסות SYN, PSD-95 ו-BDNF. לאחר בדיקת מבוך המים של מוריס, כל העכברים הורדמו באופן שגרתי, ראשיהם נערפו, המוח שלהם הוסר וההיפוקמפי שלהם הופשטו. רקמת ההיפוקמפוס עברה ליטוש חלבון, שיבשה על ידי אולטרסאונד ב-4 מעלות, הושארה על קרח למשך 30 דקות, וצנטריפוגה ב-12,000 r/min למשך 15 דקות ב-4 מעלות. הסופרנטנט נלקח, וריכוז החלבון נמדד בשיטת BCA. לאחר העמסת החלבון, בצע אלקטרופורזה של ג'ל ערימה במתח קבוע של 80 וולט, אלקטרופורזה של ג'ל הפרדה במתח קבוע של 120 וולט, והעברה רטובה בזרימה קבועה של 300 mA; הוצא את קרום ה-PVDF, חסום אותו עם חלב דל שומן 5% למשך 80 דקות בטמפרטורת החדר, ושטוף את הממברנה שלוש פעמים עם TBST. 15 דקות לזמן, נוגדן ראשוני הודגרה למשך הלילה על שולחן רועד ב-4 מעלות; למחרת, הממברנה נשטפה 3 פעמים עם TBST.

15 דקות/זמן, הנוגדן המשני הודגר בטמפרטורת החדר למשך 2 שעות, לאחר מכן בוצע פיתוח צבע ECL, והדמיה בוצעה עם מערכת הדמיה כימילומינסנציה. -אקטין שימש כהתייחסות פנימית, וערך הצפיפות האופטית של הלהקה נותח באמצעות תוכנת Image J.

1. 5ＲRT－PCRＲזיהוי

ביטוי ה-mRNA של SYN, PSD-95 ו-BDNF הופץ מ-RNA הכולל של רקמת ההיפוקמפוס לפי שיטת מיצוי Trizol, ו-cDNA נוצר לאחר שעתוק הפוך. ערכת זיהוי כמותי הקרינה טאלנט שימשה לזיהוי כמותי פלואורסצנטי יחסי. הניסוי חזר על עצמו שלוש פעמים, והתוצאות הומרו ל-2 - ΔΔCT נותח. פריימרים של עכבר -אקטין, SYN, PSD-95 ו-BDNF תוכננו על ידי חברת Shanghai Sangon, ורצפי הפריימרים מוצגים בטבלה 1.

1. 6 ניתוח סטטיסטי

באמצעות SPSS 25. 0 תוכנה סטטיסטית לעיבוד, תוכנת Graphpad Prism 8 שימשה לציור גרפים סטטיסטיים, ו-ANOVA חד כיווני שימש להשוואת אמצעים זוגיים של דגימות מרובות. P < 0. 05 אומר שההבדל מובהק סטטיסטית.