השפעות של ציסטאנצ'ה Deserticola סך גליקוזידים על פגיעה בלחץ חמצוני ואפופטוזיס תאי בחולדות עם איסכמיה מוחית-רפרפוזיה Ⅰ

אבסטלהתעסק

המטרה: לחקור את ההשפעות והמנגנונים האפשריים שלCistanche deserticola סך גליקוזידים(GCs) על נזקי מתח חמצוני ואפופטוזיס של תאי עצב בחולדות עם מוחפציעת רעפרפוזיה של איסכמיה(CIRI).

שיטות: מודל חסימת עורק המוח האמצעי (MCAO) נבנה בחולדות מודל בשיטת אמבוליזציה של תפרים. לאחר ביסוס המודל בהצלחה, החולדות בקבוצת התרופות (GCs) קיבלו GCs 50 מ"ג/(ק"ג·ד) במתן מתן במשך 14 ימים רצופים; החולדות בקבוצת הניתוח הדמה (Sham) וקבוצת המודל (Model) קיבלו אותו נפח של תמיסת מלח רגילה. ניהול בעל פה. לאחר המתן, נעשה שימוש בשיטת Longa ציון להערכת החסר הנוירולוגי; לאחר מכן הוקרבו חולדות, ובוצעה צביעת TTC כדי לחשב את אחוז שטח האוטם המוחי; שיטת ELISA שימשה לזיהוי סרוםמלונדאלדהידתוכן (מד"א),סופראוקסיד דיסמוטאז(SOD) וגלוטתיון פרוקסידאז (GSH-Px)פעילות; כתם מערבי לזיהוי גורם גרעיני E2-קשור לגורם 2 (Nrf2), heme oxygenase-1 (HO-1) ו-B ברקמת המוחלימפומה תאית/לוקמיה-2 (Bcl-2), Bcl-2-משויך חלבון X (Bax), וביטוי קספס-3 (Caspase-3).

תוצאות: בהשוואה לקבוצת הדמה, לקבוצת המודל היה ציון ליקוי נוירולוגי מוגבר, עלייה באחוז שטח אוטם מוחי,עלייה בתכולת MDA, הפחתת פעילויות SOD ו-GSH-Px, והפחתה של רמת ביטוי החלבון Nrf 2, HO -1 ו-Bc l-2 רמות ביטוי החלבון של Bax ו-Caspase-3 עלו; בהשוואה לקבוצת המודל, ציון החסר הנוירולוגי של חולדות בקבוצת GCs ירד, אחוז אזור האוטם המוחי ירד,תכולת מד"א ירדה, פעילות SOD ו-GS H-Px עולה, רמות ביטוי החלבון של Nrf 2, HO -1 ו-Bcl - 2 עלו, ורמות ביטוי החלבון של Bax ו-Caspase - 3 ירדו. מסקנה: GCs יכולים להפחית ביעילות פציעת איסכמיה-פרפוזיה מוחית, והמנגנון שלה עשוי להיות קשור להפעלת מסלול Nrf 2 / HO - 1, ובכך להפחית את רמות הלחץ החמצוני ולעכב אפופטוזיס של תאי עצב.

[מילות מפתח]Cistanche deserticola סך גליקוזידים; פגיעה באיסכמיה מוחית-רפרפוזיה; מתח חמצוני; אפופטוזיס של תאים

תמצית CISTANCHE אורגני טבעי

לחץ כדי לקבל פרטים נוספים

השירות התומך של Wecistanche - יצואנית ה-cistanche הגדולה בסין:

דוא"ל:wallence.suen@wecistanche.com

ווטסאפ/טלפון:+86 15292862950

קנה לפרטי מפרטים נוספים:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

איסכמיה-רפרפוזיה מוחית,

CIS היא מחלה עם מאודתחלואה גבוהה, נָכוּתושיעורי תמותה. תאי המוח רגישים ביותר לאיסכמיה והיפוקסיה, ולכן ניתוח מחדש של כלי דם מוחיים בהקדם האפשרי הוא הדרך היעילה ביותר להתמודד עם שבץ איסכמי חריף. פקקת תוך ורידי וכריתת פקקת מכנית הן כיום שיטות בשימוש נרחב, אך בשל היחס היחסית שלהן.

בשל חלון הזמן הצר וגורמים בלתי נשלטים אחרים, בלבד<10% of stroke patients can achieve vascular recanalization within an effective time. ריפרפוזיה של איסכמיה מוחית, CIRI הוא סוג של התאוששות כלי דם מוחיים מהיצרות. נזק פתולוגי מועלה המתרחש במהלך זרימת הדם. כיום מאמינים שהמנגנון הפתולוגי שלו עשוי להיות קשור לרעילות חומצות אמינו מעוררות, עומס יתר של סידן, שחרור גורמים דלקתיים והצטברות של רדיקלים חופשיים של חמצן הנגרמים על ידי נזק למיטוכונדריאלי [1], מה שמוביל בסופו של דבר להרס מחסום דם-מוח, הפרעות במחזור הדם. , אפופטוזיס של תאי עצב, ונמק [1] 2] וסדרה של תגובות, ובכך מחמירות עוד יותר את החסר הנוירולוגי.

הגליקוזידים הכוללים של Cistanche deserticola (גליקוזידים של cistanche, GCs) מופקים מהרפואה הסינית המסורתית Herba Cistanche החומר הפעיל העיקרי מופק מהגבעולים והשורשים של אינצ'ים). מחקרים קודמים הראו ש-GCs יכולים לעכב ביעילות פרוקסידציה של שומנים, לשפר את תפקוד המיטוכונדריה, לסלק עודף רדיקלים חופשיים של חמצן, לעכב שחרור של ציטוקינים דלקתיים, להפחית ציטוטוקסיות, נגד צבירה של טסיות דם, לעכב שגשוג תאים, לעכב אפופטוזיס עצבי ולהפחית את רמות ההורמונים, ובכך יש אנטי אייג'ינג, אנטי גידולים, אנטי דיכאון, שיפור חסינות, שיפור מחלות לב וכלי דם איסכמיות במוח, שיפור יכולות למידה וזיכרון ותפקודים קוגניטיביים, ושיפור רבייה [3].

מחקרים הראו כי GCs יכולים להפחית נזק חמצוני לתאים ולשמור על שלמות מחסום הדם-מוח.

[4]; GCs יכולים לשפר ביעילות את כדאיות התא ולחסום דלקת ואפופטוזיס הנגרמות לאחר איסכמיה-פרפוזיה מחדש [5]; Nrf 2 ממלא תפקיד חשוב בתהליכים אנטי דלקתיים ונוגדי חמצון [6]. בהתבסס על הרקע לעיל, מאמר זה נועד להמשיך ולחקור את ההשפעות והמסלולים האפשריים של GCs על עקה חמצונית ואפופטוזיס לאחר CIRI על ידי שכפול מודל CIRI.

1 חומרים ושיטות

1. 1 תרופות וריאגנטים GCs (SN-5692, טוהר 98%, מערבי

Anshenong Biotechnology Co., Ltd.), תמיסת צבע טריפנילטטרזוליום כלוריד (TTC) 2% (Beijing Solebao Technology Co., Ltd.), ערכת ELISA (Beijing Boosen Co., Ltd.), ערכת ניתוח כמותי חלבון BCA (USA Cell Signaling חברת טכנולוגיה), נוגדנים נגד ארנבים Bcl-2, Bax, Caspas נוגדנים כגון e-3, Nrf 2, HO-1, ונוגדנים משניים נגד ארנב לעזים נרכשו כולם מ- חברת פרוטינטק מארצות הברית.

1. 2 כלים

צנטריפוגה (דגם: TDL-40B, Shanghai Anheng Scientific Instrument Factory), קורא Microplate (דגם: Max-M5, American Molecular Devices Company), מכשיר אלקטרופורזה SDS-PAGE (דגם: DYY-7C, Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. Company), סורק ג'ל (דגם: 4466611, US BIO-RAD Company).

1. 3 חיות

חולדות Wistar זכר [SCXK (בייג'ינג) 2019-0010], כיתה נקייה, בני 8 שבועות, משקל גוף 250-280 גרם.

1. 3 שיטות

1. 3. 1 קיבוץ ודוגמנות

חולדות חולקו לקבוצת דמה (Sham), קבוצת מודל (Model) וקבוצת תרופות (GCs) באמצעות שיטת אקראית פשוטה. בכל קבוצה היו 15 חולדות. הם גידלו בצורה אדפטיבית במשך שבוע ולאחר מכן עיצבו מודלים. בצום וצום קפדני 12 שעות לפני הניתוח, קבוצת המודל וקבוצת ה-GCs השתמשו בשיטת אמבוליזציה של תפרים [7] כדי ליצור חסימה של עורק המוח האמצעי (חסימת עורק המוח האמצעי). חסימה, MCAO) מודל עכברוש, הסרת תסחיפים בוצעה לאחר שעתיים של איסכמיה כדי להשיג רפרפוזיה. , רשום את שעת ההתחלה של הפרפוזיה מחדש. הפצע נתפר, העור חוטא ביודופור, והחיות הוחזרו לכלוב וגודלו, ולאחר מכן זרמו במשך 24 שעות. הניתוח של החולדות בקבוצת דמה היה זהה לזה של החולדות הדוגמניות, אך לא בוצע סתימה. לבסוף, 10 חולדות בכל קבוצה נשמרו לניסויים הבאים.

1. 3. 2. שיטת ניהול

קח אבקת GCs והוסף מים טהורים להכנת תמיסה של 15 מ"ג/מ"ל. מחקרים ראשוניים הראו שהמינון של 50 מ"ג/(ק"ג·ד) טוב יותר מקבוצות מינון אחרות [8], ולכן המינון שנבחר לניסוי זה זהה לקודם. חולדות בקבוצת GCs קיבלו GCs על ידי מתן מתן לאחר 24 שעות של איסכמיה וריפרפוזיה, וחולדות בקבוצת Sham וקבוצת המודל קיבלו נפח שווה של תמיסת מלח רגילה על ידי מתן נתון למשך 14 ימים.

1. 3. 3 ציון גירעון נוירולוגי

שיטת הניקוד של Longa [7] שימשה לציון 24 שעות לאחר הניתוח, וחולדות מודל עם ציונים של 1 עד 3 נשמרו לניסויים הבאים. ציון לאחר המנה האחרונה. 0 נקודות: אין

תסמינים נוירולוגיים; נקודה אחת: ליקוי נוירולוגי קל, הגפה הקדמית הנגדית מתגמשת ומתרוממת כאשר הזנב מורם, והכתף מתרפקת; 2 נקודות: ליקוי נוירולוגי בינוני, הגפה הקדמית הנגדית מתגמשת ומתרוממת כאשר הזנב מורם, אדוקציה לכתף, סיבוב במעגלים לצד הנגדי של הנגע בהליכה; 3 נקודות: ליקוי נוירולוגי חמור, הישענות לצד הנגדי של הנגע בהליכה; 4 נקודות: פעילות לא מודעת ואוטונומית.

1. 3. 4 קביעת אחוז אזור האוטם המוחי

לאחר המתן האחרון, 4 חולדות מכל קבוצה נבחרו באקראי, הורדמו עמוק, ערפו את ראשם ומוחותיהם הוסר במהירות.

הקפיא במהירות את רקמת המוח במקרר של -20 מעלות למשך 20 דקות. לאחר שרקמת המוח מקובעת יחסית, הוציאו אותה. החל מהצומת של הקוטב הקדמי של המוח אל הכיאזמה האופטית, ומהמצח ועד העורף, חתכו את מוח החולדה לאורך מישור העטרה. חותכים ל-5 פרוסות מוח בעובי 2 מ"מ, טובלים בתמיסת TTC 2%, מניחים באמבט מים 37 מעלות לצביעה למשך 15 דקות, הופכים אותם וצובעים לעוד 15 דקות. לבסוף, פרוסות המוח הוטבלו בתמיסת פרפורמלדהיד 4% ותוקנו במשך 12 שעות לפני הצילום. רקמת מוח תקינה הוצגה באדום ורקמת מוח אוטמת הוצגה בלבן. השתמש בתוכנת תמונות כדי לנתח ולחשב את שיעור האוטם של כל פרוסת מוח. שיעור אוטם=שטח אוטם/שטח כולל של פרוסת המוח × 100%.

1. 3. 5 איתור אינדיקטורים הקשורים ללחץ חמצוני

הרדימו את החולדה, קח 4 מ"ל של דם אבי העורקים הבטני, חלק אותו לתוך צינורות EP נקיים והנח אותו במקרר 4 מעלות למשך 0. צנטריפוגה ב-3 500 r/min במשך 5 שעות ב-4 מעלות למשך 15 דקות, קח את הסופרנטנט, ולבסוף שמור את הסרום של 3 חולדות בכל קבוצה. תכולת המלונדיאלדהיד (MDA) וסופראוקסיד דיסמוטאז (סופראוקסיד דיסמוטאז) נקבעה על פי שיטת הפעולה של ערכת ELISA. e dismutase,

SOD), פעילות גלוטתיון פרוקסידאז (גלוטתיון פרוקסידאז, GSH-Px).

1. 3. 6 איתור כתם מערבי

סטרס חמצוני וחלבונים הקשורים לאפופטוזיס נמדדו כדי למדוד את הביטוי של חלבוני Nrf 2, HO -1, Bcl -2, Bax ו-Caspase -3 ברקמת המוח. שלוש חולדות נבחרו מכל קבוצה, ונלקחה כמות מתאימה של קליפת המוח מהאזור החולה, נוספה לה תמיסת תמוגה וריכוז החלבון חושב לאחר מיצוי החלבון. לאחר אלקטרופורזה של ג'ל חלבון, העבר לממברנה, חסימה עם תמיסה חוסמת למשך שעתיים, שטיפה, ולאחר מכן הודגרה עם נוגדן ראשוני ב-4 מעלות למשך הלילה, למחרת, ה-TBST הוסר, נשטף, והוסף נוגדן משני לדגירה למשך 2 ח. הנח את פס היעד על מנתח ההדמיה כדי לנתח את הערך האפור. חשב את הערך היחסי של הרצועה האפורה, הערך היחסי של הרצועה האפורה=ערך הרצועה האפורה / הערך האפור של רצועת ההתייחסות הפנימית.

1. 4 שיטות ניתוח סטטיסטי

תוכנת אפליקציית הנתונים SPSS 25. 0 לניתוח נתונים, והגרפים הסטטיסטיים במאמר זה צוירו עם תוכנת GraphPad Prism 8. תוצאות הנתונים התואמות את ההתפלגות הנורמלית מבוטאות כממוצע ± סטיית תקן. ניתוח שונות של גורם אחד שימש להשוואות בין דגימות מרובות, ו-LSD-t שימש להשוואה בין שתי דגימות בלתי תלויות. מבחן, עם P < 0. 05 מציין שההבדל מובהק סטטיסטית.