חיזוי מנגנון ואימות Cistanche Deserticola בטיפול במחלות מעי דלקתיות ⅱ

 

שם מורכב (סיני)	מזהה TCMSP	משקל מולקולרי	זמינות ביולוגית בעל פה
-סיטוסטרול (植物甾醇)	MOL000358	36.91	0.75
אנצ'ידונולול (安诺炼)	MOL005320	45.57	0.20
כמוניילינול (苏沟酚)	MOL005384	57.52	0.56
יאנגאבול (杨安补)	MOL007563	57.53	0.81
Quercitrin (槲皮素)	MOL000098	46.43	0.28
myricetin (桑椹素)	MOL001454	37.05	0.68
אצטוסיד (毛蕨花酷)	MOL003333	2.94	0.62
אקדיסטרואיד (脱皮激素)	MOL003734	3.14	0.38
פוליומוזיד (金合欢苷)	נא	נא	נא
cistanoside a (肥皂树 a)	MOL008856	3.62	0.36
Cistanoside B (肥皂树 B)	MOL008872	4.27	0.35
Cistanoside C (肥皂树 C)	נא	נא	נא
Cistanoside D (肥皂树 D)	MOL008882	5.19	0.69
tubuloside a (管花草 a)	נא	נא	נא
tubuloside b (管花草 b)	נא	נא	נא
isoacreosid (异亮芨芨草)	MOL107795	1.52	0.66
2- acetylacteoside (乙酰柠檬晶)	נא	נא	נא
L-arabinose (l- 阿拉伯糖)	MOL010200	54.12	0.03
Galactosid (半乳糖)	MOL010203	10.22	0.55
דולציול (半乳醇)	נא	נא	נא
חומצה d-glucaric (d- 葡萄糖酸)	MOL012957	60.80	0.06
מניטול (甘露醇)	MOL000003	17.73	0.03
פרוקטוז (果糖)	MOL000053	1.68	0.03
xylose (木糖)	MOL000731	58.74	0.03
גלוקוז (葡萄糖)	MOL000734	24.44	0.03
rhamnose (鼠李糖)	MOL004690	40.73	0.03
סוכרוז (蔗糖)	MOL000842	7.17	0.23
מנוזה (甘露糖)	MOL000951	1.76	0.03

 

 

להלן הטבלה המתורגמת לאנגלית:

שם מורכב (סיני)	מזהה TCMSP	משקל מולקולרי	זמינות ביולוגית בעל פה
פרוקטוז (果糖)	MOL000053	1.68	0.03
xylose (木糖)	MOL000731	58.74	0.03
גלוקוז (葡萄糖)	MOL000734	24.44	0.03
rhamnose (鼠李糖)	MOL004690	40.73	0.03
סוכרוז (蔗糖)	MOL000842	7.17	0.23
מנוזה (甘露糖)	MOL000951	1.76	0.03
Cistanin (肉桂素)	MOL008855	71.78	0.06
Cistachlorin (肉桂苷素)	נא	נא	נא
kankanosid a (甘菊苷 a)	נא	נא	נא
kankanosid b (甘菊苷 b)	נא	נא	נא
8- חומצה אפילוגנית (8- 表乙酸)	MOL003203	98.51	0.09
גלוקוזיד (榈苷)	נא	נא	נא
liriodendrin (鹤掌枫脂素)	MOL007927	5.19	0.29
הדרים A (柑橘素 A)	MOL013438	25.04	0.73
חומצה פלמיטית (棕榈酸)	MOL000069	19.30	0.10
ניאצין (烟酸)	MOL000421	47.65	0.02

 

איור 1 איור 1 רשת אינטראקציה "תרופות-מרכיב-מיקוד"

 

3.1.4 Go ו- KEGG ניתוח העשרה

כפי שמוצג באיורים 3 ו -4, התהליך הביולוגי של Cistanche Deserticola בטיפול ב- IBD קשור בעיקר לזרחן חלבון, ויסות שלילי של אפופטוזיס, תגובה לגירויים אקסוגניים וכו ', בעיקר מסלולי איתות כמו PI3K/AKT ו- EGFR טירוזין קינאז עמידות.

 

3.1.5 אימות עגינה מולקולרית

תוצאות אימות העגינה המולקולרית (טבלה 2) מראות כי האנרגיות הקשורות של יעד הליבה ורכיבי הליבה הם פחות מ- -4. 7 kJ/mol, מה שמצביע על כך שמולקולות הליגנד יכולות להיקשר היטב לחלבון הקולטן. ביניהם, האנרגיה המחייבת של Akt1 ו- -sitosterol השילוב הטוב ביותר.

 

תוסף דרך הפה של עשב עשב חדש לעצירות

---

שירות תומך של WeCistanche-היצואן הגדול ביותר של Cistanche בסין:
דוא"ל: wallence.suen@wecistanche.com
WhatsApp/Tel: +86 15292862950

 

3.2 תוצאות ניסוי בעלי חיים

3.2.1 השפעת CE על משקל גוף העכבר

בהשוואה לקבוצת הביקורת הריקה, משקל הגוף של עכברים בקבוצת הדגם הופחת משמעותית (p ＜ {{0}}. 0 1); בהשוואה לקבוצת המודל, משקל הגוף של העכברים בקבוצת הביקורת החיובית וקבוצות המינון CE הוגדל באופן משמעותי (P ＜ 0.05 או P ＜ 0.01). התוצאות מוצגות בטבלה 3.

איור 4 איור 4 ניתוח מסלול KEGG של יעדים פוטנציאליים של Cistanche Deserticola בטיפול ב- IBD

 

טבלה 2 תוצאות עגינה של רכיבי ליבה וחלבוני יעד ליבה (KJ/mol)

 

תִרכּוֹבֶת	TNF	Acti	STAT3	EGFR	Src
חומצה אולנולית	-6.2	-10.0	-7.9	-7.6	-8.6
חומצה אורסולית	-5.2	-10.0	-8.0	-7.7	-8.0
חומצה גליציררטינית	-6.4	-11.3	-8.0	-9.2	-8.3
18 - חומצה glycyrrhetinic	-4.8	-6.8	-5.2	-4.8	-5.5

 

 

טבלה 3 משקל גוף, DAI, אורך המעי הגס וציון עכברים פתולוגי בכל קבוצה (x ± S)

 

קְבוּצָה	n	משקל (g)	אורך גוף (ס"מ)	דאי (%)	ציון פתולוגי
לִשְׁלוֹט	8	20.84 ± 0.61	7.48 ± 0.18	0	0.13 ± 0.22
דֶגֶם	7	14.24 ± 0.92a	5.77 ± 0.35*	3.30 ± 0.50*	2.85 ± 0.61*
מינון נמוך	7	17.59 ± 0.75b	7.47 ± 0.70b	1.99 ± 0.45b	0.93 ± 0.36b
מינון נמוך CE	7	16.23 ± 0.99b	7.27 ± 0.42b	2.66 ± 0.48b	2.22 ± 0.60b
מינון אמצעי CE	8	17.07 ± 0.67b	7.37 ± 0.34b	2.06 ± 0.31b	1.51 ± 0.29b
מינון גבוה	8	17.37 ± 0.41b	7.43 ± 0.62b	1.85 ± 0.43b	1.13 ± 0.77b

ת: בהשוואה לקבוצת הביקורת, P<0.01; b: Compared to the model group, P<0.01; c: Compared to the model group, P<0.05.

 

3.2.2 השפעת CE על דאי עכבר ואורך המעי הגס

בהשוואה לקבוצת הביקורת הריקה, DAI של העכברים בקבוצת הדגם הוגדל משמעותית, ואורך המעי הגס קוצר משמעותית (P<0.01); compared with the model group, the DAI of rats in the positive control group and CE groups at each dose was significantly reduced, and the colon length was significantly shortened (P<0.01). All increased significantly (P＜0.05 or P＜0.01). The results are shown in Table 3 and Figure 5.

 

3.2.3 השפעות של CE על המורפולוגיה ההיסטופתולוגית של המעי הגס של העכבר

רירית המעי הגס של העכברים בקבוצת הביקורת הריקה הייתה שלמה וברורה במבנה, ולא נמצאו הסתננות וכיבים של תאים דלקתיים; רירית המעי הגס של העכברים בקבוצת הדגמים לא הייתה שלמה, מרבית הבלוטות נהרסו, כמה תאי גביע נעלמו ומבנה הקריפטה נהרס; בהשוואה למודל בהשוואה בין הקבוצות, שופר את נזק רקמות המעי הגס של העכברים בקבוצת הביקורת החיובית וקבוצות CE, הופחת משמעותית, מידת הדלקת הצטמצמה באופן משמעותי והרס הבלוטות ברקמת המעי הגס הופחתה משמעותית (P ＜ {0}}. 05 או P<0.01). The results are shown in Figure 6 and Table 3.

 

3.2.4 השפעת CE על רמות הגורמים הדלקתיים ברקמת המעי הגס של העכבר

בהשוואה לקבוצת הביקורת הריקה, רמות ה- IL {{0}}, IL -1, MPO ו- TNF- ברקמת המעי הגס של עכברים בקבוצת הדגם הוגברו באופן משמעותי (p {{} {}}} {}}} {}}}}}}}}}}}}}}} {}} {}} {} {}} {} {} {}. רמת ה- IL -10 ירדה משמעותית. (P <0.01); בהשוואה לקבוצת הדגם, רמות ה- IL -6, IL -1, MPO ו- TNF- ברקמת המעי הגס של עכברים בקבוצת הביקורת החיובית וקבוצות CE הופחתו באופן משמעותי (p <0.05 או p <0.01), IL {17}}
הרמה עלתה משמעותית (p ＜ 0. 01). התוצאות מוצגות בטבלה 4.

 

3.2.5 רמות ביטוי של חלבוני יעד ליבה ברקמת המעי הגס

בהשוואה לקבוצת הביקורת הריקה, רמות הביטוי של החלבון של PI3K, P-PI3K, EGFR, TNF-, STAT3, P-STAT3, AKT1, P-AKT1 ו- SRC ברקמת המעי הגס של עכברים בקבוצת הדגם הוגברו משמעותית (P< 0.05 or P＜0.01); compared with the model group, the expression levels of the above proteins in the colon tissue of mice in the positive control group and CE groups were significantly reduced (P＜0.05 or P＜0.01).
התוצאות מוצגות באיור 7 וטבלה 5.

 

טבלה 4 השוואה בין רמות הגורמים הדלקתיים ברקמת המעי הגס (x ± S)

 

קְבוּצָה	n	Il -10 (pg/ml)	Il -6 (pg/ml)	Il -1 (pg/ml)	TNF- (PG/ML)	MPO (U/L)
לִשְׁלוֹט	8	47.0 ± 4.70	17.35 ± 0.64	291.27 ± 72.33	387.71 ± 116.76	23.06 ± 7.26
דֶגֶם	7	3.68 ± 0.32a	145.08 ± 23.86a	338.94 ± 95.11a	635.27 ± 135.15a	97.06 ± 28.07a
מינון נמוך	7	44.74 ± 8.34b	23.23 ± 4.64b	300.52 ± 84.71b	448.21 ± 123.28b	38.60 ± 16.78b
מינון נמוך CE	7	12.87 ± 3.26b	81.12 ± 18.95b	331.24 ± 95.80b	510.81 ± 110.63b	51.61 ± 11.62b
מינון אמצעי CE	8	21.80 ± 4.12b	50.75 ± 22.16b	323.62 ± 79.21b	508.68 ± 146.97b	45.53 ± 15.21b
מינון גבוה	8	31.10 ± 7.40b	27.55 ± 41.22b	294.13 ± 86.05b	461.42 ± 140.30b	44.26 ± 13.58b

ת: בהשוואה לקבוצת הביקורת, P<0.01; b: Compared to the model group, P<0.01.

 

ת: קבוצת ביקורת ריקה; B: קבוצת מודלים; C: קבוצת ביקורת חיובית; D: קבוצת CE במינון גבוה; E: קבוצת מינון בינוני CE; F: קבוצת CE במינון נמוך.

איור 7 איור 7 אלקטרופורזה של ביטוי חלבון ליבה ברקמת המעי הגס של עכברים בכל קבוצה

 

4 דיון

במחקר זה, תוצאות ניסויי העגינה המולקולרית הראו כי רכיבי הליבה Quercetin, Suzilide, -sitosterol ו- Cistanche Glycoside H הראו יכולת קשירה חזקה ליעדי הליבה TNF, AKT1, STAT3, EGFR ו- SRC. זה משקף את המאפיינים הסינרגיסטיים של רכיבי הרכיבים והרב-מטענים של Cistanche Deserticola.

מחקרים הראו כי קוורצטין יכול לעכב משמעותית את הפרשתם ושחרורם של גורמים דלקתיים ומתווכים דלקתיים, ויש לו השפעות אנטי דלקתיות טובות [17]. סוזיליד יכולה לקדם ביעילות את הפרשת הגמא-אינטרפרון על ידי תאי חיסון, ויש לה השפעה של הגדלת חיוניותם של תאי החיסון והפחתת הכדאיות של תאי הגידול. לסוזיליד וקוורצטין יש גם השפעה של קידום הפרשת גמא-אינטרפרון על ידי תאי חיסון. סינרגיה [18].
-סיטוסטרול יכול להקל על התקדמות הקוליטיס על ידי ויסות רמות של גורמים דלקתיים כמו IL -6, IL -1 ו- TNF- [19]. Cistancheside H יכול לווסת לחץ חמצוני ותגובות דלקתיות באמצעות מסלולי איתות כמו חילוף חומרים גליצרופוספוליפיד ומטבוליזם של חומצה ארכידונית [20].
ניתן לראות כי Quercetin, Suzilide, -sitosterol ו- Cistanche Glycoside H עשויים להיות הבסיס החומרי של Cistanche Deserticola בטיפול ב- IBD.

ניתוח מסלול KEGG הראה כי Cistanche Deserticola ממלאת השפעה טיפולית על IBD בעיקר באמצעות ויסות מסלולי איתות כמו PI3K/AKT ו- EGFR טירוזין קינאז עמידות. מחקרים ציינו כי הפעלת מסלול האיתות PI3K/AKT יכולה לקדם שחרור של גורמים דלקתיים ולגרום נזק דלקתי [21].
SRC היא מולקולת האיתות במעלה הזרם של מסלול האיתות PI3K/AKT. DSS הנכנס לתאים יכול להפעיל במהירות את מסלול האיתות SRC/PI3K/AKT ולקדם את הגיוס של תאי חיסון מולדים כמו מקרופאגים ונויטרופילים לרקמות פגומות דלקתיות, ובכך להאיץ את שחרורם של גורמים דלקתיים מחמיר את התגובה הדלקתית של הגוף [22].

ניתן לזרום EGFR על ידי כריכה לחלבונים הקשורים במעלה הזרם, להפעיל את מסלול האיתות PI3K/AKT, ואז לשתף פעולה עם מסלול האיתות WNT כדי לתווך תגובות דלקתיות [23]. AKT1 יכול להפעיל גורם גרעיני κB, ובכך לקדם את הסינתזה ושחרורם של גורמים פרו-דלקתיים ולהאיץ את התגובה הדלקתית [24].
STAT3 הוא חלבון היעד העיקרי של מסלול האיתות JAK/STAT. כאשר STAT3 מופעל במהירות, זה יכול להאיץ את שחרורם של גורמים דלקתיים כמו IL -6 ו- IL -1, מה שמוביל לעלייה בהסתננות דלקתית [25]
ו TNF- הוא הציטוקין הראשון ששוחרר בתגובה החיסונית, יכול לתווך דלקת במעי באמצעות מנגנונים שונים, ויכול גם לגרום לאפופטוזיס של תאי אפיתל במעי [26].
ניתן לראות כי TNF-, AKT1, STAT3, EGFR ו- SRC עשויים להיות יעדי הליבה של Cistanche Deserticola בטיפול ב- IBD. ניסויים נוספים בבעלי חיים מצאו כי CE יכול להפחית את רמות הביטוי של החלבונים לעיל, ולהוכיח את הדיוק של חיזוי היעד של הרוקחות ברשת.

לסיכום, מחקר זה אישר באופן שיטתי את ההשפעה של Cistanche Deserticola בטיפול ב- IBD באמצעות פרמקולוגיה של רשת וניסויים בבעלי חיים. מנגנון הפעולה הספציפי שלו עשוי להיות קשור לוויסות מסלול האיתות SRC/EGFR/PI3K/AKT.