התקדמות מחקר ויישום בטכנולוגיית טביעות אצבע על Materia Medica Ⅱ

1.2 טביעת אצבע אלקטרוכימית

אלקטרוכימיה היא שיטה אנליטית פשוטה המבוססת על התכונות האלקטרוכימיות והעקרונות של החומר הנבדק, שהיא בעלות נמוכה, רגישה מאוד ודורשת מעט חומרים מתכלים [19]. עם זאת, לשיטה זו יש מגבלות מסוימות והיא ישימה כיום בעיקר לניתוח של תרופות סיניות המכילות רכיבים כימיים כגון טרפנים (כגון Angelica sinensis), פלבנואידים (כגון Scutellaria baicalensis), אלקלואידים (כגון Aconite), ואנתרקינונים ( כגון ריבס) שיכולים לעבור תגובות אלקטרוכימיות.

Wu Di et al. [20] השתמש בטביעת אצבע אלקטרוכימית כדי לבסס את תהליך המיצוי האופטימלי של Scutellaria baicalensis Georgi, מתן שיטה טובה לשימוש רציונלי בחומרי מרפא סיניים. Shi Huihui et al. [21] השתמש בטכנולוגיית התנודה הכימית של תגובה Belousov-Chabotinsky (BZ) כדי לחקור את ההשפעות של טמפרטורה, מהירות סיבוב ומספר החומרים הרפואיים שנוספו לתוצאות הניסוי וקבעו תנאי ניסוי סבירים להשגת טביעת האצבע האלקטרוכימית של Magnolia biondii Pamp ., מתן שיטה חדשה לבקרת איכות של Magnolia biondii. Zou Guihua et al. [22] קבע את טביעת האצבע האלקטרוכימית הלא-לינארית של Codonopsis pilosula (Franch.) Nannf. וג'נטיאנה מקרופילה פאל. טביעות האצבע האלקטרוכימיות של שני החומרים הרפואיים שונות מבחינה ויזואלית, מה שיכול לשמש כשיטה פשוטה ויעילה להבחין בין Codonopsis pilosula לבין Gentiana macrophylla. Dai Hongxia et al. [23] ערך ניתוח אלקטרוכימי על 20 קבוצות של Angelica sinensis (Oliv.) Diels עם תקופת צמיחה של 1, 2 ו-3 שנים. בשילוב עם ניתוח רכיבים עיקריים, נמצא כי טביעות האצבע האלקטרוכימיות ופרמטרי התנודה (כולל זמן השראת תנודות, פוטנציאל מרבי, חיי תנודה, משרעת מקסימלית, פוטנציאל עצירה ומספר מחזורים) של Angelica sinensis בתקופות גדילה שונות היו שונים באופן משמעותי, אשר יכול לשמש כבסיס לזיהוי Angelica sinensis בתקופות שונות.

עשב חומר רפואי סיני CISTANCHE HPLC טביעת אצבע

1.3 טביעת אצבע כרומטוגרפית

1.3.1 כרומטוגרפיה בשכבה דקה

כרומטוגרפיה בשכבה דקה היא שיטה כרומטוגרפית המשיגה הפרדה על ידי הסתמכות על יכולות הספיחה השונות של אותו סופח עבור רכיבים כימיים שונים. זוהי השיטה הנפוצה ביותר לזיהוי תרופות סיניות מסורתיות, עם היתרונות של תפעול קל, ציוד פשוט, רגישות טובה, השוואה גבוהה, ספציפיות חזקה ופיתוח צבע קל. האותנטיות של החומר הרפואי יכולה להיקבע על ידי נוכחות או היעדר כתמים על צלחת השכבה הדקה. עומק וגודל צבע הכתמים יכולים לשקף במידה מסוימת את איכות החומר הרפואי[24]. נכון לעכשיו, כרומטוגרפיה בשכבה דקה בעלת ביצועים גבוהים(HPTLC) משמש לעתים קרובות כדי להחליף כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים (HPLC) לזיהוי איכותי וכמותי של מוצרי רפואה סינית מסורתית בשל הפשטות, הדיוק, העלות הנמוכה, היעילות הגבוהה והמהירות שלה. לטביעות האצבע של HPTLC יש רזולוציה טובה יותר ויכולות להעריך בצורה סבירה ומדויקת את החומרים הפעילים בתרופה בזמן קצר יותר[25]. עם זאת, בשל ריבוי הגורמים המשפיעים (לחות, טמפרטורה וכו'), יכולת השחזור של התוצאות ירודה בהשוואה ל-HPLC. Loescher et al. [26] השתמש ב-HPLC ו-HPTLC כדי לנתח את התמצית של Calendula officinalis ומצא כי HPLC מתאים יותר לניתוח כמותי מאשר HPTLC.

בתגובה לאפקט זה, Li Xiangjun et al. [27] הכינו סדרה של פתרונות תואמים, כולל עריכת ניסוי הפיתוח במקרר או במכשיר אטום מבוקר טמפרטורה כדי להפחית את השפעת הטמפרטורה והוספת פרופורציות שונות של חומצה גופרתית בקצה אחד של גליל הפיתוח כדי לשלוט על הלחות.

חומר סיני עשב רפואי CISTANCHE HPLC LABLE

פאטיל וחב'. [28] קבע את טביעת האצבע HPTLC של תמצית אתר הנפט של Catsia tora Linn. התוצאות הראו שהעלים, הזרעים והפרחים הכילו 10, 7 ו-11 סוגי מרכיבים, בהתאמה. ניתן להשתמש בשיטה זו כדי לזהות את האותנטיות של Catsia tora Linn. Xiao Honghua et al. [29] השתמש בכרומטוגרפיה של שכבה דקה בשילוב עם ספקטרומטריית מסה כדי לקבוע טביעת אצבע כרומטוגרפית של שכבה דקה של כרומונים, חומצות אורגניות וספונינים טריטרפנואידים ב- Cimicifuga foetida L., וביצע ניתוח דמיון, ניתוח אשכולות וניתוח רכיבים עיקריים ב-16 קבוצות של דגימות Cimicifuga מחמישה מקורות, המספקות בסיס לבקרת האיכות של Cimicifuga.

Guzelmeric et al. [30] השתמש באתיל אצטט-חומצה פורמית-חומצה אצטית-מים (30:1.5:1.5:3) כממס המתפתח לפיתוח טביעת האצבע HPTLC של apigenin-7-glucoside, סמן פעיל של Matricaria chamomilla L., אשר יכול לשמש כמדריך מרכזי להערכת איכות של קמומיל. באזילקו וחב'. [31] קבע את טביעת האצבע של HPTLC של חמש תרכובות פלבנואידים, כלומר טגטואידים, קוורצטין, פלבנואידים, חומצה קפאית וחומצה כלורוגנית, מ- Galinsoga parviflora Cav. ניתן להשתמש בשיטה זו לזיהוי Galinsoga parviflora. אתנוליק וחב'. [32] קבע את טביעת האצבע של תמצית האתנול של Acacia catechu (L. f.) Willd. באמצעות HPTLC ביצעו הערכה כמותית פשוטה ומהירה של רוטין וקוורצטין בתמצית. Agatonovic-Kustrin et al. [33] השתמש ב-HPTLC כדי לנתח כמותית אפיגנין, מטריקריה וביבולול בתמציות העלים והפרחים של Pyrethrum parthenium (L.) Smith, Matricaria chamomilla L., ו-Calendula officinalis L., שילב אותו עם שיטת DPPH כדי להשוות את נוגד החמצון קיבולת של רכיבים אלה. שיטה זו פשוטה, מהירה, אמינה וזולה, וניתן להשתמש בה גם כדי לסנן את הפעילות נוגדת החמצון של תמציות צמחים.

1.3.2 שיטת HPLC HPLC היא שיטה אנליטית אוניברסלית לאיתור רכיבים כימיים שונים ברפואה הסינית המסורתית.

הוא נמצא בשימוש נרחב בזיהוי רכיבים כימיים ברפואה הסינית המסורתית בשל יתרונותיו של לחץ גבוה, רגישות גבוהה, יעילות גבוהה ואוטומציה [34]. גלאי ה-UV, גלאי מערך דיודות (DAD), גלאי אלקטרוכימי, גלאי אור אידוי וכו' שניתן לחבר אליו כולם מראים את עליונותם שאין לה תחליף.

Qiao et al. [35] השתמשו בכרומטוגרפיה מקיפה של שלב הפוך × הפוך שלב (RP × RP 2DLC) כדי להפריד את התרכובות הפנוליות שהתקבלו על ידי מיצוי אתיל אצטט של ליקוריץ Glycyrrhiza uralensis Fisch.

311 תרכובות זוהו תוך 40 דקות, והמבנים של 21 תרכובות לא ידועות אופיינו מראש בספקטרומטריית מסה, ו-8 מהן נמצאו בשוש בפעם הראשונה. התוצאות הראו שלמערכת RP×RP2DLC/MS יש השפעה טובה על הפרדת תמציות מורכבות של רפואה סינית מסורתית ועל ניתוח איכותי של מוצרים טבעיים. פנג ליאנג וחב'. [36] ניתח את הרכיבים הפלבנואידים של 10 קבוצות של Gynostemma pentaphyllum (Thunb.) Makino קבע את טביעת האצבע של ה-HPLC של Gynostemma pentaphyllum וכייל 11 פסגות אופייניות נפוצות. תוצאות ניתוח הדמיון הראו שהדמיון הגבוה ביותר של קבוצות 10 של טביעות אצבע Gynostemma pentaphyllum ביחס לספקטרום הייחוס היה 0.989, והנמוך ביותר היה 0.128, מה שמצביע על כך שהרכיבים הפלבנואידים של Gynostemma pentaphyllum ממקורות שונים היו דומים ב סוג אבל היו הבדלים משמעותיים בתוכן. Sun et al. [37] השתמש בשיטת HPLC-DAD כדי לנתח את הדמיון של הרכיבים הכימיים של Bupleurum chinense DC. ו-B. scorzonerifolium Willd. לראשונה, וגילו שלשניים היו 12 פסגות פלבנואידים נפוצים ו-4 פסגות ספונין, בהתאמה, ובמקביל, לכל אחד היו 6 פסגות פלבנואידים ייחודיים ו-5 פסגות ספונין, בהתאמה. התוצאות הראו ששיטה זו יכולה לשקף באופן סביר ויעיל את ההבדל ברכיבים הכימיים בין Bupleurum ל- Bupleurum chinense. המתאם בין השניים גרוע. לכן, יש להשתמש ב-Bupleurum chinense בזהירות בפרקטיקה הקלינית. הוא ועוד. [38] ניתחו באופן כמותי 10 סוגים של חומצה גאלית ביו-אקטיבית, חומצה כלורוגנית, קפאין וקטצ'ינים הכלולים ב-10 קבוצות של תה ירוק Ziyang. טביעת האצבע של HPLC שפותחה הייתה פשוטה ואמינה. לי וחב'. [39] ביסס את טביעת האצבע של HPLC של קליפת הרימון. הם בחרו 15 פסגות אופייניות והעריכו את הדמיון של 10 קבוצות של קליפת רימון ל-0.968. הם גם הפרידו וניתחו כמותית את הפוניקלאגין, חומצה גאלית, קטצ'ין, חומצה כלורוגנית, חומצה קפאית, אפיקטכין, רוטין וחומצה אלגית הכלולים בה, וסיפקו שיטה אמינה ויעילה לזיהוי האותנטיות ובקרת האיכות של קליפת הרימון. Sumathy et al. [1] השתמש ב-HPLC בשילוב עם HPTLC וספקטרומטריית גז-מסה (GC-MS) כדי לקבוע את ההרכב הכימי של תמצית המתנול של Ixora chinensis Lam. ניתוח HPLC הראה נוכחות של ביוצין A, myricetin, quercetin, rutin, daidzein ו-formononetin; חומצה אורסולית נמצאה בטביעת האצבע של HPTLC; 24 רכיבים פיטוכימיים נמצאו על ידי GC-MS; שיטה משולבת איכותית וכמותית זו יכולה להעריך בקלות את האיכות והיציבות של Ixora chinensis Lam. Ge et al. [40] קבע את טביעת האצבע UHPLC-DAD של Radix Angelicae Pubescentis, ניתח באופן כמותי את הקומרינים והחומצות הפנוליות הכלולים ב-Radix Angelicae Pubescentis, וזיהה באופן איכותי את המרכיבים הפעילים שלו באמצעות quadrupole-time of flight spectrometry (Q-TOF-MS). הם מצאו 9 חומצות פנוליות, 30 קומארינים ו-41 תרכובות של מור ואדנוזין. הם שילבו את שיטת הניתוח המבדיל כדי להבחין ביעילות ובמהירות בין 32 קבוצות של Radix Angelicae Pubescentis ממחוזות שונים. שיטה זו מספקת רעיון חדש לבקרת האיכות של Radix Angelicae Pubescentis.

רשימת מפרט CISTANCHE

יאנג וחב'. [41] השתמשו בגלאי כרומטוגרפיית נוזלים עם ביצועים גבוהים במיוחד (UPLC)-DAD וטכנולוגיית ESI-MS כדי להשיג את טביעת האצבע HPLC וטביעת האצבע של ספקטרומטריית מסה של טבליות Xiaoyanlidan, בהתאמה. הם ניתחו 113 דגימות של טבליות Xiaoyanlidan והשיגו 39 פסגות, מהן 26 מ-Quassia, 9 מ-Andrographis paniculata ו-4 מ-Rhizoma Cynoglossi. תוך שימוש בשיטות הכימיומטריות של דמיון ו-PCA, הם קבעו שחמשת המרכיבים המשמעותיים היו 4-מתוקסי-5-הידרוקסי-פרוצפלוסטומון, אנדרוגרפוליד, דהידדרואנדרוגרופוליד, ניאואנדרוגרופוליד וחומצה רוסמרינית. הם הקימו טביעת אצבע שיטתית ומקיפה כדי לשפר ולהעריך את האיכות של טבליות Xiaoyanlidan. Fan et al. [42] הקימו טביעות אצבע של HPLC ו-UPLC של גליקוזידים פלבונואידים ב-Lophatherum gracile Brongn., ובודדו פלבנואיד חדש C-glycoside luteolin 6-C- -D-glucuronic acid-(1→2){{19 }}D-pyranoglucoside בפעם הראשונה. הם גם גילו את האיזומרים האופטיים של שתי תרכובות, פלבנואיד פלבנואיד ופלבנואיד הידרוקסיפלבנואיד, בפעם הראשונה. הם השתמשו בתהודה מגנטית גרעינית גרעינית חד-ממדית ובספקטרומטריית מסה כדי להבחין ולקבוע את המבנים שלהם, וסיפקו שיטה חדשה לבקרת איכות של Lophatherum gracile Brongn. Tshibangu et al. [43] השתמש ב-HPLC-DAD בשילוב עם כרומטוגרפיה של שכבה דקה, תהודה מגנטית גרעינית וספקטרומטריית מסה כדי להפריד ביעילות את התרכובות הביפלבנואידיות העיקריות GB1, GB2, GB-1a ופלבנואידים מ-Garcinia kola Linn., ואישר את המבנים שלהם. , שיכול לשמש כשיטת ניתוח שגרתית לתכשירים פרמצבטיים. Zhao et al. [44] קבע את טביעת האצבע HPLC-UV-MS של Andrographis paniculata (Burm. F.) Nees, אנדרוגרפוליד ו-dehydroandrographolide שנקבעו כמותית הכלולים ב-Andrographis paniculata, והעריכו את ההבדלים בין 10 קבוצות של דמיון Andrographis paniculata על ידי ניתוח ושילוב PCA. שיטה זו מספקת בסיס לבקרת האיכות של Andrographis paniculata.

אחמד וחב'. [45] השתמש ב-HPLC כדי להשיג את טביעת האצבע של שרף Commiphora wightii (Arn.) Bhandari, וניתח כמותית את ה-trans-ו-cis-sterolone הכלולים בו. יחד עם זאת, שיטה זו יכולה להבחין ביעילות בין 22 קבוצות של שרף Commiphora wightii ו-9 קבוצות של שרף מזויף, שיכולות לשמש כשיטה לזיהוי האותנטיות של שרף Commiphora wightii.

2 טביעות אצבע ביולוגיות

טביעות אצבע ביולוגיות הן השימוש בשיטות ניתוח רצף גנים ברמה המולקולרית כדי להבחין ולסווג את ההפצה הגיאוגרפית והשינויים בחומרי מרפא סיניים, כולל טביעות אצבע גנומיות, טביעות אצבע פרוטאומיות[60], וטביעות אצבע של DNA[61]. נכון להיום, יש פחות מחקרים על טביעות אצבע ביולוגיות של תרופות סיניות מאשר טביעות אצבע כימיות. השיטות הנפוצות ביותר הן אלקטרופורזה של ג'ל פולי-אקרילאמיד (PAGE), טכנולוגיית סמן מולקולרית DNA פולימורפית אקראית (RAPD), תגובת שרשרת פולימראז.

(PCR) ושיטות אחרות.

Liu Li et al.[62] השתמשו בסמני RAPD, בשילוב עם PCR וניתוח אשכולות, לזיהוי יעיל של Panax notoginseng (Burk.) f. H. Chen, Panax ginseng CA Mey., וג'ינסנג אמריקאי Panaxquinquefolium L. Fan Wei et al. [63] הקימה לראשונה את טביעת האצבע של חלבון SDS-PAGE של Eupolyphaga sinensis Walker, Bombyx mori Linnaeus, ו-Scolopendra סובסידיות ל-mutilans L. Koch, מה שמספק שיטה אמינה ויעילה לזיהוי שלושת החומרים הרפואיים הללו. Wei Yicong et al. [64] עיצב פריימרים דו-אתרים ספציפיים ובנה PCR מרובה זיהוי מהיר של שני חומרים רפואיים, Houttuynia cordata Thunb. ו- Gymnotheca chinensis Decne., יכולים לזהות בו זמנית את שני המינים באופן חיובי ולקבוע אם הם מעורבים. Wang Fu et al. [65] השתמש ברצף ITS2 (Internal Transcribed Spacer 2) בתור ברקוד DNA כדי לזהות במדויק את הרפואה הסינית, Zanthoxylumbungeanum Maxim. והתבלין שלו Zanthoxylumbungeanum Maxim., המספק בסיס לזיהוי הרפואה הסינית Zanthoxylumbungeanum והתבלין שלו Zanthoxylumbungeanum.