גרעינים תלאמיים קדמיים: מצע קריטי לזיכרון מזווג לא מרחבי בחולדות חלק 2

2|חומרים ושיטות

2.1|בעלי חיים ותנאי דיור

חולדות זכר לונג-אוונס (בני 12 חודשים; ממוצע של 630 גרם) אוחסנו בקבוצות של שלושה או ארבעה בכלובי Makrolon (48 28 22 ס"מ) במחזור הפוך 12- שעות אור-חושך (האור נדלק ב-8 בערב ).

בדיקות התנהגות התרחשו בשלב החשוך של מחזור האור, חמישה מפגשים בשבוע; תצפיות אישרו שחולדות היו יותר פעילות יחסית בשלב החושך. החולדות נשמרו על 85% ממשקל הגוף שניזונו חופשי עם מים באופן חופשי; המזון היה באופן חופשי לפני ואחרי ניתוח להתאוששות לאחר הניתוח.

ניתוח הוא תהליך של טיפול במחלות ושיפור הבריאות הגופנית. תהליך ההחלמה לאחר הניתוח דורש תשומת לב מיוחדת. בנוסף להתאוששות הפיזית, הרגשה טובה דורשת גם התמקדות בהתאוששות הזיכרון. קיים קשר חזק בין התאוששות לאחר הניתוח לזיכרון.

במהלך הניתוח, גורמים כמו תגובת הגוף למצוקות והשפעות של תרופות הרדמה משפיעות לרוב על תפקוד הזיכרון של המוח. לאחר שהגוף מתאושש, שימו לב לשמירה על תזונה נכונה, פעילות גופנית מתונה ושינה מספקת. בתקופת ההחלמה מחוץ לבית החולים יש להמשיך ולהימנע מפעילות יתר ולשמור על מצב נוח של הגוף.

בנוסף להרגלי חיים, התאמות פסיכולוגיות סבירות מועילות גם בשיקום הבריאות והזיכרון. הרגע את עצמך, שמור על נפש שלווה ועזור לעצמך להסתגל להתאוששות הזיכרון. במקביל, עליך להשתתף באופן פעיל בפעילויות פנאי ולתקשר עם קרובי משפחה וחברים כדי לשמור על המוח שלך פעיל ולשפר את היכולות הקוגניטיביות והזיכרון שלך. ניתן להגביר את הפעילות הזו בהדרגה וניתן לעשות אותה בעצם פעם בשבוע.

בקיצור, תהליך ההחלמה לאחר הניתוח דורש תשומת לב כוללת. שמירה על הרגלי חיים טובים והתאמות פסיכולוגיות ממלאות תפקיד חשוב מאוד בקידום ההתאוששות הפיזית והתאוששות הזיכרון. בואו נתמודד עם זה בחיוב, בביטחון מלא ובתקווה. אנחנו צריכים לשפר את הזיכרון, ו-Cistanche deserticola יכולה לשפר משמעותית את הזיכרון, כי Cistanche deserticola יכולה גם לווסת את האיזון של נוירוטרנסמיטורים, כמו הגדלת רמות האצטילכולין וגורמי גדילה. חומרים אלו חשובים מאוד לזיכרון וללמידה. בנוסף, בשר יכול גם לשפר את זרימת הדם ולקדם אספקת חמצן, מה שיכול להבטיח שהמוח יקבל מספיק חומרים מזינים ואנרגיה, ובכך לשפר את חיוניות המוח וסיבולת.

לחץ על דע דרכים לשיפור תפקוד המוח

כל הנהלים עמדו בהנחיות שאושרו מטעם ועדת האתיקה לבעלי חיים של אוניברסיטת קנטרברי. ארבע קבוצות של חולדות הוקמו בהקצאה אקראית לאחר היכרות טרום ניתוח במבוך הזרוע הרדיאלית (RAM) ובמסלול ההמראה. ארבע הקבוצות היו נגעי ATN דו-צדדיים עם או ללא עקבות בין ריח לגירוי אובייקט, כשהם מאומנים במשימה המשותפת ושתי הקבוצות המקבילות של נגע-דמה.

גודל המדגם הסופי היה (1) דמה-ללא עקבות=7 (כלומר קבוצת נגעי-דמה ללא מרווח בין ריח וגירויים של אובייקט בשימוש במשימה המשותפת לזוגיות); (2) Sham-Trace=7 (קבוצת Shamlesion ניתנת ל-10- עקבות בין הצגת הריח לבין גירויי האובייקט); (3) ATN-No Trace=8; ו-(4) ATN-Trace=9. חולדה נוספת של נגע ATN לא נכללה בשל אי עמידה בקריטריונים של הנגע (ראה להלן).

2.2|כִּירוּרגִיָה

חולדות הורדמו עם איזופלורן (אינדוקציה 4%; תחזוקה 2.5%) והונחו במכשיר סטריאוטקסי עם מוטות אוזניים אטראומתיים (Kopf, Tujunga, CA). פס החותך הוגדר ל-7.5 מ"מ מתחת לקו הבין-אורלי כדי למזער נזקי פורניקס.

בכל חצי כדור, שתי עירוי כוונו לגרעין האנטירו-ונטרלי (AV; עליונה ותחתון), ועירוי אחד כוונה לגרעין האנטרו-מדיאלי (AM). כל ניתוח השתמש בקואורדינטות קדמית-אחורית אחת (AP) אחת ביחס למרחק Bregma-Lambda של חולדה בודדת (כל הערכים אינמ"מ). עבור נגעי AV, קואורדינטות ה-AP היו: 2.20 עבור B-L 6.9-7.2; 2.25 עבור B–L 7.3 עד 7.6; 2.30 עבור B–L גדול או שווה ל-7.7. עירוי AV נעשו ב-5.68 ו-5.73 מתחת לדורה ו-1.52 לרוחב לקו האמצע.

עירוי ה-AM בוצע {{0}}.1 מ"מ יותר קדמית מקואורדינטת AV, ב-5.76 מתחת לדורה ו-1.16 לרוחב; הנגע הראשון ב-AM נעשה לאחר השלמת כל עירוי ה-AV והחל קונטרלטרלי לאתר ה-AV האחרון. 0.15 M N-methyl-d-aspartate (NMDA; Sigma, CastleHill, NSW) ב-0.1 M חיץ פוספט (pH 7.20) הוזרם לכל אתר בקצב של 0.04 ul לדקה באמצעות 2.5-מזרק ulHamilton (Reno, NV, ארה"ב) באמצעות משאבת מיקרו עירוי (Stoelting, Wood Dale, IL).

חצי הכדור של האתרים של AV קיבלו {{0}}.12 ו-0.10 ul עבור אתרי הגחון הדורסלנד, בהתאמה; 0.06 ul שימש עבור כל אתר AM. מחט המזרק נשארה במקום למשך 3 צדדים, לאחר עירוי.
ניתוחי נגעי דמה השתמשו באותו הליך, אך המחט הונמכה ל-1 mm מעל אתרי ה-AV העליון וה-AM עם מתן אינפוזיה.

2.3|משימות התנהגותיות

זיכרון RAM בעל שמונה זרועות אישר את הפגיעה בזיכרון המרחבי בחולדות עם נגע ATN לאחר ניתוח. מנגנון מסלול שימש כדי לאמן את החולדות בכל המשימות שאינן מרחביות, כלומר, הבחנה פשוטה של ​​ריח ואובייקט פשוט ומשימות הקשורות לזוגיות של ריח-אובייקט וריח-עקבות-אובייקט.

לפני הניתוח, חולדות מוגבלות במזון הורגלו ל-RAM בעל שמונה הזרועות, המתואר להלן, כדי לחלץ 0.1 גרם חתיכות שוקולד (Foodfirst LTD Auckland, NZ) ולהסתגל לפתיחה וסגירה של דלתות זרועות. במסלול פרספקס אדום (איור 1), חולדות עוצבו גם כדי לתקוע באף כובע פלסטיק לבן עגול של 2-ס"מ שהיה 10 ס"מ מעל גובה הרצפה במרכז ספוג דק על תוספת פרספקס שקוף שהוצמד אליו קיר הקצה.

הם גם עוצבו כדי לדחוף (באמצעות אף או כפה) חפץ שהיה ציר בחלקו האחורי של בסיסו לראש באר מזון שהיה שקוע במרכזו של גוש עץ בגודל 5 8.5 3 ס"מ. האוכל הכיל חתיכות שוקולד (והחזיק מזון בלתי נגיש מתחת לשקע). החפץ ששימש לאימון מקדים לא שימש שוב. לאחר הניתוח, חולדות המתאוששות הוכרו מחדש עם ה-RAM והן עם המסלול.

2.4|זיכרון עבודה מרחבי ב-RAM

לאחר הניתוח, זיכרון עבודה מרחבי נבדק באמצעות זיכרון RAM הממוקם במרכז חדר ללא חלונות (3 3 מ'). למבוך היה רכזת עץ צבועה באפור ברוחב 35 ס"מ עם שמונה זרועות אלומיניום (65 ס"מ אורך 8.6 ס"מ רוחב, עם גבולות בגובה 4.5 ס"מ), מורמות 67.5 ס"מ מעל רצפת החדר. קירות פרספקס שקופים (אורך 19 ס"מ וגובה 25 ס"מ) נמשכים לאורך צד אחד של כל זרוע מהרכזת כדי למנוע מחולדות לקפוץ בין זרועות.

באר מזון שחור מעץ (5 8.5 3 ס"מ), עם מזון בלתי נגיש מתחתיו, הוצבה בקצה כל זרוע. במהלך הבדיקה, 2 0.1 גרם חתיכות שוקולד נכחו היטב בכל מזון בתחילת כל זרוע. ניסוי. דלתות פרספקגליוטין שקופות, שניתן היה להעלותן מתחת לרכזת באמצעות מערכת גלגלות, שלטו בגישה לזרועות הרכז.

עשרה ימים רצופים של אימון רשמי ב-RAM שימשו לבדיקת זיכרון עבודה מרחבי. החולדה הונחה במוקד המרכזי, וכעבור 10 שניות, כל שמונה הזרועות נפתחו, והחולדה הורשה לעשות בחירה שהוגדרה כשתי הרגליים האחוריות מעל סף זרוע. לאחר שהחולדה נכנסה לזרוע, כל הדלתות היו סגורות, והיא הייתה מוגבלת לזרוע למשך 15 שניות, ללא קשר לשאלה אם היא בחרה נכונה.

לאחר מכן הורשה החולדה לחזור למרכז המרכזי והחזיקה שם במשך 10 שניות לפני שכל הדלתות נפתחו מחדש כדי לאפשר בחירה נוספת בזרוע. המשפט הסתיים כאשר ה-rathad ביקר בכל שמונה הזרועות, 20 בחירות זרוע נעשו או 10 דקות חלפו.

2.5|משימות לא מרחביות: הבחנה פשוטה ולמידה זוגית-משולבת

גם אפליה פשוטה וגם משימות משויכות לזוג השתמשו באותו מסלול פרספקס אדום (93 26 26 ס"מ) שהונח על שולחן בגובה 75-ס"מ (איור 1). ניתן לחלק את המסלול על ידי שלוש דלתות נשלפות אנכית (redPerspex, 26 26 ס"מ) שנבחרו על סמך המשימה ההתנהגותית הספציפית. באשר להיכרות, הספוג הדק 6.5 6 8 מ"מ עם המכסה במרכזו החזיק פרס מזון שוקולד (איור 1).

הספוג היה מחובר לדלת הניתנת להסרה במסלול (למשימות הנלוות) או לדופן הקצה של המסלול (עבור משימת ההבחנה הפשוטה). לכל ריח נעשה שימוש בספוג אחר בתוספת דלת, שהושרה בסמוך לכלי הקיבול עם 5 מ"ל שמן חמניות מעורבב עם 20 ul של שמנים אתריים של חומר ניו זילנדי.

הריחות היו לימון וציפורן למשימות הקשורות לזוגיות, וקינמון ולימון למשימות ההבחנה הפשוטות, או להפך בקבוצות מאוזנות. חפצים קלים ומובחנים מבחינה ויזואלית (איור 1) הוצמדו על ידי ציר בחלק האחורי של בסיסו לחלק העליון של באר המזון, כך שחולדה יכולה בקלות לדחוף את החפץ לאחור (אף או כפה) כדי לחפש את הבאר אחר תגמול מזון.

מסגרת עץ (גובה 1.8 מ' מהרצפה ברוחב 1.3 מ'), עטופה בווילונות שחורים, סגרה את כל הצדדים של אזור הבדיקה כדי לצמצם רמזים מרחביים במהלך הבדיקה.

ההבחנות הפשוטות (רק ריח; אובייקט בלבד) והמשימות המשויכות לזוגיות השתמשו בהליך 'ללכת/לא ללכת'.

הניסוי הראשון עבור כל מפגש החל על ידי ריסון החולדה באזור ההתחלה למשך 120 שניות כדי להתאקלם מחדש למוטיב; ניסויים שלאחר מכן השתמשו ב-20 שניות באזור ההתחלה הזה. Allrats קיבלו 12 ניסויים המוניים בכל מפגש יומי, עם sixgo (מתוגמל) ושישה ניסויים ללא תגמול (ללא תגמול) בסדר אפסאודו אקראי. לא יותר משלושה ניסויים ללא יציאה בוצעו ברצף בפגישה.

אף אחד מארבעת הזוגות השונים של גירוי ריח-אובייקט לא חזר על עצמו בניסויים רצופים. פריטים נכונים במשימות ההבחנה הפשוטות ובצמדי הגירוי הנכונים במשימות המשותפות לזוגות היו מאוזנים בין עכברוש.

לאבחון הריח הפשוט, תגובה הוגדרה כחיטוט באף לתוך הכובע במרכז הספוג עם ריח; להריח את הספוג בלבד נחשבה לתגובה אסורה. מזון תמיד היה קיים בכיפה במרכז הספוג למשימות הקשורות לריח-חפצים; ההיבט go/no-go כאן מתייחס לשאלה האם האובייקט נדחף כדי לחשוף אם תגמול מזון נמצא מתחתיו, בקצה המסלול.

עבור אובייקטים, תגובה הוגדרה ככל דחיפה עם אף או כפה שהטה את האובייקט לאחור. השהייה מהזמן שהדלת האחרונה הוסרה וכאשר החולדה יצרה אינטראקציה עם הריח (חבטת האף בכובע; לאבחון ריח פשוט) או עם החפץ (דחף לאחור על הציר, להבחנה פשוטה של ​​אובייקט ומשימות נלוות) נמדד באמצעות שעון עצר שקט (דיק סמית', ניו זילנד).

הצופה ישב בתוך הווילונות ובסמוך למסלול כדי להפעיל את הדלתות ולתעד את ההתנהגות. ניסוי הוגדר כ'נכון' אם החולדה הגיבה תוך פחות מ-8 שניות בניסוי או לא הגיבה לפני 8 שניות בניסויים ללא נסיעה.

2.6|אפליה פשוטה

מחצית מהחולדות קיבלו הכשרה במשימה הפשוטה של ​​אבחון ריחות, ואחריה אבחון האובייקט הפשוט ולהיפך בחצי השני. תועדה חביון בין דלת X (איור 1א) ​​ואינטראקציה עם הריח או החפץ בקצה המסלול. חולדות אומנו במשימה הפשוטה של ​​הריח וההבחנה הפשוטה של ​​אובייקט עד שהגיעו לקריטריון (80% נכונים במשך 2 ימים רצופים).

עבור המשימה הפשוטה של ​​אבחון ריח, הוצג ריח בודד בכל ניסוי. הכוונה להבחין איזה משני הריחות הוצמד לתגמול מזון שהוצג בספוג בקצה תא B (איור 1א).

במשימה הפשוטה של ​​אבחון אובייקטים, אובייקט בודד הוצג בכל ניסוי בסוף תא B (לא מוצג באיור 1). ת'רט היה צריך ללמוד איזה משני חפצים הוצמד לתגמול מזון שהוצג מתחת לחפץ.

2.7|משימות משויכות (trace andno-trace) משימות אלו השתמשו בפריסה חדשה של דלתות נשלפות אנכית (איור 1). החולדות למדו איזה משני זיווגי ריח-אובייקט יתוגמלו (למשל ריח 1 + אובייקט A וריח 2 + אובייקט B) ואיזה זיווג לא יתוגמל (כלומר ריח 1 + אובייקט B וריח 2 + אובייקט א').

ללא קשר לזיווג, חולדות תמיד קיבלו פרס על הצגת הריח כאשר הוכנס לתא השני של המסלול. זה היה תא C במצב 'ללא עקבות' שבו לא נעשה שימוש בתא A ותא B היה תא ההתחלה. הריח היה בקצה תא B עבור מצב 'עקבות', עבורו שימש תא A כתיבת ההתחלה.

חולדות במצב עקבות היו נתונים לעיכוב של 10- בין הצגת הריח וגירויים של אובייקט, על ידי החזקה בתא C, בעוד חולדות במצב ללא עקבות נחשפו לאובייקט מיד לאחר האינטראקציה שלהן עם הריח (לאחר אוכלים את הפרס). בתנאים של עקבות וגם בתנאי ללא עקבות, תיעדנו זמן השהייה לחצות את תא D, מרגע הרמת DoorZ ועד שהחולדה יצרה אינטראקציה עם החפץ או נמנעה מאינטראקציה איתו במשך 8 שניות.

שתי קבוצות של חולדות (נגע-דמה ו-ATN-נגע) אומנו במשימות משויכות תא-ריח-אובייקט (ללא קבוצות עקבות), ושתי קבוצות מקבילות אומנו ב-theodor-trace-object-שייך משימה (Trace groups) עד שהן הגיעה לקריטריון (80% ניסויים נכונים לאורך 3 ימים) או לכל היותר 50 ימים.

2.8|מבחן שימור לאחר רכישה

שמירת המשימה המשותפת לזוג עבור כל חולדה בוצעה 5 ימים לאחר שהגיעה לקריטריון או לאחר 50 ימי אימון. הפגישה הזו השתמשה ב-12 ניסויים המוני מתוגמלים/לא מתוגמלים ביום אחד באופן זהה שהשתמשו בו בעבר עבור החולדה ההיא.

2.9|היסטולוגיה

2.9.1|זלוף ואיסוף רקמות

ב-3 הימים שלפני בדיקת השמירה, חולדות בודדות הכירו כלוב נקי ריק למשך 90 דקות בחדר שקט חשוך. מיד לאחר הניסוי האחרון במבחן הריכוז, החולדה הוכנסה לכלוב שלה בחדר השקט החשוך המוכר 90 דקות לפני הזילוף.

חולדות הורדמו עמוק עם נתרן פנטוברביטל (125 מ"ג/ק"ג) וזלפו דרך לב עם תמיסת מלח ואחריה פרפורמלדהיד [4% PFA ב-0.1 M phosphate buffer(PB)] כדי לתקן את המוח. מוחות היו מקובעים לאחר 4% PFA ואחריו מינימום של 48 שעות בתמיסה ארוכת טווח (20% גליצרול ב-0.1 M PB). קטעי עטרה 40-מיקרומטר נאספו באמצעות מיקרוטום מקפיא (Thermo Fisher, בריטניה) ואוחסנו בתמיסת קריו-מגן (30% גליצרול, 30% אתילן גליקול ב-0.1 M PB) ב-20 C עד לעיבוד לאימונוהיסטוכימיה.

קטעי העטרה נאספו בשתי סדרות נפרדות. הסדרה הראשונה תפסה קטעים עוקבים בחמישה קריובילים לאימונוהיסטוכימיה (כלומר אחד מכל חמישה). סדרה זו כללה בלוק קדמי של קטעים מהקורטקס הקדם-מצחתי לאזור המחיצה (בערך {{0}}}.7 עד 0.6 מ"מ מברגמה) ובלוק אחורי מהתלמוס המדיודורסלי (כ-3.5 מ"מ מברגמה) ועד הזנב. קליפת מוח רטרו-ספניאלית.

הסדרה השנייה תפסה קטעים עוקבים לאימות הנגע. קטעים אלו נאספו בארבעה כדורים קריוביים מהחזית המיידית ל-ATN ועד לתלמוס המדיודורסלי האחורי (בערך 0.6 עד 3.5 מ"מ מברגמה).

2.9.2|צביעת Neu-N ואימות נגע ATN

מקטעים צפים חופשיים בכל אזור ה-ATN נשטפו (3 10 דקות) ב-0.1 M מלוחים מבוצר פוספט עם Triton-X (0.2%; PBSTx) לפני הדגירה במאגר חוסם פרוקסידאז אנדוגני למשך 30 min [1% מי חמצן (H2O2), 50% מתנול (CH3OH) ב-2%PBSTx].

החתכים הודגרו למשך הלילה ב-4 C נוגדן ראשוני inanti-NeuN (1:5000; monoclonal-MouseCat# MAB377; Millipore, קליפורניה ארה"ב) ב-PBSTx עם 1% סרום עיזים תקין (NGS; Life Technologies, NZ).

עודף חיץ נוגדנים הוסר עם PBSTx ולאחר מכן דגירה בנוגדן משני עז נגד עכבר ביוטיניל (1:1000 Cat# BP-9200-50: VectorLaboratories, קליפורניה ארה"ב) למשך הלילה ב-4 C ב-PBSTx ו-1% NGS. חתכים הונחו ב-ExtrAvidin (מצומד פרוקסידאז; 1:1000; Sigma, NSW אוסטרליה), PBSTx ו-1% NGS למשך שעתיים בטמפרטורת החדר.

כדי להסיר עודפי ExtrAvidin ו-Triton X{{0}}, החלקים נשטפו ב-PBS, PB, ולאחר מכן Tris buffer (pH 7.4 ב-H2 מזוקק0) כדי להכין את המקטעים להדמיה עם diaminobenzidine שהוכן טרי ( DAB 0.05%; Sigma, ב-0.01% H2O2 במאגר Tris).

תגובת ה-DAB (כ-5 דקות) הופסקה באמצעות חיץ טריס (1 10 דקות שטיפה), וחתכים הונחו ב-PB ב-4 מעלות צלזיוס למשך הלילה לפני הרכבה על שקופיות ג'לטיניות והורשו להתייבש. השקופיות התייבשו באמצעות אלכוהול מדורג (70%-100%) לפני ניקוי אינקסילן והותקנו עם DPX (06522; Sigma-Aldrich) וכיסוי כיסוי.

נעשה שימוש במספר התאים החיוביים ל-Neu-N ב-ATN כדי לקבוע את מידת הנגע. זה השתמש בקטעים מהמיספרה השמאלית והימנית עבור כל אחד מתוך ארבעה 40-מיקרומטרים מקטעים ברחבי ה-ATN והאזור שנכמת באמצעות ImageJ (NIH, ארה"ב). צביעת תאים חיובית NeuN צולמה ב-5 מטרות במיקרוסקופ זקוף LeicaDM6 B ומצלמת DFC7000T (Leica Microsystems, גרמניה).

ספירות אוטומטיות של התאים התקבלו באמצעות ImageJ (תוכנת ניתוח תמונה, המכון הלאומי לבריאות, NIH, ארה"ב). האזור המקיף את הנוירונים באזור ה-ATN נבחר באופן ידני והתמונות הומרו ל-{{0}}בקנה מידה אפור, הרקע הופחת (מתגלגל=40), הומר למסכה ופונקציית פרשת המים הוחלה, וכל התאים הנוירונים מעל הסף (סף 'MaxEntropy', מעגליות 0.5–1.0) נספרו.

סף הגילוי היה זהה עבור כל המקטעים. גרעינים אוטומטיים של תאים צבועים ב-NeuN נספרו בתשעה מהחולדות הדמה (חמש בקבוצת Sham-Trace וארבעה בקבוצת Sham-No Trace) כדי לבטא ספירת תאים ב-ATN.

ספירות אוטומטיות של גרעינים מוכתמים ב-NeuN של תאים שנחסכו בכל החולדות עם נגעי ATN הושוו ביחס לספירה הממוצעת של תאי NeuN שנצפו בחולדות הדמה. נגעים מקובלים הוגדרו כמגיעים לקריטריון של 50% אובדן תאים ב-ATN, עם מינימום של 25% לכל חצי כדור. זה תואם את הקריטריונים של נגע ATN במחקרים קודמים (Mitchell & Dalrymple-Alford, 2005, 2006; Perryet al., 2018).

2.9.3|אימונוהיסטוכימיה של Zif268

קטעים צפים חופשיים עובדו בצורה דומה לזה של NeuN, אך הודגרו בנוגדן ראשי פוליקלונלי Zif268 ארנב (Egr-1; 1:1000 Cat# sc-110; Santa CruzBiotechnology, ארה"ב) למשך 72 שעות בשעה 4 C ב-PBSTx עם 1%NGS, ולאחר מכן דגירה בנוגדן משני נגד ארנבת עיזים ביו-טיניל (1:1000: Vector LaboratoriesBA-1000) למשך הלילה ב-PBSTx ו-1% NGS.

לאחר הדמיה של DAB (18 דקות), צביעת תאים חיוביים של Zif268-בכל אזור של עניין צולמה עם אובייקט 10 עם מיקרוסקופ אור (לייקה, גרמניה). ספירות אוטומטיות של התאים התקבלו באמצעות ImageJ ( NIH, ארה"ב) באותו אופן כמו תאים NeuNpositive, למעט המעגליות נקבעה ל-0.65–1.0.

ספירות של תאים חיוביים של Zif268- עבור כל האזורים השתמשו באותו אלגוריתם סף, כאשר בין שניים לשישה מקטעים לכל אזור עניין בכל חולדה נכמתו. נעשה שימוש בספירת התאים הממוצעת החיובית של Zif268- לכל mm2 על פני מקטעים (משתי ההמיספרות) באזור של עניין.

2.10|ניתוח נתונים

ANOVA באמצעות Statistica (v13; Dell Inc.) בוצעה כדי לבדוק הבדלים ממוצעים בין ארבע קבוצות החולדות (Sham-No Trace, Sham-Trace, ATN-No Trace ו-ATNTrace). גורמי מדדים חוזרים נוספו במשך ימים (RAM ואפליה פשוטה), בלוקים של ניסויים (משימות משויכות) וספירות Zif268 על פני אזורים קשורים או תת-אזורים של עניין.

ה-ANOVA הן למשימות RAM והן למשימות ההבחנה הפשוטות השוו בין ארבע קבוצות כדי לאשר ששתי קבוצות הנגעים-Sham ושתי ה-ATN-נגעים היו עקביות זו עם זו, אך שימו לב שלא היה רכיב עקבות במטלות ה-RAM או משימות ההבחנה הפשוטות. הן עבור אפליה פשוטה והן עבור משימות משויכות במסלול, נעשה שימוש בטרנספורמציה הדדית של נתוני חביון בניסויים בודדים כדי להבטיח הומוגניות של שונות.

בכל יום מבחן נתון, השהיות שעברו שינוי יצרו זמן חביון ממוצע עבור כל אחד מששת הניסויים הלא מתוגמלים וששת הניסויים המתוגמלים. עבור משימות ההבחנה הפשוטות, ניתחנו את ציון הבדל ההשהיה הממוצע (ממוצע הניסויים המתוגמלים פחות הממוצע של הניסויים הלא-מתוגמלים) אך לא את הניסויים המתוגמלים והלא-מתוגמלים בנפרד עקב כשל באחסון נתונים.

כל שלושת מדדי ההשהיה היו זמינים עבור משימות הזיכרון המשויכות לזוגות (ניסויים ללא תגמול, ניסויים מתוגמלים והפרשי חביון). כדי להסביר השוואות מרובות וכדי לאזן שגיאות מסוג I ו-Type II, השתמשנו ברמת המובהקות של p < 0.02 עבור ניתוחי התנהגות, שכן היו שלושה מדדים קשורים במשימה המשותפת-משולבת (ניסויים ללא תגמול, ניסויים מתוגמלים והפרש חביון ממוצע).

היו שש ניתוחים ראשוניים עבור אזורי עניין עבור ביטוי Zif268, כך שהמשמעות בניתוחים אלו נקבעה ל-p < 0.01. מבחני Posthoc Newman-Keuls (NK) העריכו הבדלים בקבוצות. ניתוח אפקטים עיקרי פשוט שימש כאשר היו אינטראקציות משמעותיות הכוללות גורמים חוזרים ונשנים של מדידות.

3|תוצאות

3.1|אימות נגע

כל 18 החולדות עם נגעי ATN, מלבד אחת, עמדו בקריטריון האפריורי של 50% נזק דו-צדדי ל-ATN ומינימום של 25% לכל חצי כדור. הנזק הדו-צדדי החציוני היה 76% בשתי קבוצות הפגיעה ב-ATN (טווח: ATN-No Trace, 61%-93%; ATN-Trace, 63%-93%; איור 2). לחולדה שלא נכללה היה נגע מספק רק בהמיספרה אחת (48% בסך הכל, 75% משמאל ו-20% מימין).

איור 2d מראה שספירות ה-NeuN עבור נוירונים ATN בחולדות הנגע ב-ATN (M=3388, SD=2024) היו כולן מתחת לערכים שנמצאו בחולדות הנגע הדמה (M=15, 339, SD=1065; ספירה זו הייתה דומה לזו שדווחה על ידי Frost et al., 2020). לשמונה מתוך 17 חולדות הנגע (ארבעה בקבוצת Trace וארבעה בקבוצת No-Trace) לא הייתה כל נזק לתלמוס המדיודורסלי (MD) או ל-Reunions/Rhomboid (Re/Rh) גרעינים, ונזק קטן יחסית ל- המבנים האלה נשארו תשע חולדות עם נגעים.

כאשר התרחש נזק MD, זה היה בהיבטים הקדמיים שנמצאים בסמוך ל-ATN. לכן, נזק ל-MD הוערך מ-{{0}}.72 ל-+2.10 מ"מ בקירוב מ-Bregma, שם הוא נע בין 0% ל-41% אובדן של תאים על פני הכלל כולו קבוצה (חציון=21%). כאשר התרחש נזק Re/Rh, הוא היה גם סמוך לאזור ATN, כך שהוא הוערך בקירוב של 1.08 עד 2.04 מ"מ מברגמה, שם הוא נע בין 0% ל-33% (חציון=6%). שים לב שערכי אחוז הפגיעה הללו אינם מייצגים את כל אזורי ה-MD וה-Re/Rhregion, מכיוון שהאזורים האחוריים של שני הגרעינים היו שלמים בכל החולדות עם נגעי ATN.

For more information:1950477648nn@gmail.com