שינוי העברת נוראפינפרין לאחר למידה מרחבית פוגע בגיבוש זיכרון בתיווך שינה בחולדות

השימוש הטיפולי בתרופות נוראדרנרגיות הופך את הערכת השפעותיהן על הקוגניציה לעדיפות גבוהה. נוראפינפרין (NE) הוא נוירומודולטור חשוב למגוון תהליכים קוגניטיביים ועשוי לתרום באופן חשוב לגיבוש זיכרון בתיווך שינה. השידור NE משתנה בהתאם למצב ההתנהגותי ו/או המוח ומשפיע על הפעילות העצבית הקשורה. כאן, הערכנו את ההשפעות של שינוי העברת NE לאחר למידה של משימה תלויה בהיפוקמפוס על פעילות עצבית וזיכרון מרחבי בחולדות זכרים בוגרים.

יותר ויותר מחקרים מראים שנוראפינפרין קשור קשר הדוק לזיכרון. נוראפינפרין הוא נוירוטרנסמיטר הממלא תפקידים חשובים בגוף, שאחד מהם הוא קידום היווצרות ואחסון זיכרון.

תפקידו העיקרי של אפינפרין הוא לעורר את מערכת העצבים ולשפר את הריכוז והעירנות. אלו מאפיינים הקשורים קשר הדוק לזיכרון. כאשר אנו נמצאים במצב מלחיץ, רמות האדרנלין עולות, מה שמכניס את המוח למצב ערני ביותר ומקל על זכירת מידע חשוב.

בנוסף, לאפינפרין עשויות להיות השפעות ארוכות טווח על היווצרות הזיכרון. מחקרים אחרונים מצאו שכאשר זיכרונות מופעלים שוב ושוב, רמות האפינפרין עולות, מה שעוזר לשפר את שימור הזיכרון והתמדה.

בנוסף להשפעות שלעיל, אפינפרין יכול להשפיע גם על היווצרות ואחסון של זיכרונות על ידי השפעה על האינטראקציה בין נוירונים במוח. השפעה זו יכולה לקדם היווצרות ושימור של זיכרונות על ידי ויסות הקישוריות של רשתות עצביות.

לסיכום, לאפינפרין יש קשר חשוב עם זיכרון. עלינו לשמור על גישה חיובית ולהתמקד בהפעלת הגוף והמוח שלנו כדי להעלות את רמות האדרנלין, ובכך לשפר את הזיכרון והיכולות הקוגניטיביות שלנו. ניתן לראות שאנו צריכים לשפר את הזיכרון, ו-Cistanche deserticola יכול לשפר משמעותית את הזיכרון מכיוון ש-Cistanche deserticola הוא חומר רפואי סיני מסורתי בעל השפעות ייחודיות רבות, אחת מהן היא שיפור הזיכרון. היעילות של בשר טחון מגיעה מהמרכיבים הפעילים השונים שהוא מכיל, לרבות חומצה, פוליסכרידים, פלבנואידים ועוד. מרכיבים אלו יכולים לקדם את בריאות המוח בדרכים שונות.

לחץ על דע זיכרון לטווח קצר כיצד לשפר

ניתנו קלונידין (0.05 מ"ג/ק"ג, ip; n= 12 חולדות) או פרופרנולול (10 מ"ג/ק"ג, ip; n= 11) לאחר כל אחד משבעה מפגשי למידה יומיים ב- 8-מבוך רדיאלי בזרוע. בהשוואה לקבוצת המלוחים (n= 9), החולדות שטופלו בתרופות הראו שיעורי למידה נמוכים יותר. כדי להעריך את ההשפעות של תרופות על פעילות קליפת המוח וההיפוקמפוס, תיעדנו EEG פרה-פרונטלי ופוטנציאל שדה מקומי מתת-התחום CA1 של ההיפוקמפוס הגבי למשך שעתיים לאחר כל מפגש למידה או ניהול תרופות. שתי התרופות הפחיתו באופן משמעותי את מספר אדוות ההיפוקמפוס למשך 2 שעות לפחות. ציון שינה מבוסס EEG גילה כי קלונידין גרם לתחילת השינה למהירה יותר תוך הארכת ערנות שקטה.

פרופרנולול הגביר ערנות פעילה על חשבון שינה לא מהירה של תנועת עיניים (NREM). קלונידין הפחית את התרחשותם של תנודות איטיות (SO) ושל צירי שינה במהלך שנת NREM ושינה את הצימוד הזמני בין SO לבין צירי שינה. לפיכך, שינוי תרופתי של שידור NE יצר מצב מוח לא אופטימלי לגיבוש זיכרון. התוצאות שלנו מצביעות על כך שה-NE שלאחר הלמידה תורם ליעילות של תקשורת ההיפוקמפוס-קורטיקלית שבבסיס איחוד הזיכרון.

שימוש קליני בתרופות נוראדרנרגיות מעריך את השפעותיהן על תפקודים קוגניטיביים בעלי חשיבות גבוהה1,2. קלונידין ופרופרנולול הן מהתרופות הנפוצות ביותר שנרשמו. קלונידין משמש כתרופה להורדת לחץ דם וכמשכך כאבים, אך ניתנת גם לטיפול תרופתי של הפרעות שינה, ומאז לאחרונה לטיפול בהפרעות קשב וריכוז (ADHD) ומחלת פרקינסון1,3,4. פרופרנולול משמש לטיפול במספר מצבים קרדיווסקולריים וחרדה5.

למרות היתרונות הבריאותיים הברורים, השינוי התרופתי ברמות הנוראפינפרין (NE) עלול, כתופעת לוואי, לפגוע ביכולות הקוגניטיביות של המטופלים. התפקיד החיוני של שידור NE לעיבוד מידע מודע (או 'מקוון') מבוסס היטב2,6, 7. מחקרים קודמים הדגישו את החשיבות של NE גם במצבים לא מודעים (או 'עדינים') כמו שינה8-10 כאשר מתרחשים שינויים מולקולריים, סינפטיים ומעגלים הנגרמות על ידי למידה11. במהלך השינה שלאחר הלמידה, בתחילה, עקבות זיכרון לאביליים מתייצבים באמצעות הפעלה מחדש של ייצוגים עצביים המקודדים זיכרון בהיפוקמפוס (HPC) ולאחר מכן משולבים בניאוקורטקס לאחסון לטווח ארוך12.

הוכח שתחלופה תרופתית של רמת NE לאחר למידה השפיעה על גיבוש הזיכרון בבעלי חיים13-18 ובבני אדם9,10,19,20. יתר על כן, מחקרי הפרמקולוגיה ההתנהגותית תואמים את התפקיד המסייע של NE עבור פלסטיות סינפטית21-25. למרות עדויות נרחבות שסיפקה הפסיכו-פרמקולוגיה על תפקידו של NE עבור קידוד וגיבוש זיכרון, הדינמיקה שלאחר הלמידה של שידור NE לא אופיינה באופן שיטתי. מחקרים אחרונים על ידי ניטור שחרור NE ברזולוציה גבוהה של עכברים שמתנהגים באופן ספונטני חידדו עוד יותר עבודה קודמת והציעו תפקיד של שחרור NE להמשכיות של שינה ללא תנועה מהירה (NREM) ואיחוד זיכרון בתיווך שינה NREM26,27

התנודות האיטיות הניאו-קורטיקליות (~1 הרץ) (SO), צירי השינה התלמו-קורטיקליים (10-16 הרץ) ואדוות ההיפוקמפל (~150 הרץ) הם סימני ההיכר של שנת NREM וזוהו כתנודות המפתח המאפשרות רמת מערכות תלויות שינה איחוד זיכרון28. ההשפעה של NE בפעילות מתואמת זמנית בתוך רשת קורטיקו-היפוקמפוס תומכת בזיכרון נותרה לא מובנת מספיק11. מדידת מיקרודיאליזה של שחרור NE פרה-פרונטלי בחולדה זיהתה עלייה חולפת ~2 שעות לאחר הבחנה בריח תוך חסימת האדרנורצפטורים הפרה-פרונטליים לאחר למידה גרמה לליקוי זיכרון29. ב-HPC הגבי, נדרשת הפעלה של -אדרנורצפטורים לגיבוש יעיל של זיכרון רגשי ומרחבי30,31. גם קולטני 1- וגם קולטנים אדרנרגיים מעורבים ביצירת צירי שינה ואדוות ההיפוקמפוס26,32,33. בעבר תיעדנו פעילות מוגברת של הנוירונים הנוראדרנרגיים של לוקוס קורולאוס (LC) במהלך שנת NREM לאחר למידה34 והתואמות שלהם ירי עם SO35. במחקר האחרון שלנו, הראינו כי בחולדות מורדמות, ההפעלה הפיזית של LC מווסתת את דינמיקת האוכלוסייה בקליפת המוח בקנה מידה זמני של מחזור SO יחיד. לבסוף, שינוי של דפוסי פעילות LC נטורליסטיים במהלך שנת NREM הוביל לליקוי בזיכרון37,38.

במחקר הנוכחי, קישרנו חוסר בלמידה מרחבית עם פעילות עצבית משתנה ברשת התומכת בזיכרון. כדי לשנות העברת NE, השתמשנו בקלונידין ובפרופרנולול, שתי תרופות רלוונטיות מבחינה קלינית. קלונידין מדכא את הירי של נוירוני LC-NE באמצעות הפעלה של 2-אדרנורצפטורים ומפחית את שחרור NE מסופי ה-LC39. פרופרנולול חוסם את העברת ה-NE על ידי קשירה ל-adrenoreceptors ולאחר טיפול חוזר במינון מתון (< 40 mg/kg) inhibits the LC activity40,41. We report that the alteration of NE transmission during the post-acquisition period impaired spatial learning. The reduction of SO, sleep spindles, and hippocampal ripples together with the appearance of high voltage spike-and-wave patterns (HVS) was indicative of a pharmacologically induced switch to a brain state that was likely suboptimal for memory consolidation. Our results further support the view that NE transmission during NREM sleep importantly contributes to information processing within the thalamocortical and hippocampal-cortical networks, which are thought to mediate systems-level memory consolidation.

תוצאות

התוצאות התקבלו מחולדות Sprague-Dawley זכרים בוגרים (300-400 גרם) (n=38) שהתפצלו באופן אקראי לשלושה מצבי תרופה (קלונידין, פרופרנולול ומלח). התנאים עבור כל חולדה והכללת/אי הכללת הנתונים מפורטים בטבלה משלימה S1.

קלונידין ופרופרנולול לאחר למידה גורמים לחוסר זיכרון מרחבי.

אימנו בסך הכל 32 חולדות במשימת זיכרון מרחבי במהלך שבעה מפגשים יומיים (איור 1א; ראה שיטות משלימות לפרטים). לעשרים ושש חולדות הושתלו אלקטרודות כרוניות לניטור ה-EEG הקדמי ופוטנציאל השדה המקומי (LFP) היפוקמפוס (ראה שיטות לפרטים). 6 חולדות נוספות היו שלמות (לא מושתלות) אך עקבו אחר אותו פרוטוקול אימון/תרופה. חשוב לציין, לא היה הבדל בשיעור הלמידה בין החולדות המושתלות והלא מושתלות (איור משלים S1). מיד לאחר כל מפגש למידה חולדות קיבלו קלונידין (0.05 מ"ג/ק"ג, ip; n=12), פרופרנולול (10 מ"ג/ק"ג, ip; n=11 ), או תמיסת מלח (1 מ"ל/ק"ג, ip; n=9). בפגישת הלמידה הראשונה (ללא תרופות), לא היה הבדל בין קבוצות לפי משתנה התנהגותי כלשהו (טבלה משלימה S1). במהלך הלמידה, כל החולדות נכנסו באופן פעיל לזרועות מבוך שונות (איור 1b) ואספו את כל התגמולים כמעט בכל ניסוי (איור 1c); דפוס התנהגות זה לא הצביע על הבדל בין קבוצות בפעילות תנועתית כללית או במוטיבציה למזון. רוב המשתנים ההתנהגותיים שיקפו את דינמיקת הלמידה. הדיוק של ביצוע המשימות גדל בהדרגה (מדדים חוזרים ונשנים ANOVA, F (3.7,106.6)=12.0, p<0.0001; Fig. 1d) with the between-group difference approaching a significance level (F (2,29)=3.33, p=0.05). The overall number of errors was significantly higher in the drug-treated rats (Fig. 1e). There was a significant effect of repetition (F (5,145)=11.0, p<0.001) and between-group difference by the number of errors (F(2,29)=7.34, p=0.003). The post-hoc comparisons confirmed a higher number of errors in the drug-treated groups (clonidine: p=0.031, propranolol: p=0.002; Bonferroni post-hoc comparisons vs. saline). Notably, propranolol-treated rats made the most errors during the first trial (Fig. 1f); the latter was indicative of a memory retrieval defect. To further explore the nature of spatial memory deficit, we split the errors into working memory (WM, re-entering the maze arm within a trial) and reference memory (RM, entering unbaited maze arm) errors. There was a significant between-group difference by both WM (F (2, 29)=8.0, p=0.002) and RM (F (2, 29)=5.0, p=0.014). The posthoc comparisons showed that drug-treated rats committed significantly more RM errors (Fig. 1g). Besides, the propranolol-treated rats also made more WM errors (Fig. 1g). Despite obvious spatial memory deficit at the early stages of learning, all rats reached a similar performance level by the end of the learning period (Fig. 1d,e). The trial time was decreasing (F (3.5, 102.4)=16.1, p<0.0001), yet equally in all groups (time: F (2,29)=0.43, p=656). Finally, we used the K-means cluster analysis to split rats according to their learning speed (see Methods for details). Indeed, individual rats learned the task at different rates (Fig. 1h). Remarkably, the proportion of 'slow' learners was much higher among the drug-treated rats (Fig. 1i).

קלונידין ופרופרנולול מדכאים אדוות ההיפוקמפוס.

הערכנו את ההשפעות של clonidine and propranolol על אדוות ההיפוקמפוס כמרכיבי המפתח של איחוד זיכרון12. ניתוח רטרוספקטיבי גילה כי ב-14 מתוך 26 חולדות, שהושתלו ואומנו בתחילה במבוך, זיהוי האדוות לא היה אמין עקב כשלים טכניים שונים. לכן, כדי להגדיל את גודל המדגם, ה-EEG וה-LPP של ההיפוקמפוס תועדו מ-6 חולדות נוספות, שטופלו בתרופות, אך לא נבדקו על מבוך (איור משלים S1). לפיכך, ההשפעות של תרופות על אדוות ההיפוקמפוס נבדקו ב-24 חולדות (קלונידין, n=8; פרופרנולול, n=9 ומלח, n=7; טבלה משלימה S1). שתי התרופות הפחיתו באופן משמעותי את קצב האדוות למשך שעתיים לפחות לאחר ההזרקה (F(2, 23)=13.27, p=0.0002; איור 2a–d). סיווג התנהגות חולדות לערות פעילה (AW), ערות שקטה (QW) ושנת NREM (ראה שיטות לפרטים) גילה שההשפעה הבולטת ביותר של שתי התרופות התרחשה במהלך שנת NREM בהשוואה לפרקי AW ו-QW (טבלה 1). כלומר, בהשוואה לקבוצת המלוחים (n=7), מידת דיכוי האדוות במהלך שנת NREM השתנתה מ-40.1% ל-91.3% לאחר קלונידין (n=8) ומ-2.3% ל-86 .6% לאחר הזרקת פרופרנולול (n=9). מלבד ירידה בולטת בשיעור האדוות, לא התגלו השפעות תרופה על המאפיינים הפנימיים של האדוות (משרעת: F(2, 23)=1. 12, p=0.34; חזק: F(2, 23)=3.3, p=0.056; תדירות תוך אדווה: (F(2, 23){{ 45}}.40,p=0.11), למעט משך אדוות ארוך יותר לאחר קלונידין (F(2, 23)=11.47, p=0.0004; איור. 2ד–ו).

השפעות של קלונידין ופרופרנולול על המצב ההתנהגותי ותנודות EEG הקשורות לשינה. לאחר אי הכללה של נתוני EEG לא חוקיים (n{{0}} חולדות), הניתוחים המבוססים על EEG בוצעו תוך שימוש בסך הכל של 21 מערכי נתונים (קלונידין, n=6; פרופרנולול, n{{4} }, ומלח, n=6; טבלה משלימה S1). בנוסף להשפעות על פעילות אוכלוסיית ההיפוקמפוס, שתי התרופות השפיעו על דפוס ההתנהגות הספונטנית. היה הבדל בין קבוצות בזמן השהייה הכולל בכל מצב התנהגותי (AW: F(2, 20)=4.09, p=0.034; QW:F(2, 20){{ 16}}.84, p=0.021; NREM: F(2, 20)=4.66, p=0.023). באופן ספציפי, במהלך תקופת התצפית של 2 שעות לאחר ההזרקה, קלונידין האריך את ה-QW בעוד שפרופרנולול האריך את ה-AW וקיצר את שנת NREM (איור משלים S2). אף אחת מהתרופות לא השפיעה על משך העידן הממוצע באף אחד מהמצבים ההתנהגותיים (F(2, 20) ⩽ 2.57,p ⩾ 0.10 עבור כולם). השפעת הרגעה קלה של קלונידין באה לידי ביטוי בהתחלת שינה מהירה יותר (איור משלים S2).

יתר על כן, ה-EEG הקדם-פרונטלי הושפע באופן ספציפי לתרופה (איור 3a-c). באופן ספציפי, קלונידין הגדיל את הספק הסיגמה (10-16 הרץ) במהלך AW ו-QW תוך הפחתתו במהלך שנת NREM (איור 3d-f). חוץ מזה, במהלך שנת NREM בחולדות שטופלו בתרופות, הדלתא (< 2 Hz) power was decreased and the power within the 5–7 Hz frequency range was increased due to the appearance of HVS (Fig. 3f). Te observed changes in the EEG power spectrum reflected drug-induced modulation of the oscillatory events like SO and sleep spindles (Figs. 3a–c and 4). In clonidine-treated rats, the SO was less frequent (Table 1) and of smaller amplitude (Supplementary Figure S3). There was no effect on the SO (half-wave) duration (F(2, 20)=2.55, p=0.11). The effect of clonidine on SO was almost immediate and lasted at least for 2 h (Fig. 4d). In clonidine-treated rats, the spindles were more frequent during AW and QW, while their occurrence was decreased during NREM sleep (Table 1). Notably, the effect of clonidine was delayed (Fig. 4h). Te spindle power was significantly decreased by clonidine (Supplementary Figure S3). No change was detected in the spindle length (F(2, 20)=0.08, p=0.92) or the intra-spindle frequency (F(2, 20)=1.09, p=0.36). Te clonidine-induced effects persisted across repeated drug treatments (Supplementary Figure S3). The SO and sleep spindles were unaffected by propranolol (Fig. 4d,h, and Supplementary Figure S3).

לאחר מכן הערכנו את השפעת התרופה על הצימוד הזמני בין SO וציר שינה, תופעה מבוססת שהוצעה כמנגנון של תיאום הרשת העומד בבסיס קונסולידציה עדינה42-44. לשם כך, בחרנו פרקי שינה של NREM וחילצו צירים המתרחשים בתוך ±1.5 מסביב לשיא ה-SO השלילי. בסך הכל, כ-1/3 מהצירים היו מצמדים SO (F(2, 20)=1.03, p=0.38); עם זאת, קיבוץ הציר סביב שיא ה-SO השלילי מחולק בין קבוצות (איור 4i-l). בחולדות שטופלו במי מלח ובפרופרנולול, הצירים התרחשו עדיפות לאורך השלב העולה של SO והגיעו ל-ms המקסימלית לאחר השיא השלילי של SO, בעוד שבחולדות שטופלו בקלונידין, הצירים התקבצו סביב השיא השלילי SO (איור 4l).

לבסוף, מתן קלונידין קידם HVS, תנודות חולפות בעלות משרעת גבוהה המתרחשות לעתים רחוקות במצבים ללא תרופת (טבלה 1 ואיור משלים S4). ה-HVS הראשון הופיע במהירות של 8.4 ± 1.0 דקות (טווח: 5.4 – 11.3 דקות) לאחר הזרקת קלונידין, שהיה מוקדם בהרבה מאשר לאחר מלוחים (24.6±2.3 דקות) (טווח: 16.6 – 30.7 דקות) או פרופרנולול (27.6 ± 6.2 דקות) (טווח: 7.7 – 62.2 דקות).

באופן מדהים, ב-5 מתוך 6 (83.3%) חולדות שטופלו בקלונידין ו-5 מתוך 9 (55.5%), חולדות שטופלו בפרופרנולול, ה-HVS זוהו במהלך מצב AW, בעוד שה-HVS נעדר במהלך AW ב-5 מתוך 6 מלוחים. חולדות מטופלות. בחולדות שטופלו בקלונידין, שיעור HVS היה גבוה יותר במהלך השעה הראשונה שלאחר ההזרקה והשפעה זו נשארה לאורך ימים (איור משלים S4). חוץ מזה, קלונידין הגדיל את משך ה-HVS (איור משלים S4) והפחית את התדר הבין-HVS (F(2, 20)=7.94, p=0.003). הספק HVS לא הושפע מקלונידין (F(2, 20)=2.28, p=0.13). לא היו השפעות ניתנות לזיהוי של פרופרנולול על ה-HVS (איור משלים S4).

דִיוּן

במחקר הנוכחי, הראינו כי מתן חוזר ונשנה של קלונידין (0.05 מ"ג/ק"ג, ip) ופרופרנולול (10 מ"ג/ק"ג, ip) לאחר חשיפה יומית ל8-מטלת מבוך רדיאלי בזרוע ליקוי בגיבוש זיכרון מרחבי חולדות זכרים בוגרים. המחסור בזיכרון המרחבי בחולדות שטופלו בתרופות היה ניכר במספר גבוה יותר של שגיאות WM וRM. מחקרים קודמים הצביעו על השפעה מועילה של שנת NREM על WM, אולי בשל פעילות SO מוגברת והתגברות של רשתות פרה-פרונטאליות-אוטונומיות45,46. אכן, הפעילות הפאראסימפתטית מוגברת במהלך שנת NREM וסביר להניח שתקדם את שחרור ה-NE מה-LC דרך כניסות ואגליות45. כמו כן, צימוד couleur-SO במהלך שנת NREM35 עשוי לתמוך בביצועי WM תלויי קדם-פרונטלי ביום הבא45. התוצאות שלנו תומכות בעקיפין בהשערה זו, שכן ייתכן שדיכוי תרופתי של פעילות LC-NE במהלך התקופה שלאחר הלמידה אכן השפיע על התפקוד הפרה-פרונטלי החיוני ליכולת WM. הדיוק הנמוך יותר של הזיכרון המרחבי שבא לידי ביטוי בשגיאות RM הצביע על השפעתן של תרופות על תקשורת קליפת המוח ההיפוקמפוסית המתווכת באדווה, מרכיב מפתח באיחוד רמת המערכות28. לבסוף, חוסר הזיכרון החזק ביותר בשלב מוקדם של הלמידה הצביע על החשיבות של שידור NE לעיבוד עדין של מידע חדש שהתקבל 8-10.

שיעור למידה נמוך יותר ברוב החולדות שטופלו בתרופות היה קשור כנראה לשינוי בפעילות המוח הקשורה לשינה. אכן, שינוי תרופתי של שידור NE השפיע על הנוירלדינמיקה הקשורה לשינה ברשתות התלמוקורטיקליות וההיפוקמפוס, המעורבות באיחוד זיכרון ברמת המערכות28. באופן ספציפי, שתי התרופות הפחיתו באופן דרמטי את התרחשותם של אדוות ההיפוקמפוס, אשר נחשבות לתווך את התייצבות של מכלולי תאים מקודדי זיכרון12,47. התוצאות שלנו הראו שמנגנון יצירת אדוות דורש רמה אופטימלית של NE, בעוד שגם פעילות LC-NE משופרת וגם מופחתת אינה חיובית עבור אדוות. לפיכך, דיכוי האדוות המושרה על ידי תרופות במהלך התקופה שלאחר הלמידה עשוי להסביר את חוסר הזיכרון המרחבי. תוצאה זו עולה בקנה אחד עם פגם למידה שנוצר על ידי דיכוי גלים חשמליים48,49. למיטב ידיעתנו, ההשפעות הנוראדרנרגיות על אדוות ההיפוקמפוס עדיין לא אופיינו בבעלי חיים מתנהגים. מלבד השפעתו על אדוות ההיפוקמפוס, קלונידין, אך לא פרופרנולול, דיכא SO וציר שינה, מה שעולה בקנה אחד עם הספרות הקיימת50,51; זה גם שינה את הצימוד SO-ציר.

למרות שתקופת תצפית קצרה יחסית (~2 שעות) לא אפשרה אפיון של מחזור השינה/ערות, השפעות התרופה על ה-EEG הקדם-פרונטלי היו עקביות בדרך כלל עם הספרות הקיימת50,51. ראינו השפעות ספציפיות לתרופה על דפוס השינה/ערות וספקטרום הספק ה-EEG. כלומר, קלונידין גרם להפחתה על ידי האצת תחילת שינה והארכת QW, בעוד שפרופרנולול הגביר את ה-AW על חשבון שנת NREM. שתי התרופות הפחיתו את כוח ה-EEG בטווח נמוך (<2 Hz) frequency range and increased 5–7 Hz power during NREM sleep due to the appearance of the HVSs; clonidine also reduced the sigma (10–16 Hz) power. The effects of clonidine were overall more pronounced, lasted for at least 2 h, and were consistent across daily injections. Of note, the aforementioned effects were observed during the dark (active) phase of the rat circadian cycle, while the drug-induced effects may differ during the light (inactive) phase as well as during the extended post-administration period.

מחקרים תרופתיים קודמים הוכיחו שוב ושוב כי אפנון של למידה לאחר העברת NE השפיע על חוזק הזיכרון13-15,18,29,52,53. הפעילות הגבוהה יותר של LC-NE במהלך מצבי ערנות עוררה מחקר על תפקידו בעיבוד מידע מקוון6,7, בעוד שתפקיד האפנון הנוראדרנרגי של רשתות המוח במצבי ערנות נמוכה, כגון שינה, נותר מזמן לא ממוקד. מספר מחקרים הדגישו את החשיבות של NE הפועל באמצעות -אדרנורצפטורים30,31 לגיבוש זיכרון תלוי ההיפוקמפוס10,37,38,54,55. ידוע היטב כי NE מקדם פלסטיות סינפטית ארוכת טווח21-25 המתרחשת לעתים קרובות. במחקר הקודם שלנו, דיווחנו ששלווה יחסית של נוירוני ה-LC-NE במהלך שנת NREM הופרעה על ידי התקפי פעילות חולפים, שהיו בסבירות גבוהה יותר להתרחש לאחר למידה. שינוי אופטוגני בפעילות LCactivity במהלך שנת NREM פגע בביצועים של החולדה במשימת זיכרון תלויה בהיפוקמפוס. שני מחקרים עדכניים על ידי מדידת שחרור NE בקליפת המוח הדגימו את צימוד הציר של LC בקנה מידה אינפרא-טמפורלי.

מלבד העליות שלאחר הלמידה של פעילות נוראדרנרגית29,34, מעורבות מתואמת זמנית של נוירונים LC-NE עשויה להשפיע על הרשתות ברשת. למרות שהמנגנון המדויק השולט בדינמיקת הפעילות של LC במהלך השינה אינו ידוע, קיימים יחסים זמניים בין רמת NE לבין תנודות הקשורות לשינה. קצב האכלה של נוירוני LC-NE עולה במהלך צירי שינה ויורד לפני תחילת הציר57. הדגמנו קודם לכן צימוד זמני בין ירי הנוירונים LC-NE לשלב של SO35.

במחקר האחרון שלנו על חולדות בהרדמת urethane, הראינו שהפעלת LC פאזית האריכה את מצב הקורטיקל של ריגוש משופר והגבירה את קצב הירי של נוירונים פרה-פרונטליים36. דיווחנו בעבר שגירוי ה-LC החשמלי המופעל באדווה יצר פגם בזיכרון מרחבי, ככל הנראה עקב הפרעה לדפוס הפעילות האנדוגני של LC. במחקר הנוכחי שלנו, דיכוי של שחרור NE המושרה על ידי קלונידין השפיע על רשת ייצור הציר וסביר להניח שהפרעה את צימוד הציר של LC. למרות המקור הקורטיקלי של SO, התשומות התת-קורטיקליות מהתלמוס58 והגרעינים הנוירו-מודולטוריים59, כולל LC36,60, משפיעות על הדינמיקה המרחבית-זמנית של SO. המודולציה בתיווך NE של הדינמיקה SO מאומתת עוד יותר על ידי הממצאים הנוכחיים. באופן ספציפי, הראינו שקלונידין דיכא את יצירת ה-SO, הפחית את ה-SOamplitude והשפיע על צימוד ה-SO-ציר. פרקי הצימוד של SO-ציר נחשבים כמצביעים על הפעלה של תוכן למידה, כאשר דיוק הצימוד מנבא את חוזק ההפעלה מחדש שמועיל לזיכרון61-63. לפיכך, צימוד זמני חוצה אזורי, שהוא מרכיב מפתח באיחוד רמת המערכות, עשוי לדרוש רמת NE אופטימלית. החוזק של הצימוד SO-ציר וציר-אדווה עשוי להיות תלוי בדפוס הירי של נוירוני LC-NE ובתזמון שחרור NE. שינוי זמני ומרחבי של NEtransmission עלול לגרום לעיבוד פחות יעיל ולחסרי זיכרון. קיים צורך דחוף לחקור עוד את ההשלכות התפקודיות של מערכת היחסים הזמנית המכווננת עדינה בין דלקת עצבית LC-NE לבין תנודות הקשורות לשינה. והכי חשוב, עדיין נותרו לקבוע את הטריגרים לפרץ מתואם של פעילות נוירומודולטורית במהלך השינה.

בסך הכל, התוצאות שלנו מצביעות על כך שנדרשת רמה אופטימלית של NE לעיבוד מידע יעיל של זה. עדויות ניסיוניות מצטברות והממצאים הנוכחיים שלנו תומכים בדעה ששחרור NE במהלך מצבים עדינים מקדם גם איחוד סינפטי וגם ברמת המערכת8,11. השינוי בהעברת NE השפיע בעיקרו על כל תנודות התלמוקורטיקליות וההיפוקמפוס הכרוכות בגיבוש זיכרון ברמת המערכת. ההקרנות הרבות של נוירוני LC-NE ברחבי המוח64 מספקות דרכים מרובות ל-NE להשפיע על הפעילות המתואמת ברשתות תומכות זיכרון, כולל התלמוקורטיקה, קדם-פרונטלי, ולימבי שבו מקורם של SO, צירי שינה ואדוות12,65,66. מחקרים עתידיים יחקרו ביתר פירוט את המנגנונים הנוראדרנרגיים העומדים בבסיס ההופעה, התחזוקה וההפעלה מחדש של רשת תומכת זיכרון בקנה מידה גדול.

למרות מנגנוני הפעולה השונים, הוכח ששתי התרופות מפחיתות את פעילות ה-LC. יש לציין שההשפעה המעכבת של קלונידין במבחנה הייתה חזקה יותר על ה-LC-NEneurons המקדימים בהיפוקמפוס לעומת הפרה-פרונטאליים68. קלונידין מדכא בעיקר שחרור NE פרה-סינפטי באמצעות 2-אדרנורצפטורים ופרופרנולול חוסם העברה של NE באמצעות קולטנים אדרנרגיים. חוץ מזה, פרופרנולול עשוי לעכב ספיגה חוזרת של NE, להעצים העברת NE ב-1-אדרנורצפטורים, ולהפחית העברת דופמינרגית עקב עיכוב סינתזה של קטכולאמינס69; זה עשוי להשפיע גם על העברה סרוטונרגית בשל הזיקה שלו לקולטני HT מרכזיים70. ההשפעות המתכנסות של שתי תרופות נוראדרנרגיות רלוונטיות מבחינה קלינית, למרות פעולתן על אדרנורצפטורים שונים, מצביעות על כך שהעברת NE שהשתנה תרופתית במהלך התקופה שלאחר הלמידה עשויה להפריע לרשת התומכת בזיכרון ולגרום לתופעת לוואי קוגניטיבית של השימוש הטיפולי בתרופות אלו.

שיטות

השתמשנו ב-38 חולדות Sprague-Dawley זכרים (300 – 400 גרם, מעבדות צ'ארלס ריברס, סולצפלד, גרמניה). למתקן החיות היו תנאים מבוקרים סביבתיים: מחזור אור/חושך של 12 שעות (כיבוי האורות ב-8:00 בבוקר), טמפרטורה של 20-23 מעלות ולחות של 40-60%. חולדות אוחסנו בזוגות או בנפרד, והיתה להן גישה חופשית למזון ולמים, למעט הגבלת מזון (כ-15 גרם של כדורי מזון לכל חולדה ליום) במהלך ניסוי הלמידה. משקל החולדה נשלט מדי יום כדי לוודא שהוא לא מתחת ל-85% ממשקל החולדה בליביטום. כל הניסויים נערכו בהתאמה מלאה להנחיה 2010/63/EU של הפרלמנט האירופי, חוק רווחת בעלי החיים הגרמני (TierSchG), ופקודת בעלי חיים במעבדה לרווחת בעלי חיים (TierSchVersV). המחקר נבדק על ידי הוועדה האזורית לרווחת בעלי חיים על פי סעיף 15 של חוק רווחת בעלי חיים הגרמני (Kommission nach §15 des Tierschutzgesetzes), ועדת האתיקה (§15 TierSchG), ואושר על ידי רשות המדינה (Regierungspräsidium, Tübingen, באדן-וירטמברג , גרמניה, Referat 35, Veterinärwesen). המחקר הנוכחי מבוצע על ידי הנחיות ARRIVE (https://arriveguidelines.org).

הקלטות כירורגיות ואלקטרופיזיולוגיות. ההליכים הכירורגיים והרישום תוארו בפירוט במקום אחר 38,71. בקצרה, חולדה מורדמת באיזופלורן (5% לאינדוקציה, ~2% לתחזוקה) תוקנה במסגרת סטריאוטקסית (David Kopf Instruments, Tujunga, CA) עם זווית ראש מותאמת לאפס מעלות. חומר הרדמה מקומי (Lidocard 2%, B. Braun, Melsungen, גרמניה) הוזרק תת עורית לפני קרניוטומיות להחדרת האלקטרודה. עבור אלקטרואנצפלוגרמה (EEG), שני ברגים מנירוסטה (0.86 מ"מ קוטר) היו מקובעים מעל הקורטקס הקדם-פרונטלי והמוח הקטן. שתי אלקטרודות פלטינה-אירידיום בודדות (FHC Inc., Bowdoin, ME) שהודבקו יחד עם מרחק של 100 עד 200 מיקרומטר בין הקצוות הותקנו על כונן נייד תוצרת בית והושתלו ב-HPC הגבי ( AP=-3.5 מ"מ, L=2.0 מ"מ, DV=2.0 מ"מ). ניטור מקוון של פעילות עצבית הבטיח מיקוד מדויק לאזור CA1 של HPC הגבי במהלך ההשתלה. הכונן הנייד אפשר התאמה נוספת של עומק האלקטרודה להקלטת אדוות אופטימלית במהלך אימון מבוך. עבור אלקטרומיוגרפיה (EMG), אלקטרודת חוט כסף הוכנסה בשריר הצוואר. מסגרת פלסטיק מודפסת בתלת מימד המחוברת לרשת נחושת להגנה על חוטי האלקטרודה ובידוד מרעשים חשמליים הודבקה לגולגולת. מעקב אחר טמפרטורת הגוף (~37 מעלות), קצב הלב וחמצון הדם (מעל 90%). במהלך 5-7 ימים של החלמה לאחר הניתוח, חולדות טופלו באנטיביוטיקה (10 מ"ג/ק"ג, ip, Baytril, Bayer) ומשכך כאבים (5 מ"ג/ק"ג, ip, Rymadil, Zoetis).

לאחר התאוששות לאחר הניתוח חולדות הורגלו לקופסת השינה (פרספקס שחור, 20×20×80 ס"מ) ונוהל חיבור כבלים. השתל חובר למערכת רכישת Neuralynx Digital Lynx (Neuralynx,Bozeman, MT) דרך 32-שלב ראש ערוץ (Neuralynx, Bozeman, MT) ומתאם מותאם אישית (SSD10-SS- GS, Omnetic, Minneapolis, MN). אותות חוץ-תאיים בפס רחב (0.1 הרץ-8 קילו-הרץ) מ-EEG ו-HPC-אלקטרודות עבר דיגיטציה ב-32 קילו-הרץ. מיקום האלקטרודה ב-HPC עבר אופטימיזציה לזיהוי אדוות לפחות 24 שעות לפני תחילת ההקלטה. כל מפגש הקלטה התחיל באותו זמן עבור כל חיה ונמשך 2 שעות. תקופת תצפית זו נבחרה על סמך עדויות קודמות לכך שהשלב המוקדם של קונסולידציה עדינה תלוי ב-NE8. ההקלטה נעשתה באור עמום ובמהלך השלב הפעיל (חשוך) של הקצב הצירקדי, שהוא האופטימלי ביותר לאימון חולדות.

משימת זיכרון מרחבי.

אותה משימת מבוך ופרוטוקול אימון שימשו כמתואר בפירוט במקום אחר38. חולדות אומנו על מבוך רדיאלי מוגבה בעל שמונה זרועות (איור 1א). זרועות מבוך (66 ס"מ אורך × 10 ס"מ רוחב) עם בור קטן (קוטר 1 ס"מ) בקצה לתגמול מזון (חלב שוקולד) מורחבת מפלטפורמה מרכזית (קוטר 30 ס"מ). שני רמזים ויזואליים גדולים נקבעו על הווילונות השחורים המקיפים את המבוך. במהלך המרווח בין הניסויים, חולדה הונחה על מעמד מוגבה. התנהגות החולדות הייתה במעקב וידאו. לאחר התרגלות ואימון מקדים (שיטות משלימות), 3 מתוך 8 זרועות מבוך פיתחו; מיקומי התגמול הוקצו אקראית לכל חולדה ונשמרו זהים עבור כל מפגשי האימון (3 ניסויים ביום למשך 7 ימים). ניסוי התחיל בהנחת חולדה על הפלטפורמה המרכזית ונמשך עד שכל 3 התגמולים נאספו או שחלפו 5 דקות. משטח המבוך נמחק לאחר כל ניסוי כדי למזער את סימני הריח. המשתנים ההתנהגותיים הבאים נרשמו ונותחו: מספר זרועות המבוך שביקרו, זמן ניסוי, דיוק הבחירה (מחושב כיחס בין הפיתיון והמספר הכולל של זרועות שביקרו), שגיאות זיכרון עבודה (WM) (מספר כניסות חוזרות לזרועות ביקר) , שגיאות זיכרון רפרנס (RM) (כניסות לזרועות ללא פיתיונות).

זריקות סמים

אבקת הקלונידין והפרופרנולול (Sigma Aldrich, Burlington, MA) הומסו ללא מלח והוזרקו תוך צפקית (ip) בנפח של 1 מ"ל/ק"ג מיד לאחר כל מפגש מבוך (קלונידין:0.05 מ"ג/ק"ג, ip; פרופרנולול: 10 מ"ג/ק"ג, ip). חולדות בקרה קיבלו תמיסת מלח (1 מ"ל/ק"ג, ip). קלונידין מדכא NEtransmission72 ובמינון של 0.05 מ"ג/ק"ג (ip) הוכח בחולדות כמפחית את פעילות ה-LC ל-60% מרמת הבסיס67. פרופרנולול, אנטגוניסט -אדרנורצפטור, לאחר טיפול חוזר במינון מתון (<40 mg/ kg) inhibits the LC activity40,41. Besides, propranolol in a dose of 10 mg/kg (i.p.) was shown to modulate NEmediated excitability of the hippocampal neurons73 while it did not affect rat spontaneous behavior74–76. The half-life of clonidine may greatly vary between 6 and 23 h depending on the dosage, chronic use, and metabolism level75,77. Typically, the plasma peak levels are reached 60–90 min after clonidine administration. The plasma half-life of propranolol is 3 to 6 h with a peak of 1–3 h after ingestion76. The elimination half-life of propranolol is approximately 8 h (https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/Propranolol). This, according to the pharmacokinetics of both drugs, the drug concentration was close to the highest during the observation period of up to 2 h post-injection. Importantly, both drugs are effectively washed out within less than 24 hours.

זלוף והיסטולוגיה.

חולדות הורדמו (100 מ"ג/ק"ג ip, Narcoren, Merial), וחוללו דרך הלב עם 0.9% מי מלח ואחריו 4% פרפורמלדהיד. מוחות נחתכו (50 מיקרומטר) באמצעות מיקרוטום אופקי הקפאה (Microm HM 440E, Thermo Fischer Scientific, Waltham, MA). כדי לאמת את מיקום האלקטרודה, נבדקו קטעי מוח מוכתמים ב-Nissl תחת המיקרוסקופ (Axiovision, Zeiss, Oberkochen, גרמניה).

זיהוי אירועים.

ה-SO, צירי השינה ואדוות ההיפוקמפוס זוהו כפי שתואר בעבר במקומות אחרים71,78. אות ה-EEG הורד ל-1 kHz וסונן בפס-פס (0.3 - 4 הרץ). עבור זיהוי SO, חולצו אפס חצייות של EEG מסונן המתרחשים בתוך חלון זמן של 0.4 עד 1-. הוקצו שני צלבי אפס שלילי-לחיוביים רצופים עם משרעת שיא שלילית מתחת ל-100 μV ומשרעת שיא לשיא שלילי-לחיובית העולה על 120 μV בתור SO. לזיהוי ציר, EEG מסונן עם מעבר פס (10-16 הרץ) תוקן והחלק. הצירים זוהו על ידי משרעת אות העולה על סף של 1.5 סטיות תקן (SD) של האות הממוצע במהלך תקופות שינה של NREM למשך 0.4-2.0 שניות. צירים המתרחשים בטווח של פחות מ-50 אלפיות השנייה הותכו. HVSs זוהו באמצעות אותו אלגוריתם עם פרמטרים מותאמים (פס פס: 5-7 הרץ, סף: 2.5 SD, דקות/מקסימום: 0.7 שניות/3 שניות). שני HVSs המתרחשים בפחות מ-200 אלפיות השנייה התמזגו. כדי למנוע זיהוי כפול, זוהו צירי שינה בתקופות ללא HVS. לזיהוי אדוות, HPC LFP עבר סינון פס (120-250 הרץ), תוקן והחלקה. האדוות זוהו על ידי משרעת אות העולה על סף של 3 עד 5 SDs למשך 0.025 עד 0.5 שניות. עבור כל האירועים, הפעלה וקיזוז הוגדרו כחציית אפס עולה ויורדת, בהתאמה, תוך שימוש בסף 1 SD. הספק התנודה חושב כאינטגרל של המעטפת של האות שעבר הילברט בין ההפעלה וההיסט של האירוע. הצימוד הזמני של SO-ציר הוערך כמתואר במקומות אחרים43. השיא שלילי SO שימש כאירוע התייחסות (t=0), הפסגות והשפל של הצירים המתרחשים בתוך ±1.5 שניות חולצו והיסטוגרמת מתאם האירועים נוצרה. ספירת הפחים הומרה לקצב האירועים, השתנתה ב-z וממוצע הקבוצה.

ניקוד שינה וניתוח ספקטרלי כוח EEG. ניקוד השינה התבסס על סיווג בסיוע חזותי לתקופות 10- עוקבות של אותות EEG ו-EMG79. ה-EEG נטול החפצים סווג לעירנות פעילה (AW, EEG מהיר באמפליטודה נמוכה ו-EMG גבוהה), ערות שקטה (QW, EEG מהיר באמפליטודה נמוכה ו-EMG נמוך), ו-NREM (EEG איטי באמפליטודה גבוהה ו-EMG נמוך). ). תקופות שנת ה-REM במהלך הקלטת שעתיים היו נדירות ולא נותחו. ספקטרום הספק ה-EEG חושבו עבור כל מצב התנהגותי באמצעות Matlab (Mathworks, ארה"ב) וארגז הכלים FieldTrip 80. אות ה-EEG פוצל לעידנים של {{10}} עם חפיפה של 0.5-. טרנספורציית פורייה מהירה הוחלה על מקטעי נתונים מחודדים של Hanning כדי לחשב את ספקטרום המשרעת החד-צדדית. כדי להפריד את הרכיבים הפרקטליים והרכיבים המתנודדים בספקטרום הספק ה-EEG, השתמשנו בהליך הניתוח האוטו-ספקטרלי של Irregular-Sampling Auto-Spectral. עלילות הזמן-תדר נוצרו באמצעות חלון מחדד הנינג הזזה ואורך תלוי תדר של 3 מחזורים. טווח התדרים של 0.05 עד 20 הרץ (צעד 0.1 הרץ) שימש עבור SO, צירי שינה ו-HVS, ו-50 עד 300 הרץ (צעד של 0.05 הרץ ו-9 מחזורים) עבור אדוות ההיפוקמפוס.

עיצוב ניסוי וניתוח סטטיסטי.

32 חולדות אומנו במבוך, מתוך 19 חולדות אלה הושתלו אלקטרודות, וטופלו עם קלונידין (n=16), פרופרנולול (n=11), או מי מלח (n{{4} }) לאחר כל מפגש למידה. ל-9 חולדות נוספות הושתלו אלקטרודות ושימשו לאלקטרופיזיולוגיה בלבד. המשתנים ההתנהגותיים היו ממוצעים של מפגשים והוגשו לניתוח מדידות חוזרות של שונות (ANOVA) כאשר מפגש הלמידה כגורם חוזר והטיפול התרופתי כגורם קבוצתי. תיקון החממה-גייסר הוחל כאשר הנחת הכדוריות הופרה. נעשה שימוש ב-K-means clusteranalysis כדי לחשוף את השונות בין הנבדקים בשיעור הלמידה. באופן ספציפי, הגשנו את דיוק הבחירה (כפי שהוגדר בסעיף שיטת משימות הזיכרון המרחבי) עבור כל מפגשי הלמידה וחילקנו את סדרות הזמן לשני אשכולות הנבדלים זה מזה על ידי דינמיקת הלמידה. לאחר מכן חישבנו את שיעור החולדות בכל אשכול עבור כל קבוצת ניסוי. המשתנים שנגזרו מאותות אלקטרו-פיזיולוגיים כגון תחילת שינה, משך תקופה, קצב אירועים וכו', הוגשו ל-ANOVA חד כיווני עם הטיפול התרופתי כגורם קבוצתי ולאחריו, כאשר מתאים, הבדיקות הפוסט-הוקיות של Bonferroni. שיעור האירועים לאחר ההזרקה הושווה באמצעות המדדים החוזרים ונשנים ANOVA עם חלון זמן של שעה ולרוחב טיפולים תרופתיים חוזרים. מבחן הדגימה הצמד שימש כדי לחשוף את ההבדל בין הקבוצות בהיסטוגרמות פרי-אירוע. המובהקות הסטטיסטית( -value) נקבעה ל-p=0.05. IBM SPSS Statistics (v.22) שימש לניתוח סטטיסטי. חבילות התוכנה Matlab (R2014a) ו-Adobe Illustrator® שימשו להדמיה של תוצאות.

זמינות נתונים

מערכי הנתונים ששימשו ו/או נותחו במהלך המחקר הנוכחי זמינים מהמחבר המתאים על פי בקשה סבירה.

הפניות

1. Giovannitti, JA, Toms, SM & Crawford, JJ Alpha-2 אגוניסטים לקולטן אדרנרגי: סקירה של יישומים קליניים נוכחיים. Anesth. פרוג. 62, 31–39. https://doi.org/10.2344/0003-3006-62.1.31 (2015).

2. צ'מברליין, SR & Robbins, TW אפנון נוראדרנרגי של קוגניציה: השלכות טיפוליות. J. Psychopharmacol. 27,694–718. https://doi.org/10.1177/0269881113480988 (2013).

3. Newcorn, JH, Krone, B. & Dittmann, RW טיפולים לא ממריצים להפרעות קשב וריכוז. ילד מתבגר. פסיכיאטר. קלינ. נ.אם. 31,417–435. https://doi.org/10.1016/j.chc.2022.03.005 (2022).

4. Criaud, M. et al. Noradrenaline והפרעות ייזום תנועה במחלת פרקינסון: מחקר MRI תפקודי תרופתי עם קלונידין. תאים https://doi.org/10.3390/cells11172640 (2022).

5. Middlemiss, DN, Buxton, DA & Greenwood, DT אנטגוניסטים של בטא-אדרנוצפטורים בפסיכיאטריה ובנוירולוגיה. Pharmacol.Ter. 12, 419–437. https://doi.org/10.1016/0163-7258(81)90089-9 (1981).

6. Berridge, CW & Waterhouse, BD Te locus coeruleus-noradrenergic system: אפנון של מצב התנהגותי ותהליכים קוגניטיביים תלויי מצב. Brain Res Brain Res Rev 42, 33–84 (2003).

7. Sara, SJ & Bouret, S. התמצאות והתמצאות מחדש: Te locus coeruleus מתווך קוגניציה באמצעות עוררות. Neuron 76(1), 130–141(2012).

8. שרה, SJ Locus Coeruleus בזמן עם יצירת זיכרונות. Curr. דעה. נוירוביול. 35, 87–94. https://doi.org/10.1016/j.conb.2015.07.004 (2015).

9. Groch, S. et al. תרומה של נוראפינפרין לגיבוש זיכרון רגשי במהלך השינה. Psychoneuroendocrinology 36,1342–1350. https://doi.org/10.1016/j.psyneuen.2011.03.006 (2011).

10. Gais, S., Rasch, B., Dahmen, JC, Sara, S. & Born, J. תפקוד הזיכרון של פעילות נוראדרנרגית בשינה שאינה REM. J. Cogn.Neurosci. 23, 2582–2592. https://doi.org/10.1162/jocn.2011.21622 (2011).

For more information:1950477648nn@gmail.com