Cistanche תזונתיים הקלה על נזקי אילאום חריפים של ברווז

תקציר: Aflatoxin B1 (AFB1) הוא מטבוליט רעיל יציב המאיים על בריאותם של בני אדם ובעלי חיים ומזון לבעלי חיים ומזון אנושי מזוהם נרחב. מטרת המחקר הנוכחי הייתה לחקור את ההשפעות שלcistanche דיאטטיעל פציעת ileum בברווזים הנגרמת על ידי ניהול AFB1 ולחקור את המנגנונים הבסיסיים שלה. ברווזים (N=450, זכר בן יום) עם משקל דומה חולקו באקראי ל-3 קבוצות, המכילות את קבוצת הביקורת, קבוצת AFB1 (60 מיקרוגרם AFB1 kg-1 משקל גוף) וציסטאנצ'ה (500 מ"ג). דיאטת cistanche kg−1) בתוספת קבוצת AFB1. מתן AFB1 הגביר באופן ניכר את הנזק לאילאום, AFB1-תוספות DNA בפלזמה, ולחץ חמצון ודלקת. הוספת cistanche לתזונה הגנה על ה-ileum מפני נזק מורפולוגי הנגרם על ידי מתן AFB1, הפחתת תוספות AFB1-DNA בפלזמה, וביטלה מתח חמצון ודלקת באילאום של ברווזים.אנטי חמצוןואנטי דלקתי השפעות של cistancheיכול להגן על ileum מפני נזק חריף על ידי הפעלת מסלול איתות Nrf2-ARE ועיכוב מסלול איתות NF-κB. באופן סופי,cistancheהיה דיאטטיאנטי חמצוןואנטי דלקתסוכן באמצעות הפעלת מסלול איתות Nrf2-ARE ועיכוב של מסלול איתות NF-κB נזק אקוטי שנגרם על ידי מתן AFB1.

מילות מפתח:cistanche; אילאום חריף; AFB1-תוספי DNA; Nrf2-ARE;

לחץ כאן למוצרי אנטי אייג'ינג של Cistanche

תבקש עוד:

דוא"ל:wallence.suen@wecistanche.com Whatsapp פלוס 86 15292862950

1. הקדמה

בשר הוא מקור חשוב לחלבון איכותי לתזונת האדם. בשר ברווז נצרך בשפע ברחבי העולם, במיוחד באסיה בגלל המאפיינים התזונתיים הרצויים שלו [1]. לכן, גידול ברווזים משך את תשומת הלב של אנשים. עבור ברווזים, ישנם חסרונות שונים בתהליך הרבייה, כגון AFB1 המאיימים על בריאות הברווזים. אפלטוקסין B1 (AFB1) הוא אחד המטבוליטים הרעילים בטבלה המיוצרים על ידי מיני אספרגילוס. AFB1 מוכר כרעיל ביותר מבין קבוצות האפלטוקסין (AF), יחד עם מגוון של השפעות רעילות המאיימות על בריאותם של בני אדם ובעלי חיים [2].

עבור אנשים או בעלי חיים, מזון או מזון הם דרך נפוצה וחשובה לחשיפה ל-AFB1, אך גם שאיפה ומגע ישיר עם מגע עור או רירית נספרים ולא מתעלמים מהם [3]. מחקרים קודמים הוכיחו כי AFB1 מפעיל רעילות חזקה שהיא מורכבת וחזקה מאוד, וכתוצאה מכך לעיכוב בגדילה, מומים ביולוגיים, רעילות בכבד, הפרעות במערכת העיכול ואפילו סרטן [4,5]. ל-AFB1 שהתקבל ממגע עם מזון או רירית היו השפעות שליליות על מערכות הנשימה, מערכת העיכול והרקמות וביצועי גדילה [3,6,7]. נזקי רקמות ואיברים הנגרמים על ידי מתן AFB1 הקשורים ללחץ חמצון ודלקת. ניהול AFB1 מסומן ב-AFB מוגבר1-תוכן מוסיף DNA באיבר פצוע [8]. הספיגה וההמרה של חומרים מזינים ורעלים התרחשו בקיבה ובמעי הדק, ולכן הקטנה

מערכת החיסון של רירית המעי היא הקו הראשון להגנה על הגוף מפני פגיעה [9]. הפונקציונליות והמורפולוגיה של מערכת העיכול הבריאותית עלולה להיהרס על ידי גורמים שליליים כמו רעילים, חיידקים ווירוסים [10,11]. AFB1 גרם להרס של מבנה המעי, המתבטא בנשירה של תאי אפיתל ב- jejunal villus וחדירת תאים לימפוציטים במעי של עוף [12,13]. ניתן לייחס את הפונקציונליות והמורפולוגיה השונות לתהליך של חילוף החומרים של רעלנים המלווה לעתים קרובות בדלקת בעקה חמצונית. זה עניין דחוף למצוא תרופת נגד כדי להפחית ולמזער את האיום של AFB1 עבור אנשים ובעלי חיים.

כתוצאה מכך, AFB1 הוא אחד הדאגות הבולטות בתעשיית העופות בשל הרעילות החזקה שלו. cistanche הוא מעין רכיב פוליפנול המופיע בקני שורש כורכום (Cur cuma Longa Linn) כתוסף מזון פונקציונלי המשמש במזון לבעלי חיים [14], ונמצא בשימוש נרחב

כתבלין ירוק וטבעי, צבע, חומר משמר וטעם בתעשיית המזון. תמציות צמחים כגון cistanche המכילות פוליפנולים שיפרו את חסינות הגוף [15]. cistanche ממלא תפקיד מפתח נגד מצבים ופעילויות פתולוגיות-פתולוגיות בתיווך מתח חמצוני כאשר הוא משמש כטיפול לטיפול ומניעה של מחלות כרוניות [16,17]. הניסויים הקליניים הצביעו על כך של-cistanche אין רעילות או תופעת לוואי חמורה, ועם תכונות אנטי-סרטניות ואנטי-טוקסיקגניות, שהובילו ל-cistanche כחומר כימו-מונע אטרקטיבי נגד נזק לרקמות המושרה ב-AFB1- [18-20]. הספרות הוכיחה כי ל-cistanche יש יכולת אנטי דלקתית, אנטי אפופטוזיס ונוגדי חמצון על ידי הפעלת מסלול Nrf2/HO-1, יכולת נוגדת חמצון מווסתת להעלמת דלקת ולחץ חמצוני בגוף ולחסל את AFB1-הנגרמת עקה חמצונית [21-25]. cistanche דיכא מתח חמצון והיווצרות דלקתיות על ידי הפעלת Nrf2-ARE ועיכוב מסלול איתות NF-κB בדמוני כליות שאריות [26], תכונות נוגדות חמצון ואנטי דלקתיות. בנוסף, cistanche תזונתיים שיפר משמעותית את יכולת נוגדי החמצון בפטמות [27] וברווזים [28]. לא היה ניסיון לתאם את התפקיד של cistanche במסלול איתות Nrf2-ARE ו-NF-κB ובמודל החיות של מתן AFB1 חריף.

מחקר זה שפך אור על סוגיה זו ונתן בסיס תיאורטי ל-cistanche כתוסף מזון להגנה על בריאות הברווז מפני מתן AFB1 ולהפחתת הפסדים כלכליים של תעשיות מזון וגידול שנגרמו מזיהום AFB1.

2. חומרים ושיטות

2.1. כימיקלים

cistanche נרכש מ-Nanjing Nutri-herb Biotech Co., Ltd. (Nanjing, Jiangsu, China, CAS: 458-37-7), הטוהר שלו היה יותר מ-98 אחוזים לפי ניתוח HPLC. AFB1 (טוהר גדול מ-98 אחוזים או שווה ל-, CAS מס. 1162-65-8) נרכש מ-Shanghai Yuan ye Bio-Technology Co., Ltd. (Shanghai, סין). נוגדנים ששימשו במחקר זה נרכשו מ-Bey time Biotechnology, שנחאי, סין, כולל GAPDH (מספר קטלוגי: AG019), Nrf2 (מספר קטלוגי: AF7623), Phospho-NF-κB p65 (Ser276) (מספר קטלוגי: AF5875), HRP שכותרתו עז נגד ארנבת IgG (H ועוד L) (מספר קטלוגי: A0208) ועז עם תווית HRP

Anti-Mouse IgG (H ועוד L) (מספר קטלוגי: A0216).

2.2. ברווזים ובעל

פרוטוקול הניסוי נערך בהתאם לפרקטיקות המתוארות במדריך לטיפול ושימוש בבעלי חיים חקלאיים במחקר והוראה בחקלאות של האוניברסיטה החקלאית הצפון-מזרחית (מספר פרוטוקול: NEAU-[2011]-9).

ברווזים (n {0}}, זכר ליום אחד Anas platyrhynchos, 33.8 ± 0.2 גרם) ללא משקל שונה משמעותי נרכשו ממדגרה מסחרית והוקצו אקראית ל-3 קבוצות (טבלה 1), עם 10 שכפול עטים (כלובים) לקבוצה ו-15 ברווזים לדיר למשך 70-יום

ניסוי האכלה. התזונה הבסיסית נוסחה על פי המועצה הלאומית למחקר (1994). ברווזים בקבוצת T0 ו-T0 פלוס AFB1 הוזנו בתזונה בסיסית תירס-סויה (טבלה 2), ברווזים בקבוצת T500 פלוס AFB1 הוזנו בתזונה הבסיסית בתוספת 500 מ"ג של

cistanche kg−1 של דיאטה (T500) ניסיון של 70-ימים. ב-70 הימים, ברווזים עם משקל גוף דומה בקבוצות T0 פלוס AFB1 ו-T500 פלוס AFB1 הוזנו ב-60 מיקרוגרם של AFB1 kg−1 ממשקל הגוף, וכן ברווזים בקבוצת T0 הוזנו בנפח שווה של תמיסת PBS. ברווזים הוזנו בבסיס הניסויים Acheng של האוניברסיטה החקלאית הצפון-מזרחית וסופקו להם גישה חופשית למים ולתזונה אבקתית. 15 ברווזים בעלי משקל גוף דומה (1.4 ± 0.3 ק"ג) מכל קבוצה נבחרו וצמו במשך 12 שעות, ולאחר מכן הוזנו תמיסת PBS לברווזים בקבוצת T0 ו-60 מיקרוגרם של AFB1 kg−1 ממשקל הגוף לברווזים ב-T0 בתוספת AFB1 ו קבוצות T500 פלוס AFB1 בו זמנית. לאחר 12 שעות, חמישה עשר הברווזים בכל קבוצה היו צריכים להשיג דגימות ברווזים.

2.3. אוסף דוגמאות

דגימות דם (10 מ"ל) הושגו באמצעות צינורות הפרין מוורידי כנפי ברווז ועברו צנטריפוגה ב-1000×g למשך 15 דקות ב-4 ◦C. הפלזמה שהתקבלה הופרדה מיד ואוחסנה ב-80 ◦C לניתוח. ברווזים הורדמו על ידי שאיפת אתר והרגו כדי להשיג אילאום. ה-ileum נשטף 3 פעמים ב-PBS, מיד, ואוחסן בנפרד במיכל חנקן נוזלי ואז ב-80 ◦C עבור qRT-PCR וניתוח קיבולת נוגדי חמצון. לאחר מכן, כ-0.125 סמ"ק אילאום הושג והוכנס לתמיסת פרפורמלדהיד של 4 אחוזים עבור חתך הרקמות וכ-1 מ"מ אילאום הוכנס למיקרוסקופ אלקטרונים

פתרון ב-4 ◦C לתצפית אולטרה-סטרוקטורלית מאוחרת יותר.

2.4. בדיקת רמות נוגדי חמצון בפלזמה

רמות הפלזמה של סופראוקסיד דיסמוטאז כולל (T-SOD), גלוטתיון פרוקסידאז (GSH Px), גלוטתיון S-טרנספראז (GSH-ST) ומלונדיאלדהיד (MDA) נמדדו על ידי ערכות בדיקה (מכון הביו-הנדסה נאנג'ינג Jiancheng, נאנג'ינג, סין), בהתאמה, עם

ספקטרופוטומטר UV-VIS (UV1100, MAPADA, שנחאי, סין).

2.5. בדיקת רמות AFB1-Adducts DNA בפלזמה

יצירת תוספי ה-AFB1-DNA בפלזמה נקבעה באמצעות ערכות ELISA בהתאם למפרטי הערכה (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nan Jing, סין).

2.6. בדיקת יכולת נוגדת חמצון באילאום

אילאום (100.00 מ"ג) הופק ועורבב ב-0.9 מ"ל תמיסת מלח מוחית-פיזיולוגית (4 ◦C, 0.9 אחוז NaCl, pH=7.2 -7.4) כדי להשיג 10 אחוז הומוגנית של ileum/SPSS. הפעילות או התוכן של סופראוקסיד דיסמוטאז הכולל (T-SOD U/mg חלבון), גלוטתיון רדוקטיבי (GSH-PX µmol/mg Protein), Glutathione S-transferase (GSH-ST U/mg Protein) ומלונדיאלדהיד (MDA nmol/ מ"ג חלבון) באיליאום הוערכו באמצעות ערכות Assay (מכון הביו-הנדסה של נאנג'ינג Jiancheng, נאנג'ינג, סין), בהתאמה, עם UV-VIS

ספקטרופוטומטר (UV1100, MAPADA, שנחאי, סין).

2.7. בידוד RNA ותגובת שרשרת פולימראז כמותית בזמן אמת (qRT-PCR)

ה-RNA הכולל של אילאום הברווז (100.00 מ"ג) בודד באמצעות ערכת ריאגנטים (TaKaRa, יפן) לפי הפרוטוקול המומלץ על ידי היצרנים. הריכוז והטוהר של ה-RNA הכולל זוהו ביחס A260/A280 עם ספקטרופוטומטר (IMPLEN, גרמניה). 1 מיקרוגרם כולל של RNA בכל דגימה הומר ל-cDNA עם ערכת ריאגנטים Prime Script™ RT עם מחק gDNA (TaKaRa, Dalian, סין) לפי

לפרוטוקול המומלץ על ידי היצרנים. ה-cDNA שהתקבל מכל אילאום ברווז שימש כתבנית עבור ערכת TB Green™ Premix Ex Taq™ (TaKaRa, Dalian, סין) RT-PCR (qRT-PCR). מספר ההצטרפות לגנים של ברווזים התקבל מ-NCBI ו

הפריימרים של גן הברווז יוצרו על ידי Sangon Biotech Co., Ltd. (שנחאי, סין) (טבלה 3). ביטוי הגנים הרלוונטי באילום הברווז נקבע על ידי מנגנון המחזור התרמי של Quanta gene Q225. ה-qRT-PCR הופעל ב-Monad Selected Real-Time

מערכת PCR (מכשיר PCR בזמן אמת ABI 7500 (ארה"ב)) זורמת למצב: מחזור אחד ב-95 ◦C למשך 30 שניות, 40 מחזורים ב-95 ◦C למשך 5 שניות וב-60 ◦C למשך 30 שניות. יחס הביטוי הגנים היחסי של mRNA לזיהוי זוהה בשיטת 2−∆∆Ct ומנורמל לביטוי -אקטין.

2.8. סוטה מערבית

אילאום הברווז נטחן וסוכך במאגר RIPA המכיל 1 mmol/L PMSF (Beyotime, שנחאי, סין) בקרח. ריכוז החלבון הכולל של ileum נקבע על ידי ערכת בדיקה של חומצה ביצינצ'ונינית (BCA) (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, סין). 12 אחוזים ו-10 אחוזים SDS-polyacrylamide ג'ל עבור אלקטרופורזה היו

משמש להשגת חלבוני מטרה בעלי משקל מולקולרי שונה. לאחר מכן, חלבוני מטרה הועברו לממברנת פוליווינילידן-דיפלואוריד (PVDF) (Beyotime, שנגחאי, סין) עבור כתמים עם מנגנון טרנס סופג. קרום PVDF נשטף 3 פעמים במשך 10 דקות בכל פעם ב-1 × PBST ולאחר מכן נחסם 2 שעות בחלב רזה של 5 אחוזים. ממברנה PVDF נשטפה שוב 3 פעמים והודגרה עם נוגדנים ראשיים של GAPDH, Nrf2 ו-P-P65 (Beyotime Biotechnology, שנחאי, סין) במשך 8-12 שעות ב-4 ◦C, בהתאמה. למחרת, קרום ה-PVDF נשטף שוב 3 פעמים, והודגר עם הנוגדן התואם חזרת פרוקסידאז ב-37 ◦C למשך שעה אחת, ואז נשטף שוב 3 פעמים.

רצועות חלבון יעד זוהו והוצגו תחת פעולת ערכת זיהוי הקרינה המשופרת BeyoECL Star (Beyotime Biotechnology, שנחאי, סין). תמונות של כתמים תועדו ונותחו על ידי פלטפורמת ההדמיה Essential V6 (UVITEC, Cambridge,

אַנְגלִיָה). חלבון GAPDH שימש כחלבון בקרה פנימית. כל תוצאות הניסוי חזרו על עצמם בשלושה עותקים. הביטויים היחסיים של חלבוני המטרה באו לידי ביטוי כיחס בין עוצמות הרצועה של חלבונים ל-GAPDH.

2.9. ניתוח סטטיסטי

נתוני הניסוי הושגו לפחות שש פעמים וכל דגימה נמדדה שלוש פעמים. ניתוח של נתוני המחקר באמצעות Independent-Samples T Test על ידי SPSS (גרסה 22.0, SPSS Inc., Chicago, IL, USA) עם 5 אחוזים ההסתברות לטעות ומובהקות סטטיסטית הייתה p < {{4} }.05 במחקר זה