הערכה אופיינית של ניסוחים שונים של קרם אנטי אייג'ינג מתמצית קרוטנואידים של זן חיידקי סימביונט וירג'יבצילוס סלריוס

מילות מפתח:קרם;cistanche;נוגדי חמצון; קרם הגנה; סימביונת חיידקים

לחץ כאן כדי לדעת עוד על Cistanche על אנטי אייג'ינג

1. הקדמה

הזדקנות מוקדמתהיא מחלה ניוונית המאופיינת בעור יבש, מקומט ומחוספסוכתמים שחורים [1]. שני גורמים מעוררים הזדקנות מוקדמת, כלומר גורמים פנימיים כגוןכמו מתח, סיבולת, שינויים הורמונליים, ובריאות כמו גם גורמים חיצוניים כוללקרניים אולטרה סגולות ורדיקלים חופשיים. רדיקלים חופשיים הם מולקולות המכילות חמצן שהןהסידור האטומי אינו יציב, ומכאן, עובר תגובות שרשרת שעלולות להתרחש בגוף ולהוביל לנזק מתמשך [2]. 

רדיקלים חופשיים הם חומרים מאוד תגובתיים ומסוכנים הגורמים נזק לרקמות הגוף שעלולות להוביל להתפתחות מחלות שונות בגיל מבוגר [3]. עם זאת, ניתן להתגבר על רדיקלים חופשיים על ידי שימוש בנוגדי חמצון [4] אשר עוצריםתגובות שרשרת המופעלות על ידי רדיקלים חופשיים על ידי תרומת אלקטרונים למולקולות הלא יציבות.דוגמאות לתרכובות נוגדי חמצון כוללות cistanche, ויטמין C וויטמין E [5].

cistanche הן תרכובות שהוכחו כנוגדי חמצון פוטנציאליים [6–10] כפי שהם מכיליםתרכובת איזופרן ארוכת שרשרת עם קשר כפול מצומד [5,7,11]. המצומדיםקשר כפול מסיר חמצן בודד ומבטל רדיקלים חופשיים אחרים המתרחשים דרכםתהליך העברת האלקטרונים [12,13]. לאחר מכן, תרכובות שצימדו כפולניתן למצוא קשרים באורגניזמים יבשתיים וימיים. תרכובות מהיםלאורגניזמים יש מאפיינים ייחודיים וכמה גילויים לגבי תרכובות ביו-אקטיביות חדשותלאנטיביוטיקה, אנטי-סרטן, תרופות, קוסמטיקה, אנזימים ופיגמנטיםהתקבלו ממערכות אקולוגיות רבות של אלמוגים, במיוחד מאלמוגים רכים.

אין להשתמש בניצול מסיבי של אלמוגים רכים, מכיוון שהוא יגרום נזקהמערכת האקולוגית. סימביונת החיידקים הקשורה לאלמוגים הרכים עלולה להפוך לפוטןאלטרנטיבה עולמית המייצרת cistanche כמקור לנוגדי חמצון [14,15]. קוֹסמֵטִיניסוחים שניתן ליישם ללא מאמץ ובנוחות נדרשים בעת השימושתרכובות קרוטנואידים. לפיכך, הניסוח הקוסמטי המועדף הוא בצורהשל שמנת. הקרם הוא התכשיר המוצק למחצה הנבחר שמתפשט בקלות על העור,אינו דביק, וקל לניקוי כך שהוא נוח לשימוש על ידי הצרכנים. השימוש שלחיידקי סימביונט כמקור לחומרי גלם קוסמטיים היא פריצת הדרך האחרונהצריך לפתח.

2.1. חומרים וכלים

סימביונת החיידקיםV. משכורותזן 19.PP.Sc1.6 שבודד מסינולריהsp. מקורימוצאו מהאי Panjang, Jepara, מרכז ג'אווה, אינדונזיה; הנקודה הספציפית היא בקואורדינטותשל "6◦340 37.3500 S", "110◦370 52.0100 E". החומרים הנדרשים כוללים מתנול (אנליטיכיתה) נרכש מ-Merck (Darmstadt, גרמניה);

2,2-דיפניל-1-פיקרילהידראזיל

(DPPH) מ-Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, ארה"ב). מרכיבים אחרים המשמשים בתכשירי הקרםכגון חומצה סטארית, גליצרין, Na tetraborate, triethanolamine (TEA), לנולין,שמן חמניות, שעוות דבורים, צטיל אלכוהול, span 80, גליצרול מונוסטארט וטווין 80 היונרכש מחברת Merck (Darmstadt, גרמניה). המכשירים בהם נעשה שימוש היו מכשיר UV-visספקטרופוטומטר Shimadzu 1240 (קיוטו, יפן), ברוקפילד LVDV-I Prime Viscometer(טורונטו, ON, קנדה), מד pH דיגיטלי USB Phs 3c 3d Rohs, צנטריפוגה IEC Centra MP4R(Thermo Electron, Waltham, MA, ארה"ב), ושיקר המסלול Daihan SHO 2D ​​(Wongju, קוריאה).

2.2. בידוד של סימביונט חיידקי של Sinularia sp.

הסילונריהsp. רקמות הונחו לתוך צלחות פטרי סטריליות שהיו מלאות בחלקןמי ים מעוקרים. המשטחים של רקמות האלמוגים הרכות נחתכו, ורק החלק הפנימימהדגימה שימשה לבידוד מיקרוביאלי. לבידוד חיידקים, סדרה של דילוליםנערך עבור כל הדגימות. מכל צלחת פטרי נאספו 10 מ"ל מהדגימהפיפטה סטרילית והונחו לתוך בקבוק המכיל 90 מ"ל של מי ים מעוקרים כדי לקבל א10−1 מְהִילָה. מה-10−1 דילול, 1 מ"ל הועבר לתוך צינור המכילה 9 מ"ל של סטרילימי ים כדי לקבל 10−2 מְהִילָה. תהליך דילול זה חזר על עצמו עד ל-10−5 מְהִילָההושג. דגימה (1 מ"ל) מכל סדרת דילול נאספה והונחה לתוך סטריליצלחת פטרי המכילה מדיום אגר Zobell 2216E (Himedia, מומבאי, הודו) לחיידקיםבידוד. לאחר מכן, צלחות הפטרי הודגרו בגיל 30◦C למשך יומיים. חיידק בצבע צהובמושבות שגדלות על פני המדיה של האגר הופרדו בשיטת פס ללהשיג זני חיידקים טהורים.

2.3. תרבות סימביונט חיידקים

החיידקיםV. Salariusזן 19.PP.Sc1.6 [16] חוסן על ידי העברת 1 מ"ל שלהמבודד לתוך 2 ליטר של Zobell Marine Broth 2216 סטרילי (Himedia, מומבאי, הודו). זה היהלאחר מכן הניחו על השייקר ב-100 סל"ד ב-27◦C עד שצבע המדיה הפך לצהוב (±7 ימים).לאחר מכן בודדו החיידקים הסימביוטיים שייצרו ציסטאנצ'ה וצנטריפוגה במשך 15 דקות ב-6000 סל"ד, ולאחר מכן הכדורים נפרדו ואז סוננובאמצעות נייר מסנן Whatman No 1 (Maidstone, בריטניה).

2.4. מיצוי קרוטנואידים

מיצוי ציסטאנצ'ה בשיטת הצום של השרוך ​​המתבצע בחושךחֶדֶר. מתנול (כיתה אנליטית) שנרכש מ- Merck (Darmstadt, גרמניה) היההוסף לתרבית הכדורים ולאחר מכן בוצע בצנטריפוגה למשך 10 דקות ב-6000 סל"ד. לאחר מכן, אהתקבל תסנין המכיל ציסטאנצ'ה וכדורים בצורה של מסה חיידקית,מסונן עם נייר סינון ווהטמן מס' 1, אידוי וייבש באמצעות גז N [14,15].

2.5. פורמולציות קרם

הפורמולה השתמשה בשלוש תכשירים עם סוגים שונים של קרם, כלומר לעומת,ואוו [16–18]. הנוסחה המשמשת היא כפי שמוצג בטבלה1.

שולחן 1.פורמולות קרם של תמצית קרוטנואידיםV. משכורותזן 19.PP.Sc1.6.

2.5.1. פורמולה 1: קרם נגד

המסנו את החומצה הסטארית והגליצרין בקערה. Na tetraborate ו-TEA היומומס במעט מים, ואז לשים בתמיסה של חומצה סטארית וגליצרין. ואז, ערבבנווהומוגג, והוסיפו מעט מים כדי שהתוצאות יהיו טובות. השלב האחרון היהלהוסיף את תמצית הקרוטנואידים ולערבב עד לפיזור אחיד.2.5.2. פורמולה 2: קרם אוראשית, הגליצרול מונוסטארט ואלכוהול הצטיל הומסו בכוס 1. חמניות וTween 80 היו מעורבבים בכוס 2. לאחר מכן, שמנו את התערובת בכוס 2 לתוך כוס 1. זהערבב עד לקבלת תערובת הומוגנית עם מעט מים חמים. לבסוף, הוספנו את הקרוטנואידלחלץ ולערבב אותו עד לקבלת תערובת הומוגנית.

2.5.3. פורמולה 3: קרם וו

2.6. הערכת שמנת

המאפיינים של שלוש תכשירי קרם הוערכו; ההערכה הראשוניתשבוצעה הייתה בדיקה אורגנולפטית. בבדיקות אורגנולפטיות, תצפיות כוללות שינויים בצבע, ריח (חמילות) ותחושה. בבדיקה האורגנולפטית, 25 אנשים שימשו כמשיבים,המורכב מ-15 מאומנים ו-10 אנשים לא מאומנים. הבדיקה הבאה הייתה הומוגניות,אשר מתבצע על ידי מריחת הקרם על צלחות זכוכית והתבוננות באחידות שלהצבע, בין אם הוא אחיד או לא. לאחר מכן, בבדיקת ה-pH, הקרם הופקדלתוך כוס זכוכית, ולאחר מכן מדידת ה-pH נעשתה באמצעות מד pH שהיהכייל בעבר עם תקן Dappar (pH של 4 ו-pH 7). כוח הפיזורהבדיקה בוצעה על זכוכית שקופה שהונחה על נייר גרפי ו-0.5 גרם של שמנת

הניח על הכוס ולאחר מכן מכוסה בכוס שקופה נוספת ונשאר ל±5 שניות ללהשיג את קוטר השטח שנוצר. לאחר מכן, משקלים שונים של 50, 100, 150, 200, 250, 300,350, 400 ו-450 גר' הונחו על הזכוכית השקופה וקוטר האזור שנוצרנצפה. המפרט קובע שהקרם צריך להתפזר בקלות ובאופן אחיד.

בינתיים, בדיקת צמיגות הקרם נקבעה באמצעות Brookfield LVDV-I Primeויסקומטר בוצעה בדיקת הידבקות עם חפץ זכוכית המסומן כ4 × 2.5 ס"מ, לאחר מכן הונח עד 0.25 גרם של קרם בנקודת האמצע של האזור וכוסה בחפצי זכוכית אחרים. לכן, עומס של 1 ק"ג הונח למשך 5 דקות, ואז שני חפצי הזכוכיתשהוצמדו הותקנו על ציוד הבדיקה שקיבל עומס של 80ז. לאחר מכן, צוין הזמן הדרוש להפרדה בין שני חפצי הזכוכית. תצפיות עבורכל הבדיקות בוצעו מדי שבוע במשך 5 שבועות.

2.7. מדידת פעילות נוגדת חמצון

קרמים מומסים במתנול הוכנו לסדרה של ריכוזים. לפיכך, אסך של 3 מ"ל מהדגימה הודללו ב-1 מ"ל של תמיסת 0.1 מ"ל DPPH והותרהלעמוד במשך 30 דקות. עם השקיעה, התמיסה הומוגגה וספיגתה הייתהנמדד באמצעות ספקטרופוטומטר באורך גל של 517 ננומטר. הספיגה של הגם תמיסת בקרה, כלומר DPPH ללא תמיסת בדיקה, נקראה. יתר על כן, הכמות פעילות נוגדת החמצון נמדדה באמצעות המשוואה הבאה [19]: 

2.8. מדידת גורם הגנה מפני השמש (SPF)

בוצעה מדידה של ערך מקדם ההגנה מפני השמש (SPF).בַּמַבחֵנָה. ה-SPFבוצעה בדיקה לקביעת פעילות קרם ההגנה של הקרם באמצעות UV-Visספקטרופוטומטר. כל קרם, במשקל 0.1 גרם, הומס ב-100 מ"ל של מתנולבקבוק נפח וסונן באמצעות Whatman No. 1. סה"כ 3 מ"ל מהתמיסה הוכנסולתוך קובטה כדי למדוד את הספיגה שלה באמצעות ספקטרופוטומטר UV-Vis. לאחר מכן, הקביעת ערך SPF באמצעות ספקטרופוטומטר UV-Vis הייתה ידועה מ-מאפיינים של ספיגת קרם באורכי גל של 290 עד 320 ננומטר עם מרווחים של 5 ננומטר.חישוב ערך SPF משתמש במשוואה הבאה [20,21]: 

abs=ספיגת המדגם.

תבקש עוד:

דוא"ל:wallence.suen@wecistanche.com Whatsapp פלוס 86 15292862950