תַקצִיר:חשיפה לאולטרה סגול (UV) גורמת להזדקנות העור המובילה להתקמטות העור ולצניחה באמצעות ייצור מיני חמצן תגובתיים (ROS). מסיבה זו, הגנה מפני הזדקנות צילום היא תכונה חשובה במוצרים קוסמטיים ודרמטולוגיים. חומרים ביולוגיים שמקורם במוצרים טבעיים רצויים מאוד כמרכיבים אפשריים עתידיים מכיוון שחומרים ביולוגיים אלה הם לרוב בטוחים ויעילים. במחקר זה, מטרתנו לאפיין את פעילות ההגנה על העור של Pradosia multisite, המשמשת באופן מסורתי לטיפול בכוויות שמש ואדמת. קבענו את ההשפעות של ניקוי הרדיקלים החופשיים, האנטי-מלנוגני והלחות של תמצית מתנול של Pradosia multisite (Pm-ME) בקרטינוציטים (תאי HaCaT), מלנוציטים (תאי B16F10) ופיברובלסטים (פיברובלסטים עוריים אנושיים (HDF)) ריכוזים לא ציטוטוקסיים. תמצית מתנול רב-אתרים של פראדוסיה מכילה חומצה קומרית כמרכיב עיקרי, והתמצית הפגינה פעילות הגנה מפני ציטוטוקסיות הנגרמות על ידי UVB ו-H2O2-. תמצית זו גם דיכאה את הביטוי של metalloproteinases (MMPs) ו cyclooxygenase (COX) -2 בתאי HaCaT. הפחתה של ביטוי Sirt-1 בתנאים שטופלו ב-UVB ו-H2O2- התאוששה בתאי HaCaT על ידי Pm-ME. תמצית זו הציגה פעילות משמעותית של ניקוי רדיקלים חופשיים על פי מבחן 2,20 -casino-bis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid) salt diammonium (ABTS). ה-Pm-ME גם הגביר את רמות הביטוי של סינתאז חומצה היאלורונית (HAS) וטרנסגלוטמינאז-1 (TGM-1) בתאי HaCaT, מה שמצביע על פעילות לחות משוערת. מעניין לציין כי הביטוי של הגן מסוג קולגן 1 (Col1A1) ופעילות הפרומטור שלו, כפי שהוערכה על ידי בדיקת גן מדווח, נמצאו מוגברים בתאי HDF ו-HEK293. באופן דומה, Pm-ME עזר לשחזר את רמות הקולגן לאחר טיפול UVB ו- H2O2 ב- HDFs וכן הפחית את הסינתזה וההפרשה של מלנין מתאי מלנומה B16F10, מה שעשוי להצביע על ערך קוסמטי מלבנה מועיל. מעכב p38 SB203580 ומעכב JNK SP600125 דיכאו את ביטוי MMP-9 ו-COX-2 בתאי HaCaT שטופלו ב-H2O2-. באופן דומה, מעכב ERK U0126 עיכב HAS-2 בתאי HaCaT שטופלו ב-Pm-ME/H2O2-. ממצאים אלה הצביעו על עיכוב של JNK ו-p38 והפעלה של ERK יכולים להיות ממוקדים על ידי Pm-ME. לכן, Pm-ME עשוי להפעיל תכונות אנטי-פוטו-אייג'ינג ואנטי-מלנוגניות באמצעות ויסות חלבון קינאז המופעל על ידי מיטוגן, מה שעשוי להיות מועיל בתעשיית הקוסמטיקה.

על פי מחקרים רלוונטיים,cistancheהוא נפוץעֵשֶׂבשמכונה "עשב הנס שמאריך חיים". המרכיב העיקרי שלו הואcistanoside, בעל השפעות שונות כגוןנוגד חמצון, אנטי דלקתי, וקידום תפקוד מערכת החיסון. המנגנון בין cistanche והלבנת עורטמון בהשפעה נוגדת החמצון של גליקוזידים cistanche. המלנין בעור האדם מיוצר על ידי החִמצוּןשל טירוזין מזורז על ידיטירוזינאזותגובת החמצון דורשת השתתפות של חמצן, ולכן הרדיקלים החופשיים בגוף הופכים לגורם חשוב המשפיעמלניןהפקה. Cistanche מכיל cistanoside, שהוא נוגד חמצון ויכול להפחית את היווצרותרדיקלים חופשייםבגוף, ובכך מעכב את ייצור המלנין.

לחץ על תוסף Cistanche Tubulosa להלבנה

תבקש עוד:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

1. הקדמה

העור הוא האיבר הגדול ביותר בגוף, המשמש מחסום בין האורגניזם לסביבה, ואחראי על שמירה על הומאוסטזיס של העור ובסופו של דבר קביעת הישרדות האורגניזם [1]. העור מאורגן עם האפידרמיס, דרמיס עם מבנים אדנקסאליים ושומן תת עורי [2]. בנוסף, העור חשוב לתקשורת רציפה עם מערכת החיסון, העצבית והאנדוקרינית [3], הוא מעניק בעיקר הגנה מפני פתוגנים, כימיקלים, פציעות פיזיות וקרינה אולטרה סגולה (UV) [4]. ספקטרום אולטרה סגול מחולק לשלושה אזורים, UVC (200 עד 280 ננומטר), UVB (280 עד 320 ננומטר) ו-UVA (320 עד 400 ננומטר) [5]. מתוכם, UVB נספג בעיקר בשכבות העליונות של אפידרמיס העור וכן בדרמיס הפפילרי, בעוד UVA חודר לדרמיס הרשתית ביעילות נמוכה פי 1000 בהשראת השפעות ביולוגיות שונות, בהשוואה ל-UVB [5]. למרות ש-UVC מגיב מאוד ונספג בשכבת הקרנית, הוא מוסר בעיקר על ידי שכבת האוזון והאטמוספירה. כמקור קרינת UV עיקרי, UVB יכול להוביל לייצור מיני חמצן תגובתיים (ROS) כגון מי חמצן (H2O2) באמצעות הפעלה של אנזימים יוצרי ROS כולל NADPH אוקסידאז, קסנטין אוקסידאז וחומצת אמינו D אוקסידאז [6- 8] והשראת הזדקנות העור, מה שמוביל להתקמטות העור ולצניחה [9,10]. בנוסף, דווח כי תגובת הלחץ החמצוני גורמת לנזקים שונים לרכיבים התאיים כגון שומנים בממברנה תאית, חלבונים וחומצות גרעין [11]. תאי עור פגומים אלו יכולים ליזום תגובות דלקתיות המובילות לנזק בסופו של דבר המתבטא בעור חשוף כרונית [12].

סטרס חמצוני גורם להפעלה של גורמי שעתוק דלקתיים ורגישים לחיזור, גורם גרעיני (NF)-κB וחלבון אקטיבטור (AP)-1, ואנזימי האיתות שלהם במעלה הזרם, כולל חלבונים פעילי מיטוגן קינאז (MAPK) כגון חוץ-תאי. קינאז מווסת אות (ERK), p38 ו-c-Jun-N-terminal kinase (JNK) במסלול AP-1, או כמעכב של κB (IκB ), IκB kinase (IKK / ), ו AKT במסלול NF-κB קשור להשראת דלקת ויצירת קמטים [13]. קינאז מווסת אות חוץ-תאי מתווך בדרך כלל תגובות תא הקשורות לגורמי גדילה, JNK ותגובות תא מתווכות p38- הקשורות לציטוקינים ולמתח פיזי [14]. קינאזות חלבון המופעלות על ידי מיטוגן יכולות גם לגרום לייצור של מטלופרוטאינזים של מטריקס פרוטאוליטי (MMPs) [15], אשר מעוררים פירוק קולגן ובכך מפחיתים את גמישות העור [16]. לגבי רכיבים אלה, רכיבים או תמציות נוגדות חמצון כגון ג'ינסנוסיד, כורכומין, אפיקטצ'ין, אסיאטיקוסיד, זיוגליקוזיד I, מגנולול, חומצה גאלית, הידרוקסיצ'אוויקול, חומצות הידרוקסינמיות, חומצה glycyrrhizic, מנגיפרין, מירקו, חומצה רוזמרינית, טקטורוסולין, BIO1Ksoligenin, BIO1Ksoligenin, תמצית הידרו-אלכוהולית של חסידי Spartium junceum L. שימשה לפיתוח מוצרים נגד הזדקנות העור [17-21]. מכיוון שלחץ חמצוני ידוע כגורם עיקרי למחלות אנושיות ולתהליך ההזדקנות המשפיע על אורך החיים, מטבוליטים ביו-אקטיביים משניים בתזונה של בני אדם עםaתכונות נוגדות חמצוןנחשבים למרכיבים יקרי ערך [22,23].

גנים אחרים הקשורים להזדקנות צילום כוללים cyclooxygenase-2 (COX-2) ו-Sirt-1. ציקלואוקסיגנאז-2 מתבטא בדרך כלל בנגעי עור קדם-ממאירים המושרים על ידי UV [24], והעיכוב שלו יכול להפחית את השינוי הממאיר באפידרמיס [25]. ביטוי Sirt-1 יכול למנוע אפופטוזיס של התא ולהגביר את הישרדות התא [26]. מנגנון נוסף להגנה מפני קרינת UVB הוא ייצור של מלנין, פיגמנט המסונתז במלנוציטים ומופרש בהמשך לקרטינוציטים בשכבת האפידרמיס [1]. מלנין מיוצר על ידי חמצון של L-tyrosine והפיכתו לאחר מכן ל-L-dihydroxyphenylalanine (L-DOPA) [6] על ידי זירוז עם האנזים התלוי בנחושת טירוזינאז [27]. למרות תפקידו המגן, ייצור מוגזם של מלנין עלול ליצור כתמי גיל [28], מליזמה והיפרפיגמנטציה [29]. בגלל הטרנד הנוכחי הרואה בעור בהיר כסטנדרט היופי, תכשירי הלבנת עור המשיגים הלבנת נגעים היפרפיגמנטיים או הלבנת עור הפכו לנחשקים ביותר בתעשיות התרופות והקוסמטיקה [29]. לפיכך, מאמץ ניכר הופנה לפיתוח תכשירים המפחיתים את סינתזת המלנין [30]. מכיוון שהזדקנות העור קשורה לאובדן לחות העור, שיקול חשוב לשמירה על עור בריא הוא לחות מספקת [31]. חומצה היאלורונית (HA), גליקוזאמינוגליקן במשקל מולקולרי גבוה עם תכונות הידרופיליות, תורמת ללחות ולתכונות הפלסטיות של העור על ידי ויסות הביטוי של סינתזות חומצה היאלורונית (HAS) [32]. גן חשוב נוסף בעור הוא הקולגן, המספק תמיכה למבני האפידרמיס [33], ולכן אחראי לחוזק וגמישותו של העור [34] ושההשפלה שלו מובילה הן לצניחת העור והן להתקמטות. בנוסף, טרנסגלוטמינאז-1 (TGM-1) הוא אנזים המבוטא באופן אפידרמיס המזרז יצירת מעטפת תאי אפידרמיס cornified, המסייע במניעת איבוד מים [35,36].

משפחת Sapotaceae מופצת בעיקר באזורים הטרופיים והסובטרופיים של אסיה ומסואמריקה. מינים רבים ממשפחת Sapotaceae מייצרים פירות אכילים בעלי ערך כלכלי גבוה. פירות אלה שימשו למטרות רפואיות. בפרט, הזרעים עשירים בחומרי הזנה, שומנים צמחיים, חלבונים ותרכובות מועילות אחרות. לדוגמה, שמן מאמי שימש באופן מסורתי בטיפוח העור, לטיפול בכוויות שמש ואריתמה [37]. מוזיקה פראדוסיה היא בן למשפחת Sapotaceae ששמן שימש באופן מסורתי לריפוי צלקות עור [38]. עם זאת, תכונותיו טרם הוכחו מדעית. מטרת מחקר זה הייתה אפוא לקבוע את הערך הפוטנציאלי של P. mutisii בטיפול בעור, קוסמטולוגיה ופרמקולוגיה.

2. תוצאות

2.1. אפיון Pm-ME והשפעתו על כדאיות התא

Pm-ME לא חסם את הכדאיות של עד 100 מיקרוגרם/מ"ל, אך הפחית מעט את הכדאיות ב-200 מיקרוגרם/מ"ל בתאי HaCaT, B16F10 ותאי פיברובלסטים עוריים אנושיים (HDF), לפי 3-(4,{{ 7}}דימתילתיאזול-2-יל)-2,5-מבחן דיפנילטטרזוליום ברומיד (MTT) (איור 1a–c). באמצעות כרומטוגרפיה נוזלית בלחץ אולטרה-גבוה (UHPLC) וכרומטוגרפיה נוזלית (LC)/ספקטרומטריית מסה, נמצאה תרכובת עיקרית ב-Pm-ME כחומצה קומרית ב-4.27 דקות (איור 1ד).

2.2. אפקט מגן של Pm-ME נגד נזקי UVB ו- H2O2

כדי לקבוע אם Pm-ME מגן על תאי HaCaT מפני נזק שנגרם על ידי הזדקנות UVB ו-H2O2-, התאים טופלו מראש בריכוזים שונים של Pm-ME (0-100 מיקרוגרם/מ"ל) לפני החשיפה ל UVB או H2O2. איור 2a מראה שהקרנת UVB הפחיתה את מספר תאי ה-HaCaT הנצמדים, בעוד Pm-ME הגדילה את היצמדות התא. בנוסף, נזק סלולרי שהופעל על ידי H2O2 התאושש על ידי Pm-ME ב-100 מיקרוגרם/מ"ל (איור 2ב). כדי להבהיר האם Pm-ME מוחלש UVB- ו-H2O2-תיווך היווצרות קמטים, רמות הביטוי של MMP-1 ו-MMP-9 נמדדו בעקבות טיפול UVB או H2O2 בנוכחות או בהיעדר Pm-ME. Pm-ME עיכב את הביטוי של MMP-1 ו-MMP-9 בשני התנאים (איור 2c,d). לאחר מכן בדקנו האם Pm-ME דיכא תגובות דלקתיות הנגרמות על ידי רדיקלים חופשיים על ידי מדידת רמות mRNA של COX-2. בתנאים שטופלו ב-UVB או H2O2-, רמות mRNA של COX-2 דוכאו מאוד על ידי Pm-ME ב-100 מיקרוגרם/מ"ל (איור 2e,f). לאחר מכן מדדנו את רמות ה-mRNA של הגן האנטי-אייג'ינג, Sirt-1, כדי לקבוע את השפעתו על הזדקנות הצילום. גם UVB וגם H2O2 הפחיתו את ביטוי Sirt-1, בעוד ש-Pm-ME שיחזר להפליא את הביטוי שלו ב-50 ו-100 µg/mL (איור 2g,h). מכיוון ש-Pm-ME דיכא תגובות מולקולריות ותאיות מסוימות בתאי HaCaT שטופלו ב-UVB או H2O2, בשלב הבא בדקנו האם לתמצית זו יש פעילות נוגדת חמצון ישירה באמצעות 2,2′-קזינו-ביס (3-ethylbenzothiazoline{{57 }}חומצה סולפונית) מבחן ABTS, שבו Pm-ME הראה פעילות ניקוי רדיקלים חופשיים תלוית מינון (איור 2i).

2.3. השפעות לחות ומגבירות קולגן של Pm-ME

Pm-ME הגביר את הביטוי של גנים הקשורים ללחות כגון HAS-2 ו-TGM-1 בתאי HaCaT (איור 3א). כדי לקבוע אם Pm-ME יכול לשפר את הביטוי של גן קולגן (Col1A1), טיפלנו תחילה בתאי HDF עם Pm-ME (0-100 מיקרוגרם/מ"ל) ולאחר מכן קבענו את רמת הביטוי של Col1A1. כפי שמראה איור 3b, ביטוי מוגבר של הגן Col1A1 בתנאי טיפול Pm-ME נצפה בהתאם למינון. תוצאות אלו אושרו עוד יותר באמצעות בדיקת גנים מדווחים עם מבנה Col1A1-Luc שעבר טרנספקציה בתאי HEK293 ובתאי HDF. כצפוי, Pm-ME הגביר את פעילות הפרומטור של הגן Col1A1 באופן תלוי מינון בשני התאים (איור 3c,d). בנוסף, נמצא כי Pm-ME משחזר את רמות הגן של קולגן שירדו הן בתנאי הקרנת UV והן בתנאי טיפול ב-H2O2 (איור 3e,f).

2.4. השפעה אנטי-מלנוגנית של Pm-ME

מכיוון שריכוז היעד שלנו תואם ל-100 מיקרוגרם/מ"ל, קבענו אם Pm-ME מסוגל לדכא את הפרשת המלנין ואת התוכן הסלולרי שלו. כדי לקבוע זאת, תאי מלנומה B16F10 עוררו על ידי הורמון מגרה של מלנוציטים (-MSH) בנוכחות או בהיעדר Pm-ME או ארבוטין (שליטה חיובית). לאחר מכן נמדדו רמות המלנין. Pm-ME הפחית את הפרשת המלנין עד ל-75 אחוז ב-100 מיקרוגרם/מ"ל (איור 4a,b). Pm-ME גם הפחית את תכולת המלנין בתאי B16F10 שטופלו ב-MSH עד ל-30 אחוז ב-100 מיקרוגרם/מ"ל, בעוד שתכולת המלנין ב-50 מיקרוגרם/מ"ל לא הופחתה באופן משמעותי, בהשוואה לבקרה החיובית (-MSH) (איור 4ג) . לבסוף, כדי לקבוע את ההשפעה של Pm-ME על פעילותם של אנזימים מייצרי מלנין, ביצענו בדיקת אנזים טירוזינאז. מעניין לציין כי Pm-ME (0-400 מיקרוגרם/מ"ל) הפחית משמעותית את פעילות טירוזינאז בריכוזים גבוהים מ-200 מיקרוגרם/מ"ל, בעוד שחמצה קוג'ית (KA), תרופה מבוקרת, הפחיתה מאוד את פעילות טירוזינאז (איור 4ד).

2.5. מנגנונים מולקולריים של אנטי-פוטו-אייג'ינג בתיווך Pm-ME והשפעות לחות

3. דיון

בגלל עושרם בחומרי מזון וויטמינים, מינים שונים ממשפחת ה- Sapotaceae שימשו ברפואה המסורתית [39]. עם זאת, השימוש הפוטנציאלי של P. mutisii בתעשיות הקוסמטיקה והתרופות טרם נחקר. מסיבה זו, חקרנו את הפעילות המגנה על העור של P. mutisii בקרטינוציטים ובפיברובלסטים בתנאים מזיקים לעור. כמו כן, הערכנו את התאמתו לתכשירים קוסמטיים. מכיוון שבדיקת רעילות לזיהוי סיכונים פוטנציאליים בבני אדם היא שלב הכרחי וקריטי הן בתעשיית התרופות והן בתעשיית הקוסמטיקה [40], הציטוטוקסיות של P. mutisii נבדקה בתאי HaCaT, B16F10 ו-HDF. Pradosia mutisii הפגין רעילות נמוכה עד 200 מיקרוגרם/מ"ל וללא רעילות של 100 מיקרוגרם/מ"ל בתאי HaCaT, B16F10 (איור 1a,b) ותאי HDF (איור 3c). באמצעות ניתוח UHPLC/MS (איור 1c), הוכח כי ל-Pm-ME יש ריכוז גבוה של חומצה קומרית, חומצה פנולית [41,42]. פוליפנולים הם מטבוליטים משניים של צמחים ומעורבים בדרך כלל בהגנה מפני קרינת UV או זיהום על ידי פתוגנים. בגוף האדם, הוכח כי פוליפנולים מגנים מפני התפתחות סרטן, מחלות לב וכלי דם, סוכרת, אוסטאופורוזיס ומחלות ניווניות עצביות [1]. חומצה קומארית הוכחה כבעלת תכונות נוגדות חמצון ואנטי דלקתיות [43].

קרינה אולטרה סגולה היא אחד הגורמים העיקריים לייצור רדיקלים חופשיים (למשל, ROS) בעור. רדיקלים חופשיים יכולים להוביל להזדקנות העור ולסרטן אם הם מצטברים לאורך תקופות ארוכות [44]. ידוע שלחץ חמצוני שנוצר על ידי רדיקלים חופשיים ונזקים יכולים לסכן את הישרדות התאים, התפשטות, התמיינות ומטבוליזם [45,46]. בהתאם לדיווחים קודמים [47,48], מצאנו גם שנזק תאי הנגרם כתוצאה מקרינת UVB בתאי HaCaT. הנזק כלל התפשטות מופחתת, אפופטוזיס מוגברת ותגובות מולקולריות כולל ביטוי של גנים הקשורים לדלקת, היווצרות קמטים והזדקנות (איורים 2 ו-3). מכיוון שרדיקלים המושרים על ידי UVB הם גורמים עיקריים הפוגעים בתאים, ברקמות ובאיברים, נמצא שכמה תרכובות אנדוגניות כגון מלטונין ומטבוליט שלו [49-52], ובילירובין [53] מעורבים בניקוי רדיקלים רעילים על ידי הצגת נוגדי חמצון תכונות הגנה על צילום ואנטי אייג'ינג בגופנו. עד כה, תרכובות אלו פותחו גם כחומרים ביולוגיים בעלי ערך רב שניתן ליישם על גופנו על ידי תעשיות תרופות [54]. עם זאת, ויטמין C, קו-אנזים Q10 ו-tocopherol הופכים למוצרי מכירות עולמיים מובילים לבריאות האדם בגלל תכונותיהם האנטי-אוקסידטיביות המשמעותיות. מעבדות המחקר בחברות תרופות וקוסמטיקה ממשיכות לשים דגש מרכזי על זיהוי ופיתוח תרופות נוגדות חמצון יעילות ותרכובות טבעיות. במחקר שלנו, ראינו של-Pm-ME הייתה פעילות נוגדת חמצון חזקה כאשר נבדק באמצעות מבחן ABTS (איור 2i). באופן דומה, Pm-ME הפך את הדיכוי המושרה על ידי רדיקלים חופשיים של היצמדות לתאים, השראת נזק גרעיני וביטוי שונה של גנים כגון MMP-1, MMP-9 ו-COX{{27} } בתנאי UVB ו- H2O2 באופן תלוי מינון (איור 2a-f). יש לציין כי Pm-ME שיחזר רמות של הגן Sirt-1 (איור 2g,h), המעורב במניעת אפופטוזיס והגברת הישרדות התא בתנאי עקה חמצונית [26]. תוצאות אלו מרמזות מאוד שהזדקנות התאים הייתה קשורה ללחץ חמצוני באמצעות ויסות מטה של ​​ביטוי Sirt1. התכונות האנטי-אוקסידטיביות של Pm-ME אפשרו שחזור של ביטוי Sirt1. זה עלול לגרום להגנה מפני נזקי עור והזדקנות בתנאי קרינת UVB טבעיים in vivo. בנוסף, קיימת אפשרות ש-Pm-ME מסוגל גם להגן על תגובות סלולריות הנגרמות על ידי UVC מכיוון שתנאי קרינת ה-UV שלנו עשויים להיות מזוהמים ב-UVC, למרות שהשתמשנו במערכת סינון כדי לנקות את כל אורכי הגל מתחת ל-290 ננומטר. התפיסה לפיה חומרים ביולוגיים נוגדי חמצון יכולים לשפר את הנזק הסלולרי והמולקולרי בתנאי עקה חמצונית הניעה את הייצור המסחרי של מוצרים שונים כגון BIOGF1K, ginsenoside Ro, EGCG, תמצית Fraxinus chinensis ונוגדי חמצון סינתטיים מסוימים. ההשפעות נגד קמטים ואנטי-צילום של חומרים ביולוגיים במוצרים אלה ואחרים דווחו רבות בתעשיית הקוסמטיקה [48,55,56].

שמירה על לחות נאותה של העור [31] ויצירת קולגן חדש [57] הם תהליכים חשובים לעור בריא. הביטוי של גנים לחות (HAS2, TGM-1) (איור 3a) וקולגן (Col1A1) גדל בצורה יוצאת דופן על ידי Pm-ME (איור 3b-d), ועזר לשחזר את רמות הקולגן לאחר חשיפה ל-UVB וטיפול ב-H2O2 (איור 3ה,ו). לכן, זה מצביע על כך ש-Pm-ME יכול להיות מרכיב יעיל בשמירה על עור בריא. דיכוי המלנין על ידי Pm-ME מועיל גם לשימוש בתכשירים קוסמטיים. למרות שלמלנין יש ערך בהגנה על העור מפני קרינת UV, מכיוון שנשים רבות מעדיפות להבהיר את עורן, הלבנה על ידי פעילות אנטי-מלנוגנית היא תכונה שימושית בחומרים קוסמטיים [29]. Pm-ME (100 מיקרוגרם/מ"ל) הציג פעילות מעכבת חזקה במהלך המלנוגנזה, כפי שהוערכה על ידי קביעת רמות המלנין מהמדיום המופרש והירידה המוצגת ברמות הפרשת המלנין (איור 4a-c). יתרה מכך, Pm-ME (200 מיקרוגרם/מ"ל) דיכא משמעותית את פעילות האנזים טירוזינאז (איור 4ד), מה שמרמז שריכוז גבוה יותר יעיל ישירות לדיכוי פעילות האנזים, בעוד שריכוז נמוך יותר מעורב בוויסות הפרשת המלנין. לכן, בגלל פעילותו האנטי-אוקסידטיבית, אנטי-פוטו-אייג'ינג, אנטי-קמטים, מגרה קרם לחות ואנטי-מלנוגני, Pm-ME יכולה להיחשב כמועמדת קוסמטית טובה. כדי להמשיך ולחקור אפשרות זו, אנו מתכננים להעריך את היעילות הקלינית שלה במחקרים עתידיים.

ביצענו מחקרים כדי לקבוע את המנגנונים המולקולריים שבאמצעותם Pm-ME הפעיל את נוגד החמצון והלחות שלו בקרטינוציטים. התמקדנו באנזימים הקשורים ל-MAPK (ERK, JNK ו-p38), מכיוון שאנזימים אלו ממלאים תפקיד קריטי בהזדקנות ובמלנוגנזה של קרטינוציטים ומלנוציטים בעור [58,59]. לדוגמה, מסלול ה-ERK מתווך תגובות תאי לגורם גדילה משתנה- 1 על ידי הגדלת מסלולי סינתזה של קולגן [60] ו-HA בקרטינוציטים [61]. JNK ממלא תפקיד מפתח באפופטוזיס קרטינוציטים הנגרמת על ידי מתח חמצוני [62]. האנזים p38 חשוב בשמירה על ההומאוסטזיס של העור האנושי [63]. מסלולי JNK ו-p38 מתווכים שניהם תגובות תאיות לציטוקינים ולמתח פיזי [14]. מסלולים אלה מופעלים על ידי מתחים המושרים על ידי UVB ו-ROS. מסלולים אלו יכולים להגביר את הייצור של גנים פרוטאוליטיים של MMP ו-COX-2 [15], הקשורים לפירוק קולגן ולדלקת בעור, בהתאמה [64]. יש לציין שלחץ חמצוני חסם את הזרחון של ERK, בעוד ש-p38 ו-JNK זרחנו כאשר טופלו ב-H2O2 (איור 5a). לעומת זאת, Pm-ME הגביר את הזרחון של ERK והפחית את הזרחון של p38 ו-JNK (איור 5a), מה שמרמז כי אנזימים אלה יכולים להשתתף באופן דיפרנציאלי בפעילויות פרמקולוגיות בתיווך Pm-ME. כדי להבין יותר את התפקיד הפונקציונלי של MAPK בהשפעות האנטי-פוטו-אייג'ינג, האנטי-מלנוגניות והאנטי-דלקתיות של Pm-ME בקרטינוציטים מוקרי UVB ו-H2O2-, נעשה שימוש במעכבים ספציפיים של MAPK. התוצאות של איור 5b הצביעו על כך שעיכוב של p38 ו-JNK על ידי Pm-ME הביא להשפעות נוגדות קמטים ואנטי דלקתיות, מכיוון שמעכב p38 (SB203580) ומעכב JNK (SP600125) חסמו את הביטוי של MMP{{45 }} ו-COX-2, בהתאמה. יתרה מכך, זרחון ERK המופעל על ידי Pm-ME גרמה לביטוי של גנים הקשורים ללחות מכיוון שטיפול ב-Pm-ME גרם לביטוי של HAS-2, בעוד ש-U0126 דיכא אותו (איור 5c). תוצאות אלו העלו כי אנזימים הקשורים ל-MAPK תרמו לפעילות אנטי-אייג'ינג, אנטי-קמטים ואנטי-דלקתית בתיווך PM-ME. הקרנת UVB ידועה כמגבירה אשדות איתות אחרים, כגון אלו המקושרות ל-NF-κB ו-STAT3 [65,66]. עדיין יש לחקור אם Pm-ME יכול לווסת את נתיבי האיתות הללו.

לסיכום, מצאנו ש-Pm-ME עשיר בחומצה קומארית הפגין פעילויות נוגדות חמצון, אנטי קמטים, ממריצות קרם לחות ואנטי מלנוגניות בתאי עור שהוקרנו על ידי UVB או שטופלו ב-H2O2. Pm-ME הגביר את הזרחון של ERK באופן תלוי מינון אך הפחית את הזרחון של p38 ו-JNK (איור 6). התוצאות שלנו הצביעו על כך ש-Pm-ME עשוי להיות חומר ביולוגי יעיל המגן על העור. מכיוון ש-Pm-ME הציג פעילויות מבטיחות מאוד הן בתאי עור סרטניים (תאי HaCaT ו-B16F10) והן בקרטינוציטים אנושיים רגילים במהלך מצבי עקה חמצונית, לכן, אנו מציעים את התפקידים המועילים של השימוש ב-Pm-ME בתכשירים קוסמטיים. עם זאת, לתאי מלנומה יש מאפיינים חריגים כגון שיבושים בבקרת מחזור התא, דפוסי ביטוי גנים חריגים ויכולות בידול מוגבלות [67], ויש לעקוב אחר עבודה נוספת עם מלנוציטים ראשוניים כדי להבין בדיוק את הפעילות האנטי-מלנוגנזה של Pm-ME ושלו. מנגנון מולקולרי. יתרה מכך, צמחים מאותה משפחה (Sapotaceae) או סוג (Pradosia spp.) ייבחנו לפעילויות דומות להגנת העור.

בקש עוד: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501